CN102121904B - 苏丹红的比色测定方法 - Google Patents
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Abstract
苏丹红的比色测定方法。本发明先确定苏丹红I～IV标准溶液的最大吸收波长，接着将各标准溶液配置成不同浓度的溶液，然后往其内滴加浓硫酸，各溶液在对应的最大吸收波长下测定其吸光度，建立苏丹红标准溶液吸光度和溶液浓度的标准方程；同时将待测样品溶液内滴加浓硫酸，确定其内含有何种类型苏丹红，然后在对应的最大吸收波长下测定出样品溶液的吸光度，根据标准方程计算出样品溶液中的苏丹红浓度，进而通过苏丹红浓度和样品质量的关系测算出苏丹红残留量。本发明提供的方法灵敏度高，特异性强，操作简单，检测费用低，检测周期短，适用于鸡蛋等中苏丹红的快速测定。
Description
技术领域
本发明涉及食品中有毒有害物质残留的测定方法，具体涉及用于测定食品中苏丹红的比色测定方法。
背景技术
苏丹红主要包括I、II、III和IV四种类型，是一类偶氮苯基萘酚化合物，都是工业染料。研究发现，苏丹红会导致动物患癌，在人类肝细胞研究中也显现出可能致癌的特性。世界各国都禁止将苏丹红作为食品添加剂。国内企业在饲用色素使用方面出于商业利益，滥用色素等现象较为普遍。一些养殖户对苏丹红的潜在危害认识不深，比如在家禽饲料中添加苏丹红以达到禽蛋红心效果，其安全隐患不容忽视。
目前，测定苏丹红的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱串联质谱法、薄层色谱法等，这些方法检测仪器要求高，检测程序复杂，检测费用昂贵，很难在基层检测站普及和推广。为了能更方便的测定鸡蛋中苏丹红残留，我们认为建立一种快速、准确、灵敏、低成本，并能够适应现场快速检测的方法很有必要。
发明内容
本发明针对上述缺陷，目的在于提供一种灵敏度高，特异性强，操作简单，检测费用低，检测周期短，适用于食品中苏丹红的快速测定方法。
本发明的技术方案是：本发明先确定苏丹红I、II、III、IV标准溶液的最大吸收波长，接着将各标准溶液配置成不同浓度的溶液，然后往其内滴加浓硫酸，各溶液在对应的最大吸收波长下测定其吸光度，建立苏丹红标准溶液吸光度和溶液浓度的标准方程；同时将待测样品溶液内滴加浓硫酸，确定其内含有何种类型苏丹红，然后在对应的最大吸收波长下测定出样品溶液的吸光度，根据标准方程计算出样品溶液中的苏丹红浓度，进而通过苏丹红浓度和样品质量的关系测算出苏丹红残留量。
进一步的，本发明包括以下步骤：1)配置标准溶液：称取等量的苏丹红I、II、III、IV分别放入1、2、3、4烧杯内，加入等量的乙腈超声溶解后，移入容量瓶1、2、3、4中，定容，配置成标准溶液；2)确定最大吸收波长：用紫外线扫描测定苏丹红I、II、III、IV标准溶液，确定各标准溶液的最大吸收波长，即每瓶标准溶液吸光度最大时波长；3)建立标准方程：拿取容量瓶1，从容量瓶中移取不同量的标准溶液至1、2、……、m试管中，各试管中加入乙腈定容，配置成苏丹红I浓度不同的溶液，然后分别往各试管中等量加入浓硫酸，接着再根据步骤2)中对应确定的最大吸收波长的环境下对1、2、……、m试管进行检测，确定各试管苏丹红I溶液的吸光度，根据各检测数据，以苏丹红I溶液浓度和吸光度为变量，建立两者的标准方程；4)依次对容量瓶2、3、4按照3)步骤进行测定，建立各自的标准方程；5)样品测定：称取和步骤1)苏丹红等量的样品，经过乙腈超声溶解，经过振荡、离心、滤膜过滤后将苏丹红溶液放入试管中，用乙腈定容到和步骤1)的标准溶液等容，然后加入和步骤3)等量的浓硫酸，确定样品中所含苏丹红的种类，然后在对应的最大吸收波长下测定样品的吸光度，将吸光度代入对应的标准方程，计算出样品溶液的苏丹红浓度，最后代入方程Y＝2.5vx/m计算出样品中的苏丹红含量，其中Y：样品中苏丹红含量，x：样品溶液苏丹红浓度，m：样品质量，V-样品的稀释体积。
本发明采用比色法测定食品中苏丹红的残留量，比色法是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色分析对显色反应的基本要求是：反应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。在苏丹红标准溶液中添加适量的浓硫酸可以和苏丹红发生磺化反应，磺酸基团可以取代羟基邻位的氢，苯环上偶氮基邻位或对位的氢，也很容易与酚羟基发生反应，这都可以使苏丹红的颜色发生变化，因此，可以利用这一性质，使苏丹红在测定时的吸光度发生变化，从而使检测的灵敏度增大，增加检测的准确度。
本发明建立了鸡蛋中苏丹红残留的比色测定方法。本方法建立了鸡蛋样品的前处理条件，通过全波长扫描确定了苏丹红I、II、III、IV的最大吸收波长及标准溶液的线性范围和标准方程。本方法基于苏丹红能够与浓硫酸发生磺化反应，加深或改变苏丹红溶液颜色的特性，建立的鸡蛋中苏丹红残留的测定方法，灵敏度高，特异性强，操作简单，检测费用低，检测周期短，适用于鸡蛋等中苏丹红的快速测定。
具体实施方式
本发明按照下列步骤进行：
一、按以下方法配置标准溶液、制定标准方程：
(1)按以下方法配置标准溶液：
