CN112851746A - 一种利用冻干原理的脱盐方法 - Google Patents
一种利用冻干原理的脱盐方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112851746A CN112851746A CN201911171313.2A CN201911171313A CN112851746A CN 112851746 A CN112851746 A CN 112851746A CN 201911171313 A CN201911171313 A CN 201911171313A CN 112851746 A CN112851746 A CN 112851746A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- desalting
- temperature
- drying
- vacuum
- freeze
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 title claims description 14
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims abstract description 29
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 41
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 claims description 15
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 15
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 claims description 10
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 claims description 10
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 claims description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 9
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 108010078233 Thymalfasin Proteins 0.000 claims description 2
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 claims description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N thymalfasin Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NZVYCXVTEHPMHE-ZSUJOUNUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004231 thymalfasin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 8
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000010865 sewage Substances 0.000 abstract description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 77
- 239000000047 product Substances 0.000 description 51
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 9
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 6
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 6
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 6
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 5
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 5u8924t11h Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O3)C=C[C@H](C)[C@@H](C(C)C)O4)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 0.000 description 1
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 102000006461 Parathyroid Hormone Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010058828 Parathyroid Hormone Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100032256 Parathyroid hormone/parathyroid hormone-related peptide receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710180613 Parathyroid hormone/parathyroid hormone-related peptide receptor Proteins 0.000 description 1
- 229950008167 abamectin Drugs 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920003053 polystyrene-divinylbenzene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用冻干原理的脱盐方法，包括以下步骤：易挥发盐洗脱；真空冷冻干燥去除相关盐类。真空冷冻干燥，主要是去除水分，本身能耗较高，并且为多肽生产的关键环节，在冻干的同时，进行脱盐操作，纯化工艺少了脱盐过程，充分利用能耗，并且解决了部分产品反相和离子无法脱盐的问题，解决收率极低、酸根超标，成本较高问题。同时提高了生产效率，也降低了环保成本和污水处理成本。直接通过真空冷冻干燥的方式脱盐，并且可以控制酸根的含量。
Description
技术领域
本发明属于脱盐方法技术领域，具体涉及一种利用冻干原理的脱盐方法。
背景技术
现有化学药物脱盐主要是通过物理方式脱盐，对于多肽，其脱盐方式基本采用反相色谱的交换完成，脱盐后酸根含量相对较低，但也存在缺陷，反相填料因其疏水性较强，使得多肽无法很好的脱盐，主要有两种方式难度较大，其一为脱盐后，物质和反相填料作用力过强，造成物质无法洗脱，其二为脱盐后，物质同反相填料结合力弱，造成其它酸根脱出不完全，脱盐不完全，最终影响药效。
