CN111686136B - 纯化三萜类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种纯化三萜类化合物的方法，包括提供灵芝粗萃物，所述灵芝粗萃物包括第一类三萜类化合物以及第二类三萜类化合物。第一类三萜类化合物包括灵芝酸A，第二类三萜类化合物包括灵芝酸F以及灵芝醇B。接着，以模拟移动床层析法将所述灵芝粗萃物中的三萜类化合物分离开来。运用此模拟移动床层析法可将灵芝粗萃物中的包括灵芝酸A的第一类三萜类化合物与包括灵芝酸F以及灵芝醇B的第二类三萜类化合物分离开来，以产生高纯度的三萜类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种纯化方法，且特别是有关于一种纯化三萜类化合物的方法。
背景技术
灵芝作为传统的中药材具有很高的药用价值，已经成为保健食品的主要原料之一。研究发现灵芝具有调节免疫系统、心血管系统的作用，可用于抗突变，抗衰老等作用。灵芝中主要的活性成分为三萜类化合物的灵芝酸及灵芝醇，具有抗肿瘤、保肝护肝、抗菌消炎等药理作用。
目前从灵芝粗萃物中分离纯化出三萜类化合物的方法主要是采用传统的制备色谱分离技术进行分离。然而，现有的分离纯化的方法皆为间歇式操作的纯化方式，在实际的生产过程中往往会导致产物稀释严重，操作重复性低，稳定性不佳，不适宜工业化的生产。
发明内容
本发明提供一种纯化三萜类化合物的方法，可有效地分离出高纯度的三萜类化合物。
本发明的实施例提供一种纯化三萜类化合物的方法。所述方法包括以下步骤。首先，提供灵芝粗萃物，灵芝粗萃物包括第一类三萜类化合物及第二类三萜类化合物。第一类三萜类化合物包括灵芝酸A，第二类三萜类化合物包括灵芝酸F以及灵芝醇B。接着，以模拟移动床层析法将灵芝粗萃物中的三萜类化合物分离开来。模拟移动床层析法包含：(i)提供模拟移动床，模拟移动床依序包括第一区段、第二区段以及第三区段，其中模拟移动床是由移动相及固定相所组成，固定相为内部具有孔隙的颗粒，移动相对于模拟移动床是朝同一方向从冲涤端入口流经第一区段、第二区段以及第三区段之间，固定相是相对于移动相朝反方向模拟移动，移动相为包含超临界二氧化碳与乙醇的冲涤剂；(ii)将灵芝粗萃物从进料入口注入模拟移动床的第二区段与第三区段之间，并使第一类三萜类化合物随固定相移动至第一区段与第二区段之间的萃出端，并使第二类三萜类化合物随移动相移动至第三区段的萃余端，以分离纯化出第一类三萜类化合物及第二类三萜类化合物。
在本发明的一实施例中，上述的固定相为表面改质的二氧化矽填料。
在本发明的一实施例中，上述的第一区段、第二区段以及第三区段各自包含2根管柱，且每根管柱内填充有固定相。
在本发明的一实施例中，上述固定相的颗粒间的孔隙度为0.38。
在本发明的一实施例中，其中上述冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成。
在本发明的一实施例中，其中以上述二氧化碳的总量计，上述的乙醇的含量为20wt％～30wt％。
在本发明的一实施例中，其中以上述二氧化碳的总量计，上述的乙醇的含量为25wt％～30wt％。
在本发明的一实施例中，上述的模拟移动床使用的分离条件为：二氧化碳的流速在冲涤端入口为8.088公克/分钟、在进料入口为0.33公克/分钟、在萃出端为5.928公克/分钟以及在萃余端为2.49公克/分钟，且乙醇的流速在冲涤端入口为3.911毫升/分钟、在进料入口为0.16毫升/分钟、在萃出端为2.866毫升/分钟以及在萃余端为1.205毫升/分钟，且模拟移动床的切换时间为9分钟至10分钟。
在本发明的另一实施例中，其中以上述二氧化碳的总量计，上述的乙醇的含量为20wt％～25wt％。
在本发明的另一实施例中，上述的模拟移动床使用的分离条件为：二氧化碳的流速在冲涤端入口为8.48公克/分钟、在进料入口为0.804公克/分钟、在萃出端为4.88公克/分钟以及在萃余端为4.404公克/分钟，且乙醇的流速在冲涤端入口为3.294毫升/分钟、在进料入口为0.312毫升/分钟、在萃出端为1.896毫升/分钟以及在萃余端为1.748毫升/分钟，且模拟移动床的切换时间为8分钟至10分钟。
