CN104334556A - 新型1-磷酸鞘氨醇受体拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明包括具有下式(I)的1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)拮抗剂：其中R1是-CH2CH＝CH2、-CH3、或-CH2CH2CH2OH,R2是-H、-CH2C02H、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CONH2、或-CH2C02Et并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶、4-取代-2-氯-6-羟乙基吡啶、4-取代-2-氯-6-羟丙基吡啶、4-取代-2-(氨乙基)-6-氯吡啶、4-取代-2-(氨乙基甲基)-6-氯吡啶、或5-取代-2,3-二氯噻吩。还公开了包含所述1-磷酸鞘氨醇S1P2受体2拮抗剂受体的用于治疗肿瘤性眼病、失明、以及纤维化肺、肾脏、肝脏和皮肤疾病的药物组合物。

Description

新型1-磷酸鞘氨醇受体拮抗剂
相关申请的交叉参考
本申请要求2012年3月26日提交的美国临时申请61/615454的优先权。
发明领域
本发明涉及1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体及治疗和预防与此受体相关的状况所用的化合物。更特别地，本发明涉及一种已知的1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)拮抗剂JTE013的衍生物的制备和生物测试。S1P2拮抗剂有潜力用于癌症、动脉粥样硬化、糖尿病性视网膜病变及其他炎性疾病。在这些炎性疾病中可用S1P2拮抗剂治疗的是表征为纤维化的那些，包括慢性肺部疾病、慢性肝肾疾病、慢性心脏病、和皮肤疾病如硬化症/硬皮病。所述S1P2拮抗剂也可用于治疗多形性成胶质细胞瘤(脑癌)、小儿神经母细胞瘤及其他癌症。
发明背景
受体拮抗剂是用作经与受体结合不引发生物应答、但会阻断或抑制激动剂-介导的应答的细胞受体配体的化学化合物。在药理学上，拮抗剂对其同源(cognate)受体有亲和力但无效力，其结合会破坏相互作用并抑制激动剂或逆向(inverse)激动剂在受体位点的功能。拮抗剂通过结合受体上的活性位点或变构位点来介导其作用，或它们可在通常不涉及细胞受体活性生物学调控的独特位点发生相互作用。拮抗剂活性可以可逆或不可逆，这取决于所述拮抗剂-受体复合物的寿命,而这又取决于拮抗剂受体结合性质。药物拮抗剂绝大部分通过在受体上的结构限定的结合位点与内源性配体或底物竞争来实现其效力。血管生成直接与多种病理条件如肿瘤生长、炎症和糖尿病性视网膜病变有关。目前治疗眼中异常血管生成的途径包括激光疗法，该法破坏一些视网膜组织来保护一些视力，以及给药抗-VEGF抗体和/或抗-VEGF RNA适体(aptomer)。仍很需要改进的方法和药剂来预防并治疗与在眼组织中的异常血管生成和有害的病理性血管生成有关的状况。
1-磷酸鞘氨醇(S1P)是脂质调节物，其调控多种生物过程，如细胞增殖、迁移、存活及分化。通过鞘氨醇激酶1(Sphk1)和鞘氨醇激酶2(Sphk2)将鞘氨醇磷酸化而产生的S1P，由S1P-特异性磷酸酶和裂解酶降解。它是对调控独特的细胞内信号通路的五种(5)细胞表面的G-蛋白偶联S1P受体S1P1R、S1P2R、S1P2R、S1P4R和S1P5R有高亲合力的配体。S1P1、S1P2和S1P3受体表达广泛，而S1P4和S1P5的表达在免疫和神经系统的细胞中分别为显性的。S1P1受体与G1信号通路排他性偶联，而S1P2和S1P3受体既与G1偶联也与Gq和G12/13通路偶联。然而，S1P2强力活化G12/13，而S1P3优选活化Gq。
FTY720是强力免疫调控物，其具有包括磷酸化成为FTY720-P的作用机制,FTY720-P是T淋巴细胞中五种S1P受体中的四种的激动剂。之前显示，FTY720是强力的淋巴细胞定向移动的调控物，但FTY720对血管因素的作用之前是未知的。
已证明血管内皮细胞包含"活化"FTY720及其类似物的酶系统。培养的内皮细胞如人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在为研究血管生成的体外模型系统中是可接受的。经与HUVEC条件培养基或细胞提取物温育，FTY720磷酸化并能活化内皮细胞来以百日咳-毒素敏感方式迁移，表明它活化了G1-偶联的S1P受体。本文显示内皮细胞-源的鞘氨醇激酶-2(SK2)参与了FTY720活化成为FTY720-P。
S1P受体也调控重要的血管系统的生理功能，如血管形态发生和成熟，心脏功能，血管渗透和肿瘤血管生成。事实上，无S1P1胚胎由于在妊娠E 12.5-14.5天的大出血而死亡，因为S1P1受体是胚胎血管系统适当稳定化所必需的，通过促进在内皮和血管平滑肌细胞间形成强N-钙粘蛋白-基的连接。然而，缺乏S1P2或S1P3受体的小鼠可存活并且可生育。
有趣的是，S1P1/S1P2双无胚胎比无S1P1胚胎显示出更艰难(severe)的表型，表明S1P2受体在胚胎血管发育中也有显著意义。另外，无S1P2小鼠很聋，因为内耳血管纹内的血管异常和柯蒂氏器官的感觉毛细胞退化。另外，斑马鱼基因里隔(miles-apart)(Mil)中的突变作为S1P2类似物，会由于心肌细胞前体缺陷迁移导致心脏发育缺陷(心脏二分叉)，低估了此受体对鱼心脏发育的意义。然而，S1P2受体在血管发育和病理中的作用是研究的活跃领域。
形成新血管的过程称为血管生成。在血管生成中，血管内皮细胞经历了顺序的增殖、迁移和形态发生来形成新的毛细血管网。在正常或非病理条件，血管生成出现在良好-限定的条件如伤口愈合、组织和细胞的缺血应答，以及在胚胎和胎儿发育中。然而，持续或不受控的血管生成会导致多种疾病状态或状况，并且在实体肿瘤时，可能是维持疾病状态的必要条件。
Hla等的美国专利7,838,562公开并权利要求了血管内皮1-磷酸鞘氨醇受体的数个激动剂化合物，确认其可用于治疗血管渗透性病症，包括给药治疗有效量的化合物，其选自包含2-氨基-2-[2-(4-八苯基)乙基]丙-1,3二醇，或2-氨基-2-甲基-4-[4-庚氧-苯基]丁-1-醇的组。所述血管渗透性病症可以是任何与内皮损伤有关的病症、血小板减少症、缺血性外周血管疾病、多种糖尿病相关性外周血管病症中任一种、出血性登革热、急性呼吸窘迫综合症、血管渗漏综合征、或其组合。上述化合物可以是用鞘氨醇激酶-2磷酸化为用作1-磷酸鞘氨醇受体激动剂的磷酸化形式。
Brinkman等的美国专利7,910,626公开了治疗慢性或充血性心衰的化合物，包括对所述受试者给药治疗有效量的游离形式的2-氨基-2-[2-(4-辛基苯基)乙基]丙-1,3二醇或其药物可接受盐或磷酸盐。
Kiuchi等的美国专利8,114,902公开并权利要求了用于治疗或预防自身免疫病或器官或组织移植所致的急性和慢性抵抗、骨髓移植所致的移植物抗宿主(GvH)病、和治疗或预防变应性疾病的化合物。特别合适的化合物包括2-氨基-2-{2-[2'-氟-4'-(4-甲基苯基硫代)二苯基-4-基]乙基}丙-1,3二醇和2-氨基-4-[2'-氟-4'-(4-甲基苯基硫代)二苯基-4-基]-2-(磷酰氧甲基)丁醇的药物可接受的酸添加盐、水合物或溶剂合物。
Hla等的美国专利申请2011/0015159公开并权利要求了血管内皮1-磷酸鞘氨醇受体的数个新型激动剂。已知化合物激动剂如FTY720可用鞘氨醇激酶-2磷酸化为用作1-磷酸鞘氨醇受体激动剂的磷酸化形式。这些血管内皮受体激动剂可配制成治疗血管渗透性病症和不希望的血管内皮细胞凋亡的药物组合物。
Kawasaki等的美国专利WO01/98301涉及具有1-磷酸鞘氨醇受体拮抗活性的新吡唑吡啶化合物及其在用作纤维化药物(remedies)的药物组合物中的用途，其包含Sph-1-P受体拮抗活性或药物可接受盐作为活性组分。特别地，所述发明涉及下式的新化合物:
通式(1)
其中R1、R2和R3各为C1-8烷基等等；R4是氢等；R5和R6各独立为氢、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤素；X是NH-,-O-,-CH2-,Y是NH-；Z是CO-；W是NH-；并且A是芳基或杂芳基，这些化合物据确认对血管平滑肌增厚所致的肝脏、肾脏、和肺纤维化或动脉粥样硬化有治疗效果。
S.Nakade等的欧洲专利申请EP 1424078A1公开并权利要求了数个S1P拮抗剂作呼吸疾病的药物，其包含1-磷酸鞘氨醇受体控制剂。这些化合物可用于治疗或预防气道狭窄、支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD、肺气肿、气管狭窄、扩散性泛支气管炎(panbronchialitis)、或支气管炎感染、结缔组织疾病或移植、肺淋巴血管平滑肌肉增生症(lymphangioleiomyomatosis)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、间质性肺炎、肺癌、超敏感性肺炎(hypersensitive pneumonitis)或特发性间质性肺炎。
W.K.Fang等的WO2011/048287A1公开并权利要求了密集的环状吡啶化合物作为1-磷酸鞘氨醇-2(S1P2)受体的亚型选择型调控物。这些化合物可用于治疗或预防疾病和状况，由眼部疾病：心脏疾病或状况、纤维化、疼痛和伤口组成。
