CN101948494B - 一种腺苷钴胺提取方法 - Google Patents

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Abstract

一种腺苷钴胺的制备方法，它按如下步骤进行：a、取维生素B12发酵液，在避光条件下水解过滤；b、滤液经大孔树脂柱吸附、水洗和解吸得到一解液，c、一解液经蒸发浓缩得到浓缩液；d、在浓缩液中加入絮凝剂，过滤，得到纯化液；e、纯化液经层析树脂柱吸附、展层和解吸，得到二解液；f、二解液经氧化铝柱吸附、展层和解吸，得到结晶原液；g、在搅拌状态下，往结晶原液中加入丙酮结晶，抽滤，干燥即得成品。本发明所得产品中的杂质低于1.0％，含量达到98.0％以上，产品得率达到50％以上，维生素B12的总得率高于80％，具有方法简便易行，提取得率高，产品纯度高，生产成本低的特点。

Description

一种腺苷钴胺提取方法
技术领域
本发明涉及一种腺苷钴胺提取方法，具体地说，是一种改进的腺苷钴胺提取方法。
背景技术
腺苷钴胺是维生素B12的一种，又称辅酶B12，它是以钴离子为中心，与四个吡咯环、苯并咪唑及5-脱氧核糖腺苷组成的复杂络合物，分子式：C72H100CoN18O17P，分子量：1579.57，其化学结构式如下：
Figure BSA00000268592400011
腺苷钴胺为深红色晶体或结晶性粉末，无臭无味，在空气中易吸潮，见光易分解。腺苷钴胺属于维生素类药物，主要用于治疗恶性贫血和其它巨幼细胞型贫血，也可用于治疗各种营养不良性和失血性贫血，以及神经炎、神经痛及神经性障碍等疾病，还可治疗放射线及化疗引起的白细胞减少症，急慢性口腔溃疡和氰化物的解毒等症状，具有良好的临床使用效果。
腺苷钴胺是通过微生物发酵产生。目前生产腺苷钴胺的方法有两种，一种是由维生素B12的发酵液提取制得，另一种是由维生素B12的发酵液提取制得氰钴胺，经酶合成法转化为腺苷钴胺，其中氰钴胺的酶合成法已由西班牙intequim公司申报了专利，专利号为：200510119016.5，但在市场上尚未见到该方法生产的产品。
目前市场上销售的腺苷钴胺均是由石药集团河北华荣制药有限公司通过发酵液的提取法生产的。但是，传统的生产方法没有纯化工艺，提取过程中要经过三步氧化铝提纯，由于氧化铝对腺苷钴胺发酵液的分离能力差，导致批处理能力小，生产效率低。同时，由于结晶原液纯度低，不能实现快速搅拌结晶，这是因为结晶原液的含量较低，仅能达到80％左右，且原液中还含有一些其它不溶于丙酮的物质，在使用丙酮结晶时会出现浑浊现象。为了控制这类物质不先于腺苷钴胺在丙酮中析出，必须把丙酮的加入速度控制得非常缓慢，而且需要分期加入，加入的间隔需要在12小时以上。尤其令技术人员苦恼的是结晶过程不能开搅拌，否则便会出现浑浊现象，并继而造成结晶收率偏低的结果。已有技术的产品质量虽能符合中国药典的质量要求，但品质仍属一般，且此工艺腺苷钴胺的得率仅有30％，系统总得率仅有60％，氧化铝再生步骤繁琐，操作强度大，产废量大，环保投入高，致使生产成本居高不下。
发明内容
本发明用于克服上述已有技术之缺陷、提供一种改进的腺苷钴胺提取方法，此法具有简便易行、提取得率高、产品纯度高、生产成本低的特点。
本发明所述问题是以下述技术方案解决的：
一种腺苷钴胺提取方法，它按如下步骤进行：
a、将维生素B12发酵液，在避光条件下水解过滤，得到滤液；
b、滤液经大孔树脂柱吸附、水洗和解吸，得到一解液；
c、一解液经蒸发浓缩去除丙酮或乙醇得到浓缩液；
d、在浓缩液中加入絮凝剂，用质量浓度为30％的氢氧化钠溶液调pH至7.0～7.5，过滤，得到纯化液；
e、纯化液经层析树脂柱吸附、展层和解吸，去除其它类型的维生素B12，得到二解液；所述层析树脂柱为苯乙烯类改性树脂柱；
f、二解液经氧化铝柱吸附、展层和解吸，去除相关杂质，得到结晶原液；
g、在搅拌状态下，向结晶原液中加入丙酮进行结晶，得到高纯度的腺苷钴胺晶体，抽滤，干燥即得腺苷钴胺成品。
上述腺苷钴胺提取方法，所述维生素B12发酵液为好氧发酵发酵液或厌氧发酵发酵液。
上述腺苷钴胺提取方法，所述浓缩液中维生素B12浓度控制在500～20000μg/ml。
上述腺苷钴胺提取方法，所述絮凝剂为二价锌盐或三价铝盐，所述维生素B12和絮凝剂用量的摩尔比为：维生素B12∶絮凝剂＝10～20∶1。
上述腺苷钴胺提取方法，所述层析树脂柱使用的展层剂中丙酮与水的重量比例为5～15∶100，解吸剂中丙酮与水的重量比例为30～60∶100；所述氧化铝柱使用的展层剂中丙酮与水的重量比例为60～80∶100，所述解吸剂中丙酮与水的重量比例为30～60∶100。
上述腺苷钴胺提取方法，所述结晶搅拌转速为30～100rpm。
本发明提取工艺增加了絮凝剂絮凝、新的层析树脂浓缩纯化步骤，去除了原工艺中三步氧化铝中的两步，并实现了快速动态结晶。新的提取工艺，有下述优点：
