CN106188225A - 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法 - Google Patents

一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106188225A
CN106188225A CN201610595628.XA CN201610595628A CN106188225A CN 106188225 A CN106188225 A CN 106188225A CN 201610595628 A CN201610595628 A CN 201610595628A CN 106188225 A CN106188225 A CN 106188225A
Authority
CN
China
Prior art keywords
liquid chromatography
preparative liquid
promise peptide
separation method
technical grade
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610595628.XA
Other languages
English (en)
Inventor
闻鸣
徐天华
吴中华
何奇雷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Esigma Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Esigma Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Esigma Biotechnology Co Ltd filed Critical Zhejiang Esigma Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201610595628.XA priority Critical patent/CN106188225A/zh
Publication of CN106188225A publication Critical patent/CN106188225A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，包括以下步骤：（1）溶解、过滤：取汇诺肽粗制品，以固液比1：5～10加入甲醇进行溶解，过滤，得滤液；（2）离心、超滤：将步骤（1）所得滤液进行离心，然后进行超滤，得超滤液；（3）制备液相色谱分离：将步骤（2）所得超滤液注入动态轴向压缩制备液相色谱系统，然后用洗脱剂进行洗脱，收集目标段洗脱液；（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得目标段洗脱液进行浓缩，然后干燥，得汇诺肽。本发明方法工艺流程简单，自动化程度高，可控性高，精细化程度高，产品质量的重现性良好，产品质量稳定可靠；按照本发明方法分离的产品汇诺肽纯度≥93%，收率≥80%。

