CN110882357A - 一种高纯度竹叶黄酮粉及其制备方法 - Google Patents

一种高纯度竹叶黄酮粉及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高纯度竹叶黄酮粉的制备方法，包括：将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉、离心取离心液；将离心液加入硅胶拌样，减压浓缩拌样液，干燥拌样物至不含乙醇或甲醇，得到拌样硅胶；将拌样硅胶上硅胶柱，先用第一体积比例的石油醚‑乙酸乙酯进行洗脱，再用第二体积比例的乙酸乙酯‑醇进行洗脱得B组洗脱液；对B组洗脱液加入聚酰胺拌样，浓缩、干燥，得到拌样聚酰胺；将拌样聚酰胺上聚酰胺柱，采用体积比例为10：(0～6)的水‑醇体系进行梯度洗脱或随机洗脱，得到C组洗脱液；分别对C组各份洗脱液进行浓缩和干燥后得到高纯度的竹叶黄酮粉。本发明还公开了采用该方法制备的高纯度竹叶黄酮粉。

Description

一种高纯度竹叶黄酮粉及其制备方法
技术领域
本发明涉及分离纯化领域，尤其涉及一种高纯度的竹叶黄酮粉及其制备方法。
背景技术
竹叶黄酮，是以竹叶为原料浸提而来。竹叶中所含的功能因子主要是黄酮苷和香豆素类内酯，其有效成分的含量和生物活性均与银杏叶成分具有可比性。竹叶中的黄酮类物质，具有明显的降血脂和降胆固醇的作用。药理研究表明，竹叶黄酮具有抗整体动物缺氧的作用，能有效扩张冠脉血管，增加冠脉流量，增加心肌收缩力，明显改善心肌缺血及缩小心梗范围，降低血小板聚集程度，有效抑制凝血和血栓形成，对脑缺血有一定的保护作用；研究又发现，富含黄酮的竹叶提取物有多种生物学功效，如清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒等功能，在保健品、化妆品及食品添加剂方面应用广泛。
然而现有技术中以竹叶黄酮为对象进行的提取纯化工艺的优化还比较少，且很多还停留在实验室阶段，存在纯化处理复杂、纯化效率低且纯度相对较低的问题，还没有实现批量化生产。因此需要提供一种能够实现高纯度且适合批量化生产的竹叶黄酮提取方法。
发明内容
为此，本发明提供了一种高纯度的竹叶黄酮粉及其制备方法，以解决或至少缓解上面存在的问题。
根据本发明的一个方面，提供了一种高纯度竹叶黄酮粉的制备方法，包括：将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉、离心，得到离心液；将离心液加入硅胶拌样，减压浓缩拌样液，干燥拌样物至不含乙醇或甲醇，得到拌样硅胶；将拌样硅胶上硅胶柱层析分离，先用第一体积比例的石油醚-乙酸乙酯体系进行洗脱，得A组洗脱液；再改用第二体积比例的乙酸乙酯-醇体系作为流动相进行洗脱，得到B组洗脱液；将B组洗脱液加入聚酰胺，浓缩，干燥，得拌样聚酰胺，将拌样聚酰胺上聚酰胺柱层析分离，采用体积比为10：(0～6)的水-醇体系作为流动相进行梯度洗脱或随机洗脱，得到C组份洗脱液，将C组各份洗脱液浓缩和干燥处理，得不同含量的竹叶黄酮粉。
可选地，在根据本发明的制备方法中，将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉、离心的步骤包括：在竹叶黄酮浸膏中加入无水乙醇或无水甲醇，加热使浸膏溶解完全，0～4℃环境静置醇沉，去除不溶性多糖类物质、胶质和蛋白质、色素类物质，取离心液。
可选地，在根据本发明的制备方法中，硅胶拌样时按照离心液含干物质和硅胶的质量比1：(2～3)进行拌样，硅胶粒度为200～300目；空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比为1:(1～10)，空白上柱的溶剂为石油醚，空白硅胶的柱床高小于15cm，硅胶柱的直径范围为5～100cm。
可选地，在根据本发明的制备方法中，石油醚-乙酸乙酯体系中，石油醚与乙酸乙酯的体积比为1:(3～6)；乙酸乙酯-醇体系为乙酸乙酯-甲醇体系或乙酸乙酯-乙醇体系，且乙酸乙酯和醇的体积比例为5:(2～3)；梯度洗脱或任意比例洗脱的流动相中，水-醇体系为水-甲醇体系或水-乙醇体系，且该体系中水和甲醇或乙醇的体积比为10:(0～6)。