1、由于絮凝剂的絮凝纯化和层析树脂较好的分离效果，去掉了混溶的一些蛋白和色素等杂质，使腺苷钴胺的质量有明显提高，产品中的含杂量小于1.0％，含量高于98.0％，而传统提取工艺产品的各种杂质一般在1.0～2.0％，含量不小于95.0％即为合格，其指标明显低于本发明。同时，得率也得到大幅度提高，高达80％以上，比传统工艺提高了15～20％，；
2、由于层析介质处理量大，再生简便，提高了处理能力，批处理量提高3倍以上；
3、本发明采用快速动态结晶方法，结晶时间由原来的72小时缩短为4～10小时，大大缩短了生产周期，提高了生产效率；
4、由于新工艺使用了新型絮凝剂和层析树脂，大大减少了三废的排放，实现了清洁生产，减少了环保投入，降低了生产成本。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详述。
实施例1：
将含维生素B12的20Kg的发酵液水解过滤，得到滤液，然后将滤液吸附于约10m3的大孔树脂中，洗涤、解吸，得到一解液，一解液经浓缩得到浓缩液；向浓缩液中加入二价锌盐或三价铝盐，维生素B12∶絮凝剂＝20∶1(摩尔比)，用30％的氢氧化钠调节PH至7.5，过滤后，再用水悬浮滤饼再次过滤，重复几次该操作，合并所有的滤液维生素B12的纯化液；将纯化液吸附于3m3的层析树脂中，用水洗涤后使用低比例的丙酮水，可选择丙酮与水的重量比例为15∶100。溶液进行展层，得到含有5.0Kg的其它类型维生素B12的展层液，等其它类型维生素B12的色带完全去除后，再使用高比例的丙酮水，可选择丙酮与水的重量比例为60∶100溶液进行解吸，得到含有13.7Kg腺苷钴胺的二解液；将二解液吸附于300升的氧化铝柱，使用高比例的丙酮水，可选择丙酮与水的重量比例为80∶100溶液展层去除一些杂质后，再使用低比利的丙酮水，可选择丙酮与水的重量比例为60∶100溶液进行解吸，得到含有11.5Kg腺苷钴胺的结晶原液；在搅拌状态下向结晶原液中加入丙酮使腺苷钴胺结晶出来，经抽滤、干燥得到11.5Kg的腺苷钴胺产品。该产品的各种杂质为0.98％，腺苷钴胺含量为98.1％，产品得率为57.5％，维生素B12的总得率为82.5％。
实施例2：
将含维生素B12的20Kg的发酵液水解过滤，得到滤液，然后将滤液吸附于约10m3的大孔树脂中，洗涤、解吸，得到一解液，一解液经浓缩得到浓缩液；向浓缩液中加入二价锌盐或三价铝盐，维生素B12∶絮凝剂＝10∶1(摩尔比)，用30％的氢氧化钠调节PH至7.2，过滤后，再用水悬浮滤饼再次过滤，重复几次该操作，合并所有的滤液维生素B12的纯化液；将纯化液吸附于3m3的层析树脂中，用水洗涤后使用低比例的丙酮水，即丙酮与水的重量比例为5∶100溶液进行展层，得到含有4Kg的其它类型维生素B12的展层液，等其它类型维生素B12的色带完全去除后，再使用高比例的丙酮水，即丙酮与水的重量比例为30∶100溶液进行解吸，得到含有14Kg腺苷钴胺的二解液；将二解液吸附于300升的氧化铝柱，使用高比例的丙酮水溶液，选择丙酮与水的重量比例为60∶100，展层去除一些杂质后，再使用低比利的丙酮水，选择丙酮与水的重量比例为30∶100溶液进行解吸，得到含有12Kg腺苷钴胺的结晶原液；在搅拌状态下向结晶原液中加入丙酮使腺苷钴胺结晶出来，经抽滤、干燥得到12Kg的腺苷钴胺产品。该产品的各种杂质为0.99％，腺苷钴胺含量为98.5％，产品得率为60％，维生素维生素B12的总得率为80.3％。
实施例3：
将含维生素B12的20Kg的发酵液水解过滤，得到滤液，然后将滤液吸附于约10m3的大孔树脂中，洗涤、解吸，得到一解液，一解液经浓缩得到浓缩液；向浓缩液中加入二价锌盐或三价铝盐，维生素B12∶絮凝剂＝15∶1(摩尔比)，用30％的氢氧化钠调节PH至7.4，过滤后，再用水悬浮滤饼再次过滤，重复几次该操作，合并所有的滤液维生素B12的纯化液；将纯化液吸附于3m3的层析树脂中，用水洗涤后使用低比例的丙酮水溶液，丙酮与水的重量比例为10∶100，进行展层，得到含有3.8Kg的其它类型维生素B12的展层液，等其它类型维生素B12的色带完全去除后，再使用高比例的丙酮水溶液，丙酮与水的重量比例为40∶100进行解吸，得到含有15Kg腺苷钴胺的二解液；将二解液吸附于300升的氧化铝柱，使用高比例的丙酮水溶液，丙酮与水的重量比例为70∶100展层去除一些杂质后，再使用低比利的丙酮水溶液，丙酮与水的重量比例为50∶100进行解吸，得到含有12.5Kg腺苷钴胺的结晶原液；在搅拌状态下向结晶原液中加入丙酮使腺苷钴胺结晶出来，经抽滤、干燥得到12.5Kg的腺苷钴胺产品。该产品的各种杂质为0.97％，腺苷钴胺含量为98.3％，产品得率为62.5％，维生素B12的总得率为81.5％。

