CN104524583A - 人造乳糜载药组合物及其制备方法与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种全新的载药递药体系,具体的说是一种人造乳糜载药体系组合物的配方和制备方法。这种人造乳糜包含的主要组分有(1)动植物油、油状药物或油溶性药物,(2)作为人造乳糜乳化剂的磷脂,(3)作为人造乳糜稳定剂、形态控制剂和生物调节剂的胆固醇或者类固醇,(4)作为人造乳糜稳定剂、助乳化剂的油酸或油酸盐,(5)作为人造乳糜助乳化剂的单脂肪酸甘油酯和双脂肪酸甘油酯,(6)作为人造乳糜稳定剂、乳化剂和增加人造乳糜在血液中半衰期的聚乙二醇磷脂衍生物(仿乳糜的膜蛋白替代品),(7)作为抗氧化剂的维生素E,(8)作为控制金属离子的络合物,(9)作为调节药物制剂等渗的甘油或者糖类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种人造乳糜载药组合物,还涉及这种人造乳糜载药组合物的配方、制备工艺和用途,通过药代学、药效学研究及安全性评价,该人造乳糜载药组合物适合于静脉注射或肌肉注射的给药途径,属于医药技术领域。
背景技术
乳糜,又称之为乳糜微粒(Chylomicron,英文简写为CM),主要含有外源性甘油三酯,是人体吸收和运输外源性甘油三酯及胆固醇的主要方式。乳糜是饮食高脂肪食物后,由肠壁细胞合成的富含外源性甘油三酯的巨大脂蛋白,其粒径80-500nm。食后12小时后,正常人血中几乎无乳糜。乳糜是哺乳类动物摄入脂肪类营养物质的主要渠道和转输载体,它在肠上皮细胞合成,并分泌入淋巴管。
乳糜微粒的化学组成为(重量%):甘油酯88.0,磷脂7.5,胆固醇0.8,膜蛋白2.0,胆固醇酯7.7,以及少量的脂肪酸,和溶血磷脂。乳糜微粒的乳滴核心由三脂肪酸甘油酯和溶解在甘油酯中的胆固醇酯构成,乳滴的外膜由磷脂、胆固醇和膜蛋白包裹。虽然磷脂是乳糜乳滴形成的主要乳化剂,但是胆固醇和膜蛋白在维护乳糜的形态、稳定性和控制其在血液中的存在时间亦起着非常重要的作用。
深入研究发现无论摄入的食物里是否含有胆固醇,在人体血液内检测到的乳糜中都无一例外含有胆固醇,而且胆固醇的含量比例基本处于一个相对固定值,乳糜中的胆固醇随甘油三酯升高亦增加。也就是说,胆固醇在乳糜的组成、形态、转输过程中扮演着重要的角色,是乳糜不可或缺的重要组成成分。
人们很早就开始利用乳糜转运脂肪类物质的机制,开发出了高度简化了的乳糜仿制品-“脂肪乳”(lipid emulsion or fat emulsion)。脂肪乳仅仅由甘油酯和磷脂构成,它不但是临床治疗中广泛使用的肠外营养剂,也是近年来发展较快的载药新剂型,具有很高的临床和经济价值。
例如CN101167793A公开一种核桃油脂肪乳剂及其制造方法,其配方为精纯核桃油、精制卵磷脂、纯甘油、氢氧化钠及无热原纯水。是将精纯核桃油、精制卵磷脂、甘油、水混合强烈搅拌形成初级乳,用少量氢氧化钠溶液调节初级乳的pH至7.5-8.5,然后高压均质、滤器过滤、灌装、密封和灭菌。但是从构成乳糜和脂肪乳主要化学成分的比较可以看出,脂肪乳由于没有采用维持乳滴刚性的胆固醇和保护乳糜在血液中不被过早清除掉的膜蛋白,使得脂肪乳的稳定性以及在血液中的转输机理与真正的乳糜有着很大差别,例如乳糜中一般含有0.8重量%的胆固醇和2.0重量%的膜蛋白。因此,这种脂肪乳仅仅起到了溶解油溶性药物的作用,并不具有像乳糜那样的稳定性和靶向性,不能算作真正意义上的先进靶向制剂。
此外,其他脂肪乳制剂的稳定性一般较差,而且容易从体内循环中被肝、脾巨噬细胞迅速清除,因此在血液中保留时间较短。
发明内容
因此,针对现有技术的缺陷和不足,本发明的目的是研究开发一种更接近于乳糜完整化学组成成分和性质的人造乳糜,以提供一种安全性和稳定性高,在血液中存留时间长,靶向递药性能优异的类似乳糜的载药递药体系。
发明人经过锐意研究,令人惊讶地发现,将容易造成血管粥样硬化和心脑血管疾病的胆固醇酯去掉后,能够提高安全性,而且由于胆固醇酯本身就是溶解在甘油酯中,所以它的去留不会影响人造乳糜的乳化性质和稳定性。另一方面,通过采用聚乙二醇磷脂衍生物作为膜蛋白的替代品,可以进一步提高人造乳糜的稳定性和在血液中的存留时间。另外,为了模仿乳糜的化学组成,本发明采用的多数辅料都来自天然产物,使得制备的制剂基本保持了乳糜组成、结构、形态、以及体内特性。从而获得首次人工仿制的乳糜,其具有良好的缓释、控释、靶向递药特性,在此基础上完成了本发明。
以下具体描述本发明。
本发明所述的人造乳糜,顾名思义,是基本保持了乳糜的主要化学组分和 相对应的比例的仿乳糜制剂。本发明通过仿生学原理,最大限度复制了乳糜的主要成分和比例,以聚乙二醇衍生物替代乳糜外膜中的膜蛋白对乳滴表面修饰,获得了近似天然乳糜的配方组成、形态、和体内代谢特点的人工乳糜载药体系。因此,本发明解决了其他脂肪乳制剂稳定性差,易从体内循环中被肝、脾巨噬细胞迅速清除的缺点,保证了人工乳糜在体内的稳定性、在血液中保留较长时间、增加了药物的被动靶向功能,从而提供了一种新型仿生人造乳糜递药体系。
因此,本发明第一方面,提供了一种人造乳糜载药组合物,其特征在于,该组合物包含以下组分:
0.01~35wt%的动植物油、油状药物或油溶性药物,
0.2~4.0wt%的乳化剂,
0.01~1.0wt%的形态控制剂和生物调节剂,
2.25~7wt%的等渗剂,
以及任选的助乳化剂,任选的仿乳糜膜蛋白替代品,任选的抗氧化剂,任选的控制金属离子络合物,
其余为注射用水。
根据本发明优选的实施方式,所述人造乳糜载药组合物包含0.001~5.0wt%的助乳化剂,0.001~2.0wt%的仿乳糜膜蛋白替代品,0.001~0.5wt%的抗氧化剂,0.001~0.05wt%的控制金属离子络合物。
所述的动植物油可以是补充营养的动植物油,优选大豆油、棕榈油、橄榄油、沙棘油、鱼油、海豹油、海狗油、鲨鱼油、人工合成的甘油酯中的任一种、两种或者多种混合物;