Hla等的另一个美国专利申请2009/00004207公开并权利要求了血管内皮1-磷酸鞘氨醇受体的数个新激动剂。已知化合物激动剂如FTY720可用鞘氨醇激酶-2磷酸化为用作1-磷酸鞘氨醇受体激动剂的磷酸化形式。这些血管内皮受体激动剂可配制成治疗血管渗透性病症和不希望的血管内皮细胞的药物组合物。已知化合物激动剂如FTY720可用鞘氨醇激酶-2磷酸化为用作1-磷酸鞘氨醇受体激动剂的磷酸化形式。这些血管内皮受体激动剂可配制成治疗血管渗透性病症和不希望的血管内皮细胞肿瘤的药物组合物。
Hla等的另一个美国专利申请2011/041287公开了抑制眼中特别是视网膜中异常血管生成的数个化合物。所述化合物据证明为S1P2受体的受体活性的有效抑制剂。所述组合物包括S1P2受体拮抗剂及眼部可接受赋形剂。
为确定S1P2受体在哺乳动物血管发育中的作用，在生理条件(正常视网膜发育)和病理生理条件(缺血驱动的视网膜病变)，研究缺乏S1P2受体的小鼠的视网膜血管发育。小鼠视网膜的出生后血管发育提供了探索血管生成和血管稳定化机制的有利模型系统。出生后，内皮细胞从视神经盘出现并形成小鼠视网膜的初步脉管系统。以放射方向生长的血管，形成沿视网膜神经和星形细胞脉络丛。另外，病理性视网膜血管生成异常生长并混乱方向的紊乱血管，其生长入玻璃状液形成"血管丛"并最后导致失明。此表型在小儿的早产儿视网膜病变(ROP)和成人的糖尿病性视网膜病变常见。
已显示血管生成过程在S1P-/-2小鼠中在正常的视网膜发育中进行得正常。但当小鼠暴露于缺血压力时，S1P2-/-视网膜显示有"生理性"视网膜内血管生成增加，和"病理性"玻璃体内新血管形成下降。还显示所述S1P2受体是炎性细胞浸润、诱导促炎和促血管生成的酶环氧酶(COX)-2、及抑制产生血管舒张剂一氧化氮(NO)的内皮一氧化氮合酶(eNOS)所需的。此研究通过S1P2受体鉴定S1P信号途径为预防和/或治疗影响视力的视网膜病变的新靶标。
在Schwalm Pfeilschifter和Huwiler所发论文(Biochimica et BiophysicaActa 1831(2013)239-250)中，研究了细胞外和细胞内S1P对病理性纤维发生的多步级联的普遍作用，包括组织损伤、炎症和促进ECM生成及沉积的促纤维化细胞因子的作用，对S1P参与的现有了解提示，其在肺、肾脏、肝脏、心脏和皮肤的器官纤维化发育中参与信号控制。还显示靶向鞘氨醇激酶-1/S1P信号通路提供治疗多种纤维化过程的治疗潜力。
在本发明一个实施方案中，治疗眼中异常血管生成的方法包括给有需要的个体给药有效量的S1P2受体拮抗剂。本文所用术语"治疗"包含给药有眼中异常血管生成的个体，以及预防性或预防性(prophylactically)给药眼中有异常血管生成风险的个体。给眼中有异常血管生成风险的个体给药S1P2受体拮抗剂可预防眼的异常血管生成。一个实施方案中，所述个体有风险或已诊断出眼的异常血管生成。
在本发明另一个实施方案中，所述治疗方法涉及与眼的新血管疾病有关的眼中病理性血管生成。此种疾病表征为新血管侵入眼结构如视网膜或角膜。它是致盲最常见病因，与约二十种(20)眼病有关。在年龄相关性黄斑变性中，随着视网膜色素上皮下的纤维血管组织增殖，相关的视觉问题由脉络膜毛细血管通过布鲁赫膜缺陷内生造成。
血管生成的伤害也与糖尿病性视网膜病变,早产儿视网膜病变、角膜移植排斥、新血管青光眼、和Retro-lental纤维素增生有关。其他角膜新血管形成有关的疾病包括但不限于流行性角结膜炎、维生素A缺乏症、隐形眼镜过度磨损、过敏性角膜炎、上角膜缘角结膜炎(superior limbic keratitis)、翼状胬肉干燥性角膜炎(pterygium keratitis sicca)、干燥综合征(Sjogren's syndrome)、红斑痤疮、红斑痤疮(acne rosacea)、水泡(phylectenulosis)、梅毒、分支杆菌感染、脂质变性、化学烧伤、细菌性溃疡、真菌溃疡、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、原生动物感染、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、蚕食性角膜溃疡(Mooren's ulcer)、特里昂角膜边缘性变性(Terrien's marginaldegeneration)、边缘性角质层分离(marginal keratolysis)、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多动脉炎、创伤、韦格纳结节病(Wegener's sarcoidosis)、巩膜炎、史蒂文斯-约翰逊病(Stevens-Johnson's disease)、类天疱疮(pemphigoid)和放射状角膜切开术(Radial keratotomy)。
其他与视网膜/脉络膜新血管形成有关的疾病包括但不限于糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、镰状细胞性贫血、结节病、梅毒、弹性纤维性假黄瘤(pseudoxanthoma elasticum)、佩吉特氏病(Paget's disease)、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞性疾病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎(vitritis)、分支杆菌感染、莱姆病、系统性红斑狼疮、婴儿视网膜病变(infant retinopathy)、伊尔斯氏病(Eales'disease)、贝西氏病(Behcet's disease)、细菌或病毒感染所致的视网膜炎或脉络膜炎、假定眼部组织胞浆菌病(presumed ocular histoplasmosis)、贝斯特氏病(Best's disease)、近视、视窝(optic pits)、斯塔加特病(Stargardt's disease),睫状体平坦部炎(pars planatitis)、慢性视网膜剥脱、高粘滞综合征、弓形体病(toxoplasmosis)、创伤及激光后并发症(traumaand post-laser complications)。其它眼相关的疾病包括但不限于虹膜红变(rubeosis)(眼的新血管形成)有关的疾病和异常纤维血管或纤维组织增殖所致疾病，包括所有形式的增殖性玻璃体视网膜病变。
另一个实施方案中，眼的病理性血管生成与肿瘤性眼病有关。肿瘤性眼病包括原发性眼肿瘤，如葡萄膜黑色素瘤、黑素细胞瘤、视网膜细胞瘤、视网膜血肿和迷芽瘤(choristomas)、视网膜血管瘤、视网膜神经胶质瘤和星形细胞瘤(astocytomas)、脉络膜血管瘤、脉络膜神经纤维瘤、脉络膜血肿和迷芽瘤、眼淋巴瘤和眼母斑细胞病(phakomatoses)；和与脉络膜和视网膜新血管形成有关的转移性眼肿瘤。与非肿瘤性疾病类似，上述肿瘤也具有视网膜新血管形成作为关键成分。
病理性血管生成及几类炎性疾病已与S1P2受体水平上升相关。JTE013是唯一现存的S1P2受体选择性拮抗剂化合物。但坊间有报道确认JTE013体内特性极差，这至少部分由于其代谢清除迅速造成。这些特性限制了JTE013在治疗和预防1-磷酸鞘氨醇-介导的疾病和病症中的效力和有用性。
Ferrer和Hla报告神经母细胞瘤细胞系过表达S1P2受体，并提示S1P2拮抗剂可用于治疗此小儿癌症.Van Brooklyn和Young及他人已经证实，S1P2受体对细胞侵袭的形态学及其在胶质细胞的增殖(导致多形性成胶质细胞瘤)中有重要意义。
JTE013是公知的1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)型拮抗剂，其有潜力用作癌症、糖尿病性视网膜病变及其他炎性疾病的抗血管生成剂。本发明包括开发一类1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)受体衍生物，其作为S1P2拮抗剂，通过阻断或抑制1-磷酸鞘氨醇2受体(S1P2)的信号传导，用作癌症、糖尿病性视网膜病变及其他炎性疾病的抗血管生成剂。
发明概述
本发明包括开发特定类的化合物，其作为S1P2拮抗剂，通过阻断或抑制1-磷酸鞘氨醇2受体(S1P2)，用作用于治疗癌症、糖尿病性视网膜病变及其他炎性疾病的抗血管生成剂。所述S1P2拮抗剂可用于治疗多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤及其他癌症。这些组合物可基于提高的体内特性如提高的药物动力学参数、随时间的血液浓度升高和较高的受体亲和力，至少部分基于其较低的清除，有效抑制眼中、特别是视网膜中的异常血管生成。本文也通过给药包含S1P2受体拮抗剂和眼部可接受的赋形剂的组合物，提供了治疗或预防某些类型盲症的方法。
发明内容
病理性血管生成及几类炎性疾病已与S1P2受体水平上升相关。现有技术中，JTE013是已知的选择性S1P2受体拮抗剂化合物。此化合物体内特性极差，这至少部分由于其清除迅速造成。这些特性可限制此化合物在治疗和预防1-磷酸鞘氨醇-介导的疾病中的效力和有用性。
然后，本发明包含抑制眼中特别是视网膜中异常血管生成的组合物和方法。本文也提供了治疗或预防某些类型盲症的方法。还提供了体内特性提高的包含S1P2受体拮抗剂和眼部可接受的赋形剂的组合物。本发明包含抑制眼中特别是视网膜中异常血管生成的组合物和方法。本文也提供了治疗或预防某些类型盲症的方法。基于代谢稳定性和/或作用持续时间延长，还提供了体内特性提高的包含S1P2受体拮抗剂和眼部可接受的赋形剂的组合物。