Claims (5)

1.一种腺苷钴胺提取方法，其特征在于，它按如下步骤进行：
a、取维生素B12发酵液，在避光条件下水解过滤，得到滤液；
b、滤液经大孔树脂柱吸附、水洗和解吸，得到一解液；
c、一解液经蒸发浓缩，得到浓缩液；
d、在浓缩液中加入絮凝剂，用质量浓度为30%的氢氧化钠溶液调pH至7.0～7.5，过滤，得到纯化液；所述絮凝剂为二价锌盐或三价铝盐，维生素B12和絮凝剂用量的摩尔比为：维生素B12：絮凝剂=10～20:1；
e、纯化液经层析树脂柱吸附、展层和解吸，去除其它类型的维生素B12，得到二解液；所述层析树脂柱为苯乙烯类改性树脂柱；
f、二解液经氧化铝柱吸附、展层和解吸，去除相关杂质，得到结晶原液；
g、在搅拌状态下，往结晶原液中加入丙酮进行结晶，得到高纯度的腺苷钴胺晶体，抽滤，干燥即得腺苷钴胺成品。
2.根据权利要求1所述的腺苷钴胺提取方法，其特征在于，所述维生素B12发酵液为好氧发酵液或厌氧发酵液。
3.根据权利要求2所述的腺苷钴胺提取方法，其特征在于，所述浓缩液中维生素B12浓度控制在  500～20000μg/ml。
4.根据权利要求3所述的腺苷钴胺提取方法，其特征在于，所述层析树脂柱使用的展层剂中丙酮与水的重量比例为5～15：100，解吸剂中丙酮与水的重量比例为30～60：100；所述氧化铝柱使用的展层剂中丙酮与水的重量比例为60～80：100，解吸剂中丙酮与水的重量比例为30～60：100。
5.根据权利要求4所述的腺苷钴胺提取方法，其特征在于，结晶搅拌转速为30～100rpm 。
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