所述的油状药物选自:莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、 薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物;
所述的油溶性药物优选为溶于植物油的油溶性药物,更优选为丙泊酚、丙泊酚脂溶性衍生物、依托咪酯、大蒜素、β-揽香烯、莪术醇、姜黄素、大黄素、青蒿素、环抱素A、辅酶Q10、雌激素、前列腺素、脂溶性维生素、氯维地平、两性霉素B、环孢素A、他克莫司、西罗莫司、吲哚美辛、β-胡萝卜素等。
以下是本发明中几种示例性药物或其活性成分的化学结构式:
根据本发明,所述的乳化剂可以是:蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、脑磷脂、鞘磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂中的一种或者两种或多种磷脂的混合物。
所述的形态控制剂和生物调节剂可以是:胆固醇、植物固醇、胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸。
以下是本发明中使用的几种示例性类固醇的化学结构式:a)为胆固醇;b)为植物固醇;c)为胆酸。
所述的仿乳糜膜蛋白替代品可以是:聚乙二醇-脑磷脂衍生物、聚乙二醇-鞘磷脂衍生物、聚乙二醇-胆固醇衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯衍生物、聚乙二醇-脂肪胺衍生物、聚乙二醇-脂肪醇衍生物、聚乙二醇-脂溶性高分子衍生物。
聚乙二醇是水溶性、无生物活性、无毒、柔软的线性高分子,其化学结构如下所示:
本发明发现,通过聚乙二醇修饰可以非常好的解决人造乳糜药物制剂易从体循环中被肝、脾巨噬细胞迅速清除的缺点,可以使人造乳糜药物制剂在血液中保留较长时间,增加了药物的被动靶向功能。由于聚乙二醇价廉易得、可以大规模生产、分子量易于控制、良好的物理化学性质,同时可以事先将其制备成聚乙二醇的衍生物,例如,一种代表性衍生物为PEG2000-DSPE,其化学结构如下所示:
由于采用上述仿乳糜膜蛋白替代品,简化了制剂的工艺,使得用其修饰的本发明的人造乳糜药物制剂具有新颖性、独特性和实用性。聚乙二醇的临床应用安全性,以及修饰药物制剂后产生的缓释、长效、和靶向作用已经得到临床研究验证。所以聚乙二醇脂质体阿霉素药物制剂,聚乙二醇修饰的蛋白质和多肽药物都已经获得药政部门的批准,进入临床使用。
所述助乳化剂是:天然产物、天然甘油酯的部分水解产物、也可以是人工合成的单脂肪酸甘油酯和双脂肪酸甘油酯、油酸、油酸钾盐、油酸钠盐、吐温20、吐温80、泊洛沙姆188或者两种或多种的混合物。
所述的作为控制金属离子的络合物是EDTA或其它阳离子络合剂。
所述的抗氧化剂是维生素A、维生素E、维生素C、辅酶Q10、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)或者两种或多种的混合物。
所述的等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇。
根据本发明第二方面,提供一种以上所述人造乳糜载药组合物的制备方法,该方法包括以下步骤:
(a)、将形态控制剂和生物调节剂、仿乳糜膜蛋白替代品放入动植物油、油状药物或油溶性药物中充分溶解后,在氮气保护下加入乳化剂和任选的抗氧化剂,加热形成油相混合物;
(b)、将等渗剂、任选的助乳化剂、任选的控制金属离子络合物和注射用水混合,形成水相混合物;
(c)、在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合,并进行均质化,得到均匀的乳状溶液;
(d)、将步骤(c)所得乳状溶液经处理后,进行贮藏。
根据本发明优选的实施方式,上述制备方法中:
步骤(a)中,形态控制剂和生物调节剂的量为0.01~1.0wt%,仿乳糜膜蛋白替代品的量为0.001~2.0wt%,动植物油、油状药物或油溶性药物的量为 0.01~35wt%,乳化剂0.2~4.0wt%的和抗氧化剂0.001~0.5wt%的,加热温度为40~80℃,
步骤(b)中,等渗剂的量为2.25~7wt%,助乳化剂的量为0.001~5wt%,控制金属离子络合物的量为0.001~0.05wt%,于40~80℃混合,
步骤(c)中,水相混合物与油相混合物混合后,在40~80℃,2000~38000r/min条件下高速分散后,调节pH至6.0~9.0,在压力为70~130MPa条件下进行均质4~15次,得到均匀的乳状溶液;
步骤(d)中,将步骤(c)所得乳状溶液过滤、通氮气密封,经100~125℃灭菌处理10~30min后,25℃以下贮藏。
根据以上方法制备的本发明人造乳糜具有如图1所示的结构示意图。其核心是植物油,以及溶解在植物油中的药物;起主要乳化作用的是磷脂;胆固醇;膜蛋白替代品,即聚乙二醇磷脂衍生物。
本发明第三方面,提供上述人造乳糜载药组合物用于制备药物的用途,所述药物以人造乳糜载递活性药物成分。
本发明提供的上述人造乳糜载药组合物的有益效果是:按照本发明方法制备的人造乳糜载药递药体系,解决了其他脂肪乳制剂稳定性差,易从体内循环中被肝、脾巨噬细胞迅速清除的缺点,保证了人工乳糜在体内的稳定性、在血液中保留较长时间、增加了药物的被动靶向功能,具有更好的临床优势。
附图说明
图1:本发明的人造乳糜结构示意图;
图2:本发明的人造乳糜的粒径与植物油用量相关性;
图3:本发明的人造乳糜的粒径与胆固醇含量相关性。
图4:工业化制备人造乳糜的简化工艺示意图。
图中:1、甘油水溶液,2、油溶液,3、乳糜储液罐,4、三通阀,5、管线乳化泵,6、高压均质机,7、控制阀,
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作详细说明,但不仅限于下列实例。
一、不同油制备的人造乳糜载药体系