1-磷酸鞘氨醇(S1P)是经S1P家族的G蛋白偶联受体(S1PR)传递信号的多能脂质介导物。已知S1P调控血管成熟、渗透性和血管生成。例如，已知S1P是血管生成刺激物，即新血管生长。本文所用的术语S1P2R、S1P2R、S1P2受体和S1P2受体交叉使用来指代1-磷酸鞘氨醇受体2。
制备数个新的1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)拮抗剂。实施例提供了制备拮抗剂化合物的细节。这些化合物，在用来评价体内代谢和代谢稳定性的建立完善的体外模型中，意外显示出对肝微粒体增强的。另外，这些化合物大多不意外地结合S1P2和S1P5受体。所述化合物用作治疗药物来治疗和预防S1P受体介导的状况或疾病。所述状况和疾病包括但不限于多种的炎性疾病和状况以及血管生成过程介导的疾病和状况。
在本发明的一个实施方案中，新的1-磷酸鞘氨醇拮抗剂化合物可用于治疗或预防动脉粥样硬化及相关状况，包括心血管和脑血管疾病，如，例如心肌梗塞、中风、心绞痛和外周血管病。这些化合物也可用于治疗或预防败血症和败血症休克、以及多种其他疾病包括糖尿病、肝硬化、渗透性增加的血管疾病、和过敏反应。合成这些化合物的通用步骤如下：
式1
本发明的优选化合物包含有如下通用结构的那些
其中每个包含如下：
化合物编号
6
其中烯丙基是-CH2CH＝CH2
提供下述实施例来更具说明并限定本发明方法。应理解可对本文公开的具体参数和范围作改变，并且本领域已知多种不同方法来改变公开的变量。同时应理解本文说明书和附图公开的仅仅是这些元素的优选实施方案，本发明并不受其所限，本发明应从本文所附权利要求的精神和范围出发来解释。
实施例1
a.合成5-氨基-1-烯丙基-3-甲基吡唑
将β-氨基-丁烯腈(4.2g,50mmol)和烯丙基肼(3.6g,50mmol)溶于异丙醇(20ml)，并在氮气保护氛围逐渐加热所述溶液回流5h。浓缩反应混合物并用2.5％甲醇溶于DCM的柱层析法纯化，来得到浆状(syrup)5-氨基-1-烯丙基-3-甲基吡唑(4.2g)。1H 300MHz NMR(CDCl3):δ6.00-5.88(1H,m),5.35(1H,s),5.23-5.04(2H,m),4.56(2H,dd,J＝3.6Hz,1.5Hz),3.47(2H,bs)2.15(3H,s)。
b.合成1H-6-羟基-4-异丙基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶
将异丁酰乙酸乙酯(10.5g,66.5mmol)加入5-氨基-1-烯丙基-3-甲基吡唑(9.00g,65.7mmol)的丙酸溶液中，并加热回流20h。冷却后，加入乙酸乙酯(80mL)并加热回流1h。蒸发溶剂并用5％甲醇溶于DCM的柱层析法纯化残留物，得到无色晶体1H-6-羟基-4-异丙基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶(1.1g,7％)。1H 300MHz NMR(CDCl3)δ6.16(1H,s),6.06-5.97(1H,m),5.30-5.22(2H,m),4.95(2H,dd,J＝3.6Hz,1.5Hz),3.31-3.27(1H,m),2.52(3H,s),1.31(6H,d,J＝7Hz)。
实施例2
合成2,6-二氯吡啶基-4-异氰酸酯
a)合成2,6-二氯吡啶-4-羰基叠氮化物(羰基叠氮化物)
在0-5℃将二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA)(5mL,23.2mmol)加入2,6-二氯异烟酸(4.05g,21mmol)和三乙基胺(3.8mL,27.5mmol)溶于乙酸乙酯(40mL)的溶液，室温搅拌20h。加入乙酸乙酯来稀释，用水洗有机层。用Na2S04干燥所述有机层、过滤并真空浓缩得到粗制产品2,6-二氯吡啶-4-羰基叠氮化物(7.08g)。将其溶于乙酸乙酯并用活性炭处理。过滤蒸发后，获得无色晶体2,6-二氯吡啶-4-羰基叠氮化物(4.57g)。将上述方法获得的2,6-二氯吡啶-4-羰基叠氮化物(4.21g)溶于无水(dry)甲苯(40mL)，在100℃加热溶液4h，得到2,6-二氯吡啶基-4-异氰酸酯。在0℃以溶液存储。
合成化合物1
将三乙基胺(2.17mL,3.0eq,15.57mmol)加入1H-6-羟基-4-异丙基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶(1.20g,5.19mmol)溶于二氯甲烷(30mL)的溶液，冷却至-10℃。将三氟甲磺酸酐(1.30mL,7.78mmol,1.5eq)逐滴加入此冷溶液。搅拌此溶液45分钟直至通过TLC监测反应完全。用水猝灭反应，并用二氯甲烷(3x 10mL)提取。将混合物浓缩、干燥并用柱层析法纯化(10:1己烷/乙酸乙酯)，得到1.32g的70％收率的黄色油状所需产物。1H 300MHz NMR(CDCl3):δ6.75(1H,s),6.06-5.95(1H,m),5.29-5.22(2H,m),4.95(2H,dd,J＝3.0Hz,1.5Hz),3.65-3.60(1H,m)，2.69(3H,s)和1.38(6H,d,J＝6.6Hz)。
上述化合物(200mg,0.551mmol),叔丁基咔唑盐(t-butyl carbazate)(87mg,0.661mmol,1.2eq),烤箱干燥的碳酸铯(431mg,1.322mmol,2.4eq),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(15％mol,48mg,0.082mmol)和Pd2(dba)3(5％mol,26mg,0.0276mmol)在氮保护中都置于烤箱干燥的烧瓶。将此反应混合物溶于无水脱气的二氧六环并在65℃加热12h直至通过TLC监测反应完全。将材料浓缩并进行柱层析(3:1己烷/乙酸乙酯)，得到133mg 70％收率的所需肼衍生物。1H 300MHz NMR(CDCl3)δ7.34(1H,s),6.01(1H,m),5.22(1H,m),5.16(1H,m),4.97(2H,d,J＝6Hz),4.34(2H,bs),3.59(1H,m)2.65(3H,s),1.55(9H,s),1.34(3H,s)1.36(3H,s)。
将2,6-二氯-吡啶基-4-异氰酸酯(2.0eq,1.3mL,0.771mmol)溶于甲苯的溶液加入上述肼衍生物(133mg,0.385mmol)溶于THF(5mL)溶液中，并搅拌12h直至通过TLC监测反应完全。将粗制反应物浓缩、用柱层析法(2:1到1:1己烷/乙酸乙酯)纯化，以得到黄色固体的所需产物。(193mg,94％收率).1H 300MHz NMR(CDCl3)δ9.56(1H,bs),7.44(2H,s),7.25(1H,s),7.10(1H,bs)6.10-5.97(1H,m),5.24(1H,dd,J＝7.5Hz,1.5Hz),5.01(1H,dd,J＝7.5Hz,1.5Hz),4.98-4.95(2H,m),3.69-3.60(1H,m),2.70(3H,s),1.55(9H,s),1.40(6H,d,J＝7Hz)。
合成化合物1
将氢氯酸(2M溶于醚,5mL,10mmol)加入在0℃的上述Boc-化合物(500mg,0.94mmol)溶于二乙基醚(10mL)的溶液，室温搅拌所述反应物12h。将所述反应混合物浓缩,用DCM(20mL)稀释，用饱和(sat)NaHCO3溶液(15mL)洗涤，干燥并浓缩得到粗制产品(424mg)。用制备级TLC(30％EtOAc溶于己烷)纯化后分离纯产品(化合物-1)白色固体(140mg,收率34％)。1H 300MHz NMR(CDCl3+CD3OD)δ7.41(2H,s),6.38(1H,s(1H,m),5.07-4.97(2H,m),4.77(2H,d,J＝6Hz),3.41-3.29(1H,m),2.51(3H,s),1.24(6H,d,J＝7Hz),MS(m/z MH+)434.2。
N-(1H-4-异丙基-1,3-二甲基吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)氨基-N'-(2,6-二氯吡啶-4-基)尿素(JTE013)
如文献(WO01/98301)所述制备上述标题化合物
合成化合物-2
将溴乙酸叔丁酯(500mg,2.60mmol)加入N-(1H-4-异丙基-1,3-二甲基吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)氨基-N'-(2,6-二氯吡啶-4-基)尿素(125mg,0.306mmol)溶于无水DME(1mL)的溶液，并在100℃过夜加热反应混合物。然后用DCM(20mL)稀释并用NaHCO3水溶液(1x 10mL)洗涤，随后用水(2x 10mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机层，并减压浓缩。柱层析法(5％MeOH/CH2CI2)纯化残留物得到所需纯产物白色固体(25mg)。1H 300MHz NMR(CD3OD)δ7.58(2H,s),6.78(1H,s),4.87(2H,bs),3.99(3H,s),3.65(1H,m),2.81(3H,s),1.50(9H,s),1.37(6H,d,J＝6.6Hz),MS(m/e)523(MH+)。