Description

一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法
技术领域
本发明涉及一种汇诺肽的分离方法，具体涉及一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法。
背景技术
汇诺肽是以那西肽为原料，通过化学反应制备得到了一种新型的多肽类物质，取名为汇诺肽，英文名henoptide，CAS号为1887057-00-2。通过对此物质的生物性能研究与动物实验，发现其具有抗菌，抗球虫，抗病毒等优异性能，在经济动物中可以起到促进生长和提高饲料转化率的用途。
纯品汇诺肽是一种黄色结晶，属脂溶性物质，其分子量为1153，分子式为C48H39N11O12S6，分子结构参见下式。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种制备过程简单，便于规模化生产，产品纯度高的汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，包括以下步骤：
(1)溶解、过滤：取汇诺肽粗制品，以固液比1：5～10加入甲醇进行溶解，
过滤，得滤液；
(2)离心、超滤：将步骤(1)所得滤液进行离心，然后进行超滤，得超滤液；
(3)制备液相色谱分离：将步骤(2)所得超滤液注入动态轴向压缩制备液相色谱系统，然后用洗脱剂进行洗脱，收集目标段洗脱液；
(4)浓缩、干燥：将步骤(3)所得目标段洗脱液进行浓缩，然后干燥，得汇诺肽。
进一步，步骤(3)中，所述洗脱剂为甲醇与超纯水，洗脱方式为梯度洗脱。
进一步，所述洗脱为两段洗脱：先用甲醇/超纯水体积配比为30/70～80/15的混合溶液进行梯度洗脱20～28min，再用甲醇/超纯水体积配比为92/8～98/2的混合溶液进行梯度洗脱20～30min。
进一步，步骤(3)中，所述动态轴向压缩制备液相色谱系统中的动态轴压缩柱填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为5～20μm；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。
进一步，在将步骤(2)所得超滤液注入动态轴压缩柱前先进行预柱处理，
所述预柱的填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10～25μm；所述洗脱的流速为1300～1500mL/min。
步骤(3)中，在洗脱过程中在线检测洗脱液成分，确定目标段洗脱液的收集时间。
进一步，步骤(1)中，所述汇诺肽粗制品中汇诺肽含量≥25％。
进一步，步骤(1)中，所述过滤的目数为100～300目。
进一步，步骤(2)中，所述离心为管式离心，离心速率为10000～15000r/min。
进一步，步骤(2)中，所述超滤采用二次超滤，超滤膜的截留分子量分别为3～5万道尔顿和4000～6000道尔顿。
进一步，步骤(4)中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为60～70℃，真空度为-0.08～-0.04Mpa，浓缩至百利度为20～30；
进一步，步骤(4)中，所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为70～80℃，真空度为-0.08～-0.06Mpa，干燥至水分含量≤5％。
本发明方法工艺流程简单，自动化程度高；可控性高，精细化程度高，产品 质量的重现性良好，产品质量稳定可靠；
具体实施方式
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
本发明实施例所使用的汇诺肽由浙江汇能生物股份有限公司提供。
所使用的其他化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
实施例1
(1)溶解、过滤：取150g汇诺肽粗制品(汇诺肽含量为25％)，用1500mL的甲醇进行溶解，使用200目不锈钢网过滤，得滤液；
(2)离心、超滤：将步骤(1)所得滤液进行管式离心，离心速率为14000r/min，然后使用卷式超滤膜进行二次超滤，超滤膜的截留分子量分别为3万道尔顿与4000道尔顿，得超滤液1250mL；
(3)制备液相色谱分离：将步骤(2)所得超滤液通过进样泵注入动态轴向压缩制备:液相色谱系统，进样量为1250mL，先进预柱处理，预柱的规格为Ф200×50mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为15μm，再进动态轴压缩柱处理，动态轴压缩柱规格为Ф200×250mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10μm，以流动相为甲醇与超纯水，流速为1500mL/min进行梯度洗脱，具体如下：
通过液相色谱的检测，收集7～10min的目标馏分；
(4)浓缩、干燥：将步骤(3)所得馏分在60℃，真空度-0.08～-0.04Mpa下，真空浓缩至百利度为25为止，然后在70℃，真空度-0.08～-0.06Mpa下，干燥至水分为1.33％，得30.12g汇诺肽。
经HPLC检测，汇诺肽的纯度为93.03％，收率为80.33％。
实施例2
(1)溶解、过滤：取150g汇诺肽粗制品(汇诺肽含量为25％)，用1350mL 的甲醇进行溶解，使用200目不锈钢网过滤，得滤液；
(2)离心、超滤：将步骤(1)所得滤液进行管式离心，离心速率为14000r/min，然后使用卷式超滤膜进行二次超滤，超滤膜的截留分子量分别为3万道尔顿与4000道尔顿，得超滤液1150mL；
(3)制备液相色谱分离：将步骤(2)所得超滤液通过进样泵注入动态轴向压缩制备:液相色谱系统，进样量为1150mL，先进预柱处理，预柱的规格为Ф200×50mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为15μm，再进动态轴压缩柱处理，动态轴压缩柱规格为Ф200×250mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10μm，以流动相为甲醇与超纯水，流速为1500mL/min进行梯度洗脱，具体如下：
通过液相色谱的检测，收集8～11min的目标馏分；
(4)浓缩、干燥：将步骤(3)所得馏分在65℃，真空度-0.08～-0.04Mpa下，真空浓缩至百利度为25为止，然后在75℃，真空度-0.08～-0.06Mpa下，干燥至水分为1.58％，得30.48g汇诺肽。
经HPLC检测，汇诺肽的纯度为93.78％，收率为81.29％。
实施例3
(1)溶解、过滤：取150g汇诺肽粗制品(汇诺肽含量为25％)，用1200mL的甲醇进行溶解，使用200目不锈钢网过滤，得滤液；
(2)离心、超滤：将步骤(1)所得滤液进行管式离心，离心速率为14000r/min，然后使用卷式超滤膜进行二次超滤，超滤膜的截留分子量分别为3万道尔顿与4000道尔顿，得超滤液1100mL；
(3)制备液相色谱分离：将步骤(2)所得超滤液通过进样泵注入动态轴向压缩制备:液相色谱系统，进样量为1100mL，先进预柱处理，预柱的规格为Ф200×50mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为15μm，再进动态轴压缩柱处理，动态轴压缩柱规格为Ф200×250mm，填料为十八烷基反相硅胶，硅胶 的粒径为10μm，以流动相为甲醇与超纯水，流速为1500mL/min进行梯度洗脱，具体如下：
通过液相色谱的检测，收集6～9min的目标馏分；
(4)浓缩、干燥：将步骤(3)所得馏分在70℃，真空度-0.08～-0.04Mpa下，真空浓缩至百利度为25为止，然后在80℃，真空度-0.08～-0.06Mpa下，干燥至水分为0.89％，得30.71g汇诺肽。
经HPLC检测，汇诺肽的纯度为93.03％，收率为81.88％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）溶解、过滤：取汇诺肽粗制品，以固液比 1：5～10加入甲醇进行溶解，过滤，得滤液；
（2）离心、超滤 ：将步骤（1）所得滤液进行离心，然后进行超滤，得超滤液 ；
（3）制备液相色谱分离：将步骤（2）所得超滤液注入动态轴向压缩制备液相色谱系统，然后用洗脱剂进行洗脱，收集目标段洗脱液 ；
（4）浓缩、干燥 ：将步骤（3）所得目标段洗脱液进行浓缩，然后干燥，得汇诺肽。
2.根据权利要求 1 所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（3）中，所述洗脱剂为甲醇与超纯水，洗脱方式为梯度洗脱。
3.根据权利要求 2 所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：所述洗脱为两段洗脱：先用甲醇/超纯水体积配比为30/70~85/15 的混合溶液进行梯度洗脱15~25min，再用甲醇/超纯水体积配比为92/8~98/2 的混合溶液进行梯度洗脱20~30min。
4.根据权利要求 1所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（3）中，所述动态轴向压缩制备液相色谱系统中的动态轴压缩柱填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为5~20μm；所述洗脱的流速为1300~1500mL/min。
5.根据权利要求4所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：在将步骤（2）所得超滤液注入动态轴压缩柱前先进行预柱处理，所述预柱的填料为十八烷基反相硅胶，硅胶的粒径为10~25μm；所述洗脱的流速为1300~ 1500mL/min。
6.根据权利要求1所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述汇诺肽粗制品中汇诺肽含量≥ 25%。
7.根据权利要求 1所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（1）中，所述过滤的目数为100~300目。
8.根据权利要求1所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特征在于：步骤（2）中，所述离心为管式离心，离心速率为 10000~15000r/min。
9.根据权利要求 1所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法，其特 征在于：步骤（2）中，所述超滤采用二次超滤，超滤膜的截留分子量分别为3~5万道尔顿和4000~6000道尔顿。
10.根据权利要求 1-9 之一所述汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法， 其特征在于：步骤（4）中，所述浓缩为真空浓缩，真空浓缩的温度为60~70℃，真空度为-0.08~-0.04Mpa，浓缩至百利度为20~30；所述干燥为真空干燥，真空干燥的温度为70~80℃，真空度为-0.08~-0.06Mpa，干燥至水分含量≤ 5%。
CN201610595628.XA 2016-07-25 2016-07-25 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法 Pending CN106188225A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610595628.XA CN106188225A (zh) 2016-07-25 2016-07-25 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610595628.XA CN106188225A (zh) 2016-07-25 2016-07-25 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106188225A true CN106188225A (zh) 2016-12-07