实施例1:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油10.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-15次,均质压力大约为100MPa,调节pH 6.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min(或者121℃旋转灭菌15min),灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。相对的检验证明制剂的各项指标符合要求,放置两年制剂仍然符合药用质量标准,稳定性好。
实施例2:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取橄榄油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测橄榄油含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例3:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取鱼油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.2-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测鱼油含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
小结:植物油含量在1-35%之间都可以成功制备稳定的人造乳糜。在阴凉保存条件下,人造乳糜可以保存2年,仍然符合药用质量标准。由图2所示人造乳糜的粒径与植物油用量相关性可以看到,乳糜的粒径随着植物油含量的增加 而变大。但与普通脂肪乳比较,在同样的工艺条件下,人造乳糜的粒径相对要小,粒径分布更窄。室温保存更稳定,变化更小。
二、不同磷脂制备的人造乳糜载药体系
实施例4:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入2.0g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.5-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例5:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g氢化卵磷脂、1.0g胆固醇(为了便于氢化卵磷脂和胆固醇的溶解,可以先将氢化卵磷脂和胆固醇溶解在5ml乙醇中)、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例6:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g鞘磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.2-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、 和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
三、不同胆固醇制备的人造乳糜载药体系
实施例7:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入20.0g卵磷脂、0.1g胆固醇、0.5g油酸钠、5.0g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),加入5-10ml乙醇帮助卵磷脂溶解,在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例8:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g植物固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测大豆油含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例9:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.2-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测大豆油含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
小结:在人造乳糜中加入胆固醇可以明显改变制剂的形态和稳定性,加入 胆固醇使得乳糜的粒径变小。如图3所示的人造乳糜的粒径与胆固醇含量相关性表明,在同样的工艺条件下,胆固醇加入量大于0.1%后乳糜粒径的大小不再随着胆固醇的含量增加而变化,但是粒径分布变的更窄,这可能是乳糜中胆固醇使得膜的刚度增加的结果。
四、不同聚乙二醇磷脂衍生物制备的人造乳糜载药体系
实施例10:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、0.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例11:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、5.0g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.2-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例12:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),加入5-10ml乙醇帮助辅料充分溶解,在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为 100MPa,调节pH 7.5-9.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