在本发明的一实施例中，上述灵芝粗萃物的制备方法包括使用超临界流体对灵芝进行萃取，以得到灵芝粗萃物。
在本发明的一实施例中，其中所分离的第一类三萜类化合物中灵芝酸A的含量大于5％，所分离的第二类三萜类化合物中灵芝酸F的含量大于2.3％，所分离的第二类三萜类化合物中灵芝醇B的含量大于0.3％。
基于上述，本发明的三萜类化合物的纯化方法透过应用模拟移动床层析法将灵芝粗萃物中的包括灵芝酸A的第一类三萜类化合物与包括灵芝酸F以及灵芝醇B的第二类三萜类化合物分离开来，所述方法操作稳定、溶剂耗量小且可实现自动化，不仅可有效提升分离效率，更可获得高纯度的三萜类化合物。
附图说明
包含附图以便进一步理解本发明，且附图并入本说明书中并构成本说明书的一部分。附图说明本发明的实施例，并与描述一起用于解释本发明的原理。
图1为依照本发明一实施例的纯化三萜类化合物的方法的步骤图；
图2为依照本发明一实施例的灵芝粗萃物的HPLC图谱；
图3为本发明实施例的一种纯化三萜类化合物的方法中所使用的模拟移动床的组态设计图；
图4为依照本发明一实施例的灵芝粗萃物在单一管柱测试中所得的超临界流体层析分析图；
图5为依照本发明一实施例的利用模拟移动床层析法从灵芝粗萃物中分离纯化出三萜类化合物的结果分析图；
图6为依照本发明另一实施例的灵芝粗萃物在单一管柱测试中所得的超临界流体层析分析图；
图7为依照本发明另一实施例的利用模拟移动床层析法从灵芝粗萃物中分离纯化出三萜类化合物的结果分析图。
附图标号说明
S100、S110：步骤；
102：灵芝粗萃物；
102A、102B：成分；
1I0A：第一区段；
110B：第二区段；
110C：第三区段；
C1、C2、C3、C4、C5、C6：管柱；
D：冲涤端入口；
E：萃出端；
F：进料入口；
R：萃余端；
X1：方向。
具体实施方式
本发明实施例的纯化三萜类化合物的方法，可用以将第一类三萜类化合物、第二类三萜类化合物以及其它混合物从灵芝粗萃物中分离纯化出来。借此，能够得到高纯度的三萜类化合物。更具体来说，本发明的纯化三萜类化合物的方法可将灵芝粗萃物中不同种类的三萜类化合物分离。
图1为依照本发明一实施例的纯化三萜类化合物的方法的步骤图。
请参照图1。首先，进行步骤S100，提供灵芝粗萃物。灵芝粗萃物包括第一类三萜类化合物及第二类三萜类化合物，其中第一类三萜类化合物包括灵芝酸A，第二类三萜类化合物包括灵芝酸F以及灵芝醇B。接着，进行步骤S110，以模拟移动床(Simulated Moving Bed，SMB)层析法将灵芝粗萃物中的第一类三萜类化合物与第二类三萜类化合物分离开来。
以下列举实施例以说明本发明的生产方法的细节或条件，但这些实施例并非用以限制本发明保护范围。所绘附图为示意图仅为说明方便而绘制，并非代表限制其实际的方法、条件或装置等。
灵芝粗萃物的制备
在本实施例中，灵芝粗萃物的制备方法包括使用超临界流体对灵芝进行萃取而取得。举例而言，可将灵芝切丁后置入分离槽，使用二氧化碳进行萃取；同时泵入辅助溶剂，以与二氧化碳共同进行3个小时的萃取。在本实施例中，辅助溶剂为乙醇，但不以此为限。上述萃取条件为：压力为45MPa、温度为45℃、二氧化碳流速为10公斤/小时且乙醇流速为1.6公斤/小时。在3个小时的萃取中，每半个小时自分离槽中取样一次。接着，将收集到的6瓶萃取液进行混合、浓缩及过滤，以得到灵芝粗萃物。
分析方法
使用高效液相层析仪紫外线侦测器(HPLC/UV)(泵：日立2130；紫外线侦测器：日立L-2455)进行样品的分析，其中分析管柱采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；移动相以1毫升/分钟(mL/min)的流速进行冲涤，冲涤方式则使用乙腈(acetonitrile，ACN)溶液及0.1％乙酸(HAc)水溶液的梯度冲涤，梯度冲涤的设定整理于表1，检测波长则设定为252nm。
