CN104231044A - 那西肽过柱纯化工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种那西肽的提纯方法，具体的说涉及一种那西肽的过柱纯化工艺，主要步骤包括那西肽过柱液配置，大孔树脂柱的吸附、浓缩干燥等。本方法通过选择合适的大孔树脂，过柱方法以及浓缩干燥方法，能有效的提高那西肽粗品的纯度，得到的那西肽含量能达到95%以上，收率达到70-80%。该方法仪器设备要求低，操作简单，适合大生产操作。
Description
技术领域
本发明属于分离工程技术领域，涉及那西肽的提纯工艺，具体的说涉及一种用过柱方法纯化那西肽的工艺。
背景技术
那西肽为动物专用抗生素，其抗菌作用机理是抑制细菌蛋白质合成而起抗菌作用。细菌对那西肽不易产生耐药性，与其他抗生素也无明显交叉耐药性。那西肽对革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌有较高的活性。那西肽毒性小，混饲给药在动物消化道中很少吸收，因而在动物性产品中残留少。
用途：抗生素类药，用于促进畜禽生长。
分子式：C51H43N13O12S6
分子量：1222.37
那西肽由链霉菌发酵后，通过一系列后提取方法得到含量为70%左右的成品，用于预混剂使用，如果要将70%含量的那西肽进一步提纯现有主要是多次溶剂重结晶的方法，此方法对溶剂使用量较大，由于需要多次结晶过程，那西肽的损失较大，提取过程分解较多，杂质分离效果不理想，含量难以做到90%以上。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术中那西肽提纯方法难以去除那西肽中的杂质，操作过程中容易使那西肽分解，那西肽产品的含量难以达到90%以上的问题，提供一种使用过柱纯化那西肽的方法，通过选用两种不同极性的大孔吸附树脂来吸附那西肽中的杂质，达到纯化目的。
本发明采用下列技术方案解决上述技术问题：
那西肽过柱纯化的工艺，其具体步骤如下：
（1）将那西肽粗品1g（质量分数70%）加入15-20倍质量的混合溶剂中，加酸调节pH值使那西肽完全溶解；（2）将两种不同极性类型的大孔吸附树脂A和B分别依次用丙酮和甲醇预处理后，按照质量比1：2-3：4的比例混合后湿法装入柱径比为15：1的层析柱中，（3）将那西肽溶液过混合树脂柱，控制流速为1-5ml/min，收集过柱液；（4）用碱中和到中性，减压浓缩到原体积的十分之一，大量固体析出，过滤，水洗滤饼，减压烘干得到纯化后的那西肽，含量95%以上，总回收率70-80%；
上述技术方案中混合溶剂为丙酮与体积分数80%的甲醇按体积比1：1-1：2组成；
上述技术方案中所述的加酸条件所使用的酸为摩尔浓度0.01-0.1mol/L的盐酸，pH调整到2-4；
上述技术方案中所述的大孔树脂A型号为HPD-100或与其极性相当的大孔吸附树脂（如HPD-200A，HPD-200B），大孔树脂B 的型号为HPD-500或与其极性相当的大孔吸附树脂（如HPD-600）。
作为优选，大孔树脂A和B按照3:5的比例进行混合填充。
作为优选，所述的过柱流度为2-3ml/min。
作为优选，所述的中和用碱为摩尔浓度0.01-0.1mol/L的NaOH。
作为优选，所述的减压浓缩温度不超过50度，真空干燥温度不超过50度。
本发明的有益效果是：本发明选用了两种不同极性的大孔吸附树脂调节合适的比例一次性装柱层析，大大缩短了过柱时间，并且前处理简单，吸附效果好，除杂质的效果明显，能达到较理性的纯化效果，纯化过程中那西肽分解少，得率高，得到产品含量能达到95%，收率能达到70-80%。
本发明解决了传统多次溶剂重结晶方法中产率低，产品分解厉害，溶剂损耗大，成本高，难以得到90%以上含量产品的问题，同时避免了用单一树脂纯化时间长，树脂消耗量大和纯化效果不理想的缺点。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，实施例中所需试剂均系市购常规试剂，那西肽粗品由浙江汇能动物药品有限公司生产。
大孔吸附树脂HPD-100，由沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产；
大孔吸附树脂HPD-500，由沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产。