可选地，在根据本发明的制备方法中，对聚酰胺柱梯度洗脱的流动相中，水和醇的体积比可为10:1、10:2、10:3、10:6，若以此梯度洗脱，当每一种比例的洗脱液洗脱至颜色变淡时，改用另一种醇比例高的流动相进行洗脱。
可选地，在根据本发明的制备方法中，聚酰胺层析柱中的拌样聚酰胺和空白聚酰胺的柱床高比例为(1～10)：1；聚酰胺的上柱溶剂为纯化水，空白聚酰胺的柱床高小于15cm；聚酰胺柱的直径范围为5～100cm，聚酰胺的粒度为100～200目。
可选地，在根据本发明的制备方法中，硅胶拌样时按照离心液含干物质和硅胶的质量比为1:3进行拌样；空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比例为1:3；聚酰胺拌样时按照洗脱液含干物质和聚酰胺的重量比为1:(2～3)进行拌样。
可选地，在根据本发明的制备方法中，聚酰胺柱层析收集梯度洗脱或随机洗脱的洗脱液，对其进行浓缩和干燥后的步骤包括：将各洗脱液浓缩至原体积的1/9～1/10，并对浓缩后的溶液进行喷雾干燥成粉。
可选地，在根据本发明的制备方法中，还包括步骤：采用紫外光谱法对各收集洗脱液进行黄酮总含量检测，以及采用HPLC法对单一组分黄酮进行单一黄酮含量检测，其中，单一黄酮组分包括异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷中的一种或多种。
可选地，在根据本发明的制备方法中，，黄酮总含量检测步骤包括：以芦丁为对照品，采用Al(NO3)3、NaNO2和NaOH显色，在紫外510nm处检测不同浓度组份吸光度(A)，绘制标准曲线；黄酮粗品含量检测，称取各洗脱液干燥的黄酮粗品，用40％乙醇溶解并定容至50mL，分别取各样品溶液10mL至50mL容量瓶中，用40％乙醇补充至25mL，加入5mL NaNO2，然后以5mL Al(NO3)3和5mL NaOH显色，并以40％乙醇定容，显色10分钟，以空白试剂为对照，在510nm下测定各溶液的吸光度(A)，对照芦丁标准曲线，计算各洗脱液产品黄酮总含量。
可选地，在根据本发明的制备方法中，HPLC检测步骤包括：对于任一单一黄酮组分，依据对照品绘制标准曲线，将该组份的峰面积代入标准曲线进行计算，得到该单一黄酮组份的含量。
可选地，在根据本发明的制备方法中，竹叶黄酮浸膏和各洗脱液中黄酮包括碳苷黄酮、氧苷黄酮和黄酮苷元。
根据本发明的另一个方面，提供了一种高纯度的竹叶黄酮粉的制备方法，采用如上所述的高纯度竹叶黄酮粉的制备方法制备。
根据本发明的技术方案，充分利用丰富的竹类自然资源，提供了一种从竹叶浸膏中制备高纯度竹叶黄酮粉的方法，适于用任何溶媒浸提的竹叶黄酮浸膏。通过对竹叶黄酮浸膏预处理，采用醇沉法去除浸膏中的多糖、胶质、蛋白质类等杂质，再进行硅胶柱层析分离，硅胶柱层析以石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-醇体系进行洗脱。将硅胶层析后的洗脱液再上聚酰胺柱层析，采用水-醇体系进行梯度洗脱。收集各梯度洗脱液，对其进行浓缩和喷雾干燥后，可得到30～80％纯度的竹叶黄酮粉。该方法可重复再现、技术连续性强、副产品多、操作简单、环保、成本低，可得到不同纯度要求的竹叶黄酮粉，适合工业化大生产，具有示范推广和实用性强的特点。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本发明的具体实施方式。
附图说明
为了实现上述以及相关目的，本文结合下面的描述和附图来描述某些说明性方面，这些方面指示了可以实践本文所公开的原理的各种方式，并且所有方面及其等效方面旨在落入所要求保护的主题的范围内。通过结合附图阅读下面的详细描述，本公开的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。遍及本公开，相同的附图标记通常指代相同的部件或元素。