表1
图2为依照本发明一实施例的灵芝粗萃物的HPLC图谱。在本实施例中，灵芝粗萃物中的三萜类化合物包括灵芝酸A、灵芝酸F以及灵芝醇B。将所得的灵芝粗萃物的高效液相层析分析图与灵芝酸A、灵芝酸F以及灵芝醇B各自的标准品溶液所得的高效液相层析分析图相比较，可从图2的分析图中清楚判读出灵芝酸A、灵芝酸F以及灵芝醇B的波锋位置，以此结果做为分析标准。标准溶液的配制方法为：取标的物灵芝酸A，用甲醇配制成一系列浓度，分别为115、230、460及920mg/L，分别进样20μL，得回归方程为Y＝16196X(R2＝0.9967)。取标的物灵芝酸F，用甲醇配制成一系列浓度，分别为160、320及640mg/L，分别进样20μL，得回归方程为Y＝12230X(R2＝0.9992)。灵芝醇B使用甲醇配制成浓度为300ppm，分析后HPLC图谱中面积为5967659，采用外标一点法进行含量检测。
模拟移动床的组态设计
图3为本发明实施例的一种纯化三萜类化合物的方法中所使用的模拟移动床的组态设计图。本实验例是以提供图3所示的模拟移动床100来进行模拟移动床层析法。请参考图3，模拟移动床100包括第一区段110A、第二区段110B与第三区段110C。在本实施例中，第一区段110A包含两根管柱C1与C2，第二区段110B包含两根管柱C3与C4、且第三区段110C包含两根管柱C5与C6，上述6根管柱串联。
模拟移动床100是由移动相(未绘示)及固定相(未绘示)所组成。移动相包括冲涤剂，而固定相为内部具有孔隙的颗粒。举例而言，固定相的颗粒间的孔隙度为0.38。每根管柱(C1～C6)内是填充颗粒内部具有孔隙的固定相。在本实施例中，固定相为经表面改质的二氧化矽填料，而移动相为包含超临界二氧化碳与辅助溶剂的冲涤剂。举例来说，冲涤剂可通过二氧化碳液泵产生的高压二氧化碳与另外输入的辅助溶剂混合后而形成。在本实施例中，移动相中的辅助溶剂例如是乙醇。在本实施例中，冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成。然而，本发明不以此为限。在本实施例中，以二氧化碳的总量计，乙醇的含量为20wt％～30wt％，亦即，乙醇的含量除以二氧化碳的总量约为20wt％～30wt％，但不限于此。在一实施例中，以二氧化碳的总量计，乙醇的含量为25wt％～30wt％。在另一实施例中，以二氧化碳的总量计，乙醇的含量为20wt％～25wt％。一般而言，固定相以及移动相的选择可以依据所欲分离的产物的需求而进行调整。
在本实施例中，通过固定相及移动相于三区段之间的相对流动，以分离混合物中的物质。移动相是相对于模拟移动床100中是朝同一方向从冲涤端入口D流经第一区段110A、第二区段110B以及第三区段110C之间，而固定相是相对于移动相朝反方向模拟移动。举例来说，请参考图3，若固定相是朝X1方向模拟移动(例如向左移动)，则移动相会朝与Xl相反的方向移动(例如向右移动)。通过进料口切换装置改变混合物的进料位置，以模拟固定相与移动相的相对流动方向。混合物进入层析管柱(进料)后，混合物所包含的成分A及成分B会依照各物质的亨利常数K分别被固定相滞留或随着移动相移动，进而分离或纯化成分A及成分B。具体而言，是将灵芝粗萃物102的进料溶液从进料入口F注入模拟移动床100的第二区段110B与第三区段110C之间，并且使包括第一类三萜类化合物的成分102A随固定相移动至第一区段110A与第二区段110B之间的萃出端E，并使包括第二类三萜类化合物的成分102B随移动相移动至第三区段110C的萃余端R。
亨利常数K的计算
混合物进入层析管柱(进料)后，混合物所包含的成分会依照各物质的亨利常数K分别被固定相滞留或随着移动相移动，进而分离或纯化成分。亨利常数K值的计算方式如式(1)所示：
式(1)中：
t为超临界流体层析分析图中的待测成分的滞留时间；
t0为不滞留成分的流出时间；