将溶于DCM(1ml)的上述叔丁基酯(15mg,0.028mmol)加入在0℃的三氟甲烷磺酸(15mg,0.10mmol)溶于无水DCM(3ml)的溶液。室温搅拌反应混合物1h。反应完成后，如TLC所示，将NaHC03(9mg)和MeOH(0.5ml)加入该反应混合物，搅拌15min。真空浓缩所述反应混合物、与DCM共蒸发并用己烷打浆(triturated)得到所需产物(化合物-2)棕色固体(25mg,含34％化合物和66％三氟甲磺酸钠(sodium triflate))。1H 300MHz NMR(CD3OD)δ7.58(2H,s),6.78(1H,s),5.49(2H,d,J＝7.5Hz),4.00(3H,s),3.44-3.57(1H,m),2.82(3H,s),1.37(6H,d,J＝6.6Hz),MS(m/z MH+)466.2。
合成化合物-3
将碳酸铯(140mg,0.4mmol)加入化合物1(180mg,0.328mmol)和溴乙酸叔丁酯(80mg,0.41mmol)溶于无水DMF(1ml)的溶液。室温搅拌反应混合物3h。然后用DCM(20mL)稀释，用水(3x 10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，并减压浓缩。用制备级(prep)TLC(25％EtOAc/己烷)纯化后用异丙基醚打浆，随后分离所需产物无色晶体(45mg)。1H 300MHz NMR(CDCl3):δ8.49(1H,bs),7.49(2H,s),7.01(1H,bs),6.40(1H,s),6.02-5.96(1H,m),5.21-5.15(2H,m),4.97(1H,d,J＝18Hz),4.96-4.88(2H,m),3.67(1H,d,J＝18Hz),3.55-3.42(1H,m),2.62(3H,s),1.47(9H,s),1.32(6H,d,J＝7Hz),MS(m/z MH+)447。
将上述溶于DCM(1mL)的Boc-保护的化合物(22mg,0.04mmol)加入在0℃的三氟甲烷磺酸(22mg,0.14mmol)溶于无水DCM(4mL)的溶液。室温搅拌反应混合物1h。反应完成后，如TLC所示，将NaHC03(11mg)和MeOH(0.5mL)加入该反应混合物，搅拌15min。真空浓缩所述反应混合物、与DCM共蒸发并用己烷打浆得到所需产物(化合物-3)浅棕色固体(25mg,含34％化合物和66％三氟甲磺酸钠。1H 300MHz NMR(CD3OD)δ9.69(1H,bs),7.67(2H,s),6.64(1H,s),5.97-5.91(1H,m),5.09-4.85(6H,m),3.57-3.34(1H,m),2.60(3H,s),1.36(6H,d,J＝7Hz),MS(m/e MH+)490。
合成化合物-4
如上式制备化合物4。MS(m/e MH+)447。
合成化合物-5
合成1H-6-羟基-4-三氟甲基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶
将乙基-4,4,4-三氟乙酰乙酸(5.6g,30mmol)溶于丙酸(10mL)的溶液加入5-氨基-1-烯丙基-3-甲基吡唑(4.2g,30mmol)溶于丙酸的溶液，并加热(150℃)回流23h。冷却后，加入乙酸乙酯(40mL)并加热回流1h。经过滤、乙酸乙酯洗涤并减压干燥，经慢慢冷却，沉积所需化合物的晶体。由此获得1H-6-羟基-4-三氟甲基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶(5.1gm,66％)白色晶体,1H 300MHz NMR(CDCl3)δ6.63(1H,s),6.07-5.94(1H,m),5.29-5.23(2H,m),4.962H,dd,J＝3.0Hz,1.5Hz),2.51(3H,s)和1.85(1H,bs)。
将三乙基胺(1.77g,2.42mL,3.0eq,17.52mmol)加入1H-6-羟基-4-三氟甲基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶(1.50g,5.84mmol)溶于二氯甲烷(30mL)的溶液，并冷却至-10℃。
将三氟甲烷磺酸酐(1.48mL,2.47g,8.75mmol,3.0eq)加入此冷溶液。在此温度搅拌该溶液45分钟，直至通过TLC监测反应完全。用水猝灭反应，并用二氯甲烷(3x 10mL)提取。将有机层浓缩、干燥并用柱层析法纯化(10:1己烷/乙酸乙酯)，得到2.15g的96％收率的黄色油状所需产物。1H 600MHz NMR(CDCl3)δ6.60(1H,s),6.03(1H,m),5.30(2H,m),4.98(2H,dd,J＝6.0Hz,1.5Hz),2.49(3H,s)。
将上述化合物(215mg,.553mmol),叔丁基咔唑盐(88mg,0.664mmol,1.2eq),烤箱干燥的碳酸铯(432mg,1.327mmol,2.4eq),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(15％mol,48mg,.083mmol)和Pd2(dba)3(5％mol,25mg,0.0276mmol)在氮保护氛围都干燥置于烧瓶。将此反应混合物溶于无水脱气的二氧六环并在65℃加热12h直至通过TLC监测反应完全。将反应混合物浓缩并对该材料直接进行柱层析法(3:1己烷/乙酸乙酯)得到85mg的42％收率的所需产物。1H300MHz NMR(CDCl3)δ7.93(1H,s),6.04(1H,m),5.24(2H,m),5.02(2H,dd,J＝6.0Hz，1.5Hz)，4.91(2H,bs)2.59(3H,s),1.58(9H,s)。
将2,6-二氯-吡啶基-4-异氰酸酯(～2.0eq,1.0ml,0.458mmol)溶于甲苯的溶液加入在0-5℃的上述肼衍生物(85mg,0.229mmol)溶于THF(5ml)的溶液。搅拌该溶液12h直至通过TLC监测反应完全。将反应物浓缩并通过柱层析法(2:1到1:1己烷/乙酸乙酯)直接纯化，得到122mg的95％收率的所需Boc产物。1H 600MHz NMR(CDCl3)δ8.75(1H,bs),8.06(1H,bs),7.72(1H,s),7.32(2H,s),6.01(1H,m),5.24(2H,d J＝5.6Hz,2.5Hz),5.00(2H,d,J＝5.4Hz),2.64(3H,s),1.57(9H,s)。
5.
将氢氯酸(2M溶于醚,1.0mL,2mmol)加入在0℃的上述Boc衍生物(44mg,0.095mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)的溶液。室温搅拌反应混合物12h。过滤反应混合物，然后用异丙基醚洗涤如此获得的结晶化合物，并在真空烤箱中干燥。分离化合物-5为无色固体(26mg,收率72％)。1H 300MHz NMR(CD3OD)δ7.60(2H,s),6.93(1H,s),5.97-5.88(1H,m),5.08-4.92(2H,m),4.91-4.88(2H,m),2.49(3H,s),MS(m/e MH+)460。
合成化合物-6
将POBr3(365mg,1.29mmol)加入1H-6-羟基-4-异丙基-1-烯丙基-3-甲基吡唑[3,4-b]吡啶(200mg,0.86mmol)溶于苯甲醚(anisole)(1mL)的溶液。在130℃加热该反应混合物3h。在TLC所示的反应完全后，用甲苯(10mL)稀释反应混合物。用饱和NaHC03(10mL)之后用饱和NaCl水溶液(10mL)洗涤，经Na2S04干燥并过滤。减压蒸发过滤物，用10％乙酸乙酯/已烷为洗脱剂的柱层析法纯化所得残留物。获得黄色油状的所需产物(化合物-6)(108mg,收率:42％)。1H300MHz NMR(CDCl3)δ7.03(1H,s),6.15(1H,m),5.22-5.16(2H,m),5.02(2H,dd,J＝6.0Hz，1.5Hz)，3.62-3.45(1H,m),2.62(3H,s),1.38(6H,d,J＝6.0Hz)。
叔丁醇钾(Potassium-tert-butoxide)(1M溶液,1mL)加入在0℃的乙基-N-羟基亚氨逐乙酸酯(105mg,102mmol)溶于无水DMF(1mL)的溶液，并搅拌2.5h。小心加入上述在0℃溶于DMF(1mL)的溴化合物(100mg,0.34mmol)，在室温持续搅拌12h。用水(5mL)猝灭反应混合物，并用乙酸乙酯提取。经Na2S04干燥有机层，减压去除溶剂。通过柱层析法(20％EtOAc/已烷)纯化残留物得到无色油状的(80mg,收率:74％)N-羟基乙酰亚胺酸(acetohydroxamate)衍生物。1H300MHz NMR(CDCl3)δ6.91(1H,s),5.99(1H,m),5.23-5.17(2H,m),4.97(2H,dd,J＝6.0Hz,1.5Hz),4.28(2H,q),3.56(1H,m),2.63(3H,s),2.19(3H,s),1.39-1.33(9H,m)。
将硫酸(0.01mL)加入上述N-羟基乙酰亚胺酸化合物(80mg,0.25mmol)溶于甲醇(4mL)的溶液。室温搅拌该反应混合物2.5h。如TLC所示反应完成后，用Na2C03(108mg)中和，加水(10mL)并用EtOAc(3x 10mL)提取。合并有机层，经Na2S04干燥并减压蒸发。用于之后反应的粗制胺(60mg,收率:96％)无需进一步纯化。1H 300MHz NMR(CDCl3)δ6.55(2H,bs),6.49(1H,s),6.08-5.97(1H,m),5.23-5.16(2H,m),4.96(2H,dd,J＝6.0Hz,1.5Hz),3.52-3.47(1H,m),2.62(3H,s),1.33(6H,d,J＝7.0Hz)。
合成化合物6.