例如，阿巴帕肽Abaloparatide是一种新型合成肽，是甲状旁腺激素受体(PTH1受体)的一种选择性激活剂，由于其具有良好的成骨活性，用于伴有骨折高风险的绝经后女性骨质疏松症的治疗。作为一种日常自我注射药物(abaloparatide-SC，皮下注射剂型)，用于绝经后骨质疏松症女性患者群体，因其透皮给药剂型，受人青睐，市场巨大，肽序如下：H-Ala1-Val-Ser-Glu-His-Gln6-Leu-Leu-His-Asp-Lys11-Gly-Lys-Ser-Ile-Gln16-Asp-Leu-Arg-Arg-Arg21-Glu-Leu-Leu-Glu-Lys26-Leu-Leu-Aib-Lys-Leu31-His-Thr-Ala-NH2。
阿巴帕肽常规脱盐方法主要是通过反相色谱完成，但是经过反相脱盐后，同反相填料结合力变强，无法洗脱，收率极低。
阿基瑞林因其肽序较短，在脱无盐过程中，与反相填料结合过弱，致使未完全脱盐即下柱，导致脱盐不完全，影响后续的使用效果。
本发明主要是解决以上两类多肽的脱盐问题，保证脱盐完全，并且不损失收率
发明内容
为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种利用冻干原理的脱盐方法。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种利用冻干原理的脱盐方法，包括以下步骤：易挥发盐洗脱；真空冷冻干燥去除相关盐类。
进一步地，所述易挥发盐洗脱为多肽纯化采用易挥发盐洗脱。
进一步地，所述多肽包括胸腺法新、利拉鲁肽、索玛鲁肽、阿巴帕肽、阿基瑞林等。
进一步地，所述真空冷冻干燥分三个过程：样品预冻、一次干燥和二次干燥。
进一步地，所述样品预冻过程使样品温度在-40℃以下，保持2-4h。
进一步地，所述一次干燥过程中冷阱温度≤-40℃，真空度≤50Pa。
进一步地，所述二次干燥的过程中真空度≤10pa，制品温度为20℃～100℃；除盐所用的时间为4-24小时。
进一步地，所述易挥发盐选自碳酸、醋酸、甲酸铵、碳酸氢铵、碳酸铵、醋酸铵中的任意一种或多种。
综上，本发明将产品质量符合要求的馏分不经过反相脱盐，而是直接经过易挥发盐洗脱，然后经过真空冷冻干燥去除相关盐类，冻干过程中，通过只控制真空度和温度，使盐挥发，最终得到成无盐的合格产品。整个真空冷冻干燥过程分三个过程，样品预冻、一次干燥和二次干燥，其中本发明的成无盐时，主要是通过二次干燥实现。
本发明的有益效果为：真空冷冻干燥，主要是去除水分，本身能耗较高，并且为多肽生产的关键环节，必须充分利用，在冻干的同时，进行脱盐操作，纯化工艺少了脱盐过程，一举两得，充分利用能耗，并且解决了部分产品反相和离子无法脱盐的问题，解决收率极低、酸根超标，成本较高问题。同时提高了生产效率，也降低了环保成本和污水处理成本。直接通过真空冷冻干燥的方式脱盐，并且可以控制酸根的含量。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施方法对本发明内容作进一步说明，但本发明的保护内容不局限以下实施例。
实施例1
阿巴帕肽无盐条件下，同反相填料和离子交换填料结合较强，致使脱盐难度较大，收率低。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：50mmol/L的磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至2.2；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：12％—32％，50-70min。第二步：将制备柱用50％以上的乙腈溶液冲洗干净后上样，用含5％乙腈的0.1-0.4％的碳酸氢铵溶液(pH为6.5-7.0)作为A相，B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：13％—35％，50-70min梯度洗脱，收集目的峰，将纯度大于98.5％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的阿巴帕肽进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将阿巴帕肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-10℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持28h。
2.3此后，视制品温度适时提高板温，以保持板温与品温的温差在15～20℃为宜，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为40℃，使制品温度迅速上升至35±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在30±2℃恒温保持12h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，纯化所用的磷酸根和TFA均小于0.5％，说明碳酸氢铵交换去除能力较好，另碳酸氢铵经过分解挥发，碳酸根为0.26％，符合产品质量要求。
实施例2
阿巴帕肽无盐条件下，同反相填料和离子交换交换填料结合较强，致使脱盐难度较大，收率低。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：50mmol/L的磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至2.2；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：12％—32％，50-70min。第二步：将制备柱用50％以上的乙腈溶液冲洗干净后上样，用含5％乙腈的0.1-0.4％的碳酸氢铵溶液(pH为6.5-7.0)作为A相，B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：13％—35％，50-70min梯度洗脱，收集目的峰，将纯度大于98.5％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的阿巴帕肽进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将阿巴帕肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-10℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持28h。
2.3此后，视制品温度适时提高板温，以保持板温与品温的温差在15～20℃为宜，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为35℃，使制品温度迅速上升至30±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在37±2℃恒温保持6h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，纯化所用的磷酸根和TFA均小于0.5％，说明碳酸氢铵交换去除能力较好，另碳酸氢铵经过分解挥发，碳酸根为0.41％，符合产品质量要求。
实施例3