td为超临界流体层析系统的死角体积，本实施例中忽略td；
εe为填充管柱的外孔孔隙度(即固定相的颗粒间的孔隙度)，本实施例中εe为0.38。
模拟移动床层析法的操作条件
依据上述计算得亨利常数K并结合三角形理论，以得到模拟移动床层析法的操作条件，包括实验所需设定的移动相端(即冲涤剂端入口)、进料端、萃出端(萃余端)的二氧化碳与辅助溶剂流速以及切换时间。三角形理论的主要参数mj为各区段移动相的体积流速与固体体积流速的比值，参数mj的定义如下：
式(2)中：
Qj为j区段流体的体积流速；
tsw为切换时间；
εt为填料总孔隙度，且εt＝εe+(1-εe)εi，本实施例中εe为0.38且εt为0.659；
Vc为管住体积，本实施例中Vc为19.635；
Vd为模拟移动床系统的死角体积，本实施例中Vd为0.1个管柱体积，即Vd为1.963。
接着，以下将对利用模拟移动床层析法将三萜类化合物成分从灵芝粗萃物中分离开来的方式进行说明。
实施例1
单一管柱测试
为了设定模拟移动床层析法的操作条件，在本实施例中，先筛选出适合的流动相，并调查三萜类化合物与其他主要杂质的滞留行为。在本实施例中，以灵芝粗萃物作为分析样品，并使用高效液相层析仪紫外线侦测器(HPLC/UV)以上述分析方法进行分析。固定相为经表面改质的二氧化矽填料，移动相为包含超临界二氧化碳与辅助溶剂的冲涤剂。在本实施例中，冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成。作为固定相的二氧化矽填料填充于1cmID×25cmL的填充管柱再串接于超临界流体层析(Supercritical FluidChromatography，SFC)设备，检测波长则设定为252nm。超临界流体层析设备的操作条件设定为压力180bar，温度50℃，二氧化碳流速设定为4.0公克/分钟(g/min)，乙醇流速为1.934毫升/分钟(mL/min)。在本实施例中，以二氧化碳的总量计，乙醇的含量约为28wt％，在此条件下的超临界流体密度为0.837公克/毫升(g/mL)。
图4为依照本发明一实施例的灵芝粗萃物在单一管柱测试中所得的超临界流体层析分析图。请参考图4，样品在滞留时间为15分钟时可完全脱附。详细而言，可将样品分为4个族群，并与三个标的物的出峰时间进行比对，其中标的物为三萜类化合物所包括的灵芝酸A、灵芝酸F以及灵芝醇B。第一个峰代表低极性杂质成分群，滞留时间tA＝3.9min；第二个峰代表灵芝酸F与灵芝醇B以及其他杂质，滞留时间tB＝5.2min；第三个峰代表灵芝酸A与杂质，滞留时间tC＝8.3min；第4个峰代表高极性杂质，滞留时间tD＝12.3min。依据上文所述的亨利常数K的计算可得第一个峰的亨利常数KA＝1.513，第二个峰的亨利常数KB＝2.221，第三个峰的亨利常数KC＝3.911，第四个峰的亨利常数KD＝6.091。
三萜类化合物的分离
在本步骤中，是将超临界二氧化碳萃取灵芝所得的灵芝萃取物用95％乙醇溶解且配置成浓度为5278ppm的进料溶液后，将灵芝粗萃物102的进料溶液从进料入口F注入模拟移动床100的第二区段110B与第三区段110C之间。接着，使包括第一类三萜类化合物的成分102A随固定相移动至第一区段110A与第二区段110B之间的萃出端E，并使包括第二类三萜类化合物的成分102B随移动相移动至第三区段110C的萃余端R。具体而言，成分102A包括灵芝酸A，成分102B包括灵芝醇B及灵芝酸F。
为了达到上述的分离结果，本实施例使用上述的三角形理论设定模拟移动床层析法的操作条件。模拟移动床100使用的分离条件为：管柱(C1～C6)的规格为1cmID×25cmL，填充于管柱内的固定相为经表面改质的二氧化矽填料，移动相为包含超临界二氧化碳与辅助溶剂的冲涤剂，其中辅助溶剂为乙醇。模拟移动床层析法的冲涤端入口D、进料入口F、萃出端E及萃余端R的流速设定如下表2所示。
表2