图1示出了根据本发明一个实施例的高纯度竹叶黄酮粉的制备方法100的流程图。
具体实施方式
下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施例。虽然附图中显示了本公开的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
图1示出了根据本发明一个实施例的高纯度竹叶黄酮粉的制备方法100的流程图。如图1所示，该方法始于步骤S110中。
在步骤S110中，将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或无水甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉，离心，得到离心液。
其中，竹叶黄酮浸膏可以是任何溶媒浸提的竹叶黄酮浸膏。根据一个实施例，竹叶黄酮浸膏可以根据以下方法制备得到：将晾干后的竹叶原料粉碎成物料碎片；将该物料碎片投入提取罐中，用高浓度的醇溶剂(如浓度大于90％的甲醇或乙醇)提取三次，每次提取完成后放出提取液，并将三次提取液进行合并，其中每次提取时间为1.5～2h、提取温度为80～85℃、料液比为1:(8～10)g/mL；将所合并的提取液浓缩至流膏状，进一步干燥得到竹叶黄酮浸膏。
具体地，新鲜晾干的竹叶原料可以采用筛孔直径为5～8mm的粉碎机来进行粉碎，原料可以为干慈竹叶或干楠竹叶等。提取罐可以是中试提取罐(容量大于100L)或者生产型提取罐(容量大于2m3)。该提取罐的底部可以间歇性的通入空压气体来搅动料液，释放空压气和其夹带残留的溶剂进入提取罐上方连通的冷凝装置中进行冷凝回收，该回收液能够重新流入提取罐中。空压气体的压力为0.2～0.5Mpa，每隔3～5min通入一次空压气体，每次通入空压气体的持续时间为0.5～1min。
每批物料可以提取三次，其中前两次提取的提取时间均为2h，第三次提取的提权时间为1.5～2h。三次提取的料液比分别为10:1、8:1、10:1。在进行提取液合并时，对于单批物料试验，可以将三次的提取液进行合并。而对于多批物料的连续生产环境下，可以将第一批物料的前两次提取液进行合并，将第一批物料的第三次提取液作为第二批物料的第一次提取液，与第二批物料的第二次提取液合并，第二批物料的第三次提取液作为第三批物料的第一次提取液，依次类推。在连续生产环境下，将每批次的最后一次提取液作为下批次的第一次提取液，这样可以提高大规模生产时的提取效率，操作简单，技术连续性强，适合工业化大生产。
提取液合并后，经浓缩冷凝回收溶媒。具体地，可先将批次合并的提取液常压浓缩至原体积的1/9～1/10后，后改减压浓缩至流膏状，再干燥得到竹叶黄酮浸膏。竹叶黄酮浸膏的预处理纯化步骤，具体包括：在竹叶黄酮浸膏中加入无水乙醇，加热使浸膏溶解完全，0～4℃环境静置醇沉，离心，去除多糖类物质、胶质和蛋白质、色素类物质，留取离心液。
随后，在步骤S120中，将离心液加入硅胶进行拌样，减压浓缩拌样液，干燥拌样物至不含乙醇或甲醇，得到拌样硅胶。
随后，在步骤S130中，将拌样硅胶上硅胶层析柱进行分离，先用第一体积比例的石油醚-乙酸乙酯体系进行洗脱得A组洗脱液，再改用第二体积比例的乙酸乙酯-醇体系作为流动相进行洗脱，得到B组洗脱液。
根据本发明的一个实施例，硅胶拌样时按照离心液含干物质和硅胶的质量比为1：(2～3)进行拌样，优选地其拌样重量比为1:3。硅胶粒度为200～300目。空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比例为1:(1～10)，优选地为1:3；硅胶上柱的溶剂为石油醚。空白硅胶的柱床高小于15cm，优选地为12cm。硅胶柱的直径范围为5～100cm，优选20cm。
此外，石油醚-乙酸乙酯体系中，石油醚与乙酸乙酯的体积比可选取1:(1～6)范围中的任一比例，优选地为1:(3～6)，更优选地为1:3。乙酸乙酯-醇体系为乙酸乙酯-甲醇体系或乙酸乙酯-乙醇体系，且乙酸乙酯和甲醇或乙醇的体积比可选取5:(1～5)范围中的任一比例，优选地为5:(2～3)，更优选地为5:2进行洗脱，得到对应的B组洗脱液。当然也可以根据需要选择其他比例，本发明对此不作限制。