实施例1
那西肽过柱纯化的工艺，其具体步骤如下：
（1）将那西肽粗品2g（含量70%）加入30ml的混合溶剂（丙酮：甲醇80%体积比1：1），加酸调节pH值使那西肽完全溶解；
（2）将大孔吸附树脂HPD-100和HPD-500分别依次用丙酮和甲醇预处理后，按照1：2的比例混合后湿法装入柱径比为15：1的层析柱中；
（3）将之前配置的那西肽溶液过混合树脂柱，控制流速为5ml/min，收集过柱液；
（4）用碱中和到中性，减压浓缩到原体积的十分之一，大量固体析出，过滤，水洗滤饼，减压烘干得到纯化后的那西肽1.11g，含量96.3%，总回收率76.35%。
实施例2
那西肽过柱纯化的工艺，其具体步骤如下：
（1）将那西肽粗品2g（含量70%）加入40ml的混合溶剂（丙酮：甲醇80%体积比1：1），加酸调节pH值使那西肽完全溶解；
（2）将大孔吸附树脂HPD-100和HPD-500分别依次用丙酮和甲醇预处理后，按照3：5的比例混合后湿法装入柱径比为15：1的层析柱中；
（3）将之前配置的那西肽溶液过混合树脂柱，控制流速为4ml/min，收集过柱液；
（4）用碱中和到中性，减压浓缩到原体积的十分之一，大量固体析出，过滤，水洗滤饼，减压烘干得到纯化后的那西肽1.14g，含量96.2%，总回收率78.33%。
实施例3
（1）将那西肽粗品2g（含量70%）加入40ml的混合溶剂（丙酮：甲醇80%体积比1：2），加酸调节pH值使那西肽完全溶解；
（2）将大孔吸附树脂HPD-100和HPD-500分别依次用丙酮和甲醇预处理后，按照3：4的比例混合后湿法装入柱径比为15：1的层析柱中；
（2）将之前配置的那西肽溶液过混合树脂柱，控制流速为2ml/min，收集过柱液；
（3）用碱中和到中性，减压浓缩到原体积的十分之一，大量固体析出，过滤，水洗滤饼，减压烘干得到纯化后的那西肽1.15g，含量95.1%，总回收率78.11%。
对比例1：
将2g含量70%那西肽的粗品投入到40ml 无水乙醇中，加热到50°C溶解，加入活性炭1g，于50°C搅拌30分钟，趁热过滤掉活性炭，滤液冷冻到0°C，固体析出，过滤，滤饼抽干后用20ml丙酮冲洗，抽滤干后，于50°C烘干，得到产品1.2g，含量82%，得率70.28%。
由实施例1-3与对比例1对比表明，本发明的方法解决了传统溶剂重结晶方法中那西肽产率低，产品分解厉害，难以得到90%以上含量产品的问题。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (6)
1.那西肽过柱纯化的工艺，其特征在于，其具体步骤如下：
（1）将质量分数70%的那西肽粗品1g加入15-20倍质量的混合溶剂中，加酸调节pH值使那西肽完全溶解；所述混合溶剂为丙酮与体积分数80%的甲醇按体积比1:1-1:2组成；
（2）将两种不同极性类型的大孔吸附树脂A和B分别依次用丙酮和甲醇预处理后，按照质量比1：2~3：4的比例混合后湿法装入柱径比为15：1的层析柱中；所述大孔树脂A型号为HPD-100或与其极性相当的大孔吸附树脂，大孔树脂B 的型号为HPD-500或与其极性相当的大孔吸附树脂；
（3）将步骤（1）的那西肽溶液过步骤（2）的混合树脂柱，控制流速为1-5ml/min，收集过柱液；
（4）将步骤（3）的过柱液用碱中和到中性，减压浓缩到原体积的十分之一，大量固体析出，过滤，水洗滤饼，减压烘干得到纯化后的那西肽，所述那西肽的含量为95%以上。
2.根据权利要求1所述的那西肽过柱纯化工艺，其特征在于，步骤（1）中所述的加酸条件所使用的酸为摩尔浓度0.01-0.1mol/L的盐酸，pH调整到2-4。
3.根据权利要求1所述的那西肽过柱纯化工艺，其特征在于，步骤（2）中所述的大孔树脂A和B按照质量比3：5的比例进行混合填充。
4.根据权利要求1所述的那西肽过柱纯化工艺，其特征在于，步骤（3）中所述的过柱速度为2-3ml/min。
5.根据权利要求1所述的那西肽纯化工艺，其特征在于，步骤（4）中所述的中和用碱为摩尔浓度0.01-0.1mol/L的NaOH。
6.根据权利要求1所述的那西肽纯化工艺，其特征在于，步骤（4）中所述的减压浓缩温度不超过50℃，真空干燥温度不超过50℃。
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