在本步骤中，进行层析分离时的温度固定为50℃、萃余端R的出口压力设定为180bar且冲涤端入口D的压力显示为200bar。在本步骤中，当使用上述的方式操作一段时间以后，如6分钟，便将所有的出口以及入口同时往下一根管柱切换。再持续一段相同时间后，再一次将所有出入口移往下一根管柱，如此持续的切换各出入口端的位置，便可模拟固体沿着图3的左手方向移动，而形成固体与液体逆向流动的行为。在本实施例中，测试了五种不同切换时间(6分钟、6.5分钟、7.5分钟、9分钟及10分钟)。当模拟移动床的操作达4次循环以上的稳态操作以后，便开始在萃余端R及萃出端E收集样品，分析结果显示于图5及表3中。
图5为依照本发明一实施例的利用模拟移动床层析法从灵芝粗萃物中分离纯化出三萜类化合物的结果分析图。请参照图5及表3，比对模拟移动床的进料入口F的溶液与在萃余端R及萃出端E收集到的溶液的分析结果，可以得知的是，第一类三萜类化合物可由萃出端E分离出来，而第二类三萜类化合物可由萃余端R分离出来。举例来说，在切换时间为9分钟的条件下，灵芝酸A在萃出端E所收集到的含量可由进料的4.77％提高至10.17％，灵芝酸F在萃余端R所收集到的含量可由进料的2.01％提高至2.32％，灵芝醇B在萃余端R所收集到的含量可由进料的0.25％提高至0.36％；而在切换时间为10分钟的条件下，灵芝酸A在萃出端E所收集到的含量可由进料的4.77％提高至5.64％，灵芝酸F在萃余端R所收集到的含量可由进料的2.01％提高至4.30％，灵芝醇B在萃余端R所收集到的含量可由进料的0.25％提高至0.35％。借此，可有效地将第一类三萜类化合物与第二类三萜类化合物分离，以提高第一类三萜类化合物的纯度。
表3
实施例2
单一管柱测试
为了设定模拟移动床层析法的操作条件，在本实施例中，先筛选出适合的流动相，并调查三萜类化合物与其他主要杂质在此层析系统中的滞留行为。在本实施例中，以灵芝粗萃物作为分析样品，并使用高效液相层析仪紫外线侦测器(HPLC/UV)以上述分析方法进行分析。固定相为经表面改质的二氧化矽填料，移动相为包含超临界二氧化碳与辅助溶剂的冲涤剂。在本实施例中，冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成。作为固定相的二氧化矽填料填充于1cmID×25cmL的填充管柱再串接于超临界流体层析(Supercritical Fluid Chromatography，SFC)设备，检测波长则设定为252nm。在本实施例中，超临界流体层析设备的操作条件设定为压力160bar，温度50℃，二氧化碳流速设定为4.0g/min，95％乙醇流速为1.554mL/min，并假设εt＝εe+(1-εe)*0.45＝0.659，计算得乙醇的含量在二氧化碳的总量中约为23.8wt％，在此条件下的超临界流体密度为0.83g/mL。
图6为依照本发明另一实施例的灵芝粗萃物在单一管柱测试中所得的超临界流体层析分析图。请参考图6，样品在滞留时间为25分钟时可完全脱附。详细而言，可将样品分为4个族群，并与三个标的物的出峰时间进行比对，其中标的物为三萜类化合物所包括的灵芝酸A、灵芝酸F以及灵芝醇B。第一个峰代表低极性杂质成分群，滞留时间tA＝5.28min；第二个峰代表灵芝酸F与灵芝醇B以及其他杂质，滞留时间tB＝10.05min；第三个峰代表灵芝酸A与杂质，滞留时间tC＝17.0min；第4个峰代表高极性杂质，滞留时间tD＝22.0min。依据上文所述的亨利常数K的计算可得第一个峰的亨利常数KA＝3.58，第二个峰的亨利常数KB＝4.603，第三个峰的亨利常数KC＝8.21，第四个峰的亨利常数KD＝10.804。
三萜类化合物的分离
在本步骤中，是将超临界二氧化碳萃取灵芝所得的灵芝萃取物用95％乙醇溶解且配置成浓度为5000ppm的进料溶液后，将灵芝粗萃物102的进料溶液从进料入口F注入模拟移动床100的第二区段110B与第三区段110C之间，并且使包括第一类三萜类化合物的成分102A随固定相移动至第一区段110A与第二区段110B之间的萃出端E，并使包括第二类三萜类化合物的成分102B随移动相移动至第三区段110C的萃余端R。具体而言，成分102A包括灵芝酸A，成分102B包括灵芝醇B及灵芝酸F。
