CN104655839A - 一种特异性检测金黄色葡萄球菌的方法 - Google Patents

一种特异性检测金黄色葡萄球菌的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种特异性检测金黄色葡萄球菌的方法。所述的特异性检测是将核酸适配体修饰在磁性纳米粒子表面，快速识别并结合溶液样品中的金黄色葡萄球菌，利用磁场将磁性纳米颗粒结合的目标菌分离富集，再将捕捉到的菌悬浮到一定体积的裂解液中，释放并用提取出金黄色葡萄球的ATP，由于ATP量与菌液浓度呈正比，通过ATP生物发光法得到菌浓度与发光强度的线性曲线，即可定量检测金黄色葡萄球菌。方法具有适配体易合成、易修饰、易固定、可长期保存，对目标菌结合、分离、富集和浓缩，有效去除样品基质和其它干扰菌，提高检测的灵敏度的优点。

Description

一种特异性检测金黄色葡萄球菌的方法
技术领域：
本发明属于食品安全领域，具体涉及一种食品中金黄色葡萄球菌的检测方法。
背景技术：
金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的革兰氏阳性菌，广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及人和动物的排泄物中。该菌对生长环境不严格，为条件致病菌，而大多食品基质如乳、肉、蛋、鱼等制品为金葡菌生长提供了良好条件，在适合的温度下，易产生耐高温的肠毒素而引起食品中毒，伴有呕吐剧烈，失水及虚脱等症状。据统计，在世界各国中由金葡菌引发的食物中毒在细菌性食物中毒中排在前三位，占约25％，并造成巨大的经济损失，严重影响人类食品安全和经济发展。因而，建立快速有效吸附和检测金黄色葡萄球菌的方法变得尤为重要。
目前已建立的金黄色葡萄球菌检测方法主要包括Baird-Parker方法、酶联免疫吸附法(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)等。现场快速筛检方法中则以ELISA方法应用最多，该方法是基于抗原-抗体亲和反应，以抗体作为识别分子。但是抗体易受到外界条件尤其是温度的影响，对保藏条件要求苛刻，在很大程度上限制了方法的灵活应用。此外，抗体制备需要经过动物实验或细胞实验，繁琐费事，制备的抗体成本高，发展的方法检测成本也相应偏高。所以又必要发展一种快速方便，稳定性好、灵敏度高、特异性强、使用成本低的新型检测方法。
最近，ATP生物发光检测细菌的方法已日渐成熟，其原理是基于每个生物体内含有恒量的ATP，ATP在萤火虫荧光素和荧光素酶的催化下释放光子产生荧光，发光强度与生物体量呈正比，从而间接检测出生物体的含量。尽管ATP生物发光法具有快速检测的特点，但是不能分辨菌株种类。因此，有必要建立一种基于ATP生物发光法快速检测食品中金黄色葡萄球菌单一致病菌的检测方法。
发明内容：
本发明目的在于提供一种核酸适配体修饰磁性纳米粒子捕捉、富集金黄色葡萄球菌，并采用生物发光检测的方法。本发明采用的技术方案为：将对金黄色葡萄球菌具有特异性识别功能的核酸适配体修饰在磁性纳米粒子表面，该材料可以快速识别并结合溶液样品中的金黄色葡萄球菌；利用磁场将磁性纳米颗粒结合的金黄色葡萄球菌分离；再将捕捉到的金黄色葡萄球菌悬浮到一定体积的裂解液中，释放并用提取出金黄色葡萄球的ATP；由于ATP量与菌液浓度呈正比，通过ATP生物发光法得到细菌浓度与发光强度的线性曲线，即可检测金黄色葡萄球菌。具体步骤为：
(1)Fe3O4磁性纳米粒子制备
以FeCl3·6H2O作为单一铁源，乙二醇为还原剂，醋酸钠提供碱性的反应环境，在密闭的高温高压环境下，Fe3+可被乙二醇部分还原为Fe2+，铁离子再被氧化成Fe(OH)3和Fe(OH)3，再脱水形成Fe3O4，离心分离，超纯水清洗即得到Fe3O4磁性纳米粒子。为使所制备的Fe3O4磁性纳米粒子更加稳定，在其表面包覆一层二氧化硅：用Stober法在Fe3O4纳米粒子表面包裹二氧化硅，即在乙醇和水的介质中，通过正硅酸四乙酯在碱性条件下水解生成Si(OH)4，最后以SiO2形式包裹在磁纳米表面；然后在反应体系中加入APTES反应24h，形成氨基化Fe3O4纳米粒子。
(2)核酸适配体修饰的Fe3O4磁性纳米粒子的制备
取上述氨基化Fe3O4磁性纳米粒子分散于PBS缓冲溶液中，再加入戊二醛溶液，室温下缓慢振荡2h，用PBS洗3次，再将粒子分散于avidin(125μg/mL)溶液，缓慢振荡12h，PBS洗3次并分散到PBS中，得到Avidin修饰的磁性纳米颗粒。生物素标记核酸适配体序列为：Biotin-CCC CCC GCA ATG GTA CGG TAC TTC CTC GGC ACGTTC TCA GTA GCG CTC GCT GGT CAT CCC ACA GCT ACG TCAAAA GTG CAC GCT ACT TTG CTA A。将Avidin修饰的磁性纳米颗粒和生物素标记核酸适配体缓慢振荡12h后，利用永磁铁磁性分离，由于生物素与亲和素之间的特异性相互作用，即得适配体修饰的Fe3O4磁性纳米粒子。