根据本发明的另一个实施例，还可以检测各洗脱液中(如A组洗脱液、B组洗脱液、及后文的C组洗脱液等)的黄酮总含量和或单一黄酮组分含量，该单一黄酮组分包括异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷等中的一种或多种。这里的黄酮主要包括碳苷黄酮、氧苷黄酮和黄酮苷元。其中，黄酮总含量可用紫外光谱法检测，单一黄酮组分含量可用高效液相色谱检测(HPLC)。
具体地，黄酮总含量的检测步骤包括：以芦丁为对照品，采用Al(N03)3、NaNO2和NaOH显色，在紫外510nm处检测不同浓度组份吸光度(A)，绘制标准曲线；黄酮粗品含量检测：称取各洗脱液干燥的黄酮粗品，用40％乙醇溶解并定容至50mL，分别取各样品溶液10mL至50mL容量瓶中，用40％乙醇补充至25mL，加入5mL NaNO2，然后以5mL Al(N03)3和5mL NaOH显色，并以40％乙醇定容，显色10分钟，以空白试剂为对照，在510nm下测定各溶液的吸光度(A)，对照芦丁标准曲线，计算各洗脱液产品黄酮总含量。
单一黄酮组分含量的检测步骤包括：对于任一单一黄酮组分，依据样品标准曲线，将该组份的峰面积，代入标准曲线进行计算，得到该单一黄酮组分的含量。
例如，B组分洗脱液经紫外光谱检测，可得到总黄酮含量。经HPLC(高效液相色谱)检测，可检测单组分黄酮含量。
随后，在步骤S140中，对B组洗脱液，加入聚酰胺拌样，浓缩、干燥得拌样聚酰胺。
其中，聚酰胺拌样时按照洗脱液含干物质和聚酰胺的质量比为1:(2～3)进行聚酰胺拌样，优选地按照洗脱液中干物质和聚酰胺的质量比为1:2.5进行拌样。
随后，在步骤S150中，将拌样聚酰胺上聚酰胺层析柱进行分离，采用体积比例为10：(0～6)的水-醇体系作为流动相进行梯度洗脱或随机洗脱，得到C组份洗脱液。优选地为5：(0～3)的体积比例。
其中，聚酰胺柱层析的拌样聚酰胺和空白聚酰胺的柱床高比例为(1～10)：1；聚酰胺上柱溶剂为纯化水。空白聚酰胺的柱床高小于15cm；聚酰胺柱的直径范围为5～100cm，聚酰胺的粒度为100～200目。
水-醇体系为水-甲醇体系或水-乙醇体系，在该流动相中，水和甲醇/乙醇的体积比例为10:(0～6)，可选用其中任意比例对聚酰胺柱进行洗脱，称为随机洗脱。作为优选地，水和醇的体积比例分别为10:1、10:2、10:3、10:6进行分组分步的梯度洗脱，当一种比例的洗脱液洗脱至淡白或无色时，改用另一种醇含量比例高的流动相进行洗脱。每收集组分浓缩，可用紫外光谱法检测其黄酮总含量。该黄酮总含量的检测方法在基于步骤S130中的描述中已详细公开，这里不再赘述。
随后，在步骤S160中，分别对C组洗脱液进行浓缩和干燥后得到高纯度的竹叶黄酮粉。其中，10:0体积比例的洗脱液可收集做其他用处，这里主要对其他体积比例(如10:1、10:2、10:3、10:6)的洗脱液进行浓缩和干燥处理。
具体地，可以先将所收集的各C组洗脱液浓缩至原体积的1/9～1/10后，对浓缩后的溶液进行喷雾干燥或冷冻干燥，得不同纯度的竹叶黄酮粉，其中10:2和10:3体积比例洗脱的黄酮纯度较高，可达50％～80％，10:6洗脱液主要含黄酮苷元。进一步地，可将所收集的各洗脱液浓缩至原体积的1/10～1/12，然后喷雾干燥。
下面通过具体的实施例说明本发明从竹叶浸膏制备高纯度竹叶黄酮粉的方法，该描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
称取一定量的含的竹叶黄酮浸膏6.0kg，总含量为1.34％，加入无水乙醇，边加热边搅拌至溶解后，0～4℃环境静置醇沉、离心，得到离心液；离心液浓缩至25.67L，紫外光谱法检测，离心液总黄酮含量3.02mg/mL。
实施例2