为了达到上述的分离结果，本实施例使用上述的三角形理论设定模拟移动床层析法的操作条件。模拟移动床100使用的分离条件为：管柱(C1～C6)的规格为1cmID×25cmL，填充于管柱内的固定相为经表面改质的二氧化矽填料，移动相为包含超临界二氧化碳与辅助溶剂的冲涤剂，其中辅助溶剂为乙醇。模拟移动床层析法的冲涤端入口D、进料入口F、萃出端E及萃余端R的流速设定如下表4所示。
表4
在本步骤中，进行层析分离时的温度固定为50℃、萃余端R的出口压力设定为160bar且冲涤端入口D的压力显示为190bar。在本步骤中，当使用上述的方式操作一段时间以后，如4分钟，便将所有的出口以及入口同时往下一根管柱切换。再持续一段相同时间后，再一次将所有出入口移往下一根管柱，如此持续的切换各出入口端的位置，便可模拟固体沿着图3的左手方向移动，而形成与液体逆向流动的行为。在本实施例中，测试了六种不同切换时间(4分钟、6分钟、8分钟、9分钟、10分钟及12分钟)。当模拟移动床的操作达4次循环以上的稳态操作以后，便开始在萃余端R及萃出端E收集样品，分析结果显示于图7。
图7为依照本发明另一实施例的利用模拟移动床层析法从灵芝粗萃物中分离纯化出三萜类化合物的结果分析图。请参照图7，比对模拟移动床的进料口F溶液与在萃余端R及萃出端E收集到的溶液的分析结果，可以得知的是，第一类三萜类化合物可由萃出端E分离出来，而第二类三萜类化合物可由萃余端R分离出来。举例来说，在切换时间为8分钟至10分钟范围的条件下，可有效地将第一类三萜类化合物与第二类三萜类化合物分离，以提高第一类三萜类化合物的纯度。
综上所述，由于本发明所提供的模拟移动床技术可以连续式进料，操作步骤简易，稳定性佳，与传统的制备方法相比较具有实现自动化、溶剂消耗少，产率高等优势，容易工业化生产高纯度三萜类化合物。因此，本发明所提供的通过使用超临界流体模拟移动床层析技术纯化三萜类化合物的方法能够解决传统技术中产物稀释严重、操作重复性低，稳定性不佳等问题。
虽然本发明已以实施例揭露如上，但其并非用以限定本发明，任何所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，应当可作些许的改动与润饰，故本发明的保护范围应当以后附的权利要求书所界定者为准。
Claims (8)
1.一种纯化三萜类化合物的方法，包括：
提供灵芝粗萃物，所述灵芝粗萃物包括第一类三萜类化合物及第二类三萜类化合物，其中所述第一类三萜类化合物包括灵芝酸A，所述第二类三萜类化合物包括灵芝酸F以及灵芝醇B；以及以模拟移动床层析法将所述灵芝粗萃物中的所述第一类三萜类化合物与所述第二类三萜类化合物分离开来，其中所述模拟移动床层析法包含：(i)提供模拟移动床，所述模拟移动床依序包括第一区段、第二区段以及第三区段，其中所述模拟移动床是由移动相及固定相所组成，所述固定相为内部具有孔隙的颗粒，所述移动相对于所述模拟移动床是朝同一方向从冲涤端入口流经所述第一区段、所述第二区段以及所述第三区段之间，所述固定相是相对于所述移动相朝反方向模拟移动，所述固定相为表面改质的二氧化矽填料，所述移动相为包含超临界二氧化碳与乙醇的冲涤剂，所述冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成，其中以二氧化碳的总量计，所述95％乙醇的含量为25wt％～30wt％；
(ii)将所述灵芝粗萃物从进料入口注入所述模拟移动床的所述第二区段与所述第三区段之间，并使所述第一类三萜类化合物随所述固定相移动至所述第一区段与所述第二区段之间的萃出端，并使所述第二类三萜类化合物随所述移动相移动至所述第三区段的萃余端，以分离纯化出所述第一类三萜类化合物及所述第二类三萜类化合物，