将2,6-二氯-吡啶基-4-异氰酸酯(～2.0eq,1.1mL,0.48mmol)溶于甲苯的溶液加入在0℃的上述粗制胺(60mg,0.24mmol)溶于无水THF(4mL)的溶液。搅拌该溶液12h直至通过TLC监测反应完全。减压去除溶剂并获得所需化合物。柱层析法(EtOAc/己烷)分离6的白色固体(70mg,收率:66％)。1H 300MHzNMR(CDCl3)δ8.67(1H,s),7.72(1H,s),7.48(2H,s),6.63(1H,s),5.99-5.94(1H,m),5.21-5.13(2H,m),4.94(2H,dd,J＝5.0Hz,1.5Hz),3.60-3.56(1H,m),2.65(3H,s),1.38(6H,d,J＝7Hz),MS(m/e MH+)435。
用上述方法也可制备下述化合物。合成方法显示如下。
N-(2,6-二氯吡啶-4-基)-2-(2-羟乙基)-2-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼-1-甲酰胺(化合物9):
2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)乙-1-醇:
将2-肼基乙醇(5.1ml,149.25mmol)加入1H-6-溴-4-异丙基-1,3-二甲基吡唑[3,4-b]吡啶(2.0g,7.46mmol)溶于乙醇(10ml)的溶液，并过夜加热回流。冷却后在冰水浴中搅拌4小时。过滤粗制材料并用50％乙醇水溶液(5ml)打浆获得固体，过滤并在60℃减压干燥，得到2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)乙-1-醇的白色固体,1.3g(4.94mmol,66％收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.76(s,1H),4.92(brs,2H),4.20-3.96(m,2H),3.94-3.86(m,2H),3.84(s,3H),3.52-3.45(m,2H),2.58(s,3H),1.25(d,6H,J＝6.6Hz)。
将2,6-二氯吡啶-4-羰基叠氮化物(1.0g,4.61mmol)溶于甲苯(10ml)并在100℃搅拌溶液4h。冷却至0-5℃后，加入2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)乙-1-醇(750mg,2.85mmol)溶于THF(10ml)的溶液并室温(rt.)搅拌18小时。浓缩后，用梯度洗脱(0-20％甲醇/DCM)通过柱层析法纯化粗制材料得到N-(2,6-二氯吡啶-4-基)-2-(2-羟乙基)-2-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼-1-甲酰胺的白色固体,624mg(1.38mmol,30％收率)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.28(brs,1H),7.47(s,2H),6.70(brs,1H),6.58(s,1H),4.70-4.50(m,1H),4.30-4.20(m,1H),4.08-3.98(m,1H),3.91(s,3H),3.53-3.46(m,2H),2.92-2.70(m,1H),2.60(s,3H),1.32(d,6H,J＝6.6Hz)。HRMS(ESI):发现对于CigHssClsNyOs[M+H]+,质量为452.1290,452.1480。
如公布的专利申请WO2011041287A1所述及公开制备化合物27-33，其在此引入作为参考。下文描述合成化合物27和33。这些包含结构
组成有:
合成化合物27和33
制备化合物A-2
将LDA(247mL,1M)慢慢加入-78℃的化合物A-1(20g,206mmol)溶于THF(300mL)的溶液。在-78℃搅拌该溶液1h，然后加入丙酮(100mL)。搅拌反应物1h，然后用NH4Cl水溶液(aq.)猝灭，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥并浓缩得到粗制化合物A-2。
制备化合物A-3
将Red-P(20g)加入化合物A-2(20g,129mmol)溶于40％HI(水溶液250mL)的溶液。在140℃加热回流该溶液2天，用5N NaOH(水溶液)猝灭溶液，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，浓缩并纯化通过急骤层析(flash chromatography)(石油醚:乙酸乙酯20:1)得到化合物A-3(5g,收率＝27％)。
制备化合物A-4
将正丁锂(17mL,2.5M)慢慢加入在-78℃的化合物A-3(5g,36mmol)溶于THF(150mL)的溶液。在-78℃搅拌反应物1h，然后慢慢加入comp B(7.5g,43.2mmol)，在-78℃搅拌反应物2h，然后用NH4Cl(水溶液)猝灭，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到粗制化合物A-4(10g)。
制备化合物A-5
将碘酰基苯甲酸(IBX,18g,63mmol)加入化合物A-4(10g,31.5mmol)溶于40ml DMSO的溶液。在60℃搅拌该溶液3h，然后冷却至0℃，用NaHC03(水溶液)猝灭，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩。通过急骤层析(石油醚:乙酸乙酯＝20:1-10:1)纯化化合物并得到化合物A-5(6g,收率60％)。
制备化合物A-6
将MeNHNH2(10mL)加入化合物A-5(6g,19.4mmol)溶于乙二醇(3mL)的溶液。在140℃过夜加热回流该溶液。加水(50ml)并用二氯甲烷提取溶液。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，浓缩，并通过急骤层析纯化得到化合物A-6(3g,收率50％)。
制备化合物Bn-A-6
将6M HCl(10mL)加入化合物A-6(3g,9.5mmol)溶于THF(50mL)的溶液。室温(RT)搅拌反应物1h，用NaHC03(水溶液)猝灭，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到comp A-6-1。将NaH(760mg,19mmol)加入化合物A-6-1溶于THF(50mL)的溶液，在60℃搅拌溶液2h。将溶液和溴化苄(BnBr)(3.23g,19mmol)冷却至0℃。将溶液加温到RT，搅拌过夜。加水(20mL)，并用乙酸乙酯提取该溶液。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到化合物Bn-A-6(2.7g,收率90％)。
制备化合物A-7
将m-氯过氧苯甲酸(MCPBA,3.7g,16.7mmol)加入在0℃的化合物Bn-A-6(2.7g,8.4mmol)溶于CHCl3(30mL)的溶液。在90℃加热回流该溶液3h。用NaHC03(水溶液)猝灭该溶液，并用DCM提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到粗制化合物A-7(3g)。
制备化合物A-8
将POCl3(5mL)加入化合物A-7(3g,8.8mmol)溶于甲苯(30mL)的溶液。在90℃搅拌该溶液3h，然后浓缩并用NaHC03(水溶液)猝灭，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到化合物A-8(800mg,收率25％)。
制备化合物A-9
将化合物A-8(250mg,0.7mmol),和NH2NH2(水溶液)溶于EtOH(1ml)的溶液在CEM微波炉(Microwave)中在120℃搅拌12h。冷却溶液，并用乙酸乙酯提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到粗制化合物A-9(200mg)。
制备化合物A-10
将2,6-二氯-4-异氰酸酯吡啶(化合物C,160mg,0.85mmol)加入化合物A-9(200mg,0.56mmol)溶于THF(5ml)的溶液。在室温搅拌该溶液30min，加甲醇并过滤所得固体。浓缩滤出物用制备级TLC(100mg,收率33％)纯化化合物A-10。
制备化合物33
将三甲基碘硅烷(0.5ml)慢慢加入A-10(100mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷的溶液。在室温搅拌该溶液30min，用NaHC03(水溶液)猝灭，并用DCM提取。卤水洗涤有机层，用Na2S04酸酐干燥，并浓缩得到化合物33(40mg,收率48％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:8.68(1H,br),7.55(1H,br),7.40(2H,s),7.00(1H,s),6.71(1H,s),4.18(3H,s),3.62-3.55(1H,m),3.56(2H,J＝5.6Hz,t),3.04(2H,J＝6.4Hz,t),2.00-1.98(2H,m),1.36(6H,J＝6.4Hz,d)；MS(ESI):452[M+H]+。
制备化合物27
将伯吉斯试剂(Burgess Reagent)(80mg,0.33mmol)加入33(50mg,0.11mmol)溶于THF(4ml)的溶液。在室温搅拌该溶液过夜。将该溶液加温至60℃1h，然后用制备级-HPLC浓缩并纯化该溶液得到化合物27(2mg)。
用上述方法也可制备如下化合物(方法见下表)。
合成化合物34-45的通用方法
酸形成异氰酸酯的通用过程
方法A.