五、不同油酸制备的人造乳糜载药体系
实施例13:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.1g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例14:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、1.0g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.2-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例15:
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、5.0g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.5-9.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
六、不含聚乙二醇磷脂衍生物的人造乳糜的制备可行性考察
当植物油、磷脂、固醇等辅料都保持原有用量不变时,以及增加磷脂用量来取代聚乙二醇磷脂衍生物条件下,考察了不加入聚乙二醇磷脂衍生物对制备人造乳糜的影响。
实施例16:不含聚乙二醇磷脂衍生物的人造乳糜(其它辅料用量保持不变,制剂总量为1000ml)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠,在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例17:不含聚乙二醇磷脂衍生物的人造乳糜(增加磷脂用量以弥补聚乙二醇磷脂衍生物用量,制剂总量为1000ml)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入12.0g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠,在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
七、包裹不同脂溶性药物的人造乳糜的适用性考察
当植物油、磷脂、固醇、聚乙二醇磷脂衍生物等辅料都固定不变时,系统考察了加入不同种类脂溶性药物对制备人造乳糜的影响(仅选择6种药物作为示例,并不限于这六种药物)。
实施例18:丙泊酚人造乳糜药物制剂(制剂总量为1000ml)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油 酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入10.0g丙泊酚和5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测丙泊酚含量(100mg/10ml)、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例19:前列腺素E1人造乳糜药物制剂(制剂总量为1000ml)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂(必须使用高纯度磷脂,纯度大于95%)、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至55℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5.0mg前列腺素E1和5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 5.0-6.0,过滤,分装(1ml安培瓶),通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测前列腺素E1含量(5ug/1ml)、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在2-8℃低温贮藏。
实施例20:脂溶性维生素人造乳糜药物制剂(制剂总量为1000ml)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至55℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入和维生素A、维生素D、维生素K、维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 5.0-6.0,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测各种维生素含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在2-8℃低温贮藏。
实施例21:依托咪酯人造乳糜药物制剂
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入2.0g依托咪酯和5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装(10ml安培瓶),通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测依托咪酯含量(20mg/10ml)、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例22:大蒜素人造乳糜药物制剂