(3)适配体修饰的磁纳米粒子对金黄色葡萄球菌的捕捉、分离与富集
取1mL的液体样品与2mL适配体修饰磁纳米粒子进行混合，振荡孵育反应10min，磁性分离，弃去上清液中的样品基质，磁性分离得到的产物用Tris-HCl缓冲液洗三次，将其再悬浮于100μLTris-HCl缓冲液中，即得到浓缩10倍后的被适配体化磁纳米捕获的金黄色葡萄球菌悬菌液。
(4)金黄色葡萄球菌体内ATP的释放及生物发光法测定
采用TCA，BAB，CTAB，DMSO或SDS(优选CTAB)的3％TCA溶液作为ATP提取剂，取20μL提取剂与100μL样品进行混合，轻微振荡反应2min，充分释放细菌体内的ATP后，稀释20倍。取50μL稀释液与70μL浓度为50mg/mL的萤火虫荧光素与荧光素酶溶液进行反应，MPI-E化学发光检测仪记录ATP生物发光相对发光值(RLU)与细菌浓度的对数log(cfu/mL)建立的金黄色葡萄球菌检测的线性关系定量。
本发明与现有技术相比，其显著优点是：
(1)核酸适配体对金黄色葡萄球菌具有特异性识别作用，且具有易合成、易修饰、易固定、可反复使用和长期保存的优点。
(2)利用磁性纳米粒子完成对目标菌的结合、分离、富集和浓缩，不但可以有效去除样品基质和其它干扰菌，而且可以提高检测的灵敏度
(3)采用优化的ATP生物发光检测法检测金黄色葡萄球菌，可以大大缩短检测时间，已达到快速检测的目的。
(4)可快速、简单、灵敏、特异的检测食品中的金黄色葡萄球菌，简化样品前处理，缩短了检测时间。
附图说明：
附图1为：核酸适配体修饰的磁性纳米粒子捕捉生物发光检测金黄色葡萄球菌的实验原理图。附图2为：Fe3O4磁性纳米粒子与氨基化的Fe3O4磁性纳米粒子的电镜图：(a)Fe3O4(b)Fe3O4-SiO2-NH2。附图3：核酸适配体化的磁性纳米材料捕获浓缩10后的金黄色葡萄球菌溶液的标准曲线。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步地描述：
(1)通过溶剂热法合成Fe3O4磁性纳米粒子，并对其表面进行修饰。分析天平准确称取0.81g FeCl3·6H2O，2.16g NaAC加入到30mL乙二醇中，50℃磁力搅拌，形成均一溶液。与反应釜中反应200℃，6h。自然冷却后，用水和乙醇交叉洗各3次，于50℃真空干燥12h，得到Fe3O4磁性纳米粒子。
(2)利用改进的Stober法对Fe3O4磁性纳米粒子进行表面氨基化修饰。取30mg上述合成的Fe3O4磁性纳米粒子，加入100mL，0.1M HCl，超声分散5min。再水洗2次，乙醇洗1次。分散到126.6mL无水乙醇和30mL超纯水中，机械搅拌(30转/分钟)，加入1.05mL浓氨水，再超声5min。又继续机械搅拌，加入1.08mL的TEOS，搅拌12h(时间越长，硅层越厚)。乙醇洗5次，再分散到150mL无水乙醇中，再加入1mL的APTES，机械搅拌24h。乙醇洗5次，真空干燥，得到Fe3O4-SiO2-NH2。
(3)利用戊二醛法将氨基化的磁性纳米粒子与亲和素偶联。取Fe3O4-SiO2-NH2分散于5mL PBS中，超声20min，再加入1.25mL，25％戊二醛溶液，室温下缓慢振荡2h。再用PBS洗3次。再将粒子分散于5mL，avidin(125μg/mL)，缓慢振荡12h，PBS洗3次，分散到5mLPBS中。
(4)利用通过亲和素(Avidin)与生物素(Biotin)之间的特异性结合将表面修饰有亲和素的磁性纳米粒子与生物素修饰的金黄色葡萄球菌适配体DNA单链连接。取5μL，50nM生物素化适配体和1mL，1mg/mL的亲和素修饰的磁性纳米粒子溶液缓慢振荡12h。磁性分离，用1TE缓冲液洗3次，最终分散于5mL的TE缓冲液中。
(5)ATP生物发光法进行反应条件的优化。将一定量的菌液与一定体积和浓度的ATP提取剂混合反应一段时间。再取50μL上述反应的混合液加入一定量的一定浓度的环糊精和一定量的50mg/L的荧光素-荧光素酶溶液，并立即放入MPI-E化学发光仪中测量相对发光值(RLU)。并对ATP提取剂的选择和浓度、提取时间、菌液与提取剂的体积比、缓冲液和pH、环糊精的种类和浓度以及萤火虫荧光素-荧光素酶的用量进行了优化。其优化结果为：选择浓度为0.02％的CTAB提取液、提取时间为2min、菌液与CTAB溶液的体积比为5：1、选择pH值为7.4的Tris-HCl缓冲液以及70μL的50mg/mL萤火虫荧光素-荧光素酶溶液。