将实施例1的离心液，按离心液含干物质和硅胶的重量比为1:3进行拌样后上硅胶柱，硅胶粒度为200～300目，空白硅胶和拌样硅胶的柱床高之比为1:3，空白硅胶柱床高12cm。石油醚为硅胶上柱液，先用石油醚比乙酸乙酯(V/V)为1:4洗脱至颜色浅绿色，再改用乙酸乙酯和甲醇的体积比例为5:2的流动相进行洗脱，得到B组洗脱液23.42L。紫外光谱法检测，洗脱液总黄酮含量2.90mg/mL。
实施例3
将实施例2中的第B组洗脱液，按照洗脱液干物质和聚酰胺的重量比为1:2.5拌聚酰胺(100～200目)，以纯化水上柱洗脱，先用纯化水洗脱，后改用水和甲醇的体积比例分别为10:1、10:2、10:3、10:6的流动相进行梯度洗脱，得到C组多份洗脱液。10:1得到洗脱液3.44L、10:2得到洗脱液2.38L，10:3和10:6分别得到洗脱液2.51L和1.69L。浓缩液经喷雾干燥后，得黄酮粉分别为16.82g，36.06g，41.477g和11.4g；紫外光谱法检测含量分别为34.04％，61.08％，81.12％，33.04％。
根据本发明的技术方案，充分利用丰富的竹类自然资源，提供了一种从竹叶浸膏中制备高纯度竹叶黄酮粉的方法，适于用任何溶媒浸提的竹叶黄酮浸膏。通过对竹叶黄酮浸膏预处理，采用醇沉法去除浸膏中的多糖、胶质、蛋白质类等杂质，再进行硅胶柱层析分离，硅胶柱层析以乙酸乙酯-醇体系进行洗脱。将硅胶层析后的洗脱液再上聚酰胺柱层析，采用乙酸乙酯-醇体系进行梯度洗脱。收集各梯度洗脱液，对其进行浓缩和喷雾干燥后，可得到30～80％纯度的竹叶黄酮粉。该方法可重复再现、技术连续性强、副产品多、操作简单、环保、成本低，可得到不同纯度要求的竹叶黄酮粉，适合工业化大生产，具有示范推广和实用性强的特点。
而且，本发明在制备竹叶黄酮浸膏时，通过对鲜竹叶晾干粉碎，采用高浓度醇对物料多次提取合并，每批次的最后一次提取液还可以作为下批次的第一次提取液，以提高大规模生产时的分离提取效率，操作简单，技术连续性强，适合工业化大生产。进一步地，在每批物料的单次提取时，采用循环溶剂法，溶剂经持续加热挥发、冷凝、回流、浸提、回流入溶剂罐，持续周而复始地循环浸提，有效降低溶剂用量和成本，且加快了分离提取效率。
A10、如A9所述的方法，其中，所述黄酮总含量的检测步骤包括：
以芦丁为对照品，采用Al(NO3)3、NaNO2和NaOH显色，在紫外510nm处检测不同浓度组份吸光度(A)，绘制标准曲线；黄酮粗品含量检测：称取各洗脱液干燥的黄酮粗品，用40％乙醇溶解并定容至50mL，分别取各样品溶液10mL至50mL容量瓶中，用40％乙醇补充至25mL，加入5mL NaNO2，然后以5mL Al(NO3)3和5mL NaOH显色，并以40％乙醇定容，显色10分钟，以空白试剂为对照，在510nm下测定各溶液的吸光度(A)，对照芦丁标准曲线，计算各洗脱液产品黄酮总含量。A11、如A10所述的方法，其中，单一黄酮组分含量的检测步骤包括：对于任一单一黄酮组分，依据对照品标准曲线，将该组份的峰面积，代入标准曲线进行计算，得到该单一黄酮组分的含量。
本说明书的描述中，除非另有明确的规定和限定，术语“连接”、“固定”等均应做广义理解。此外，术语“上”、“下”、“内”、“外”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系是基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或单元必须具有特定的方向、以特定的方位构造和操作，因此，不能理解为对本发明的限制。
在本说明书的描述中，术语“一个实施例”、“一些实施例”、“具体实施例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
在此处所提供的说明书中，说明了大量具体细节。然而，能够理解，本发明的实施例可以在没有这些具体细节的情况下被实践。在一些实例中，并未详细示出公知的方法、结构和技术，以便不模糊对本说明书的理解。

Claims (10)

1.一种高纯度竹叶黄酮粉的制备方法，包括：