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入2.0g大蒜素和5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳, 并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装(10ml安培瓶),通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测大蒜素含量(20mg/10ml)、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例23:β-揽香烯人造乳糜药物制剂
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油100.0g,加入9.5g卵磷脂、1.0g胆固醇、0.5g油酸钠、2.5g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约20min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入5.0gβ-揽香烯和5ml维生素E,溶解混匀。另取注射用水800ml,加入甘油22g。在氮气保护的条件下,含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.0-8.0,过滤,分装(5ml安培瓶),通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测β-揽香烯含量(25mg/5ml)、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
八、人造乳糜工业化生产可行性考察
本发明分别进行了放大20倍的中试生产和放大500倍的工业化生产的验证。图4为工业化生产人造乳糜的简化工艺示意图。
实施例24:人造乳糜的中试放大(制剂总量为20L)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油2.0kg,加入190g卵磷脂、20g胆固醇、10g油酸钠、50g聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约30min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入100mL维生素E,溶解混匀。另取注射用水15L,加入甘油440g。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至20L。高压均质机均质5-8次,均质压力大约为100MPa(均质过程必须增加非接触型冷却系统,以有效控制液体的温度),调节pH 7.5-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在25℃以下贮藏。
实施例25:人造乳糜的工业化生产验证(制剂总量为500L)
人造乳糜载药组合物的处方:
其制备方法为:取大豆油50.00kg,加入4.75kg卵磷脂、0.50kg胆固醇、 0.25kg油酸钠、1.25kg聚乙二醇-磷脂(PEG2000-DSPE),在氮气保护的条件下,加热至75℃,搅拌约30min使得添加的各种化合物充分溶解,然后加入1.50L维生素E,溶解混匀。另取注射用水400L,加入甘油11.00kg。在氮气保护的条件下,将油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中,制成初乳,并调节总量至500L。高压均质机均质6-8次,均质压力大约为100MPa,调节pH 7.5-8.5,过滤,分装,通入氮气,密封。115℃旋转灭菌30min,灯检合格后,检测甘油酯含量、粒径、和细菌内毒素,质量标准符合设计要求后包装,在2-8℃低温贮藏。
九、以前列腺素E1人造乳糜药物制剂为例考察人造乳糜载药体系的稳定性
取实施例中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂进行高温、低温、高湿、光照试验,考察其稳定性:
①高温试验
取本品(2mL:200μg)置密封洁净广口瓶中,在40℃恒温烘箱中放置10天,于第5天和第10天取样,检测评价指标。
②低温试验
取本品(2mL:200μg)置密封洁净广口瓶中,在6±2℃冰箱中放置10天,于第5天和第10天取样,检测评价指标。
③高湿试验
取本品(2mL:200μg)置恒湿密闭广口瓶中[内盛KNO3饱和溶液(RH90±5%)],于25℃、条件下放置10天,在第5天和第10天取样,检测评价指标。
④光照试验
取本品(2mL:200μg)置装有日光灯的光照箱,于照度4500Lx±500Lx下放置10天,在第5天和第10天取样检测。
结果见表1,表明本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂稳定。
表1:前列腺素E1人造乳糜药物制剂的稳定性试验结果
十、以前列腺素E1人造乳糜药物制剂为例考察人造乳糜载药体系的缓释性能
采用LC-MS/MS,以前列腺素E1为对照,同时测定大鼠不同时间段血液中前列腺素E1的含量,计算药动学参数。
10.1给药与样品的采集
健康Wistar大鼠,实验前12h禁食不禁水,实验期间自由饮水,实验12h后进食。设高、中、低3个剂量组,每个采血点有6只大鼠,每只大鼠采血1次。给药后分别在不同时间段眼眶后静脉丛取血,置肝素化试管中,离心,分离血浆,待测。
10.2血浆样品处理
取大鼠血浆样品,加1Mol/L的Hcl l00μl沉淀蛋白,10000转离心10min,取上清液,0.45μm微孔滤膜过滤,进样5μl,分析。
10.3体内测定方法
用大鼠空白血浆样品进样得到色谱图,将前列腺素E1对照品系列加入到空白血,依同法进行样品处理;取大鼠给药后收集的血浆样品同法处理,得到大鼠给药后血浆样品色谱图,通过DAS 2.0程序拟合结果表明,本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂和前列腺素E1脂肪乳注射剂,两种制剂在大鼠体内均符合二房室模型,其平均药动学参数如下表2所示。