(6)对核酸适配体化的磁性纳米材料捕获浓缩10后的金黄色葡萄球菌溶液进行检测，并得到标准曲线。制备不同浓度梯度的悬菌液102,103,104,105,106,107cfu/mL，取1000μL的上述不同浓度的菌液与2000μL适配体化磁纳米离子进行混合反应，振荡孵育10min，磁性分离，弃去上清液，并用Tris-HCl缓冲液(Ph＝7.4)洗三次，将其再悬浮于100μL Tris-HCl缓冲液中，而后加入20μL，0.02％CTAB溶液，作用2min，轻微振荡后，快速磁性分离后，取50μLATP提取液迅速加入到10μL的β-环糊精和70μL的荧光素-荧光素酶溶液中，并立即放入MPI-E化学发光仪中测量RLU。实验结果为在2.5×102到2.5×106cfu/mL的菌液溶度中，菌液浓度的对数值与相对发光值的对数值呈现良好的线性关系，log(RLU)＝0.3713log(cfu/mL)+1.5257，R2＝0.9602，检测限为250cfu/mL。
(7)对灭菌牛奶实际样品中加标金黄色葡萄球菌的检测：对牛奶样品进行分装和灭菌后，再加入金黄色葡萄球菌溶液，使其含有一定浓度的菌液的牛奶样品。取1000μL的上述含菌的牛奶样品与2000μL适配体化磁纳米离子进行混合反应，振荡孵育10min，磁性分离，弃去上清液，并用Tris-HCl缓冲液(Ph＝7.4)洗三次，将其再悬浮于100μL Tris-HCl缓冲液中，而后加入20μL，0.02％CTAB溶液，作用2min，轻微振荡，快速磁性分离后，取50μLATP提取液迅速加入到10μL的0.008％β-环糊精和70μL的荧光素-荧光素酶溶液中，并立即放入MPI-E化学发光仪中测量RLU。从标准曲线中求得对应的实际牛奶样品中可被检测到的金黄色葡萄球菌的菌落数。

Claims (10)

1.一种核酸适配体修饰磁性纳米粒子捕捉金黄色葡萄球菌并采用生物发光检测的方法，其特征在于：将对金黄色葡萄球菌具有特异性识别功能的核酸适配体修饰在磁性纳米粒子表面，该材料可以快速识别并结合溶液样品中的金黄色葡萄球菌；利用磁场将磁性纳米颗粒结合的金黄色葡萄球菌分离；再将捕捉到的金黄色葡萄球菌悬浮到一定体积的裂解液中，释放并用提取出金黄色葡萄球的ATP；由于ATP量与菌液浓度呈正比，通过ATP生物发光法得到细菌浓度与发光强度的线性曲线，即可检测金黄色葡萄球菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的适配体修饰的Fe3O4磁性纳米粒子的制备方法是：首先制备Fe3O4磁性纳米粒子，利用硅氧烷在其表面修饰上氨基，得到氨基化Fe3O4磁性纳米粒子，利用生物素与亲和素之间的特异性相互作用将生物素修饰的适配体链接到磁性纳米颗粒表面，得适配体修饰的Fe3O4磁性纳米粒子。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的Fe3O4磁性纳米粒子制备以FeCl3·6H2O作为单一铁源，乙二醇为还原剂，醋酸钠提供碱性的反应环境，在密闭的高温高压环境下，Fe3+可被乙二醇部分还原为Fe2+，铁离子再被氧化成Fe(OH)3和Fe(OH)3，再脱水形成Fe3O4，离心分离，超纯水清洗即得到Fe3O4磁性纳米粒子。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子其制备方法为：用Stober法在Fe3O4纳米粒子表面包裹二氧化硅，即在乙醇和水的介质中，通过正硅酸四乙酯在碱性条件下水解生成Si(OH)4，最后以SiO2形式包裹在磁纳米表面，再在反应体系中加入APTES反应24h，就形成氨基化修饰的Fe3O4纳米粒子。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的核酸适配体修饰到到磁性纳米颗粒表面，采用的方法是：将氨基化Fe3O4磁性纳米粒子分散于PBS缓冲溶液中，超声分散，加入戊二醛溶液，室温下缓慢振荡2h后用PBS清洗3次，再将粒子分散于亲和素溶液，缓慢振荡反应12h，PBS洗3次，加入生物素标记的适配体反应12h，磁性分离清洗，即得到适配体修饰的Fe3O4磁性纳米粒子。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磁场分离采用永磁体或电磁铁。