将合适的酸(1.0eq,0.5mmol)溶于新蒸馏的乙酸乙酯(5mL)，并将该溶液冷却至0℃。向此溶液加入三乙基胺(1.3eq,0.65mmol,0.09mL)之后加入二苯基磷酰基叠氮化物(1.1eq,0.55mmol,0.12mL)。将反应物加温至室温，并搅拌过夜。然后用水猝灭，并用乙酸乙酯(2x 25mL)提取。用水(20mL)然后卤水(20mL)洗涤有机层，用硫酸钠干燥，并浓缩至一半体积。加甲苯(10mL)并用不超过35℃的旋蒸(rotovapor)水浴的内部温度去除剩余乙酸乙酯。然后加热回流甲苯溶液(10mL,0.5mmol)3-4h，用TLC监控反应完成。使溶液冷却至室温，直接用于下面的反应。
方法B.
将合适的酸(1.0eq,0.5mmol)溶于含2滴无水DMF的无水THF(5mL)。向此溶液逐滴加入草酰氯(1.3eq,0.65mmol,0.06mL)。室温搅拌该溶液1h，并用TLC监控反应完成。加三甲基硅叠氮(Azidotrimethylsilane)(2.0eq,1.0mmol,0.13mL)，搅拌2h，并用TLC监控反应完成。用水猝灭反应，浓缩并用乙酸乙酯(20mL)稀释。用水(20mL)和卤水(20mL)洗涤有机层,干燥并浓缩至一半体积。加甲苯(10mL)并用不超过35℃的旋蒸水浴的内部温度去除剩余乙酸乙酯。然后回流甲苯溶液(10mL,0.5mmol)3-4h，用TLC监控反应完成。使溶液冷却至室温，直接用于下面的反应。
合成制备酸1至5
合成酸1
文献(PCT国际申请2012042433,2012年4月5日,Didiuk,Mary Theresa等Preparation of pyrazolospiroketone acetyl-CoA carboxylase)报告了合成酸1。
合成酸2
制备中间产物2b:
向化合物2a(1.5g,6.84mmol)溶于正丙醇(10mL)的溶液加入nPrONa钠盐(sodium)(3.4mL,2M)，并在50℃搅拌48h。减压去除溶剂，用冰(10g)稀释，并用乙酸乙酯(3x 10mL)提取。经MgS04干燥合并的提取物,过滤、并减压浓缩提供(1.4g,79％)化合物2b。1H NMR(300Hz,CDCl3)δ7.41(s,1H),7.20(s,1H),4.22-4.35(m,4H),1.75-1.82(m,4H),0.99-1.15(m,6H)。
制备酸2:
向化合物2b(1.48g,5.75mmol)溶于甲醇(15mL)的溶液加水(7mL)和碳酸钾(1.6g,11.59mmol)，室温搅拌16h。减压去除溶剂，用水(15mL)稀释，用KHS04酸化，过滤固体，并干燥(2,910mg,74％).1H NMR(300Hz,CDCl3)δ8.21(br s,1H),7.44(s,1H),7.24(s,1H),4.28(t,J＝6.6Hz,2H),1.76-1.83(m,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。
合成酸3
制备中间产物3a:
向氢化钠(115mg,4.79mmol,1.05eq)溶于无水THF(10mL)的溶液逐滴加入在0℃的2-甲氧基乙醇，搅拌30分钟。在室温将此溶液加入2,6-二氯异烟酸乙酯(1.0g,4.57mmol,1.Oeq)溶于无水THF(5mL)的溶液，然后在50℃加热过夜。通过加入2N HCl(2.5mL,5mmol)中和反应物。去除溶剂，加水(10mL)，并用乙酸乙酯(3x 10mL)提取。经MgS04干燥合并的提取物,过滤、并减压浓缩提供3a.(600mg.51％)1H NMR(MeOD):δ7.42(s,1H),7.22(s,1H),4.46-4.35(m,4H),3.75(m,2H),3.40(s,3H),1.40(t,3H)。
制备酸3:
向化合物3a(600mg,2.31mmol)溶于甲醇(10mL)的溶液加水(4mL)和碳酸钾(635mg,4.6mmol)，室温搅拌16h。减压去除溶剂，用水(10mL),稀释，用KHS04酸化，并用乙酸乙酯(3x 10mL)提取。经MgS04干燥合并的提取物，过滤并浓缩减压提供3(320mg,59％)。1H NMR(MeOD):δ7.41(s,1H),7.22(s,1H),4.45(t,2H),3.74(t,2H),3.40(s,3H)。
合成酸4
制备中间产物4a:
将化合物2a(2.5g,10.9mmol),乙基胺(5.45mL,2M),DIPEA(2mL)溶于THF(20mL)的溶液，在75℃于密封管中加热16h。减压去除溶剂，用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x 15mL)提取。经MgS04干燥合并的提取物,过滤、并减压浓缩提供粗制化合物。然后用硅胶柱通过柱层析法进一步纯化提供所需化合物4a(450mg,17％)1H NMR(300Hz,CDCl3)δ7.08(s,1H),6.80(s,1H),4.40(q,J＝7.2,14.3Hz,2H),3.31(q,J＝7.2,14.1Hz,2H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H),1.24(t,J＝6.9Hz,3H)。
制备中间产物4b:
向在-10℃的化合物4a(400mg,1.68mmol)溶于THF(5mL)的溶液逐滴慢慢加入LHMDS(2mL,1M)。30min后加入(Boc)2O(440mg,2.01mmol)溶于THF的溶液，慢慢升至室温并搅拌30min。减压去除溶剂，用饱和NH4Cl(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x 10mL)提取。经MgS04干燥合并的提取物,过滤、并减压浓缩提供(1.4g,79％)化合物4b.1H NMR(300Hz,CDCl3)δ8.19(s,1H),7.52(s,1H),4.40(q,J＝7.2,14.4Hz,2H),4.00(q,J＝7.2,14.1Hz,2H),1.54(s,9H),1.37(t,J＝6.9Hz,3H),1.23(t,J＝6.9Hz,3H)。
制备酸4:
向化合物4b(1.00g,2.95mmol)溶于甲醇(12mL)的溶液，加水(3mL)和碳酸钾(800mg,5.79mmol)，室温搅拌16h。减压去除溶剂，用水(15mL)稀释，用KHS04酸化，过滤固体，并干燥获得所需化合物4(910mg,74％).1H NMR(300Hz,CDCl3)δ8.31(s,1H),7.57(s,1H),4.02(q,J＝7.2,14.2Hz,2H),1.55(s,9H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H)。
合成酸5
制备酸5：
向化合物2a(1.0g,5.20mmol)溶于水(3mL)的溶液加入N-乙基甲基胺(1.5g,25.42mmol),并加热回流48h。减压去除溶剂。用IPE和己烷打浆提供所需化合物5(300mg,27％).1H NMR(300Hz,CDCl3)δ11.90(br s,1H),7.04(s,1H),6.97(s,1H),3.59(q,J＝6.9,14.4Hz,2H),4.00(s,3H),1.17(t,J＝6.9Hz,3H)。
下述吡唑吡啶衍生物与异氰酸酯反应的通用过程。
2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)乙-1-醇:
在室温搅拌肼衍生物(100mg,.38mmol)溶于无水THF(10mL)的溶液，其中逐滴加入合适的异氰酸酯(～1.3eq,.5mmol)溶于甲苯(10mL)的溶液，并搅拌12h直至通过TLC监测反应完全。浓缩粗制反应物并用1:1的二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱剂用柱层析法纯化得到所需产物。
合成化合物34
N-(2,6-二氯吡啶-4-基)-2-(2-羟基丙基)-2-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼-1-甲酰胺(化合物34):
2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)丙-1-醇
将2-肼基丙醇(3.35g,37.2mmol)加入1H-6-溴-4-异丙基-1,3-二甲基吡唑[3,4-b]吡啶(500mg,1.87mmol)溶于乙醇(2.5ml)的溶液并热回流过夜。冷却后，冰浴中搅拌4h。过滤粗制材料，用50％乙醇水溶液(5ml)打浆所得固体，过滤并在60℃减压干燥得到2-(1-(4-异丙基-1,3-二甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6-基)肼基)丙-1-醇的白色固体,B-2(300mg,58％收率)。1H 300MHz NMR(CDCl3)δ6.89(1H,s),4.95(2H,bs),4.28(1H,bs),3.99(2H,m),3.85(3H,s),3.58(2H,t),3.48(1H,m),2.57(3H,s),1.93(2H,m),1.33(3H,s),1.31(3H,s)。
化合物34
方法A(80mg,45％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3+MeOD-4)δ7.47(2H,s),6.52(1H,s),4.06(2H,bm)3.96-3.80(2H,bm),3.84(3H,s),3.44(2H,m),3.39(1H,bs),2.51(3H,s),1.24(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝466.1
化合物35
方法A(75mg,43％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3)δ8.91(1H,s),7.06(1H,s),6.85(1H,s),6.65(1H,s),6.60(1H,s)4.45(1H,bs),4.30(2H,qt),4.16(2H,m),3.90(3H,s)3.51(2H,m),2.80(1H,bs)2.60(3H,s),1.31(6H,m)1.29(3H,m)。ESI+(M+H)m/z＝462.1
化合物36
方法A(80mg，45％，3步)1H 300MHz NMR(CDCl3)δ8.99(1H,s),7.05(1H,s),6.87(1H,s),6.81(1H,s),6.60(1H,s)4.45(1H,bs),4.160(2H,t),4.10(2H,m),3.87(3H,s)3.48(2H,m),3.20(1H,bs)2.59(3H,s),1.75(2H,m)1.30(6H,d).97(3H,t)。ESI+(M+H)m/z＝476.1
化合物37
方法A(80mg,44％,3步)1H 400MHz NMR(CDCl3)δ8.91(1H,s),7.11(1H,s),6.89(1H,s),6.62(1H,s),6.58(1H,s)4.55(1H,bs),4.51(2H,m),4.09(2H,m),3.91(3H,s),3.67(2H,m)3.49(2H,m),3.39(3H,s),2.71(1H,bs)2.59(3H,s),1.30(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝492.1