通过DAS 2.0程序非房室模拟参数拟合结果表明,经大鼠尾静脉两种前列腺素E1注射剂后,本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂AUC明显大于前列腺素E1脂肪乳注射剂,前者清除率明显低于后者,MRT分别为4.453和2.867小时,半衰期长于后者,是后者的1.55倍;AUCo-t分别为489.731和258.430mgL-1min,是后者的1.895倍,如下表3所示,有极显著性意义(p<0.01),表明前者较后者有较长的血液中的消除半衰期,其在体内的循环时间进一步延长,证明本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂具有明显的缓释效果。
表2:前列腺素E1人造乳糜药物制剂的药动学参数
注:**:药动学参数经t检验有计显著性差异(p<0.01)。
十一、以前列腺素E1人造乳糜药物制剂为例考察人造乳糜载药体系的药效
11.1前列腺素E1人造乳糜药物制剂对血脂作用的考察
将健康大鼠随机分成5组,每组10只,分别为正常组、模型组、前列腺素E1粉针组、本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂A组、前列腺素E1脂肪乳注射剂B组。其中,正常组饲喂基础饲料,模型组、前列腺素E1粉针组、A组、B组通过尾静脉注射。饲养四周后,测小鼠血清总胆固醇(T C)、甘油三酯(TAG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)等指标。
表3:前列腺素E1人造乳糜药物制剂对大鼠血脂的作用考察
实验结果表3表明,本发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂较前列腺素E1脂肪乳有更好的血清胆固醇作用、降甘油三酯作用。LDL-C与心血管病发作呈正相关,而HDL-C则与心血管病的发作呈负相关,结果表明发明中的前列腺素E1人造乳糜药物制剂比前列腺素E1脂肪乳具有更好的降低心血管病发病的机率。
11.2前列腺素E1人造乳糜药物制剂对大鼠体内血栓形成的影响
11.2.1体外旁路循环法试验
Wistar大鼠300只,体重286±13g,雄性,按照体重随机分为前列腺素E1粉针剂、脂肪乳及人造乳糜制剂空白组、前列腺素E1粉针剂5、10μg/kg、前列腺素E1脂肪乳5、10μg/kg及前列腺素E1人造乳糜制剂5、10μg/kg 9个组,每组50只。每组动物在分别分为给药后30、60、90、120、180min5个时间组,每组10只。按照自身对照方法进行大鼠体内血栓形成试验。用物巴比妥钠30mg/kg ip麻醉,分离右颈总动脉及左颈外静脉,从颈总动脉至颈外动脉插入一个带有丝线并且充满肝素-生理盐水的聚乙烯套管,连接形成体外旁路循环。首先从舌下静脉注射生理盐水2ml/kg,5min后开放血流,血液从右颈动脉流向左颈外静脉,15min后中断血流,迅速取出中间套管中丝线,放于滤纸上,然后称重,总重剪去丝线重计委给药前血栓湿重(mg)。然后各组舌下静脉注射药物,更换带有丝线充满肝素-生理盐水的聚乙烯套管,各组的时间分别为于给药30、60、90、120、180min后开放血流,其他方法同上,所得血栓为给药后血栓湿重。依下列公式计算血栓形成率,比较前列腺素E1粉针剂、脂肪乳剂及人造乳糜制剂抑制大鼠体内血栓形成的作用强度及持续时间。
抑制率=(给药前血栓重量-给药后血栓重量)/给药前血栓重量×100%
11.2.2电刺激法试验
Wistar大鼠300只,体重215±20g,雄雌兼用。分组同上面的试验。给药组分别舌下静脉注射前列腺素E1粉针5μg/kg、10μg/kg、前列腺素E1脂肪乳5μg/kg、10μg/kg及前列腺素E1人造乳糜制剂5μg/kg、10μg/kg,三对照组分别给予等体积(2ml/kg)粉针溶剂、脂肪乳溶剂及人造乳糜溶剂。于药后30、60、90、120、180min用物巴比妥钠30mg/kg ip麻醉,分离右颈总动脉15mm长,将不锈钢电极放置在该动脉处,并在其远端放置温度测量探测头测血管表面温度。用1.5mA直流电持续刺激7.5min。当颈总动脉因血栓形成堵塞血流时,血管远端温度突然下降。从刺激开始到温度突降所需时间为堵塞时间(OT),以OT长短作为判断药物指标。
11.2.3试验结果
前列腺素E1粉针5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90min均可明显抑制大鼠血栓形成,与粉空组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);药后120、180min对于大鼠血栓形成有一定的抑制作用,但是没有统计学意义(P>0.05)。前列腺素E1脂肪乳5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90、120、180min均可明显抑制大鼠血栓形成,与乳剂空白组比较有显著性差异(P<0.01)。前列腺素E1人造乳糜制剂5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90、120、180min均可明显抑制大鼠血栓形成,与人造乳糜制剂空白组比较有显著性差异(P<0.01)。并且前列腺素E1人造乳糜制剂在药后60min内与脂肪乳剂的作用强度相同,但60min后明显优于粉针剂、脂肪乳剂。提示前列腺素E1人造乳糜制剂在体内的作用持续时间比粉针剂、脂肪乳剂长。前列腺素E1粉空、乳空及人造乳糜空于药后各时间点,对大鼠血栓形成均无明显抑制作用(P>0.05),(见表4)。
表4:前列腺素E1人造乳糜药物制剂对大鼠体内血栓形成抑制率(%)的比较
前列腺素E1粉针、脂肪乳5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90min均可明显延长OT的作用,与粉空、乳空组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),但药后120、180min没有统计学意义(P>0.05)。前列腺素E1人造乳糜制剂5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90、120、180min均具有明显延长OT的作用,与人造乳糜空白组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。表明前列腺素E1人造乳糜制剂在防治大鼠体内血栓形成的做用可持续180min以上,明显长于前列腺素E1粉针。前列腺素E1粉空、乳空及人造乳糜空白组于药后各时间点,均无延长OT的作用(P>0.05),(见表5)。
表5:前列腺素E1人造乳糜药物制剂对大鼠体内血栓形成OT(s)的影响
11.3前列腺素E1粉针剂及脂肪乳剂对大鼠血小板聚集性的影响
Wistar大鼠300只,体重286±13g,雄性,按照体重随机分为前列腺素E1粉针剂、脂肪乳及人造乳糜空白组、前列腺素E1粉针剂5、10ug/kg、前列腺素E1脂肪乳5、10ug/kg及前列腺素E1人造乳糜制剂5、10μg/kg 9个组,每组50只。给药30、60、90、120、180min分别以戊巴比妥钠30mg/kg ip麻醉,腹主动脉取血。3.8%柠檬酸钠抗凝,分离富血小板血浆(PRP)及贫血小板血浆(PPP),用SP A-4型血小板聚集仪测定血小板3min最大聚集率(以1mM的ADP为诱导剂)。
前列腺素E1粉针5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90min均可明显抑制大鼠血小板聚集作用,与粉空组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);而药后120、180min与粉空比无显著差异(P>0.05)。PGE1脂肪乳5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90、120、180min均具有明显延长制大鼠血小板聚集的作用,与乳剂空白组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。前列腺素E1人造乳糜5μg/kg、10μg/kg组于给药后30、60、90、120、180min均具有明显延长制大鼠血小板聚集的作用,与人造乳糜空白组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),并且效果优于脂肪乳组。表明前列腺素E1人造乳糜制剂的作用时间比粉针剂、脂肪乳剂长。前列腺素E1粉空、乳空及人造乳糜空于药后各时间点,均无抑制血小板聚集作用,(见表6)。
表6:前列腺素E1人造乳糜药物制剂对大鼠血小板聚集性(3min最大聚集率%)的影响
十二、以前列腺素E1人造乳糜药物制剂为例考察人造乳糜载药体系的安全性
12.1局部刺激试验
12.1.1试验方法
大白兔20只,1.5-1.6kg,雌雄兼用。按体重、性别分为4组,即粉针溶剂对照组、人造乳糜溶剂对照组、粉针组、人造乳糜组。每组5只,雌2,雄3。比照临床报道的通常最大静点浓度(300μg/250ml,4h滴完,约相当于1.2μg/ml*min)确定给药方案,即前列腺素E1粉针组和人造乳糜组剂量均为72μg/只,用5%葡萄糖溶液稀释成60ml,在耳缘静脉以恒速泵于1h滴完,每日一次,连续5日。粉针溶剂及人造乳糜溶剂同上方法。除每次给药时及给药后观察给药局部表观外,并于末次静点后剪下遥侧耳廓,常规固定后,于距静点入针近心端1cm处,每隔1cm取0.5cm宽标本,切片染色,进行镜下药理观察。
12.1.2结果
前列腺素E1粉针剂组于给药期间在耳廓见有明显血管扩张,耳廓静脉周 围轻度红肿,耳廓稍厚;前列腺素E1人造乳糜制剂组耳廓亦见有明显血管扩张,且药后持续时间较长,但无红肿;粉针溶剂对照组、人造乳糜溶剂无明显改变。镜下观察前列腺素E1粉针剂和前列腺素E1人造乳糜组均有血管扩张,粉针剂组于耳缘静脉周围有轻度水肿及较多炎细胞浸润,1例血管内有血栓;粉针溶剂对照组、人造乳糜溶剂组均无病理变化。此结果说明前列腺素E1人造乳糜制剂可以减少局部刺激。
12.2脂肪栓塞试验
12.2.1试验方法
Wistar大鼠10只,比临床报道的每次最大剂量(600μg)按照人和动物体表面积折算系数,确定大鼠试验剂量为54μg/kg。每日自舌静脉缓慢注射一次,连续10日。末次给药后次日脱颈处死,剖取心、肝、肺、肾脏器,进行病理观察。
12.2.2结果
实验动物在给药时及给药后未见明显异常,心、肝、肺、肾脏器镜下病理观察均未见脂肪栓塞。此结果说明前列腺素E1脂肪乳剂未发生脂肪栓塞。
12.3溶血试验
12.3.1试验方法:
自家兔耳缘静脉采血15ml,用玻璃珠除去纤维蛋白后,离心(1500rpm×15min),除去上清液,再以10倍量生理盐水洗涤三次(均离心弃去上清)至上清液无红色,再用0.9%氯化钠注射液配成2%红细胞混悬液备用。
取10ml试管7支,按表7加入各种溶液,其中第6管为生理盐水空白对照,第7管为阳性对照(蒸馏水)。各管轻轻摇动至均匀后,37℃水浴中温孵3h,观察0.5~3h内各管的溶血程度,按表8标准判断。
表7:体外溶血试验
表8:溶血试验结果判断
12.3.2结果
前列腺素E1人造乳糜注射液在0.5~3h内未出现溶血或部分溶血现象,表现为溶液中红细胞全部下沉,上层液乳白色与腺素E1人造乳糜注射液相同,摇均后红细胞分散;生理盐水组在0.5~3h内也未出现溶血或部分溶血现象,蒸馏水组在各时间点全溶血,结果详见表9。
表9:前列腺素E1人造乳糜药物制剂体外溶血试验结果
以上试验重复3次,0管全部溶血,其余各管均为未发现有溶血现象,也未发现有红细胞凝集作用。
本试验以临床使用的浓度做体外溶血试验,说明前列腺素E1人造乳糜药物制剂无溶血和红细胞粘集作用。
综上所述:本发明提供了一种优于脂肪乳制剂的新型人造乳糜载药体系,它能延长药物在体内的滞留时间,使药物更好的达到靶器官,并且更加安全可靠。