将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或无水甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉、离心，得到离心液；
将所述离心液加入硅胶拌样，减压浓缩拌样液，干燥拌样物至不含乙醇或甲醇，得到拌样硅胶；
将所述拌样硅胶上硅胶层析柱进行分离，先用第一体积比例的石油醚-乙酸乙酯体系进行洗脱得A组洗脱液，再改用第二体积比例的乙酸乙酯-醇体系作为流动相进行洗脱，得到B组洗脱液；
对所述B组洗脱液加入聚酰胺拌样，浓缩，干燥，得到拌样聚酰胺；
将所述拌样聚酰胺上聚酰胺层析柱进行分离，采用体积比为10：(0～6)的水-醇体系作为流动相进行梯度洗脱或随机洗脱，得到C组份洗脱液；以及
分别对C组各份洗脱液进行浓缩和干燥处理，得到高纯度的竹叶黄酮粉。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述将竹叶黄酮浸膏用无水乙醇或无水甲醇加热溶解，0～4℃环境静置醇沉、离心的步骤包括：
在竹叶黄酮浸膏中加入无水乙醇或无水甲醇，加热使浸膏溶解完全，0～4℃环境静置醇沉，去除不溶性多糖类物质、胶质和蛋白质、色素类物质，取离心液。
3.如权利要求1所述的方法，其中，
硅胶拌样时按照离心液含干物质和硅胶的质量比1：(2～3)进行拌样，硅胶粒度为200～300目；
空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比例为1:(1～10)，空白上柱的溶剂为石油醚，空白硅胶的柱床高小于15cm，硅胶柱的直径范围为5～100cm。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，
所述石油醚-乙酸乙酯体系中，石油醚与乙酸乙酯的体积比为1:(3～6)；
所述乙酸乙酯-醇体系为乙酸乙酯-甲醇体系或乙酸乙酯-乙醇体系，且乙酸乙酯和醇的体积比为5:(2～3)；
所述梯度洗脱或任意比例洗脱的流动相中，水-醇体系为水-甲醇体系或水-乙醇体系，且该体系中水和甲醇/乙醇的体积比例为10:(0～6)。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，对聚酰胺柱梯度洗脱的流动相中，水和醇的体积比例分别为10:1、10:2、10:3、10:6，当每一种比例的洗脱液洗脱至颜色变淡时，改用另一种醇比例高的流动相进行洗脱。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，聚酰胺层析柱中的拌样聚酰胺和空白聚酰胺的柱床高比例为(1～10)：1；
聚酰胺的上柱溶剂为纯化水，空白聚酰胺的柱床高小于15cm；
聚酰胺柱的直径范围为5～100cm，聚酰胺的粒度为100～200目。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，
硅胶拌样时按照离心液含干物质和硅胶的质量比为1:3进行拌样；
空白硅胶和拌样硅胶的柱床高比例为1:3；
聚酰胺拌样时按照混黄酮干物质和聚酰胺的重量比为1:(2～3)进行拌样。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述分别对C组各份洗脱液进行浓缩和干燥后的步骤包括：
将各洗脱液浓缩至原体积的1/9～1/10，并对浓缩后的溶液进行喷雾干燥成粉。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，还包括步骤：
采用紫外光谱法检测各洗脱液中的黄酮总含量；和/或
采用高效液相色谱检测方法各洗脱液中的单一黄酮组分含量，所述单一黄酮组分包括异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷中的一种或多种。
10.一种高纯度的竹叶黄酮粉，采用如权利要求1-9中任一项所述的制备方法制备。
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