Family

ID=57495790

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610595628.XA Pending CN106188225A (zh) 2016-07-25 2016-07-25 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106188225A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103788028A (zh) * 2012-10-31 2014-05-14 江苏汉邦科技有限公司 一种奥利司他的工业液相色谱制备方法
CN104231044A (zh) * 2014-08-13 2014-12-24 浙江汇能动物药品有限公司 那西肽过柱纯化工艺
CN104892717A (zh) * 2015-06-18 2015-09-09 湖南华诚生物资源有限公司 一种罗汉果甜苷v的工业级制备液相色谱分离方法
CN105254746A (zh) * 2015-10-19 2016-01-20 吉尔生化（上海）有限公司 一种胸腺肽α1脱盐的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103788028A (zh) * 2012-10-31 2014-05-14 江苏汉邦科技有限公司 一种奥利司他的工业液相色谱制备方法
CN104231044A (zh) * 2014-08-13 2014-12-24 浙江汇能动物药品有限公司 那西肽过柱纯化工艺
CN104892717A (zh) * 2015-06-18 2015-09-09 湖南华诚生物资源有限公司 一种罗汉果甜苷v的工业级制备液相色谱分离方法
CN105254746A (zh) * 2015-10-19 2016-01-20 吉尔生化（上海）有限公司 一种胸腺肽α1脱盐的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107216228B (zh) 一种低共熔溶剂及用于提取大黄中蒽醌的方法
CN104513286B (zh) 一种分离纯化非达米星的方法
CN103408602B (zh) 一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法
CN101863935B (zh) 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法
CN105566414B (zh) 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法
CN108033993B (zh) 一种制备雷公藤内酯酮的方法
Geng et al. Separation of phenolic acids from sugarcane rind by online solid‐phase extraction with high‐speed counter‐current chromatography
CN101230080B (zh) 模拟移动床色谱拆分20(S)和20(R)-人参皂苷Rg3对映体
CN111141850A (zh) 对乙酰氨基酚原料药有关物质的液相检测分离方法
CN110882357A (zh) 一种高纯度竹叶黄酮粉及其制备方法
CN108114705A (zh) 一种硅胶基质碱性氨基酸键合固定相及其制备和应用
Yin et al. Trends in counter-current chromatography: Applications to natural products purification
CN114988979B (zh) 一种宏量分离制备高纯度番茄红素的方法
CN107573255A (zh) 一种从辣椒果实中分离纯化辣椒碱和二氢辣椒碱的方法
CN105287690A (zh) 一种欧洲越橘提取物及其制备方法
CN105859715A (zh) 一种从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的临界流体色谱方法
CN106188225A (zh) 一种汇诺肽的工业级制备液相色谱分离方法
CN108042618B (zh) 一种利用亚临界水提取芍药总苷的方法
CN109096078A (zh) 一种大果桉醛c的制备方法
CN113388128B (zh) 咪唑二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法和应用
CN104892620B (zh) 一种高纯度水黄皮素的制备方法
CN105771311A (zh) 一种采用动态轴向压缩柱纯化混合提取物的方法
CN113121320B (zh) 一种使用高速逆流色谱分离杨梅树皮中杨梅醇的方法
CN111233944B (zh) 一种同时制备分离四种木脂素类成分的高效液相方法
CN111686136B (zh) 纯化三萜类化合物的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20161207