阿巴帕肽无盐条件下，同反相填料和离子交换交换填料结合较强，致使脱盐难度较大，收率低。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：50mmol/L的磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH至2.2；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：12％—32％，50-70min。第二步：将制备柱用50％以上的乙腈溶液冲洗干净后上样，用含5％乙腈的0.1-0.4％的碳酸氢铵溶液(pH为6.5-7.0)作为A相，B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：230nm。梯度：B％：13％—35％，50-70min梯度洗脱，收集目的峰，将纯度大于98.5％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的阿巴帕肽进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将阿巴帕肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-10℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持28h。
2.3此后，视制品温度适时提高板温，以保持板温与品温的温差在15～20℃为宜，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为45℃，使制品温度迅速上升至40±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在30±2℃恒温保持24h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，纯化所用的磷酸根和TFA均小于0.5％，说明碳酸氢铵交换去除能力较好，另碳酸氢铵经过分解挥发，碳酸根为0.05％，符合产品质量要求。
实施例4
索马鲁肽无盐条件下，同反相填料和离子交换交换填料结合较强，致使脱盐难度较大，收率低。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：50mmol/L的硫酸铵溶液，用硫酸调pH至2.5；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：30％—45％，50-70min。第二步：将制备柱用50％以上的乙腈溶液冲洗干净后上样，用含5％乙腈的0.1-0.4％的甲酸铵溶液(pH为7.0-7.5)作为A相，B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：32％—42％，50-70min梯度洗脱，收集目的峰，将纯度大于98.5％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的索马鲁肽进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将索马鲁肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-20℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持12h。
2.3此后，每个10h升高板温5℃，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为40℃，使制品温度迅速上升至33±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在35±2℃恒温保持12h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，纯化所用的硫酸根为0.37％，说明甲酸铵交换去除能力较好，另甲酸根经过分解挥发，甲酸根为0.12％，符合产品质量要求。
实施例5
利拉鲁肽无盐条件下，同反相填料和离子交换交换填料结合较强，致使脱盐难度较大，收率低。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：0.2％醋酸+0.1％磷酸溶液，用氨水调pH至6.5；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：31％—41％，50-70min。第二步：将制备柱用50％以上的乙腈溶液冲洗干净后上样，用含5％乙腈的0.1-0.4％的醋酸铵溶液(pH为7.0)作为A相，B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：31％—41％，50-70min梯度洗脱，收集目的峰，将纯度大于98.5％，单杂小于0.50％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的利拉鲁肽进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将利拉鲁肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-15℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持20h。
2.3此后，每个10h升高板温5℃，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为35℃，使制品温度迅速上升至35±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在35±2℃恒温保持16h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，碳酸氢根经过分解挥发，含量为0.12％，符合产品质量要求。
实施例6
阿基瑞林无盐条件下，同反相填料结合较弱，无保留，致使脱盐难度较大，酸根超标。
第一步纯化条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶10μm粒径的固定相色谱柱，柱子直径和长度为：20cm×25cm：A 1相：50mmol/L碳酸氢铵；B相：色谱纯乙腈。流速：700ml/min。检测波长：280nm。梯度：B％：5％—15％，50-70min。收集目的峰，将纯度大于98.0％，单杂小于0.50％的馏分合并，合并后的样品于水温不超过35℃下减压旋蒸浓缩至约15-50mg/mL后转至合适大小西林瓶。
质量符合要求的阿基瑞林进行冻干，工艺如下：
冻干机型号：东富龙Lyo-2
1.预冻：
开启冻干机电脑控制，开启压缩机对前箱板层进行制冷，将利拉鲁肽迅速冻结，制品温度在-40℃以下，保持3±1h。
2.一次干燥：
2.1对后箱制冷，使冷阱温度降至-40℃以下。
2.2对后箱抽真空，待后箱真空度≤100Pa时，打开中隔阀，对前箱抽真空。当前箱真空≤15Pa时，设定板温-15℃，开启有限量泄漏，设定有限量泄漏25±5Pa，开启真空报警和电加热，保持12h。
2.3此后，每个10h升高板温5℃，直到制品抽白。抽白后在此板温保持3h，一次干燥结束。
2.4一次干燥过程中冷阱温度应≤-40℃，前、后箱真空度应≤50Pa。
3.二次干燥：
3.1设定板温为40℃，使制品温度迅速上升至35±2℃。
3.2关闭有限量泄漏，调整板温，使制品在35±2℃恒温保持12h；
3.3整个二次干燥过程中，前、后箱真空应≤10Pa，后箱温度应保持-45℃以下。
3.4冻干终点判断：关闭中隔阀，2min内，真空泄露△P应小于1Pa。
4.出箱：
释放真空，打开真空泄露阀释放箱内真空至常压。关闭冻干机及其附属设备；打开箱门，将制品从箱内移至超净工作台包装。
冻干后，产品质量经过检测，碳酸氢根经过分解挥发，含量为0.35％，符合产品质量要求。
对比例1：利拉鲁肽纯化(CN 105017381 A)