化合物38-Boc盐
方法A(120mg,56％,3步)1H 400MHz NMR(CDCl3)δ8.96(1H,s),7.58(2H,d),6.81(1H,bs),6.62(1H,s),4.49(1H,bs),4.17-4.06(2H,bm)3.96(2H,m),3.91(3H,s),3.48(2H,m),3.03(1H,bs),2.62(3H,s),1.48(9H,s),1.30(6H,d),1.17(3H,t)。ESI+(M+H)m/z＝561.2
化合物38-HCl盐
将上述溶于二氯甲烷(1mL)的Boc衍生物在冰浴中冷却至0-5℃，加入2MHCI溶液的醚(1mL)溶液，搅拌过夜。过滤所得固体，在真空烤箱中干燥至收率60mg的氢氯酸盐。1H 400MHz NMR(MeOD-4)δ7.31(1H,s),6.99(1H,s),6.71(1H,bs),4.49(1H,bs),4.09-3.99(2H,bm)3.96(2H,m),3.93(3H,s),3.67(1H,m),3.53(2H,m),3.38(2H,m),2.64(3H,s),1.32(6H,d)1.12(3H,t)。ESI+(M+H)m/z＝461.1
化合物39
方法A(110mg,61％,3步)1H 400MHz NMR(DMSO)δ9.47(1H,s),8.96(1H,bs),6.88(1H,bs),6.61(1H,s),6.49(1H,s),5.38,4.73(1H,bs),4.17-3.86(2H,bm)3.80(3H,s),3.80-3.71(2H,bm),3.45(2H,m),2.89(3H,s),2.50(3H,s),1.23,(6H,d),1.03(3H,t)。ESI+(M+H)m/z＝475.1
化合物40
方法B(55mg,32％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3)δ9.08(1H,s),8.35(1H,s),8.23(1H,s),6.70(1H,s),6.61(1H,s),4.49(1H,bs),4.17-4.06(2H,bm),3.91(3H,s),3.49(2H,m),3.11(1H,bs),2.60(3H,s),1.30(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝452.1
化合物41
方法A(95mg,55％,3步)1H 400MHz NMR(CDCl3)δ9.08(1H,s),8.36(1H,d),8.22(1H,d),6.71(1H,bs),6.62(1H,s),4.29(1H,bs),4.2-4.17(2H,bm)3.96(2H,m),3.451(2H,m),3.12(1H,bs),2.60(3H,s),1.32(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝452.1
化合物42
方法A(45mg,26％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3)δ9.54(1H,s),6.81(1H,bs),6.60(1H,s),6.25(1H,s),4.45(1H,bs),4.11-4.08(2H,bm)3.84(3H,s),3.49(2H,m),2.89(1H,bs),2.60(3H,s),1.30(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝457.0
化合物43
方法B(90mg,54％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3+MeOD-4)δ6.49(1H,bs),6.21(1H,s),4.19-4.06(2H,bm)3.83(3H,s),3.48-3.38(2H,bm)3.35(1H,m),2.47(3H,s),2.16(3H,s),1.19(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝437.1
化合物44
方法A(110mg,60％,3步)1H 300MHz NMR(CDCl3+MeOD-4)δ9.18(1H,s),7.76(1H,s),7.61(1H,s),7.19(1H,s),6.59(1H,s),4.43(1H,bs),4.07-3.92(2H,bm),3.85(3H,s),3.60-3.48(2H,m),2.54(3H,s),1.27(6H,d)。
ESI+(M+H)m/z＝485.1
化合物45
方法B(90mg,58％,3步)1H 400MHz NMR(CDCl3+MeOD-4)δ6.50(1H,bs),6.22(1H,s),4.34(1H,bs),4.17-4.06(2H,bm),3.82(3H,s),3.43(2H,m),2.52(3H,s),1.26(6H,d)。ESI+(M+H)m/z＝408.1
体外结合亲和力
测试本发明上述的数个化合物，来测定对S1P2和S1P3受体的结合亲和力(见下)。通过测试样本化合物并且参照对照(EC80)孔的每个图式化的(GPCR)，其评价与S1P2和S1P3受体的结合，来获得拮抗剂百分比抑制率测定值。用单个加入测试方案操作样本。方案设计如下。
I.储备母液(Master stock solution)
除非特别指明，在100％无水DMSO中所述稀释样本化合物，包括所有稀释度。如柠檬酸盐(1equivalent per molecule)测试该化合物。如在不同溶剂中提供该样本化合物，就在特定溶剂中进行所有储备母液的稀释。将含相同溶剂最终浓度的所有对照孔作为样本化合物孔。
II.化合物板测试
从储备母液将样本化合物移至测试所用的子板(daughter plate)。用测试缓冲液稀释每份样本化合物(1X HBSS，和20mM HEPES,2.5mM丙磺舒(Probenecid),和0.4％游离脂肪酸BSA)至合适浓度来获得最终特定浓度。
III.拮抗剂试验模式
用实时测定的EC80值，刺激所有预先温育的样本化合物和参照拮抗剂(如果适用)，与参照激动剂的EC80值相比。用FLIPRTETRA读180秒(此测试向各孔加参照激动剂，然后可收集荧光计读数来计算EC80值)。对所有板做合适的基线校正。一旦通过了基线校正，就可以输出最大荧光值，操作数据来计算百分比活化率、百分比抑制率和Z'。结果见下表，其显示这些化合物出乎意外地与S1P2和S1P5受体都结合。
JTE013和Cmpd-1的血液浓度数据
为确定JTE013和化合物1的药物动力学，各在3只正常小鼠做试验。将1mg/kg的所述化合物IV注入，并在表1所述时间取血。用MS/MS测定通过标准曲线对起始化合物定量。
表1.JTE013对照的血液浓度相比1mg/kg静脉内给药JTE013至3只小鼠(M01-M03)后的时间。
a NP指无峰。
b n/a指不可用。
c BLQ指定量的较低水平以下(LLOQ＝1ng/mL)。
图1.JTE013的血液浓度相比1mg/kg静脉内给药JTE013至一组3只小鼠(M01-M03)后的时间。
表2.Cmpd-1的血液浓度相比1mg/kg静脉内给药EDG-1至3只小鼠(M04-M06)后的时间。
a NP指无峰。
b n/a指不可用。
c BLQ指定量的较低水平以下(LLOQ＝1ng/mL)。
图2.均值(±S.D.)1mg/kg静脉内给药JTE013至一组3只小鼠后的JTE013血液浓度。
表3.化合物1的血液浓度相比1mg/kg静脉内给药化合物1至一组3只小鼠(M04-M06)后的时间。
a终末半寿期从最后两个可测浓度估算得出。
图3.化合物1的血液浓度相比1mg/kg静脉内给药化合物1至一组3只小鼠(M04-M06)后的时间。
表3.1mg/kg静脉内给药EDG-1至3只小鼠(M04-M06)后血中的Cmpd-1的估计药物动力学参数。
a终末半寿期从最后两个可测浓度估算得出。
bNC指因PK曲线截短的性质而不可计算。
图4.均值(±S.D.)1mg/kg静脉内给药化合物1至一组3只小鼠后的化合物1的血液浓度。
图5.均值(±S.D.)1mg/kg静脉内给药至两组各3只小鼠后的JTE013和化合物1的血液浓度。
上述在1mg/kg静脉内给药小鼠后测得的JTE013和化合物1的血液浓度，清楚表明给药化合物1的小鼠血药水平随时间最高，这表明对SP1和SP2受体的结合亲和力较高，因此治疗肿瘤疾病的效力更强，这是通过阻滞并预防细胞增殖、迁移和形态发生，后者会形成癌症细胞生长扩散所需的新的毛细血管网。维持较高血液水平较长时间的能力越强，所述化合物对所述受体的亲和力并与其结合的可能性越大。
体外ADME-Tox汇总表
为获得JTE013和化合物1以及化合物2的其它蛋白质结合和代谢信息,完成了体外血浆蛋白结合和微粒体内在清除(microsomal intR1nsic clearance)的研究。结果如下。
表5.血浆蛋白质结合汇总表
表6.微粒体内在清除汇总表
a微粒体内在清除
b半寿期
Verapamil是代谢对照而Warfarin是非代谢对照。
从用血浆蛋白结合和微粒体内在清除做的最初体外ADME毒理研究，可清楚已知对照JTE013和化合物1两试验的表现很相近，而化合物2在肝脏微粒体中稳定得多且血浆蛋白结合较低。为进一步弄清这些分子的性质，在静脉内注射到小鼠后研究所述化合物的清除。化合物1比JTE013药物动力学显著提高，比化合物2强(见曲线下面积)。因为2h后受体结合能力更强且药物血浆水平更高,所以可预期化合物1的体内效力更强。这三种化合物的体内代谢和药物动力学差异很显著。化合物1的强蛋白质结合必然会抑制肝脏代谢。化合物2的游离羧基集团可能会导致糖冠化(glucoronylation)以及比体外代谢研究更迅速的分泌，这可能提示或蛋白质结合下降是有害的。
包含上述S1P受体激动剂的药物组合物可包含用于治疗与血管渗透性和血管内皮细胞凋亡有关的病症的其它药理学药剂。合适的其它药理学药剂包括例如，细胞毒性剂、化疗剂、激素类、类固醇类抗炎药(例如强的松(prednisone)、皮质类固醇类(corticosteroids)等)、非类固醇抗炎药(例如NSAIDs、阿斯匹林、对乙酰氨基酚等)；及包含一或多种前述其它药理学药剂的组合。
药物组合物可用一或多种生理可接受载体或赋形剂配制。因此，所述化合物及其生理可接受的盐和溶剂合物可配制用于通过吸入或吹气(经嘴或鼻)给药或口服、颊含(buccal)、肠胃外或直肠给药。
为口服给药，所述药物组合物可呈例如片剂或胶囊的形式，与生理可接受赋形剂如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂如土豆淀粉或羧甲基淀粉钠，润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；及包含一或多种上述赋形剂的组合，用本领域已知手段制备。所述片剂用本领域公知方法包被。口服给药用的液体制剂可呈形式，例如溶液、浆、或悬液，或者它们可作为干燥产物存在用于与水或其它合适载体在使用前配制。这些液体制剂可用常用手段制备，与药物可接受添加剂如悬浮剂(suspending agent)(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或金合欢)；无水载体(例如杏仁油、油酯(oily esters)、乙醇酒精或分馏植物油)、防腐剂(例如甲基或丙基-对-羟基苯甲酸或山梨酸)；及包含一或多种上述添加剂的组合。所述制剂适当时还可能包含缓冲盐、调味料、色素、和甜味剂。