其中所述模拟移动床使用的分离条件为：所述二氧化碳的流速在所述冲涤端入口为8.088公克/分钟、在所述进料入口为0.33公克/分钟、在所述萃出端为5.928公克/分钟以及在所述萃余端为2.49公克/分钟，且所述95％乙醇的流速在所述冲涤端入口为3.911毫升/分钟、在所述进料入口为0.16毫升/分钟、在所述萃出端为2.866毫升/分钟以及在所述萃余端为1.205毫升/分钟，且所述模拟移动床的切换时间为9分钟至10分钟。
2.根据权利要求1所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所述第一区段、所述第二区段以及所述第三区段各自包含2根管柱，且每根管柱内填充有所述固定相。
3.根据权利要求1所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所述固定相的所述颗粒间的孔隙度为0.38。
4.根据权利要求1所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所述灵芝粗萃物的制备方法包括：
使用超临界流体对灵芝进行萃取，以得到所述灵芝粗萃物。
5.根据权利要求1所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所分离的所述第一类三萜类化合物中所述灵芝酸A的含量大于5％，所分离的所述第二类三萜类化合物中所述灵芝酸F的含量大于2.3％，所分离的所述第二类三萜类化合物中所述灵芝醇B的含量大于0.3％。
6.一种纯化三萜类化合物的方法，包括：
提供灵芝粗萃物，所述灵芝粗萃物包括第一类三萜类化合物及第二类三萜类化合物，其中所述第一类三萜类化合物包括灵芝酸A，所述第二类三萜类化合物包括灵芝酸F以及灵芝醇B；以及以模拟移动床层析法将所述灵芝粗萃物中的所述第一类三萜类化合物与所述第二类三萜类化合物分离开来，其中所述模拟移动床层析法包含：(i)提供模拟移动床，所述模拟移动床依序包括第一区段、第二区段以及第三区段，其中所述模拟移动床是由移动相及固定相所组成，所述固定相为内部具有孔隙的颗粒，所述移动相对于所述模拟移动床是朝同一方向从冲涤端入口流经所述第一区段、所述第二区段以及所述第三区段之间，所述固定相是相对于所述移动相朝反方向模拟移动，所述固定相为表面改质的二氧化矽填料，所述移动相为包含超临界二氧化碳与乙醇的冲涤剂，所述冲涤剂是通过高压二氧化碳与95％乙醇混合后而形成，其中以二氧化碳的总量计，所述95％乙醇的含量为20wt％～25wt％；
(ii)将所述灵芝粗萃物从进料入口注入所述模拟移动床的所述第二区段与所述第三区段之间，并使所述第一类三萜类化合物随所述固定相移动至所述第一区段与所述第二区段之间的萃出端，并使所述第二类三萜类化合物随所述移动相移动至所述第三区段的萃余端，以分离纯化出所述第一类三萜类化合物及所述第二类三萜类化合物，
其中所述模拟移动床使用的分离条件为：所述二氧化碳的流速在所述冲涤端入口为8.48公克/分钟、在所述进料入口为0.804公克/分钟、在所述萃出端为4.88公克/分钟以及在所述萃余端为4.404公克/分钟，且所述95％乙醇的流速在所述冲涤端入口为3.294毫升/分钟、在所述进料入口为0.312毫升/分钟、在所述萃出端为1.896毫升/分钟以及在所述萃余端为1.748毫升/分钟，且所述模拟移动床的切换时间为8分钟至10分钟。
7.根据权利要求6所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所述灵芝粗萃物的制备方法包括：
使用超临界流体对灵芝进行萃取，以得到所述灵芝粗萃物。
8.根据权利要求6所述的纯化三萜类化合物的方法，其中所分离的所述第一类三萜类化合物中所述灵芝酸A的含量大于5％，所分离的所述第二类三萜类化合物中所述灵芝酸F的含量大于2.3％，所分离的所述第二类三萜类化合物中所述灵芝醇B的含量大于0.3％。
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