样品处理：将固相合成所得的利拉鲁肽用质量百分浓度为10％左右的稀氨水来溶解(溶解浓度约为15mg/ml)，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用；
①第一步纯化条件：色谱柱：以聚苯乙烯二乙烯苯基质的填料为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：3cm×25cm。流动相：A相：配比含有质量百分浓度为0.1％的氨水水溶液；B相：配比含有质量百分浓度为0.1％的氨水乙腈溶液。流速：25-30ml/min。检测波长：245nm。梯度：流动相B的质量百分浓度：20-65％，梯度处理时间40-55min。进样量为0.8g；
纯化过程：将色谱柱用质量百分浓度90％以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为溶解过滤之后的样品溶液。线性梯度洗脱，收集目的峰，纯度为92％左右，将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用；将纯化后收集的肽溶液用20％的碳酸氢胺调样品溶液PH值至偏中性，减压浓缩至一定体积50-100ml除过多的乙腈，为了第二步纯化做准备。
②第二步纯化条件：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：3cm×25cm，流动相：A相：配比含有质量百分浓度为0.01％的盐酸水溶液；B相：色谱纯乙腈溶液；流速：25-30ml/min；检测波长：245nm。梯度：流动相B的质量百分浓度：40-60％，梯度处理时间45-60min；进样量为第一步纯化浓缩之后含量92％的样品溶液；
纯化过程：将色谱柱用质量百分浓度90％以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为第一步纯化浓缩之后含量92％的样品溶液，线性梯度洗脱，收集目的峰，纯度为98％左右，将收集好的肽溶液放置收集瓶中备用；
③转盐：取100g阴离子交换树脂Lewatit MP60置于大小合适的转盐玻璃柱中，用超纯水，乙醇，碱洗，酸洗，再碱洗等一系列步骤冲洗至中性后再上样使用，将浓缩后的肽溶液倒入转盐玻璃柱中，通过控制液体样品的流速来达到转盐的目的，同时收集转盐后的肽溶液；将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至1g/50ml，浓缩温度不超过40℃，然后冷冻干燥得纯度大于98.0％的利拉鲁肽，纯化收率可得60％以上。本对比例在进行冻干之前已完成脱盐，工艺复杂，并且需要花费大量的时间，产生大量的废水。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，不是全部的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
Claims (8)
1.一种利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，包括以下步骤：
易挥发盐洗脱；真空冷冻干燥去除相关盐类。
2.根据权利要求1所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述易挥发盐洗脱为多肽纯化采用易挥发盐洗脱。
3.根据权利要求2所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述多肽包括胸腺法新、利拉鲁肽、索玛鲁肽、阿巴帕肽、阿基瑞林。
4.根据权利要求1所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥分三个过程：样品预冻、一次干燥和二次干燥。
5.根据权利要求4所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述样品预冻过程使样品温度在-40℃以下，保持2-4h。
6.根据权利要求4所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述一次干燥过程中冷阱温度≤-40℃，真空度≤50Pa。
7.根据权利要求4所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述二次干燥的过程中真空度≤10pa，制品温度为20℃～100℃；除盐所用的时间为4-24小时。
8.根据权利要求1-7任一所述的利用冻干原理的脱盐方法，其特征在于，所述易挥发盐选自碳酸、醋酸、甲酸铵、碳酸氢铵、碳酸铵、醋酸铵中的任意一种或多种。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911171313.2A CN112851746A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种利用冻干原理的脱盐方法 |
| PCT/CN2020/092552 WO2021103454A1 (zh) | 2019-11-26 | 2020-05-27 | 一种利用冻干原理的脱盐方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911171313.2A CN112851746A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种利用冻干原理的脱盐方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112851746A true CN112851746A (zh) | 2021-05-28 |
Family
ID=75984701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911171313.2A Pending CN112851746A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种利用冻干原理的脱盐方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112851746A (zh) |
| WO (1) | WO2021103454A1 (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102675450A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-09-19 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种纯化胸腺素β4的方法 |
| CN103694316A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-02 | 杭州华津药业股份有限公司 | 一种阿基瑞林的制备方法 |
| CN105037488A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 南京肽业生物科技有限公司 | 一种美拉诺坦ii的纯化方法 |
| CN105254746A (zh) * | 2015-10-19 | 2016-01-20 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种胸腺肽α1脱盐的方法 |
| CN105646669A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种纯化卡贝缩宫素的方法 |