可合适地配制口服給药制剂来得到活性化合物的控制释放。颊含给药所述组合物可采用本领域已知技术配制的片剂或锭剂(lozenge)形式。对于吸入给药，用合适的推进剂，例如二-氯-二氟甲烷、三-氯-氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其他合适气体，可方便地从压缩包或或喷雾器以气溶胶喷雾(aerosol spray)的存在形式递送该化合物。对于压力气溶胶，可通过提供阀确定剂量单位来递送定量的量。例如，用作吸入剂或吹入剂的明胶胶囊和药筒(cartridge)，可配制含所述化合物和合适粉末基如乳糖或淀粉的粉末混合物。
也可配制所述化合物用于通过注射肠胃外给药，例如通过丸注射(bolusinjection)或持续输注。注射用配制剂可以单位剂型与添加的防腐剂，例如在安瓿或多剂量容器中存在。所述组合物可在油状或水载体中采取悬液、溶液、或乳液的形式，并可包含配制用剂(formulatory agent)如悬浮、稳定和/或分散剂。或者，所述活性成分可在使用前呈粉末形式，用于与合适载体建构例如无菌无热原水。
也可配制所述化合物为直肠用组合物，如栓剂或保留灌肠，例如含有可可脂或其他甘油酯等常用栓剂基。除了前述配制剂，也可配制所述化合物为长效(depot)制剂。此长效作用配制剂可植入(例如通过皮内或肌内)或肌内注射给药。因此，例如可用合适的聚合或疏水材料(例如可接受油中的乳液)或离子交换树脂，或略溶的衍生物，例如略溶的盐来配制所述化合物。
因此本文包括，可以药物有效量配制本发明的S1P2受体选择性拮抗剂化合物为上述组合物，通过在数个上述载体组合物中的任一中给药其药物有效量，用于治疗血管生成性眼病、肿瘤性眼病和盲症，并用于治疗肺、肾脏、肝脏和皮肤疾病的纤维化病症。

Claims (36)

1.一种1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物,所述拮抗剂具有下式:
其中R1是-烯丙基、-CH3、或-CH2CH2CH2OH,R2是-H、-CH2C02H、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CONH2、或-CH2C02Et并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶、4-取代-2-氯-6-羟乙基吡啶、4-取代-2-氯-6-羟丙基吡啶、4-取代-2-(氨乙基)-6-氯吡啶、4-取代-2-(氨乙基甲基)-6-氯吡啶、5-取代-2,3-二氯噻吩，条件是如果R2是-H，则R1不能是-CH3。
2.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-烯丙基,R2是-H,并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶。
3.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2C02H,并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶。
4.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶。
5.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2CH2OH,并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶。
6.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,R3是4-取代-2-氯-6-羟乙基吡啶。
7.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,R3是4-取代-2-氯-6-羟丙基吡啶。
8.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,并且R3是4-取代-2-(氨乙基)-6-氯吡啶。
9.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,并且R3是4-取代-2-(氨乙基甲基)-6-氯吡啶。
10.根据权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，
其中R1是-CH3,R2是-CH2CH2OH,R3是5-取代-2,3-二氯噻吩。
11.一种1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，具有式:
12.一种1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂及其生理可接受的盐和溶剂合物，所述拮抗剂具有式:
其中R1选自-CH2CH2CH2OH和-烯丙基组成的组，R2是-H并且R3是4-取代-2,6-二氯吡啶。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合。
14.一种药物组合物，其包含权利要求2所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合。
15.一种药物组合物，其包含权利要求4所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合。
16.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，结合选自由细胞毒性剂、化疗剂、激素类、类固醇类抗炎药、强的松、皮质类固醇、非类固醇抗炎药(NSAIDs)、阿斯匹林、对乙酰氨基酚和混合物组成的组的其它药理学药剂。
17.一种药物组合物，其包含权利要求2所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，结合选自由细胞毒性剂、化疗剂、激素类、类固醇类抗炎药、强的松、皮质类固醇、非类固醇抗炎药(NSAIDs)、阿斯匹林、对乙酰氨基酚和混合物组成的组的其它药理学药剂。
18.一种药物组合物，其包含权利要求4所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，结合选自由细胞毒性剂、化疗剂、激素类、类固醇类抗炎药、强的松、皮质类固醇、非类固醇抗炎药(NSAIDs)、阿斯匹林、对乙酰氨基酚及其混合物组成的组的其它药理学药剂。
19.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合，配制用于通过吸入、吹气、口服、颊含、肠胃外或直肠给药。
20.一种药物组合物，其包含权利要求2所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合，配制用于通过吸入、吹气、口服、颊含、肠胃外或直肠给药。
21.一种药物组合物，其包含权利要求4所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受载体或赋形剂组合，配制用于通过吸入、吹气、口服、颊含、肠胃外或直肠给药。
22.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受赋形剂组合，所述赋形剂选自由粘合剂如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂如土豆淀粉或羧甲基淀粉钠，润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；及其组合组成的组。
23.一种药物组合物，其包含权利要求2所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受赋形剂组合，所述赋形剂选自由粘合剂如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂如土豆淀粉或羧甲基淀粉钠，润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；及其组合组成的组。
24.一种药物组合物，其包含权利要求4所述的1-磷酸鞘氨醇受体2拮抗剂，与一或多种生理可接受赋形剂组合，所述赋形剂选自由粘合剂如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素；填料(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂如土豆淀粉或羧甲基淀粉钠，润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；及其组合组成的组。
25.一种纤维化的肺、肾脏、肝脏和皮肤疾病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求1所述的化合物。
26.一种纤维化的肺、肾脏、肝脏和皮肤疾病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求2所述的化合物。
27.一种纤维化的肺、肾脏、肝脏和皮肤疾病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求4所述的化合物。
28.一种肿瘤性眼病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求1所述的化合物。
29.一种肿瘤性眼病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求2所述的化合物。
30.一种肿瘤性眼病的治疗方法，其通过给药药物可接受量的权利要求4所述的化合物。
31.一种抑制眼中异常血管生成的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求1所述的化合物。
32.一种抑制眼中异常血管生成的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求2所述的化合物。
33.一种抑制眼中异常血管生成的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求4所述的化合物。
34.一种预防眼睛失明的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求1所述的化合物。
35.一种预防眼睛失明的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求2所述的化合物。
36.一种预防眼睛失明的方法，其通过给药药物可接受量的权利要求4所述的化合物。
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