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物素标记核酸适配体序列为：Biotin-CCC CCC GCA ATG GTA CGG TACTTC CTC GGC ACG TTC TCA GTA GCG CTC GCT GGT CAT CCCACA GCT ACG TCA AAA GTG CAC GCT ACT TTG CTA A。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的细菌裂解液可以是TCA，BAB，CTAB，DMSO或SDS；优选CTAB。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的ATP生物发光法为ATP-荧光素-荧光素酶发光体系。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的定量方法为ATP生物发光检测，测得相对发光值的对数log(RLU)与细菌浓度的对数log(cfu/mL)为建立的金黄色葡萄球菌检测的线性关系。
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Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105466896A (zh) * 2015-11-23 2016-04-06 江南大学 核酸适配体功能化磁纳米颗粒分离富集-激光诱导荧光检测金黄色葡萄球菌
CN105969338A (zh) * 2016-05-16 2016-09-28 曲阜师范大学 一种SiO2–DNA纳米材料及其制备方法和应用
CN106018387A (zh) * 2016-05-13 2016-10-12 孙晓晖 一种atp荧光检测方法
CN106324260A (zh) * 2016-11-10 2017-01-11 中国科学院成都生物研究所 一种牛血清白蛋白检测探针及其制备方法和应用
CN107236795A (zh) * 2017-06-06 2017-10-10 江南大学 一种磁分离rca合成dna酶检测金黄色葡萄球菌的方法
CN107557428A (zh) * 2017-10-31 2018-01-09 苏州大学 一种磁纳米颗粒及其制备方法与在病原菌检测中的应用
CN109136196A (zh) * 2018-09-30 2019-01-04 西南大学 铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途
CN109762824A (zh) * 2019-01-15 2019-05-17 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法
CN112763558A (zh) * 2020-12-23 2021-05-07 杭州市红十字会医院 一种金黄色葡萄球菌检测方法
CN113133513A (zh) * 2021-04-30 2021-07-20 西北农林科技大学 一种纳米仿生增强的革兰氏阳性菌捕获-分离剂及其制备方法和应用
CN113176243A (zh) * 2021-06-08 2021-07-27 江苏大学 一种食品中金黄色葡萄球菌的双信号检测方法
CN113281321A (zh) * 2021-06-08 2021-08-20 江苏大学 基于Fe3+猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法
CN113376134A (zh) * 2021-06-08 2021-09-10 江苏大学 基于上转换荧光共振能量转移的金黄色葡萄球菌快速检测方法
CN114369551A (zh) * 2022-01-07 2022-04-19 中国农业科学院油料作物研究所 一种快速分离两歧双歧杆菌的磁性纳米粒子的制备方法及应用
CN116794013A (zh) * 2023-06-25 2023-09-22 上海上药杏灵科技药业股份有限公司 一种银杏酮酯总混样品中金黄色葡萄球菌的快速检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101952729A (zh) * 2008-02-20 2011-01-19 3M创新有限公司 利用全细胞捕获和atp分析进行样品细菌分析的方法
CN103604920A (zh) * 2013-12-02 2014-02-26 重庆市肿瘤研究所 一种诊断卵巢癌的磁性纳米探针的制备方法及检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101952729A (zh) * 2008-02-20 2011-01-19 3M创新有限公司 利用全细胞捕获和atp分析进行样品细菌分析的方法
CN103604920A (zh) * 2013-12-02 2014-02-26 重庆市肿瘤研究所 一种诊断卵巢癌的磁性纳米探针的制备方法及检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
段诺: "食源性致病菌适配体的筛选及分析应用研究", 《中国博士学位论文全文数据库》 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105466896A (zh) * 2015-11-23 2016-04-06 江南大学 核酸适配体功能化磁纳米颗粒分离富集-激光诱导荧光检测金黄色葡萄球菌
CN106018387A (zh) * 2016-05-13 2016-10-12 孙晓晖 一种atp荧光检测方法
CN105969338A (zh) * 2016-05-16 2016-09-28 曲阜师范大学 一种SiO2–DNA纳米材料及其制备方法和应用
CN105969338B (zh) * 2016-05-16 2018-03-02 曲阜师范大学 一种SiO2–DNA纳米材料及其制备方法和应用
CN106324260A (zh) * 2016-11-10 2017-01-11 中国科学院成都生物研究所 一种牛血清白蛋白检测探针及其制备方法和应用
CN106324260B (zh) * 2016-11-10 2018-06-22 中国科学院成都生物研究所 一种牛血清白蛋白检测探针及其制备方法和应用
CN107236795A (zh) * 2017-06-06 2017-10-10 江南大学 一种磁分离rca合成dna酶检测金黄色葡萄球菌的方法
CN107557428A (zh) * 2017-10-31 2018-01-09 苏州大学 一种磁纳米颗粒及其制备方法与在病原菌检测中的应用
CN109136196A (zh) * 2018-09-30 2019-01-04 西南大学 铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途
CN109762824A (zh) * 2019-01-15 2019-05-17 温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院 一种分离甲胎蛋白的适配体功能化纳米磁珠的制备方法
CN112763558A (zh) * 2020-12-23 2021-05-07 杭州市红十字会医院 一种金黄色葡萄球菌检测方法
CN112763558B (zh) * 2020-12-23 2022-06-10 杭州市红十字会医院 一种金黄色葡萄球菌检测方法
CN113133513A (zh) * 2021-04-30 2021-07-20 西北农林科技大学 一种纳米仿生增强的革兰氏阳性菌捕获-分离剂及其制备方法和应用
CN113133513B (zh) * 2021-04-30 2023-07-18 西北农林科技大学 一种纳米仿生增强的革兰氏阳性菌捕获-分离剂及其制备方法和应用
CN113176243A (zh) * 2021-06-08 2021-07-27 江苏大学 一种食品中金黄色葡萄球菌的双信号检测方法
CN113281321A (zh) * 2021-06-08 2021-08-20 江苏大学 基于Fe3+猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法
CN113376134A (zh) * 2021-06-08 2021-09-10 江苏大学 基于上转换荧光共振能量转移的金黄色葡萄球菌快速检测方法
CN113176243B (zh) * 2021-06-08 2022-07-29 江苏大学 一种食品中金黄色葡萄球菌的双信号检测方法
CN113281321B (zh) * 2021-06-08 2022-08-26 江苏大学 基于Fe3+猝灭上转换荧光的金黄色葡萄球菌快速检测方法
CN114369551A (zh) * 2022-01-07 2022-04-19 中国农业科学院油料作物研究所 一种快速分离两歧双歧杆菌的磁性纳米粒子的制备方法及应用
CN116794013A (zh) * 2023-06-25 2023-09-22 上海上药杏灵科技药业股份有限公司 一种银杏酮酯总混样品中金黄色葡萄球菌的快速检测方法

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