| CN106188218A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 江苏诺泰生物制药股份有限公司 | 一种提高多肽原料药稳定性的方法 |
| CN108047329A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-05-18 | 润辉生物技术（威海）有限公司 | 一种阿巴帕肽的制备方法 |
| CN109060989A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-21 | 重庆市肿瘤研究所 | 应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法 |
-
2019
- 2019-11-26 CN CN201911171313.2A patent/CN112851746A/zh active Pending
-
2020
- 2020-05-27 WO PCT/CN2020/092552 patent/WO2021103454A1/zh active Application Filing
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102675450A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-09-19 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种纯化胸腺素β4的方法 |
| CN103694316A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-02 | 杭州华津药业股份有限公司 | 一种阿基瑞林的制备方法 |
| CN105037488A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 南京肽业生物科技有限公司 | 一种美拉诺坦ii的纯化方法 |
| CN105254746A (zh) * | 2015-10-19 | 2016-01-20 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种胸腺肽α1脱盐的方法 |
| CN105646669A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 吉尔生化（上海）有限公司 | 一种纯化卡贝缩宫素的方法 |
| CN106188218A (zh) * | 2016-07-14 | 2016-12-07 | 江苏诺泰生物制药股份有限公司 | 一种提高多肽原料药稳定性的方法 |
| CN108047329A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-05-18 | 润辉生物技术（威海）有限公司 | 一种阿巴帕肽的制备方法 |
| CN109060989A (zh) * | 2018-08-29 | 2018-12-21 | 重庆市肿瘤研究所 | 应用iTRAQ技术研究三阴性乳腺癌外泌体差异表达蛋白的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| WOWRA等: "Isolation and sequencing of cx-tubulin peptides from myxamoebae of the slime mould Physarum polycephalum", 《BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA》 * |
| 单虎: "《现代兽医兽药大全 动物生物制品分册》", 30 April 2011, 中国农业大学出版社 * |
| 郑兆彬等: "离线PH梯度-强阳离子交换色谱法分离肽段混合物", 《色谱》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021103454A1 (zh) | 2021-06-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109593034B (zh) | 一种从银杏叶提取废液中制备莽草酸的方法 | |
| EP3064214A1 (en) | Separation and purification method for vancomycin hydrochloride of high purity | |
| CN109081844B (zh) | 一种从发酵培养物中提取大观霉素的方法 | |
| NO834765L (no) | Fremgangsmaate for rensing av antra-cyclinon-glukosider ved adsorpsjon paa harpikser | |
| CN101440127B (zh) | 高纯度盐酸万古霉素的制备方法 | |
| CN104761423A (zh) | 用于提纯芳香族氨基酸的方法 | |
| CN101372504A (zh) | 一种纯化去氨加压素的方法 | |
| US20230167474A1 (en) | Methods for enzymatic production of glucosamine salts and the purification methods thereof | |
| CN109320400B (zh) | 一种从罗汉果甜苷生产废液中提取天然甘露醇的方法 | |
| CN106631852A (zh) | 一种从l‑鸟氨酸发酵液中提取l‑鸟氨酸盐酸盐的方法 | |
| CN112851746A (zh) | 一种利用冻干原理的脱盐方法 | |
| CN102258580B (zh) | 一种制备博落回总生物碱的方法 | |
| CN104119229A (zh) | 一种制取纯品绿原酸的工艺 | |
| CN101805382A (zh) | 一种高纯度奈替米星的分离纯化方法 | |
| CN110128467A (zh) | 一种纯化甘油磷脂酰胆碱粗品的工艺方法及其得到的甘油磷脂酰胆碱 | |
| CN1117157C (zh) | 制备有机酸的方法 | |
| CN107032983B (zh) | 一种利用大孔吸附树脂从发酵液中提取分离琥珀酸的方法 | |
| WO2016149993A1 (zh) | 一种以阿拉伯胶为原料提取制备高纯度l-阿拉伯糖的工艺 | |
| CN116102589A (zh) | 一种自玉米浸泡液中提取植酸钠的方法 | |
| CN105238841A (zh) | 头孢菌素c吸附废液中dcpc的回收与转化方法 | |
| CN111363024A (zh) | 多肽的纯化方法 | |
| EP3502121A1 (en) | Polymyxin b sulphate crystal and preparation method therefor | |
| US2538479A (en) | Methods of deacidifying solutions | |
| CN102796150A (zh) | 一种高纯度西索霉素的分离纯化方法 | |
| CN105037456A (zh) | 分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210528 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |