CN104388324A - 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法 - Google Patents

用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104388324A
CN104388324A CN201410601800.9A CN201410601800A CN104388324A CN 104388324 A CN104388324 A CN 104388324A CN 201410601800 A CN201410601800 A CN 201410601800A CN 104388324 A CN104388324 A CN 104388324A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
cell culture
purposes
culture
culture medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410601800.9A
Other languages
English (en)
Inventor
约翰·阔沃勒
麦可·武本恩
卓斯·曼纽尔·库库·马丁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DPx Holdings BV
Original Assignee
DSM IP Assets BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34961830&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN104388324(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by DSM IP Assets BV filed Critical DSM IP Assets BV
Publication of CN104388324A publication Critical patent/CN104388324A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C12M3/06—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with filtration, ultrafiltration, inverse osmosis or dialysis means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/10—Hollow fibers or tubes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/10—Perfusion
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0618—Cells of the nervous system
    • C12N5/0621—Eye cells, e.g. cornea, iris pigmented cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/44—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of volume or liquid level
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2521/00—Culture process characterised by the use of hydrostatic pressure, flow or shear forces

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明涉及用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法。本发明涉及通过对细胞培养物进行连续灌注培养来培养细胞的方法，所述细胞培养物包含细胞培养基和细胞，其中，细胞培养基被加入到细胞培养物中，所述细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块上循环，导致液体流出物的细胞密度较之细胞培养物要低，而过滤器模块内的流是交互切向流。优选地，培养基按照特定的灌注速率加入和/或从培养物中至少将生物质移出一次。本方法尤其适合于培养聚集的细胞。本发明还涉及这样的方法：其中，细胞会生产生物物质(优选地，生产抗体)，所述生物物质可在下游加工过程中被进一步纯化。

Description

用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法
本发明是申请日为2005年3月4日、申请号为200580007175.4、题为“用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法”的申请的分案申请。
本发明涉及对细胞的灌注培养(perfusion culturing)。
本发明公开了一种方法，用于通过对细胞培养物进行连续灌注培养来培养细胞，所述细胞培养物包含细胞培养基和细胞，其中，细胞培养基被加入到细胞培养物中，其中，细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块上循环，导致液体流出物的细胞密度较细胞培养物要低，而过滤器模块内的流是交互切向流。
我们惊奇地发现，按照本发明对动物(特别是哺乳动物)细胞或酵母细胞进行灌注培养，可以获得极其高的存活细胞密度，而细胞培养物进一步展示出极其高的细胞存活率(viability)。此外，还发现，本发明的灌注方法使得培养物内细胞聚集更少，甚至能获得单个的细胞的悬浮液，而没有可见的聚集物。这是令人惊奇的发现，因为使用低剪切条件，例如，在灌注细胞培养中，典型地，不会使细胞不聚集。灌注细胞培养期间的细胞聚集是不利的，因为例如细胞聚集物中细胞代谢情况不均一使得过程控制会更难。如果细胞形成了5个或更多个细胞的聚集物，以及当聚集物总的来说包含细胞总量中5％或更多的时候，这就尤其麻烦。
在US 6,544,424中描述了一种灌注方法。虽然，该文献提到，该方法可以被用于对动物细胞进行灌注培养，但是其既没有公开也没有暗示本发明中发现的高细胞密度。此外，US 6,544,424B1中公开，该灌注过程可以减少中空纤维膜表面上障碍物的粘附和生长，但是其既没有公开也没有暗示细胞培养物中的细胞本身会更少地聚集。
Voisier et al.(Biotechnol.Bioeng.82(2003)，751-765)对悬浮哺乳细胞高密度灌注培养中的多种细胞驻留技术进行了综述。其中提到的细胞驻留系统中没有一种能够提供本发明的极其高的存活细胞密度以及极其高的细胞存活率。
细胞灌注培养在本领域中有其传统含义，即，这意味着，在培养期间，通过分离设备来保留细胞，其中存在较之分离前具有更低的细胞密度的液体流出物，并且存在细胞培养基流入物。在本发明的方法中，该分离设备是包含中空纤维的过滤器模块。
灌注培养包括但不限于，连续流和半连续流，例如，逐步流(step-wise flow)或交错流(staggered flow)。
术语“中空纤维”指管状的膜。该管的内径优选在0.3至6.0mm之间，更优选地，在0.5至3.0mm之间，最优选地，在0.5至2.0mm之间。优选地，膜的网孔大小被选择为：网孔中孔的大小接近细胞直径，确保细胞能驻留下来，而细胞残骸能通过过滤器。优选地，网孔大小为3-30μm。
包含中空纤维的过滤器模块可通过商业途径获得，例如，从GeneralElectric(以前的Amersham)获得。
“过滤器模块内的交互切向流”指：在与中空纤维的膜表面相同的方向上(即，与之相切的方向)存在一道流，所述的流来回流动，在与所述过滤器表面基本垂直的方向上存在另一道流。可以根据本领域技术人员已知的方法来获得切向流。例如，在US 6,544,424中描述过，可以用一个泵使细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块上循环，用另一个泵移出细胞密度较过滤器分离之前更低的液体，由此获得交互切向流。
在本发明的方法中，适用于培养细胞的任何类型的细胞培养基原则上都可使用。选择细胞培养基及细胞培养条件的方针都是本领域内公知的，并且在例如Freshney，R.I.Culture of animal cells(a manual of basictechniques)，4th edition 2000，wiley-Liss的第8章和第9章以及Doyle，A.，Griffiths，J.B.，Newell，D.G.Cell&Tissue culture：Laboratory Procedures 1993，John wiley&Sons中提供过。
通常，用于哺乳动物细胞的细胞培养基包含盐、氨基酸、维生素、脂类、去垢剂、缓冲液、生长因子、激素、细胞因子、微量元素和碳水化合物。盐的例子包括镁盐，例如MgCl2·6H2O、MgSO4和MgSO4·7H2O；铁盐，例如FeSO4·7H2O；钾盐，例如KH2PO4、KCl；钠盐，例如NaH2PO4、Na2HPO4和钙盐，例如CaCl2·2H2O。氨基酸的例子是全部20种已知的蛋白质源氨基酸，例如，组氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸。维生素的例子包括：抗坏血酸、生物素、胆碱Cl、肌醇、D-泛酸、核黄素。脂类的例子包括：脂肪酸，例如亚油酸和油酸；大豆蛋白胨和乙醇胺。去垢剂的例子包括Tween 80和Pluronic F68。缓冲液的例子是HEPES。生长因子/激素/细胞因子包括IGF、氢化可的松和(重组)胰岛素。微量元素的例子是本领域技术人员已知的，其包括Zn、Mg和Se。碳水化合物的例子包括葡萄糖、果糖、半乳糖和丙酮酸盐/酯。
细胞培养基的pH、温度、溶解氧浓度和渗透压摩尔浓度(osmolarity)原则上并不重要，其取决于所选用细胞的种类。优选地，pH、温度、溶解氧浓度和渗透压摩尔浓度被选择为：其对于细胞的生长和生产率来说是最优的。本领域技术人员知道如何找到对灌注培养来说最优的pH、温度、溶解氧浓度和渗透压摩尔浓度。通常，最优pH介于6.6和7.6之间，最优温度介于30至39℃之间，最优渗透压摩尔浓度介于260至400mOsm/kg之间。
可有利地用本发明方法处理的细胞可以是从本发明的方法获得好处(即培养至极其高的存活细胞密度以及极其高的细胞存活率)的任何种类的细胞。
根据本发明的方法，极其高的存活细胞密度是每mL至少80x 106个细胞的密度，优选地，每mL至少100x 106个细胞，更优选地，每mL至少110x 106个细胞，更优选地，每mL至少120x 106个细胞，更优选地，每mL至少130x 106个细胞，最优选地，每mL至少140x 106个细胞。典型地，细胞密度的合适上限可以是每mL大约500x 106个细胞。
令人惊奇地，本发明的极其高的细胞密度还伴随着极其高的细胞存活率。极其高的细胞存活率是至少为90％的存活率，优选为至少95％，更优选为至少97％，最优选为至少99％。
应当理解，非常高的存活细胞密度和非常高的细胞存活率是在灌注培养进行一段时间之后达到的，通常是当细胞达到稳定状态后，对哺乳动物细胞而言，典型的是灌注培养初始化之后12至25天。
本发明的方法适合用于培养动物细胞或酵母细胞，尤其适合用于培养哺乳动物细胞。
本发明的方法还尤其适合用于对培养期间(尤其是灌注培养期间)容易形成或固有地会形成聚集物的细胞(所谓的聚集细胞)进行培养。令人惊奇地，本发明的方法不仅能减少过滤器膜上的聚集物分布，还能减少灌注培养期间细胞的聚集，甚至是减少固有地趋向于形成聚集物的细胞的聚集。根据本发明对聚集细胞的培养能使得培养物中至少5个细胞的聚集物仅包含细胞总数的至多5％，优选地，至多4％，更优选地，至多3％，进一步更优选地，细胞总数的至多2％。尤其优选地，根据本发明对聚集细胞的培养使得培养物是真正的单个的细胞的悬浮液。
聚集细胞是形成至少5个细胞的聚集物的细胞，所述聚集物占到细胞总数的至少5％。优选地，聚集物由至少6个，更优选至少7个，进一步更优选至少8个，进一步更优选至少9个，进一步更优选至少10个细胞组成。优选地，聚集物总的来说包含细胞总数的至少7％，更优选至少10％，最优选15％。
哺乳动物细胞的例子包括：CHO(中国仓鼠卵巢)细胞、杂交瘤、BHK(幼仓鼠肾)细胞、骨髓瘤细胞、人类细胞(例如HEK-293细胞、人成淋巴细胞、细胞)、小鼠细胞(例如，NS0细胞)。酵母细胞的例子包括Saccharomyces cerevisiae、Phaffia rhodozyma、Kluyveromyces lactis或来自Pichia属的酵母细胞。
优选地，使用哺乳动物细胞，更优选地，CHO、NS0、细胞。还优选地，可以使用已知在培养期间会发生聚集的细胞(聚集细胞)。最优选地，使用细胞。
例如，可在显微镜下对细胞聚集进行测定。
将细胞培养基加入到培养物中的速率(流入速率或灌注速率)会影响细胞的存活率和密度。
在本发明的一种实施方式中，按照下述公式1的灌注速率，将细胞培养基加入：
灌注速率＝SPR*细胞培养物总体积*存活细胞密度    (1)
其中，灌注速率以每天多少升来表示，其中，SPR是比灌注速率，即，细胞培养基被加入到细胞培养物中的速率，其被表示为每时间单位每存活细胞中加入的培养基的体积，并且，其中，存活细胞密度是每单位体积中存活细胞的数量。本领域技术人员可以测定得到存活细胞的数量，例如，通过台盼蓝排除方法来测定。
比灌注速率优选被选择为0.01至0.3nL/细胞/天之间，更优选地，0.01至0.2nL/细胞/天之间。
当调节灌注速率时，可以有利地考虑其它参数，例如被加入到培养物中的葡萄糖的量和/或氧气浓度。例如，对而言，作为培养基灌注速率的一部分，葡萄糖灌注速率优选被选用为3至20毫摩尔/L之间，更优选地，5至15毫摩尔/L之间。
本领域技术人员知道如何确定流出速率。液体的流出速率是通过灌注速率来确定的，其通常被选用为相等的值。
在本发明的一种实施方式中，流出的液体基本上没有存活细胞。
在本发明的另一种实施方式中，从细胞培养物中至少移出一次生物质(biomass)(即，细胞培养物中的细胞)，并将额外的细胞培养基加入到细胞培养物中，以补偿移出的生物质。移出生物质可以获得更高的细胞密度。可以连续或逐步地移出生物质。
在逐步方法中，在给定的时间段内将生物质连续移出。如果使用逐步方法，优选在细胞达到稳定状态的恰好之前或之后立即开始移出生物质。
如果使用逐步方法，对每个生物质移出步骤而言，优选地，每天移出的生物质体积为工作体积的2至40％，更优选地，每天为工作体积的5至30％，进一步更优选地，每天为工作体积的10至25％。
“工作体积”指细胞培养物的总体积。
“生物质移出步骤”指从开始移出生物质到结束之间的时间。如果使用连续方法，那么连续移出生物质，直到细胞培养结束。优选地，连续移出生物质起始自细胞达到稳定状态的恰好之前或之后。优选地，移出的生物质体积每天为工作体积的2至40％，更优选地，每天为工作体积的3至30％，进一步更优选地，每天为工作体积的4至15％。
额外加入细胞培养基用于补偿生物质的移出。其中将额外的细胞培养基加入到细胞培养物中的加料可以与灌注加料合并，但是其也可以采用单独加料的形式。本领域技术人员知道需要加入多少额外的细胞培养基来补偿生物质的移出。通常，向细胞培养物中加入额外细胞培养基的速率与生物质移出速率相同。
在本发明的另一种实施方式中，细胞要生产生物物质(biologicalsubstances)。适合在对细胞的灌注培养中生产的生物物质原则上是可以通过动物(尤其是哺乳动物)和酵母细胞生产的所有生物物质，例如，治疗和诊断用的蛋白质，例如，单克隆抗体，生长因子或肽激素，酶，多核苷酸，例如用于基因疗法的病毒载体，疫苗等。
在本发明的灌注培养方法中，流出液体较之分离之前的液体，具有更低的细胞密度，但是生物物质的浓度相同。
优选地，本发明的方法用于生产生物制药产品，生物制药产品是具有医药应用的生物物质。生物制药产品的例子如下(括号之间是相应生物制药产品的商品名的例子)：替奈替普酶(Tenecteplase)(TN KaseTM)、(重组)抗出血因子(ReFactoTM)、成淋巴细胞干扰素a-n1(WellferonTM)、(重组)凝血因子(NovoSevenTM)、依那西普(Etanercept)(EnbrelTM)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)(HerceptinTM)、英利昔单抗(Infliximab)(RemicadeTM)、巴利昔单抗(Basiliximab)(SimulectTM)、达克珠单抗(Daclizumab)(ZenapazTM)、(重组)凝血因子IX(BenefixTM)、促红细胞生成素alpha()、G-CSF(Filgrastim)、干扰素alpha-2b()、重组胰岛素()、干扰素beta 1a()、因子VIII()、葡糖脑苷脂酶(CerezymeTM)、干扰素beta 1b()、TNF alpha受体()、囊泡刺激激素()、Mab阿昔单抗( )、Mab ritiximab()、组织血纤蛋白溶解酶原激活因子()、人生长激素(GenoTropinTM)。具有可能的医药应用的多核苷酸的例子是基因治疗用的质粒DNA。目前在临床试验中针对医药应用对一些基因治疗用DNA进行了检验。疫苗的例子是肝、口腔四价轮状病毒疫苗(RotaShieldTM)、狂犬病疫苗(RanAvertTM)、乙型肝炎疫苗(RECOMBIVAX )和灭活甲型肝炎疫苗(VAQTATM)。
可在所谓的下游加工中对流出物中的生物物质进行进一步纯化。下游加工通常包括若干纯化步骤，其组合和顺序可以变动。下游加工过程中纯化步骤的例子是：分离步骤(例如，通过亲和色谱和/或离子交换色谱)、用于浓缩生物物质的步骤(例如，通过超滤或渗滤)、交换缓冲液的步骤和/或去除或灭活病毒的步骤(例如，通过病毒过滤、pH改变或溶剂去垢剂处理)。
下面将通过下述实施例来阐述本发明，但是下述实施例对本发明没有限制。
实施例1：对人细胞系 进行工艺优化，用于生产生物药物 导论
目前有大量的表达平台用于生产生物药物。新产品中的大多数必须选择哺乳动物体系，这主要是由于这些细胞含有而其它细胞缺乏的糖基化机制。但是目前，这些细胞的细胞质量和得到的生产率都比相应的微生物体系要低10-100倍，如果这些微生物细胞有生产上述产物的机制的话。
针对细胞系(拥有大量特征，使其有利于生产生物药物的人细胞系)开发了一种灌注培养系统及方法。灌注方法包括对培养物中多种组分的分离，使得细胞可被保留，收获物被获取，培养基的更新得以进行。对细胞系进行的连续灌注培养中，旋转过滤器(spinfilter)、声学设备(acoustic device)和交互切向流(ATF)单元的性能被评测。
材料和方法
细胞系及其保持：将产生人IgG的细胞系用于本研究。细胞被保持在不含血清的商业培养基(EX-CELLTM VPRO培养基，JRHBiosciences)中，其中补充有6mM L-谷氨酰胺(Gibco)。细胞系是人的红细胞系，其上带有使用磷酸甘油酸酯激酶启动子的腺病毒5型(ad5)E1基因。
生物反应器设置：在该研究中，使用1L和4L工作体积的反应器(Applikon，荷兰和B.Braun，德国)。Braun DCU3控制器(B.Braun，德国)被用于按照给定的设置来执行工艺。温度保持为36.5℃(范围为35.5-37.5℃)。通过靠顶部空间对入口气体组合物进行自动调节，以及通过微孔喷头进行间歇式喷射，将溶解氧浓度控制为空气饱和的50％(范围40-60％)。pH的设置点为7.1(范围为6.7-7.5)，通过顶部空间的CO2流对其进行控制。用存活细胞密度在0.2-0.5*106个细胞/mL范围内的接种体将细胞接种到发酵罐中。灌注开始于存活细胞密度在1-3*106个细胞/mL的范围内的时候。
细胞驻留：用三种不同的设备将细胞保持在反应器中。首先，使用孔径为10μm的旋转过滤器(GKD，Düren，德国)。第二种，使用BiosepBDI1015细胞驻留系统和控制器(AppliSens，荷兰)。最后来评测ATF-4控制单元，其装有相关的中空纤维膜模块(Refine Technology，美国)。所用的中空纤维过滤器是CFP-2-E-8SIP型号(0.2微米，面积：4600em2，Amersham Bioscience，从Magellan instruments，美国获得)。为保持恒定的培养物体积，使用水平传感器控制回路。
分析方法：用台盼蓝排除方法，对生物反应器的细胞进行计数。按照下述方法来测定存活细胞的数量：将大量用台盼蓝染色过的细胞转移到Fuchs Rosenthal血球计数器中。将血球计数器的腔室放到显微镜下，对合适数量的小格进行计数。使用下述公式来计算存活细胞密度：
存活细胞密度(X 105个细胞/ml)＝(A+B)x E/320      (2)
其中，
A＝方框A中未染色细胞的数量
B＝方框B中未染色细胞的数量
E＝稀释因子
通过用带有UV280nm吸收检测装置的HPLC，使用分析蛋白质A柱来测定抗体浓度；基于IgG1参考标准校正曲线来确定实际浓度。
结果
灌注培养
图1-6显示了用上述材料和方法获得的结果。
附图说明：
图1：针对两种不同的连续灌注发酵的存活细胞密度(x 106个细胞/ml)对培养时间(天)的示意图，所述发酵是对产生IgG1的克隆来进行得，其中使用旋转过滤器分离设备。1L Applikon发酵罐的搅拌器速率被设定为100-150rpm。灌注按照1L的工作体积进行。对两种灌注运行模式而言，比灌注速率(SPR)都是0.1-0.3nL/细胞/天。在两种情况下，由于旋转过滤器堵塞，灌注的运行都不得不终止。
图2：在用声学设备作为细胞驻留系统的连续灌注系统中对产生IgG1的细胞进行培养。1L Applikon发酵罐的搅拌器速率被设定为100-150rpm。用于运行/停止循环的设置为300s向前(forward)和4.5s向后(backwards)。在运行期间，这被改为300s/3s循环(第15天)。用于灌注运行的比灌注速率在0.1-0.3nL/细胞/天之间。
图3：在用ATF-4单元作为细胞驻留系统的连续灌注系统中对产生IgG1的细胞进行培养。该实验在4L的Applikon发酵罐中进行。搅拌器速度被设置为125rpm。ATF-4在每天0.5至3倍之间的工作体积下运行。SPR被设定为0.03-0.08nL/细胞/天。插入图片显示出：培养物具有高细胞密度，并且完全没有聚集细胞。
图4：对两种不同的灌注发酵而言，IgG1的生产率对培养时间(天)的图，所述发酵是用旋转过滤器分离设备对产生IgG1的克隆进行的。
图5：在用声学设备作为细胞驻留系统的连续灌注系统中，产生IgG1的细胞的生产率。
图6：在用ATF单元作为细胞驻留系统的连续灌注系统中，产生IgG1的细胞的生产率。
概括
关于针对不同类型的灌注获得的数据的总结，参见表1。
表1.对使用三种不同的驻留设备进行的灌注中存活细胞密度、体积产率(基于反应器体积)和产量提高的总结。加入了分批和补料分批的结果用于比较(数据未示出)。
可以得出结论，使用ATF单元进行的连续灌注实验显示出了明显的获得非常高的细胞密度和产品浓度的潜力(100x 106个细胞/mL和0.9g/L/天)，而且没有观察到细胞的聚集。
实施例2通过灌注来培养 细胞
设备：B.Braun发酵罐控制单元(Braun，德国)，7L Braun容器和具有相关pH、溶解氧(DO)和水平传感器探针(Braun，德国)的磁头板(headplate)，ATF-4控制单元，装有相关的中空纤维膜模块(RefineTechnology，美国)。
过滤器
过滤器型号：CFP-2-E-8SIP
种类：0.2微米
面积：4600cm2
Amersham Bioscience
工作体积：
设置点：4.1L
范围：3.8-4.7L
ATF设置
参数 设置点 范围
压升设置点(psi) 可变 2-4
压升流(L/min) 3.2 2.5-4.0
排出流(L/min) 3.2 2.5-4.0
排出时间(s) 可变 3-8
前压力(pre-pressure)(psi) 可变 5-9
排出速率
该方法中没有应用生物质的去除过程。
材料：Ex-CELLTM VPRO培养基(JRH Bioscience，美国)中6mM(最终体积)的L-谷氨酰胺(Gibco)，12％的Na2CO3被用于控制pH。
细胞系和培养条件
在本研究中对表达模型IgG的细胞系进行研究。细胞系从由视网膜获得的初级人类细胞产生。细胞系能产生完整的人单克隆抗体(包括聚糖)(参考文献1)(参考文献2)。
在Erlenymer摇瓶中于110rpm和36.5℃下培养细胞。用5％CO2/空气混和物对这些瓶子的顶部空间加以控制。
参考文献1：Jones，D.H.，van Berkel，P.H.C.，Logtenberg，T.and Bout，A.，2002，‘PER.C6cell line for human antibody production’，Gen.Eng.News 22，50-54。
参考文献2：Jones，D.et al.，2003，‘High-level expression of recombinantIgG in the human cell line PER.C6’，Biotechnol.Prog.19，163-168。
发酵罐操作
细胞被培养于发酵罐中，其中，溶解氧压力、pH、温度和搅动速率按照下面详述的内容来控制。
方法描述：
用细胞接种发酵罐，其中接种体的存活细胞密度范围为0.2-0.5x 106个细胞/ml，设置点为0.3x 106个细胞/ml。当存活细胞密度＞2x 106个细胞/ml或在培养的第5天(取先到达的时间)开始进行灌注。
灌注速率取决于培养物的细胞密度，所用的速率如下表所示。随着发酵罐内细胞密度增加，对流速和稀释速率加以调节。
用于培养 细胞的灌注速率
下表2和图7和图8中展示了来自该实施例的实际数据和结果(除此之外，还包括本实施例中所用的流速和比灌注速率)。
图7：对于使用灌注方法培养的细胞而言，培养时间(天)对流速(L/天)和比灌注速率(SPR，以n1/细胞/天表示)的图。
图8：使用实施例2的流程，得到的存活细胞密度和细胞存活率
表2.从实施例2获得的原始数据
以下内容对应于母案申请中的原始权利要求书，现作为说明书的一部分并入此处：
1.通过对细胞培养物进行连续灌注培养来培养细胞的方法，所述细胞培养物包含细胞培养基和细胞，其中：
细胞培养基被加入到所述细胞培养物中，
所述细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块上循环，导致液体流出物的细胞密度较之所述细胞培养物要低，而且所述过滤器模块内的流是交互切向流。
2.如项1所述的方法，其中，所述细胞培养基按照公式1计算得到的灌注速率加入：
灌注速率＝SPR*细胞培养物总体积*存活细胞密度     (1)
其中，所述灌注速率以每天多少升来表示；其中，所述SPR是比灌注速率，即，所述细胞培养基被加入到所述细胞培养物中的速率，其被表示为每时间单位每个存活细胞加入的培养基的体积；并且，其中，所述存活细胞密度是每单位体积中存活细胞的数量。
3.如项2所述的方法，其中，所述SPR在0.01至0.3nL/细胞/天之间。
4.如前述任意一项项所述的方法，其中，从所述细胞培养物中至少将生物质移出一次，并且向所述细胞培养物中加入额外的细胞培养基。
5.如项4所述的方法，其中，所述生物质的移出步骤在细胞达到稳定状态的恰好之前或之后立即开始。
6.如项4或5所述的方法，其中，每天移出的生物质的体积在所述细胞培养物总体积的2至40％之间。
7.如前述任意一项项所述的方法，其中，所述交互切向流是通过下述方法获得的：用一个泵使所述细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块上循环，以及用另一个泵移出细胞密度较所述过滤器分离之前更低的液体。
8.如前述任意一项项所述的方法，其中，所述细胞被培养至存活细胞密度为每ml至少80x 106个细胞，以及细胞存活率为至少90％。
9.如前述任意一项项所述的方法，其中，至少5个细胞的聚集物至多包含细胞总量的5％。
10.如前述任意一项项所述的方法，其中，所述细胞是酵母细胞或动物细胞，优选地，哺乳动物细胞。
11.如项10所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
12.如项11所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是细胞。
13.如前述任意一项项所述的方法，其中，所述细胞能产生生物物质。
14.如项13所述的方法，其中，所述生物物质是治疗和诊断用的蛋白质，例如，单克隆抗体，生长因子或肽激素，酶，多核苷酸，例如用于基因疗法的病毒载体，或疫苗，优选地，单克隆抗体。
15.如项13或14所述的方法，其中，所述生物物质在下游加工过程中被进一步纯化。

Claims (16)

1.方法用于在细胞生长期间降低聚集细胞悬浮液的聚集程度的用途，在所述方法中：包含细胞培养基和聚集细胞的细胞培养物被维持在连续灌注培养体系中，细胞培养基被加入到所述细胞培养物中，所述细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块内循环，导致液体流出物的细胞密度较之所述细胞培养物要低，所述过滤器模块内的循环的特征为交互切向流，以及继续所述培养直至达到期望的细胞密度。
2.如权利要求1所述的用途，其中从所述细胞培养物中至少将生物质移出一次，并且向所述细胞培养物中加入额外的细胞培养基。
3.如权利要求2所述的用途，其中所述生物质的移出在细胞达到稳定状态的恰好之前或之后立即开始。
4.如权利要求2所述的用途，其中每天移出的生物质的体积在所述细胞培养物总体积的2至40％之间。
5.如权利要求1-5中任一项所述的用途，其中所述过滤器模块包含中空纤维，以及所述交互切向流是通过下述方法获得的：用一个泵使所述细胞培养物在包含中空纤维的过滤器模块内循环，以及用另一个泵移出液体流出物。
6.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中以0.01至0.3nL/细胞/天之间的灌注速率添加细胞培养基。
7.如权利要求1-6中任一项所述的用途，其中细胞被培养至存活细胞密度是每ml至少80x106个细胞，并且细胞的存活率为至少90％。
8.如权利要求1-7中任一项所述的用途，其中细胞总数的至多5％包含至少5个细胞的聚集物。
9.如权利要求1-8中任一项所述的用途，其中所述细胞为动物细胞或酵母细胞。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述细胞为哺乳动物细胞。
11.如权利要求10所述的用途，其中所述哺乳动物细胞为细胞。
12.如权利要求1-11中任一项所述的用途，其中所述细胞产生生物物质。
13.如权利要求12所述的用途，其中所述生物物质是治疗或诊断用的蛋白质或多核苷酸。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述治疗或诊断用蛋白质选自由单克隆抗体，生长因子、肽激素、酶和疫苗组成的组。
15.如权利要求13所述的用途，其中所述治疗用或诊断用多核苷酸为用于基因疗法的病毒载体。
16.如权利要求12-15中任一项所述的用途，其中所述生物物质在下游加工过程中被进一步纯化。
CN201410601800.9A 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法 Pending CN104388324A (zh)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04075702.3 2004-03-05
EP04075703 2004-03-05
EP04075702 2004-03-05
EP04075703.1 2004-03-05
EP04077657 2004-09-27
EP04077656.9 2004-09-27
EP04077657.7 2004-09-27
EP04077656 2004-09-27

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800071754A Division CN1930281A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104388324A true CN104388324A (zh) 2015-03-04

Family

ID=34961830

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410601800.9A Pending CN104388324A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法
CNA2005800071754A Pending CN1930281A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法
CN201410471955.5A Pending CN104593277A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2005800071754A Pending CN1930281A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法
CN201410471955.5A Pending CN104593277A (zh) 2004-03-05 2005-03-04 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法

Country Status (14)

Country Link
US (3) US8206981B2 (zh)
EP (3) EP2540815A1 (zh)
JP (6) JP2007525984A (zh)
KR (1) KR101050585B1 (zh)
CN (3) CN104388324A (zh)
AU (1) AU2005229359C1 (zh)
CA (1) CA2557046A1 (zh)
DK (1) DK1720972T3 (zh)
ES (1) ES2456015T3 (zh)
IL (2) IL177724A (zh)
PL (1) PL1720972T3 (zh)
PT (1) PT1720972E (zh)
SI (1) SI1720972T1 (zh)
WO (1) WO2005095578A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109072154A (zh) * 2016-04-15 2018-12-21 勃林格殷格翰国际公司 细胞保留装置和方法
CN111051496A (zh) * 2017-09-06 2020-04-21 富士胶片株式会社 产物的制造方法

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2005229359C1 (en) 2004-03-05 2011-07-28 Patheon Holdings I B.V. Process for cell culturing by continuous perfusion and alternating tangential flow
DK1988170T3 (da) 2006-02-24 2019-07-22 Toray Industries Fremgangsmåde til fremstilling af et kemisk produkt og indretning til kontinuerlig fermentering
EP1870450A1 (en) * 2006-06-21 2007-12-26 DSMIP Assets B.V. Process for the culturing of E1-immortalized HER cells
AU2011211462C1 (en) * 2006-07-14 2015-01-22 Dpx Holdings B.V. Improved process for the culturing of cells
ES2579957T3 (es) * 2006-07-14 2016-08-17 Dpx Holdings B.V. Procedimiento mejorado para el cultivo de células
EP2014760A1 (en) 2007-06-13 2009-01-14 CMC Biopharmaceuticals A/S A method for producing a biopolymer (e.g. polypeptide) in a continuous fermentation process
JP5727790B2 (ja) * 2007-12-27 2015-06-03 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 細胞培養プロセス
WO2010003759A2 (en) * 2008-06-17 2010-01-14 Dsm Ip Assets B.V. Cell culturing method
CA2735790C (en) 2008-09-02 2017-02-28 Pluristem Ltd. Adherent cells from placenta tissue and use thereof in therapy
DK2350268T3 (en) * 2008-11-03 2015-03-23 Crucell Holland Bv PROCEDURE FOR PRODUCING ADENOVIRUS VECTORS
EA020563B1 (ru) 2009-07-16 2014-12-30 Круселл Холланд Б.В. Получение полиовируса с высокими титрами для получения вакцины
EA028875B1 (ru) 2009-10-15 2018-01-31 Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. Способ очистки аденовирусных частиц из клеточной суспензии
CN102791852B (zh) 2009-10-15 2014-05-07 克鲁塞尔荷兰公司 纯化腺病毒颗粒的方法
RS56484B1 (sr) 2009-11-17 2018-01-31 Squibb & Sons Llc Metode za poboljšanu proizvodnju proteina
US20120315696A1 (en) * 2010-02-15 2012-12-13 Alfred Luitjens METHOD FOR THE PRODUCTION OF Ad26 ADENOVIRAL VECTORS
KR101820980B1 (ko) * 2010-02-15 2018-01-22 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이. Ａｄ 26 아데노바이러스 벡터를 제조하는 방법
WO2011144561A1 (en) 2010-05-18 2011-11-24 Crucell Holland B.V. Methods for welding ethylene vinyl acetate (eva) tubing, tubing obtained thereby and use of such tubing for sterile transfer of content into a bioreactor
ES2556454T3 (es) * 2010-10-05 2016-01-18 Novo Nordisk Health Care Ag Proceso para producción de proteínas
EP2707387B1 (en) * 2011-05-13 2019-12-25 Octapharma AG A method of increasing the productivity of eucaryotic cells in the production of recombinant fviii
PL2726600T3 (pl) * 2011-07-01 2017-08-31 Amgen Inc. Hodowla ssaczych komórek
JP6220789B2 (ja) 2011-10-18 2017-10-25 コヒラス・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド 糖およびポリオールの組合せによって安定化されたエタネルセプト製剤
US10493151B2 (en) 2011-10-18 2019-12-03 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations stabilized with sodium chloride
CN103305417A (zh) * 2012-03-07 2013-09-18 无锡药明康德生物技术有限公司 进行蛋白生产的高产量反应器及其生产方法和应用
GB201211256D0 (en) 2012-06-25 2012-08-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Fermentation process
CA2878508A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations exhibiting marked reduction in sub-visible particles
CN104902914B (zh) 2012-09-11 2019-01-01 科荣生生物科学公司 高纯度和优异产量的正确折叠的依那西普
US9663753B2 (en) 2012-09-27 2017-05-30 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Tangential flow perfusion system
TWI637057B (zh) 2012-11-09 2018-10-01 拜爾沙納有限公司 具交替生物反應器用途之不連續進料批次製程
JP6742902B2 (ja) 2013-03-15 2020-08-19 ジェンザイム・コーポレーション 高密度細胞バンキングの方法
ES2842350T3 (es) 2013-03-19 2021-07-13 Cmc Biologics As Un procedimiento para la producción de un producto (por ejemplo, polipéptido) en un proceso de fermentación de cultivo celular continuo
EP3391942A1 (en) * 2013-03-26 2018-10-24 Coherus Biosciences, Inc. Protein production method
US9790465B2 (en) 2013-04-30 2017-10-17 Corning Incorporated Spheroid cell culture well article and methods thereof
WO2015039115A1 (en) * 2013-09-16 2015-03-19 Genzyme Corporation Methods and systems for processing a cell culture
CN105579572B (zh) 2013-09-30 2018-08-10 扬森疫苗与预防公司 用于净化高密度粗细胞培养收获物的方法
CN103525756B (zh) * 2013-10-23 2015-04-08 南京农业大学 一种原代鸡肝细胞的分离培养方法
US20160289633A1 (en) * 2013-12-20 2016-10-06 Biogen Ma Inc. Use of Perfusion Seed Cultures to Improve Biopharmaceutical Fed-Batch Production Capacity and Product Quality
IL282517B (en) * 2014-01-29 2022-07-01 Amgen Inc Overexpression of n-glycosylation pathway regulators to modulate glycosylation of recombinant proteins
MX2016010680A (es) * 2014-02-17 2017-04-27 Advantech Bioscience Farmacêutica Ltda Perfeccionamiento de expresión de proteína recombinante con el uso de un sistema de retención de célula basado en membrana.
SG10202113019XA (en) * 2014-06-04 2021-12-30 Amgen Inc Methods for harvesting mammalian cell cultures
EP3172317B1 (en) 2014-07-24 2019-05-01 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Process for the purification of poliovirus from cell cultures
JP6530171B2 (ja) * 2014-09-09 2019-06-12 旭化成メディカル株式会社 培養産生物の回収方法
CN113481097A (zh) 2014-10-29 2021-10-08 康宁股份有限公司 灌注生物反应器平台
KR102460969B1 (ko) 2014-10-29 2022-10-31 코닝 인코포레이티드 세포 배양 인서트
US10092888B2 (en) 2014-11-07 2018-10-09 Genesis Technologies, Llc Linear reciprocating actuator
EP3256565A1 (en) * 2015-02-09 2017-12-20 Univercells NV System, apparatus and method for the production of cells and/or cell products
WO2017180724A1 (en) * 2016-04-12 2017-10-19 Artemis Biosystems, Inc. Perfusion filtration systems
CN116144500A (zh) 2016-04-14 2023-05-23 崔泽尔有限公司 具有恒流泵/管道系统的固定床生物反应器
EP3442986A4 (en) * 2016-04-14 2019-11-13 Trizell Ltd. FIXED BAYOR ACTUATOR WITH CONSTANT FLOW PUMP / PIPING SYSTEM
CN109415679A (zh) 2016-06-30 2019-03-01 富士胶片株式会社 细胞悬液的膜分离方法以及细胞培养装置
EP3481191A2 (en) * 2016-07-11 2019-05-15 Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. Systems and methods for growing cells in vitro
US11857970B2 (en) 2017-07-14 2024-01-02 Corning Incorporated Cell culture vessel
PL3652291T3 (pl) 2017-07-14 2022-03-28 Corning Incorporated Naczynie do hodowli komórkowej
CN111051494B (zh) 2017-07-14 2024-03-29 康宁股份有限公司 用于手动或自动培养基交换的3d细胞培养容器
JP7195302B2 (ja) 2017-07-14 2022-12-23 コーニング インコーポレイテッド ３ｄ培養のための細胞培養容器及び３ｄ細胞の培養方法
JP2020533983A (ja) * 2017-09-15 2020-11-26 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 目的のポリペプチドのラージスケールの製造間のオンラインバイオマス静電容量モニタリング
CN111344558A (zh) 2017-10-06 2020-06-26 龙沙有限公司 使用拉曼光谱法自动控制细胞培养
WO2019079188A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. PERFUSION BIOREACTOR AND METHODS OF USE THEREOF
US20210163592A1 (en) * 2017-12-11 2021-06-03 Amgen Inc Continuous manufacturing process for bispecific antibody products
WO2019173752A1 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Repligen Corporation Tangential flow depth filtration systems and methods of filtration using same
CN110241012B (zh) * 2018-03-09 2022-11-01 嘉和生物药业有限公司 一种生物大分子上游分阶段截留的生产方法、生产模块及在生产中的应用
CN111868249A (zh) * 2018-03-19 2020-10-30 富士胶片株式会社 生产物的制造方法
CN112165983A (zh) 2018-05-25 2021-01-01 瑞普利金公司 切向流过滤系统和方法
CN108504562A (zh) * 2018-06-21 2018-09-07 江苏澳创生物科技有限公司 一种发酵生产l-苏氨酸的系统及其应用
PL3649229T3 (pl) 2018-07-13 2021-12-06 Corning Incorporated Naczynia do hodowli komórkowych ze stabilizującymi urządzeniami
EP3649227A1 (en) 2018-07-13 2020-05-13 Corning Incorporated Fluidic devices including microplates with interconnected wells
PL3649226T3 (pl) 2018-07-13 2022-05-16 Corning Incorporated Płytki mikrodołkowe z boczną ścianką zawierającą powierzchnię dostarczającą płynną pożywkę
WO2020165873A1 (en) * 2019-02-15 2020-08-20 Oncosimis Biotech Private Limited Method and system for enhanced continuous production, secretion and separation of recombinant polypeptides from bacteria
EP4008774A4 (en) * 2019-07-16 2023-09-27 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. CELL CULTURE METHOD AND ITS APPLICATION BASED ON CONTINUOUS AND HIGH DENSITY INOCULATION
AU2021315939A1 (en) 2020-07-28 2023-02-23 Seagen Inc. Methods and systems for producing polypeptides

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US54544A (en) * 1866-05-08 Improvement in low-water detecters
JPS61199788A (ja) 1985-02-28 1986-09-04 Mitsubishi Rayon Co Ltd 醗酵生成物の分離濃縮方法及び連続醗酵方法
US5286646A (en) 1985-11-25 1994-02-15 Boehringer Mannheim Gmbh Method for mammalian cell culture
GB8617646D0 (en) 1986-07-18 1986-08-28 Manchester Inst Science Tech Recovery of biological material
US4806484A (en) 1987-08-07 1989-02-21 Igb Products, Ltd. Perfusion airlift bioreactor
JPH0797982B2 (ja) 1987-09-24 1995-10-25 東洋紡績株式会社 細胞培養装置
US4921792A (en) * 1987-11-27 1990-05-01 Miles Inc. Continuous cell dispersion, cultivation and substance recovery process
JPH01243985A (ja) 1988-03-25 1989-09-28 P C C Technol:Kk 植物器官の培養法及びその培養槽
US5595909A (en) * 1988-05-23 1997-01-21 Regents Of The University Of Minnesota Filter device
EP0343635B1 (en) 1988-05-25 1994-08-24 Teijin Limited Process for continuously culturing adherent animal cells
JPH02113896A (ja) * 1988-10-24 1990-04-26 Snow Brand Milk Prod Co Ltd ヒト抗リシンモノクローナル抗体およびそれを分泌するハイブリドーマ
US5019512A (en) * 1989-03-17 1991-05-28 Baxter International Inc. Spin filter for removing substantially cell-free culture medium from suspension cell culture system
JPH0541984A (ja) * 1990-09-07 1993-02-23 Dow Chem Co:The 攪拌容器における中空繊維においての細胞の増殖
US5256294A (en) 1990-09-17 1993-10-26 Genentech, Inc. Tangential flow filtration process and apparatus
GB9118664D0 (en) 1991-08-30 1991-10-16 Celltech Ltd Cell culture
JPH05153973A (ja) 1991-12-03 1993-06-22 Hitachi Ltd 細胞培養方法及び装置
US6204000B1 (en) 1995-04-28 2001-03-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Diagnostic methods and gene therapy using reagents derived from the human metastasis suppressor gene KAI1
JP2752918B2 (ja) * 1995-05-16 1998-05-18 ユーエイチティー株式会社 動物細胞のマイクロキャリア培養法
US6001585A (en) 1997-11-14 1999-12-14 Cellex Biosciences, Inc. Micro hollow fiber bioreactor
JP2997771B2 (ja) * 1998-06-29 2000-01-11 金沢大学長 細胞の懸濁培養方法
US6103526A (en) 1998-10-08 2000-08-15 Protein Sciences Corporation Spodoptera frugiperda single cell suspension cell line in serum-free media, methods of producing and using
US8026096B1 (en) 1998-10-08 2011-09-27 Protein Sciences Corporation In vivo active erythropoietin produced in insect cells
US6667176B1 (en) 2000-01-11 2003-12-23 Geron Corporation cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells
CA2252972C (en) 1998-11-26 2012-09-18 National Research Council Of Canada Serum-free production of recombinant proteins and adenoviral vectors
ES2319254T3 (es) 1999-01-26 2009-05-06 Schering-Plough Ltd. Propagacion de coronavirus bovino en celulas de ovario de hamster chino.
US6855544B1 (en) * 1999-04-15 2005-02-15 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell
DE60043273D1 (de) 1999-04-15 2009-12-17 Crucell Holland Bv Verwendung von Rekombinanten Proteinen in Menschlichen Zellen
EP1103610A1 (en) * 1999-11-26 2001-05-30 Introgene B.V. Production of vaccines from immortalised mammalian cell lines
JP2001149099A (ja) 1999-11-26 2001-06-05 Olympus Optical Co Ltd 染色体異常解析のための有核細胞の標本作製方法
US6544424B1 (en) * 1999-12-03 2003-04-08 Refined Technology Company Fluid filtration system
US6168941B1 (en) * 2000-04-07 2001-01-02 Genvec, Inc. Method of producing adenoviral vector stocks
JP4138209B2 (ja) 2000-06-29 2008-08-27 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 プラバスタチン含有組成物
JP2002113896A (ja) 2000-10-05 2002-04-16 Seiko Epson Corp 画像形成装置
DE60231074D1 (de) * 2001-04-17 2009-03-19 Seiren K K Mediumzusätze und medien für tierzellkulturen
DE10120835C2 (de) 2001-04-27 2003-04-10 Sifin Inst Fuer Immunpraeparat Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern
CA2351156A1 (en) 2001-07-04 2003-01-04 Peter W. Zandstra A bioprocess for the generation of pluripotent cell derived cells and tissues
PT1451290E (pt) * 2001-08-31 2011-03-09 Bayer Schering Pharma Ag Uma unidade e um processo para levar a cabo a fermentação com elevada densidade celular
WO2003022290A1 (fr) 2001-09-05 2003-03-20 Yamasa Corporation Compositions pharmaceutiques pour traiter la neuropathie diabetique
WO2003025158A1 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Medcell Biologics, Inc. Oxygen enriched bioreactor and method of culturing cells
JP2003219873A (ja) 2002-01-24 2003-08-05 Japan Science & Technology Corp サケ科キングサーモン由来の不死化細胞
US20030186335A1 (en) 2002-03-28 2003-10-02 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Monoclonal antibodies, hybridomas, cell isolation method, isolated cells and immunological diagnostic method
DE10237082B4 (de) * 2002-08-09 2014-12-31 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur biotechnologischen Herstellung von Wertstoffen
BRPI0409895B8 (pt) 2003-05-09 2021-05-25 Crucell Holland Bv método de cultura de células derivadas de células per.c6 capazes de crescer em suspensão para aumentar o rendimento de produto das referidas células
JP2005041984A (ja) 2003-07-22 2005-02-17 Shin Kobe Electric Mach Co Ltd 水架橋ポリオレフィン製シートの製造法
AU2005229359C1 (en) 2004-03-05 2011-07-28 Patheon Holdings I B.V. Process for cell culturing by continuous perfusion and alternating tangential flow
ES2579957T3 (es) 2006-07-14 2016-08-17 Dpx Holdings B.V. Procedimiento mejorado para el cultivo de células
JP2008308560A (ja) 2007-06-13 2008-12-25 Tohcello Co Ltd 表面防汚性複合フィルムの製造方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109072154A (zh) * 2016-04-15 2018-12-21 勃林格殷格翰国际公司 细胞保留装置和方法
CN111051496A (zh) * 2017-09-06 2020-04-21 富士胶片株式会社 产物的制造方法
US11685888B2 (en) 2017-09-06 2023-06-27 Fujifilm Corporation Method for producing product
CN111051496B (zh) * 2017-09-06 2024-03-08 富士胶片株式会社 产物的制造方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN1930281A (zh) 2007-03-14
JP2007525984A (ja) 2007-09-13
EP1720972B1 (en) 2014-01-08
IL177724A (en) 2011-01-31
CN104593277A (zh) 2015-05-06
EP2308958A2 (en) 2011-04-13
EP2540815A1 (en) 2013-01-02
JP2017225443A (ja) 2017-12-28
JP5719947B2 (ja) 2015-05-20
SI1720972T1 (sl) 2014-06-30
AU2005229359B2 (en) 2009-01-08
ES2456015T3 (es) 2014-04-21
EP2308958A3 (en) 2011-08-10
PT1720972E (pt) 2014-04-07
AU2005229359A1 (en) 2005-10-13
WO2005095578A1 (en) 2005-10-13
US8206981B2 (en) 2012-06-26
IL205606A (en) 2011-08-31
US20130266985A1 (en) 2013-10-10
DK1720972T3 (da) 2014-04-14
KR20070022221A (ko) 2007-02-26
CA2557046A1 (en) 2005-10-13
EP1720972A1 (en) 2006-11-15
JP2014128272A (ja) 2014-07-10
US20080131934A1 (en) 2008-06-05
AU2005229359C1 (en) 2011-07-28
US9260695B2 (en) 2016-02-16
JP2011125348A (ja) 2011-06-30
US20140087424A1 (en) 2014-03-27
IL177724A0 (en) 2006-12-31
PL1720972T3 (pl) 2014-06-30
KR101050585B1 (ko) 2011-07-19
JP2012090632A (ja) 2012-05-17
JP2016039817A (ja) 2016-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104388324A (zh) 用于通过连续灌注和交互切向流来培养细胞的方法
Jain et al. Upstream processes in antibody production: evaluation of critical parameters
CN102549142B (zh) 在连续细胞培养中产生所关心多肽或病毒的方法
CN104263700A (zh) 改进的细胞培养方法
CN110520538B (zh) 灌注培养基
CN107190034A (zh) 生产蛋白质的方法
AU2013203993C1 (en) Process for cell culturing by continuous perfusion and alternating tangential flow
EP4008774A1 (en) Cell culture method and application thereof based on high-density and continuous inoculation
WO2010003759A2 (en) Cell culturing method
US20210214702A1 (en) Process for production of recombinant tnk-tpa by packed-bed perfusion system
Munster et al. A high density culture system for the in-vitro production of human and mouse monoclonal antibodies
ENGASSER et al. in a membrane perfusion reactor

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20160325

Address after: Amsterdam, The Netherlands

Applicant after: DPX HOLDINGS B.V.

Address before: Holland Heerlen

Applicant before: DSM IP ASSETS B.V.

RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150304