CN101602802B - 一种胸腺肽α1脱盐的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胸腺肽α1脱盐的工艺。本发明是使用离子交换的方法脱去胸腺肽α1样品中的盐分，其工艺步骤为：A、将胸腺肽α1溶液调节pH值至酸性；B、将酸化后的胸腺肽α1溶液与阳离子交换树脂混合；C、用水洗脱离子交换树脂；D、用碱性溶液洗脱交换树脂，收集在230nm波长处有吸收的洗脱液；E、浓缩干燥，得脱盐胸腺肽α1。本工艺具有样品处理量大，脱盐效率好，可重复上样，适合于工业化大生产的特点。
Description
【技术领域】
本发明涉及多肽的脱盐工艺，尤其涉及使用阳离子交换法进行胸腺肽α1脱盐的工艺。
【背景技术】
胸腺肽α1是一种治疗慢性乙型肝炎和增强免疫系统反应性的多肽类药物。多项体外试验显示，该肽通过刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素α、干扰素γ以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平。该肽还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。该肽可能增加前NK细胞的聚集，而干扰素可使其细胞毒性增强。体内试验显示，该肽可以提高经刀豆蛋白A激活后小鼠淋巴细胞白介素2受体的表达水平，同时提高白介素2的分泌水平。
该肽在合成、裂解及纯化的过程中，由于使用了TFA(三氟乙酸)、盐酸、磷酸、醋酸、硫酸等，引入了大量对人体有害的酸根离子，特别是TFA酸根，在纯化后干燥前必须去除这些有害的酸根离子。目前使用Sephadex G25(葡聚糖凝胶G25)柱进行脱盐的方法，但耗时长，一次样品处理量小，工作效率低，不适合于大规模工业生产。
【发明内容】
为了提供一种操作简单、实用、高效，样品处理量大，适合于工业化大规模生产的工艺，本发明提供了一种胸腺肽α1脱盐的工艺。
本发明提供了一种胸腺肽α1脱盐的工艺，采用离子交换法去除胸腺肽α1中的有害酸根离子。其具体原理是利用阳离子交换树脂在酸性条件下对酸根离子不能吸附而能吸附肽类物质的特点进行离子交换，从而达到有效去除酸根离子的目的。
本发明的实现方法如下：
A、将胸腺肽α1溶液调节pH值至酸性；
B、将酸化后的胸腺肽α1溶液与阳离子交换树脂混合；
C、用水洗脱离子交换树脂；
D、用碱性溶液洗脱阳离子交换树脂，收集在230nm波长处有吸收的洗脱液；
E、浓缩干燥，得脱盐胸腺肽α1。
本发明优选的技术方案为：步骤A胸腺肽α1为纯化后的胸腺肽α1；步骤D中用碱性溶液洗脱阳离子交换树脂，其中所述碱性溶液为乙胺，三乙胺，氨水中的任意一种或两种以上的混合溶液。
本发明优选的技术方案为：步骤B，C，D，中所用的阳离子交换树脂为强阳离子交换树脂或弱阳离子交换树脂，如SP或CM型。
本发明优选的技术方案为：步骤A中将纯化后的胸腺肽α1溶液调节pH值为1.5至2.5之间
本发明优选的技术方案为：步骤A中调节pH值所用的酸是磷酸、稀硫酸或稀盐酸中的任意一种或两种以上的混合溶液。
本发明优选的技术方案为：步骤C中的水为纯水。纯水指纯净的水，可通过双蒸法获得
本发明优选的技术方案为：步骤C中用水洗脱离子交换树脂至洗脱液与纯水pH值一致。
使用后的树脂如需再次使用则用纯水洗脱至中性或者用纯水洗脱至弱碱性后用少量酸调节成中性即可。
本发明的优点在于：
1、待脱盐的胸腺肽α1溶液不需去除纯化过程中引入的有机溶剂，纯化后可直接开始按照本法进行脱盐，节省大量时间，大大提高了工作效率。
2、阳离子交换树脂进行可逆吸附，操作过程中样品几乎没有损失，回收率高。
3、使用该方法脱盐效果非常好，产品含盐量可以控制在1％以下，达到药用标准。
4、树脂可以快速再生，而且上样量大，操作非常方便、简单，特别适合于工业化大规模生产。
【具体实施方式】
以下具体实施可以对本方法进一步说明：
实施例一：
强阳离子交换树脂500ml，胸腺肽α1纯化后称取10克，制备精肽溶液，用盐酸调节pH值1.5，与强阳离子交换树脂充分混合后，用纯水充分洗脱后，用30％(V/V)氨水溶液洗脱后浓缩冻干，得到胸腺肽α1精肽10.1克，总含盐量0.38％。
实施例二：
强阳离子交换树脂1000ml，胸腺肽α1纯化后精肽溶液测定含量18克，用磷酸调节pH值2.5，与强阳离子交换树脂充分混合后，用纯水充分洗脱后，用15％(V/V)三乙胺水溶液洗脱后浓缩冻干，得到胸腺肽α1精肽17.7克，总含盐量0.25％。
实施例三：
弱阳离子交换树脂500ml，胸腺肽α1纯化后精肽溶液测定含量10克，用硫酸调节pH值2.0，与弱阳离子交换树脂充分混合后，用纯水充分洗脱后，用20％(V/V)乙氨水溶液洗脱后浓缩冻干，得到胸腺肽α1精肽9.9克，总含盐量0.41％。
实施例四：
弱阳离子交换树脂1000ml，胸腺肽α1纯化后精肽溶液测定含量10克，用磷酸调节pH值2.3，与弱阳离子交换树脂充分混合后，用纯水充分洗脱后，用10％(V/V)三乙胺水溶液洗脱后浓缩冻干，得到胸腺肽α1精肽10.0克，总含盐量0.21％。
以上内容是结合具体的优选技术方案对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种胸腺肽α1脱盐的工艺，其特征在于：包括如下步骤：
A、将胸腺肽α1溶液调节pH值至酸性；
B、将酸化后的胸腺肽α1溶液与阳离子交换树脂混合；
C、用水洗脱阳离子交换树脂；
D、用碱性溶液洗脱阳离子交换树脂，收集在230nm波长处有吸收的洗脱液；
E、浓缩干燥，得脱盐胸腺肽α1；
其中步骤A采用磷酸、稀硫酸或稀盐酸中的任意一种或两种以上的混合溶液将胸腺肽α1溶液调节pH值至1.5至2.5之间；步骤D所述的碱性溶液为乙胺、三乙胺、氨水中的任意一种或两种以上的混合溶液。
2.根据权利要求1所述的胸腺肽α1脱盐的工艺，其特征在于：步骤C中的水为纯水。
3.根据权利要求1至2任意一项所述的胸腺肽α1脱盐的工艺，其特征在于：步骤B，C， D中所用的阳离子交换树脂为强阳离子交换树脂或弱阳离子交换树脂。
4.根据权利要求1至2任意一项所述的胸腺肽α1脱盐的工艺，其特征在于：步骤C中用水洗脱阳离子交换树脂至洗脱液与纯水pH值一致。
5.根据权利要求3所述的胸腺肽α1脱盐的工艺，其特征在于：步骤C中用水洗脱阳离子交换树脂至洗脱液与纯水pH值一致。
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