CN102746352A - 一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将1总亿两性霉素B投入到二甲基甲酰胺，180％甲醇溶液的混合溶剂中，调节pH值；步骤2：用二甲基甲酰胺和甲醇预处理后，按照3∶4～5∶6的比例混合后湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，得到混合树脂柱；滤液过混合树脂柱，再将过混合树脂柱的滤液按照总亿/体积计用1总亿：10～20ml二氯甲烷：10～25ml注射用水的比例混合，用酸或碱调pH值至4.0～6.0，结晶；出现结晶后，保温35～45℃，静置18～24小时养晶，步骤3：将养晶后得到的溶液抽滤，温度40～60℃，烘干24～30h，得到产品。本发明解决了传统重结晶方法中产率低，工艺复杂，成本高的问题，而且避免了运用单一树脂纯化，过柱时间长、树脂消耗量大和效果不理想的缺点。

Description

一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺
技术领域
本发明涉及一种原料药的提炼纯化工艺，特别涉及一种用于治疗深部真菌感染药物原料药生产过程中的纯化工艺。
背景技术
两性霉素B(Amphotericin B)是由结节链霉菌(Streptomycesnodosus)产生的第一个被证实对真菌性感染有效地大分子多烯类抗生素，其抗菌谱广，是临床上治疗深部真菌感染的首选药物。其化学名为
[1R-(1R*，3S*，5R*，6R*，9R*，11R*，15S*，16R*，17R*，18S*，19E，21E，23E，25E，27E，29E，31E，33R*，35S*，36R*，37S*)]-33-[(3-氨基-3，6-二脱氧-β-D-吡喃甘露糖基)氧]-1，3，5，6，9，11，17，37-八羟基-15，16，18-三甲基-13-氧代-14，39-二氧双环-[33.3.1]三十九烷-19，21，23，25，27，29，31-七烯-36-羧酸，化学结构式如下
Figure BDA0000056307780000011
虽然目前我国两性霉素B的产量已达国际水平，但是传统纯化工艺仍然使用多次重结晶的方法，这种方法主要存在两大问题：
一，常用的两性霉素B精制工艺中，每次精制溶剂用量少，溶液浓度较高，粘度大，过滤除杂质非常困难，此条件下两性霉素B溶解不完全，然而常规工艺通常要在结晶操作前先过滤去除未溶解的物质，这些物质包括了尚未溶解的两性霉素B，这样会造成产品损失，影响产品收率。并且延长了辅助生产时间，增加动力消耗，降低了设备利用率。
二，两性霉素B一般要经过多次重复重结晶才能使未知杂质含量降到合格水平，而且每次精制所采用的溶剂体系不同，工艺复杂，多次结晶纯化倍数低，产品收率低，生产成本高。
为了解决以上的工艺问题，有必要采取其它的分离纯化方法。由于两性霉素B不溶于水，而溶于二甲基酰胺、甲醇等有机溶剂，故考虑用大孔树脂吸附技术对其进行分离纯化。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，针对原有的产率低，工艺复杂，成本高的问题，提供一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，选用不同极性的大孔树脂吸附两性霉素B中的杂质，以达到纯化效果。
本发明采用下列技术方案解决上述技术问题：一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：将1总亿两性霉素B按总亿/体积计投入到15～20ml二甲基甲酰胺(DMF)：20ml80％甲醇溶液的混合溶剂中，用柠檬酸调节pH值至2.0～4.0，使两性霉素B完全溶解，溶解后的溶液过滤得到澄清滤液；
步骤2：将两种不同极性类型的大孔吸附树脂A、B，用DMF和甲醇预处理后，按照3∶4～5∶6的比例混合后湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，树脂的体积总量为原料效价的40～50倍，得到混合树脂柱；将步骤1中的滤液过混合树脂柱，控制流出速度为2～10ml/min；再将过混合树脂柱的滤液按照总亿/体积计用1总亿：10～20ml二氯甲烷：10～25ml注射用水的比例混合，用酸或碱调pH值至4.0～6.0，结晶；出现结晶后，保温35～45℃，静置18～24小时养晶；
步骤3：将养晶后得到的溶液抽滤，温度40～60℃，烘干24～30h，得到纯化的两性霉素B产品。
在上述技术方案基础上，所述的步骤2中的A树脂为弱极性、小孔径的聚苯乙烯型树脂，B树脂为非极性的中孔径聚苯乙烯型树脂。
在上述技术方案基础上，所述的步骤2中的A树脂为HPD-100型号的大孔吸附树脂或其他极性相当的大孔吸附树脂，B树脂为HPD-500型号的大孔吸附树脂或其他非极性的大孔吸附树脂。
在上述技术方案基础上，所述的步骤2中，A、B两种树脂按照3∶4的比例混合。
或者，所述的步骤2中，A、B两种树脂按照5∶6的比例混合。
在上述技术方案基础上，所述步骤2中的酸为柠檬酸，碱为三乙胺。
本发明的技术优点是：本发明选择混合两种分别为弱极性、小孔径的聚苯乙烯型树脂和非极性、中孔径的聚苯乙烯型树脂不同极性的大孔树脂，优选HPD-100型号和HPD-500型号，调节其最适合的比例一次性装柱层析，大大缩短过柱时间，并且前处理简单，收率高，吸附效果好，去杂效果可叠加，吸附产品杂质达到良好的纯化效果，收率在75％到80％之间，杂质总含量降至5.0％以下，最大单个杂质降至1.4％以下。树脂的吸附率和解吸率是衡量树脂的重要指标，不仅吸附量大，还要求解吸率高，以保证目标产物能最大限度地回收。
本发明解决了传统重结晶方法中产率低，工艺复杂，成本高的问题，而且避免了运用单一树脂纯化，过柱时间长、树脂消耗量大和效果不理想的缺点。
具体实施方式
实施例1
步骤1：将8.47g(10总亿)两性霉素B投入在150mlDMF和200ml80％甲醇水溶剂中，用柠檬酸调节pH至2.0～4.0，使其溶解，溶解后的溶液过滤得澄清滤液；
步骤2：用DMF和甲醇预处理A树脂、B树脂，A树脂采用AM-7型树脂、B树脂采用AM-18型树脂，分别取170ml AM-7型树脂和230ml AM-18型树脂湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，将滤液过混合树脂柱，控制流出速度为2-10ml/min；再将过柱得到的滤液加入100ml二氯甲烷和100ml注射用水的混合溶剂中，用三乙胺调pH至4.0-6.0，结晶；结晶之后将溶液置入水浴锅内缓慢加温到35-45℃，保温静置18-24小时养晶。
步骤3：将得到的养晶溶液抽滤，送烘箱烘干，温度60℃，压力0.8-1.0Mpa，烘干24h，得到两性霉素B产品。
实验结果：经HPLC检测，过混合树脂柱后两性霉素B产品收率为78.2％、总杂为4.95％、最大单杂为1.32％
实施例2
步骤1：将462.96g(500总亿)两性霉素B投入在10LDMF和10L80％甲醇水溶剂中，用柠檬酸调节pH至2.0～4.0，使其溶解，溶解后的溶液过滤得到澄清滤液；
步骤2：用DMF和甲醇分别预处理型号为HPD-100和HPD-500的大孔树脂，分别量取11.4L的HPD-100和13.6L的HPD-500树脂湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，将步骤1得到的滤液过混合树脂柱，控制流出速为2～10ml/min；再将过柱得到的滤液加入10L二氯甲烷和12.5L注射用水的混合溶剂中，用柠檬酸调pH至4.0-6.0，结晶；结晶之后将养晶罐保温35-45℃，静置养晶18-24h。
步骤3：将步骤2得到的养晶溶液抽滤，送烘箱烘干，温度40℃，压力0.8～1.0Mpa，烘干30h，得到两性霉素B产品。
实验结果：经HPLC检测，过混合树脂柱后两性霉素B产品收率为76.3％、总杂为4.83％、最大单杂为1.35％。
实施例3
步骤1：将847.46g(1000总亿)两性霉素B投入在18LDMF和20L甲醇(80％)溶剂中，用柠檬酸调节pH至2.0-4.0，使其溶解，溶解后的溶液过滤得到澄清滤液；
步骤2：用DMF和甲醇分别预处理型号为HPD-100和HPD-500的大孔树脂，分别量取17.8L的HPD-100和22.2L的HPD-500树脂湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，将步骤1得到的滤液过混合树脂柱，控制流出速为2-10ml/min；再将过柱得到的滤液加入15L二氯甲烷和20L注射用水的混合溶剂中，用柠檬酸调pH至4.0～6.0，结晶；结晶之后将养晶罐保温35～45℃，静置养晶18～24h。
步骤3：将得到的养晶溶液过滤，结晶送烘箱烘干，温度50℃，压力0.8～1.0Mpa，烘干24～30h，得到两性霉素B产品。
实验结果：经HPLC检测，过混合树脂柱后两性霉素B产品收率为75.8％、总杂为4.88％、最大单杂为1.37％。

Claims (6)

1.一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将1总亿两性霉素B按总亿/体积计投入到15～20ml二甲基甲酰胺：20ml80％甲醇溶液的混合溶剂中，用柠檬酸调节pH值至2.0～4.0，使两性霉素B完全溶解，溶解后的溶液过滤得到澄清滤液；
步骤2：将两种不同极性类型的大孔吸附树脂A、B，用二甲基甲酰胺和甲醇预处理后，按照3∶4～5∶6的比例混合后湿法装入柱径比为12.5∶1的层析柱中，树脂的体积总量为原料效价的40～50倍，得到混合树脂柱；将步骤1中的滤液过混合树脂柱，控制流出速度为2～10ml/min；再将过混合树脂柱的滤液按照总亿/体积计用1总亿：10～20ml二氯甲烷：10～25ml注射用水的比例混合，用酸或碱调pH值至4.0～6.0，结晶；出现结晶后，保温35～45℃，静置18～24小时养晶；
步骤3：将养晶后得到的溶液抽滤，温度40～60℃，烘干24～30h，得到纯化的两性霉素B产品。
2.根据权利要求1所述的一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征是，所述的步骤2中的A树脂为弱极性、小孔径的聚苯乙烯型树脂，B树脂为非极性的中孔径聚苯乙烯型树脂。
3.根据权利要求2所述的一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征是，所述的步骤2中的A树脂为HPD-100型号的大孔吸附树脂或其他极性相当的大孔吸附树脂，B树脂为HPD-500型号的大孔吸附树脂或其他非极性的大孔吸附树脂。
4.根据权利要求1所述的一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征是，所述的步骤2中，A、B两种树脂按照3∶4的比例混合。
5.根据权利要求1所述的一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征是，所述的步骤2中，A、B两种树脂按照5∶6的比例混合。
6.根据权利要求1所述的一种治疗深部真菌感染药物的纯化工艺，其特征是，所述步骤2中的酸为柠檬酸，碱为三乙胺。
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