CN104297177A - 一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品检测领域，具体涉及一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒及检测方法。所述的检测试剂盒包括以下含量的组分：有机溶剂50-100ml、酸溶液50-100ml、水20-50ml、氯化钠水溶液20-50ml、蛋白质标准液20-30ml、显色液0.2-0.5g。采用该检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法步骤为：分别将样品溶液与蛋白质标准液加入两支比色管中，再分别加氯化钠水溶液，有机溶剂、酸溶液、水及显色液滤液，在595nm波长下，测定吸光度，根据朗伯尔定律计算浓度。本发明操作简单，检测结果准确，检测迅速，可满足食品监管部门对市售乳制品中蛋白质含量的检测。
Description
技术领域
本发明属于食品检测领域，具体涉及一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒及检测方法。
背景技术
蛋白质具有多种生理功能，可充当人体所需维生素及微量元素等物质的载体、提高免疫能力、调节机体水电解质平衡及提供多种氨基酸等。现代科学证明，蛋白质与生命的产生、存在及消亡均密切相关。因此，蛋白质作为人类生命现象中最基本的物质基础及人体六大营养物质之一，其摄入与人体健康息息相关。牛奶蛋白具有易消化，因此，婴幼儿、青少年、老年人及慢性病患者可经常食用，以增加蛋白质摄入，提高机体抵抗力。
为了保证乳及乳制品的质量，我国有关标准中明确规定了乳及乳制品中的蛋白质含量，但许多不法厂商为了获取经济利益，在乳及乳制品中非法添加三聚氰胺、尿素及硝酸铵等含氮量高的化合物，严重影响了产品质量，同时，对食用者的身体健康也构成极大的危胁。因此，测定食品中蛋白质的含量不仅是检验食品质量的重要举措，同时也是保证人们身体健康的重要手段。传统的蛋白质测定方法多采用测定氮的含量间接测定蛋白质的含量，该方法也是我国测定蛋白质含量的标准方法，其适用性强，重复性好，但这种方法存在的最大的缺陷就是测得的结果不仅包含了蛋白质，而且还包含了尿素氮及无机胺盐等含氮的化合物。此外，蛋白质的测定方法还包括双缩脲法、水杨酸比色法，但双缩脲法灵敏度低，干扰大，水杨酸法测定结果准确性较差。因此，提供一种检测方便、结果准确的蛋白质检测方法至关重要。
发明内容
为解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的是提供一种乳制品中蛋白质的快速准确的检测试剂盒及检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，包括以下含量的组分：
有机溶剂 50-100ml，
酸溶液 50-100ml，
水 20-50ml，
氯化钠水溶液 20-50ml，
0.01%的蛋白质标准液 20-30ml，
显色液 0.2-0.5g。
优选的，所述的有机溶剂选自乙醇、丙二醇或丙三醇中的一种。
优选的，所述的有机溶剂为90-95%体积份的有机溶剂。
优选的，所述的酸溶液选自醋酸或磷酸中的一种。
优选的，所述的酸溶液为80-90%体积份的酸溶液。
优选的，所述的水为去离子水。
优选的，所述的氯化钠水溶液浓度为0.1-0.3mol/L。
优选的，所述的染色液为考马斯亮蓝G-250。
采用如上所述的检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法，包括以下步骤：
（1）样品前处理：取固体样品2-5g或液体样品5-10ml，置入比色管中，加入5-10ml水，充分混匀，制得待测试样；同时准确量取蛋白质标准液5-10ml加入另一支比色管中；
（2）在步骤（1）中的两支比色管中分别加入2-5ml氯化钠水溶液，摇匀，再加入有机溶剂5-10ml、 酸溶液5-10ml、水 2-5ml，将显色液过滤，取滤液3-5ml分别加入两支比色管中；
（3）在加入显色液后即采用可见紫外分光光度计进行测定吸光度，检测波长为595nm，根据朗伯尔定律计算浓度。
步骤（3）中计算浓度的公式为：c=al/A，c为待测试样浓度，a为吸收系数，l为光在样本中经过的距离，A为吸光度。
和现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1.考马斯亮蓝G-250在465nm处有最大吸收值，当其与蛋白质结合后形成的复发物在595nm处有最大吸收值，且其吸收值明显高于465nm处的吸收值，因此，可大大提高蛋白质的检测灵敏度，最低可达1ug。本发明中采用考马斯亮蓝G-250作为检测过程中的显色液，可明显提高乳制品中蛋白质的检测限及检测灵敏度。
2. 本发明在检测前先对样品进行预处理，加入一定浓度的氯化钠水溶液、酸试剂及有机溶剂等，可固化蛋白质，并排除其他氮化合物对检测过程的影响，同时，先对样品溶液进行过滤，取滤液进行检测，均提高了检测结果的准确性。
3.本发明检测过程简单，检测时间短，可在5-10min左右内完成，且检测试剂简单，因此，检测成本低，可满足食品监管部门对市售乳制品的大样本抽查。
4.本发明在对样品进行检测的同时，还对蛋白质标准溶液进行检测，可通过蛋白质标准溶液的检测结果判断该方法检测的可靠性，并可将其作为阳性对照，有效排除检测环境对样品检测结果的干扰。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明做进一步说明：
实施例1
一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，包括以下含量的组分：
90%体积份的乙醇 50ml，
80%体积份的醋酸 50ml，
去离子水 20ml，
0.1mol/L的氯化钠水溶液 20ml，
0.01%的蛋白质标准液 20ml，
马斯亮蓝G-250显色液 0.2g。
采用如上所述的检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法，包括以下步骤：
（1）样品前处理：取婴儿奶粉2g，置入比色管中，加入5ml水，充分混匀，制得待测试样；同时准确量取蛋白质标准液5ml加入另一支比色管中；
（2）在步骤（1）中的两支比色管中分别加入2ml氯化钠水溶液，摇匀，再加入有机溶剂5ml、 酸溶液5ml、水 2ml，将显色液过滤，取滤液3ml分别加入两支比色管中；
（3）在加入显色液后即采用可见紫外分光光度计进行测定吸光度，检测波长为595nm，根据朗伯尔定律计算浓度。
经计算并经单位换算后得该样品中蛋白质含量为15g/100g，含量合格。
实施例2
本发明的技术方案如下：
一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，包括以下含量的组分：
95%体积份的丙二醇 100ml，
90%体积份的磷酸 100ml，
去离子水 50ml，
0.3 mol/L的氯化钠水溶液 50ml，
0.01%的蛋白质标准液 30ml，
考马斯亮蓝G-250显色液 0.5g。
采用如上所述的检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法，包括以下步骤：
（1）样品前处理：取女士奶粉5g，置入比色管中，加入10ml水，充分混匀，制得待测试样；同时准确量取蛋白质标准液10ml加入另一支比色管中；
（2）在步骤（1）中的两支比色管中分别加入5ml氯化钠水溶液，摇匀，再加入有机溶剂10ml、 酸溶液10ml、水5ml，将显色液过滤，取滤液5ml分别加入两支比色管中；
（3）在加入显色液后即采用可见紫外分光光度计进行测定吸光度，检测波长为595nm，根据朗伯尔定律计算浓度。
经计算并经单位换算后得该样品中蛋白质含量为8g/100g。
实施例3
本发明的技术方案如下：
一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，包括以下含量的组分：
93%体积份的丙三醇 80ml，
85%体积份的醋酸 80ml，
去离子水 30ml，
0.2 mol/L的氯化钠水溶液 30ml，
0.01%的蛋白质标准液 25ml，
考马斯亮蓝G-250显色液 0.35g。
采用如上所述的检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法，包括以下步骤：
（1）样品前处理：取纯牛奶5ml，置入比色管中，加入5ml水，充分混匀，制得待测试样；同时准确量取蛋白质标准液5ml加入另一支比色管中；
（2）在步骤（1）中的两支比色管中分别加入2ml氯化钠水溶液，摇匀，再加入有机溶剂50ml、 酸溶液5ml、水 2ml，将显色液过滤，取滤液3ml分别加入两支比色管中；
（3）在加入显色液后即采用可见紫外分光光度计进行测定吸光度，检测波长为595nm，根据公式c=al/A计算浓度。
计算浓度并经单位换算后得该样品中，c为待测试样浓度，a为吸收系数，l为光在样本中经过的距离，A为吸光度。
经计算并经单位换算后得该样品中蛋白质含量为10g/100g。
上述实施例仅为本发明的优选实施方式，并不应理解为对本发明的限定，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，包括以下含量的组分：
有机溶剂 50-100ml，
酸溶液 50-100ml，
水 20-50ml，
氯化钠水溶液 20-50ml，
0.01%的蛋白质标准液 20-30ml，
显色液 0.2-0.5g。
2.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的有机溶剂选自乙醇、丙二醇或丙三醇中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的有机溶剂为90-95%体积份的有机溶剂。
4.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的酸溶液选自醋酸或磷酸中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的酸溶液为80-90%体积份的酸溶液。
6.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的水为去离子水。
7.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的氯化钠水溶液浓度为0.1-0.3mol/L。
8.根据权利要求1所述的一种乳制品中蛋白质的检测试剂盒，其特征在于，所述的染色液为考马斯亮蓝G-250。
9.采用如权利要求1-8任一所述的检测试剂盒对乳制品中蛋白质进行检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）样品前处理：取固体样品2-5g或液体样品5-10ml，置入比色管中，加入5-10ml水，充分混匀，制得待测试样；同时准确量取蛋白质标准液5-10ml加入另一支比色管中；
（2）在步骤（1）中的两支比色管中分别加入2-5ml氯化钠水溶液，摇匀，再加入有机溶剂5-10ml、 酸溶液5-10ml、水 2-5ml，将显色液过滤，取滤液3-5ml分别加入两支比色管中；
（3）在加入显色液后即采用可见紫外分光光度计进行测定吸光度，检测波长为595nm，根据朗伯尔定律计算浓度。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特在于，步骤（3）中计算浓度的公式为：c=al/A，c为待测试样浓度，a为吸收系数，l为光在样本中经过的距离，A为吸光度。
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