Claims (10)
1.一种人造乳糜载药组合物,其特征在于,该组合物包含以下组分:
0.01~35wt%的动植物油、油状药物或油溶性药物,
0.2~4.0wt%的乳化剂,
0.01~1.0wt%的形态控制剂和生物调节剂,
2.25~7wt%的等渗剂,
以及任选的助乳化剂,任选的仿乳糜膜蛋白替代品,任选的抗氧化剂,任选的控制金属离子络合物,
其余为注射用水。
2.根据权利要求1所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,该组合物包含:0.001~5.0wt%的助乳化剂,0.001~2.0wt%的仿乳糜膜蛋白替代品,0.001~0.5wt%的抗氧化剂,0.001~0.05wt%的控制金属离子络合物。
3.根据权利要求1或2所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,
所述的动植物油是补充营养的动植物油,优选大豆油、棕榈油、橄榄油、沙棘油、鱼油、海豹油、海狗油、鲨鱼油、人工合成的甘油酯中的任一种、两种或者多种混合物;
所述的油状药物选自:莪术油、薏米仁油、大蒜油、红花油、花椒油、川芎油、青蒿油、冬青油、月见草油、当归油、生姜油、荆芥油、连翘油、桉叶油、紫苏油、陈皮油、牡荆油、玫瑰油、蓖麻油、薄荷油、茵陈油、小茴香油、松木油、丁香油、八角茴香油、麝香草油、肉桂油、艾叶油、苏子油、姜黄油、白千层油、熏衣草油、木香油、广藿香油、马鞭草油、苦艾油、香紫苏油、苍术油、香桃木油、柠檬油、枳实油、丁香罗勒油、红紫苏叶油、术(松)榴油、椰子油、砂仁油、橄榄油、香茅油、香叶油、香薷草油、留兰香油、杜杉油、广霍香油、苏合香油、黑加伦油、五味子油、石菖蒲油、蛇床子油、黄柏果油、薰衣草油、迷迭香油、香柠檬油、白檀油、胡萝卜籽油、柏木叶油、芹菜籽油、牛至油、香茅醛油、芫荽油、橙花油、肉豆蔻油、洋葱油、檀香油、万寿菊油、百里香油、依兰油中的任一种或多种混合物;
所述的油溶性药物优选为溶于植物油的油溶性药物,更优选为丙泊酚、丙泊酚脂溶性衍生物、依托咪酯、大蒜素、β-揽香烯、莪术醇、姜黄素、大黄素、青蒿素、环抱素A、辅酶Q10、雌激素、前列腺素、脂溶性维生素、氯维地平、两性霉素B、环孢素A、他克莫司、西罗莫司、吲哚美辛、β-胡萝卜素等。
4.根据权利要求1至3之一所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,所述的乳化剂是:蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、脑磷脂、鞘磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、人工合成卵磷脂中的一种或者两种或多种磷脂的混合物。
5.根据权利要求1至4之一所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,
所述的形态控制剂和生物调节剂是:胆固醇、植物固醇、胆酸、熊脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸。
6.根据权利要求1至5之一所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,
所述的仿乳糜膜蛋白替代品是:聚乙二醇-脑磷脂衍生物、聚乙二醇-鞘磷脂衍生物、聚乙二醇-胆固醇衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯衍生物、聚乙二醇-脂肪胺衍生物、聚乙二醇-脂肪醇衍生物、聚乙二醇-脂溶性高分子衍生物。
7.根据权利要求1至6之一所述的人造乳糜载药组合物,其特征在于,
所述助乳化剂是:天然产物、天然甘油酯的部分水解产物、也可以是人工合成的单脂肪酸甘油酯和双脂肪酸甘油酯、油酸、油酸钾盐、油酸钠盐、吐温20、吐温80、泊洛沙姆188或者两种或多种的混合物;
所述的作为控制金属离子的络合物是EDTA或其它阳离子络合剂;
所述的抗氧化剂是维生素A、维生素E、维生素C、辅酶Q10、丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)或者两种或多种的混合物;
所述的等渗剂是甘油、葡萄糖或木糖醇。
8.根据权利要求1至7之一所述的人造乳糜载药组合物的制备方法,该方法包括以下步骤:
(a)将形态控制剂和生物调节剂、仿乳糜膜蛋白替代品放入动植物油、油状药物或油溶性药物中充分溶解后,在氮气保护下加入乳化剂和任选的抗氧化剂,加热形成油相混合物;
(b)将等渗剂、任选的助乳化剂、任选的控制金属离子络合物和注射用水混合,形成水相混合物;
(c)在氮气保护下将水相混合物与油相混合物混合,并进行均质化,得到均匀的乳状溶液;
(d)将步骤(c)所得乳状溶液经处理后,进行贮藏。
9.根据权利要求8所述的人造乳糜载药组合物的制备方法,其特征在于,
步骤(a)中,形态控制剂和生物调节剂的量为0.01~1.0wt%,仿乳糜膜蛋白替代品的量为0.001~2.0wt%,动植物油、油状药物或油溶性药物的量为0.01~35wt%,乳化剂0.2~4.0wt%的和抗氧化剂0.001~0.5wt%的,加热温度为40~80℃;
步骤(b)中,等渗剂的量为2.25~7wt%,助乳化剂的量为0.001~5wt%,控制金属离子络合物的量为0.001~0.05wt%,于40~80℃混合;
步骤(c)中,水相混合物与油相混合物混合后,在40~80℃,2000~38000r/min条件下高速分散后,调节pH至6.0~9.0,在压力为70~130MPa条件下进行均质4~15次;
步骤(d)中,将步骤(c)所得乳状溶液过滤、通氮气密封,经100~125℃灭菌处理10~30min后,25℃以下贮藏。
10.权利要求1至7之一所述的人造乳糜载药组合物用于制备药物的用途,所述药物以人造乳糜载递活性药物成分。
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