用分析天平分别准确称取0.01g苏丹红I、II、III、IV放入小烧杯中，每个烧杯中加入约80mL乙腈超声溶解10min，移入100mL容量瓶中，定容，配制成100μg/mL的标准溶液。
(2)按以下方法确定最大吸收波长
以乙腈为参比溶液，用分光光度计分别设定波长范围为300～500nm，扫描测定苏丹红I、II、III、IV标准溶液的最大吸收波长，吸光度最大时的波长即为苏丹红的最大吸收波长。
表1苏丹红I～IV最大吸收波长
(3)按以下方法制定标准方程
移取苏丹红I的标准溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL于10mL试管中以乙腈定容，配置成浓度分别为0、5、10、20、30、40μg/mL的溶液，分别等量加入4滴浓硫酸，摇匀。以加入量为0μg/mL苏丹红溶液为参比溶液，分别于491nm波长下测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。
重复上述操作，测定苏丹红II、III分别配置成0、5、10、20、30、40μg/mL不同浓度的溶液，在对应的最大吸收波长下测定其吸光度，绘制标准曲线，得回归方程。
移取苏丹红IV的标准溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2mL于10mL试管中以乙腈定容，配置成浓度分别为0、4、8、12、16、20μg/mL的溶液，分别等量加入4滴浓硫酸，摇匀。以加入量为0μg/mL苏丹红溶液为参比溶液，分别于478nm波长下测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。
表2苏丹红I～IV标准方程
二、按以下方法进行样品处理和测定
鲜鸡蛋样品经匀质器混合均匀后，称取样品15g(精确至0.01g)，置于50mL塑料离心管中，在样品中加入30mL乙腈，超声提取10min，中速振荡10min，5000r/min离心10min，收集上层乙腈层，下层鸡蛋样品用乙腈重复提取2次，每次20mL，合并乙腈层；45℃减压浓缩，以5mL乙腈溶解残渣，过0.45μm膜。移取2mL样品溶液于10mL试管中，加乙腈于刻度线，摇匀，再加4滴浓硫酸，肉眼观察颜色变化，以确定该溶液含有苏丹红I、II、III、IV的哪种，确定后用对应的最大吸收波长来测定样品的吸光度，平行测定3次，取平均值。
三、按以下方法计算样品中苏丹红含量
根据上述测得的数值，代入公式
Y＝2.5vx/m，计算样品中的苏丹红含量
式中：Y——样品中苏丹红含量(mg/kg)；
x——根据标准方程算出的苏丹红的浓度(μg/mL)；
m——样品的质量(g)；
v——样品的稀释体积(mL)。
上述实施例的一些数据只为更好的理解本发明，不影响本发明的保护范围，任何符合本发明思想的技术方案均在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.苏丹红的比色测定方法，其特征在于，确定苏丹红I、II、III、IV标准溶液的最大吸收波长，接着将各标准溶液配置成不同浓度的溶液，然后往其内滴加浓硫酸，各溶液在对应的最大吸收波长下测定其吸光度，建立苏丹红标准溶液吸光度和溶液浓度的标准方程；同时将待测样品溶液内滴加浓硫酸，确定其内含有何种类型苏丹红，然后在对应的最大吸收波长下测定出样品溶液的吸光度，根据标准方程计算出样品溶液中的苏丹红浓度，进而通过苏丹红浓度和样品质量的关系测算出苏丹红残留量。
2.根据权利要求1所述的苏丹红的比色测定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)配置标准溶液：称取等量的苏丹红I、II、III、IV分别放入1、2、3、4烧杯内，加入等量的乙腈超声溶解后，移入容量瓶1、2、3、4中，定容，配置成标准溶液；2)确定最大吸收波长：用紫外线扫描测定苏丹红I、II、III、IV标准溶液，确定各标准溶液的最大吸收波长，即每瓶标准溶液吸光度最大时波长；3)建立标准方程：拿取容量瓶1，从容量瓶中移取不同量的标准溶液至1、2、……、m试管中，各试管中加入乙腈定容，配置成苏丹红I浓度不同的溶液，然后分别往各试管中等量加入浓硫酸，接着再根据步骤2)中对应确定的最大吸收波长的环境下对1、2、……、m试管进行检测，确定各试管苏丹红I溶液的吸光度，根据各检测数据，以苏丹红I溶液浓度和吸光度为变量，建立两者的标准方程；4)依次对容量瓶2、3、4按照3)步骤进行测定，建立各自的标准方程；5)样品测定：称取和步骤1)苏丹红等量的样品，经过乙腈超声溶解，经过振荡、离心、滤膜过滤后将苏丹红溶液放入试管中，用乙腈定容到和步骤1)的标准溶液等容，然后加入和步骤3)等量的浓硫酸，确定样品中所含苏丹红的种类，然后在对应的最大吸收波长下测定样品的吸光度，将吸光度代入对应的标准方程，计算出样品溶液的苏丹红浓度，最后代入方程Y＝2.5vx/m计算出样品中的苏丹红含量，其中Y：样品中苏丹红含量，x：样品溶液苏丹红浓度，m：样品质量，V-样品的稀释体积。
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