CN103655652A - 一种低燥性人参的炮制方法 - Google Patents
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Abstract
一种低燥性人参的炮制方法,包括下述步骤:1、取栀子8-35g、知母8-35g和山楂8-40g,加入其总重量10-50倍量的水,密闭浸泡0.5~12h,煎煮两次,每次0.5~10h,过滤,合并药液,1000~5000r·pm离心10~30min,静置,取上清液制成酸寒药汁,备用;2、将鲜参切成0.1~10mm的鲜参片,加入0.1-10倍量步骤1制备的酸寒药汁,浸泡1-24h,蒸制1-4h,取出,置于蜜汁1-24h,再置于烘箱内在40~70℃条件下烘干1~24h,摊晾,即得。本发明能有效提高了人身作为补益佳品实用的安全性,扩大了人参的应用范围。
Description
技术领域
本发明属于中药炮制学技术领域,具体涉及中药人参的新炮制方法。
背景技术
人参,作为驰名中外的珍贵药材,被誉为“百草之王”。最早记载于《神农本草经》,主补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目、开心益智、久服轻身延年。2010版《药典》中记载人参甘,微苦,微温。具有大补元气,复脉固脱,补脾益肺,生津养血,安神益智之功效。现代医学也证明,人参除了能滋补强身外,在防肿瘤、抗衰老、抗心律失常、抑制细胞凋亡、降糖降脂、改善学习记忆、增强性功能和免疫功能及解酒等方面均有疗效,故近年来人参越来越受到人们的青睐。
人参虽为补益之佳品,但文献报道中提到人参服用不当会导致不良反应。中医普遍认为人参具有温燥之性,可能会导致机体气机塞滞,影响升降出入,产生动血之患,甚则血与气并犯于上而发为厥证,或阴阳绝离导致死亡。清代名医徐大椿在《用药如用兵论》中指出:“虽甘草、人参,误用致害,皆毒药之类也”。国内外已有多篇关于人参中毒的文献报道中提到临床运用不当可出现血压升高、鼻出血、精神高度兴奋、烦躁不安、失眠、易激动、神经过敏、眩晕头痛、玫瑰疹、瘙痒、体温升高、晨泻、抽搐、惊悸及小儿性早熟等症状, 医学上称之为“人参中毒综合症”, 也称“人参滥用综合症”,这些副作用应该都与人参自身的燥性有关。目前市场上出现了保龄参、活性参、人参口嚼片等很多人参制品,在不同程度上方便了人们服用,但在众多新兴的人参制品中,均没有解决其燥性问题,大大限制了它的应用。
徐灵胎提出“相反为制”的传统制药论,相反为制是指用药性相反的辅料或药物来制约中药的偏性或改变药性。因此我们根据相反为制、寒热相制的原则,试图寻求一种寒性辅料,通过炮制改变或缓和人参的燥性,减少副作用,以解决疗效与副作用的矛盾,提高临床用药的安全性,扩大其应用范围,满足人们的保健需求,拉动人参的产业,进一步加固人参产业链的发展。
发明内容
本发明的目的,是提供一种低燥性人参的炮制方法,具有增强药物疗效,改变药物性能,便于调剂制剂等作用。
本发明鉴于人参在临床应用方面的不足,根据“相反为制,寒热相制”的原则,提供一种以酸寒无毒中药栀子、知母、山楂等作为辅料来降低人参温燥之性,且符合大生产的炮制工艺。制备低燥性人参,扩大临床用药范围,满足人们日常保健需求。本发明针对酸寒药汁制人参炮制工艺的各个环节参数进行了正交试验等充分研究,从而确定了最佳炮制工艺。
采用的技术方案:
一种低燥性人参的炮制方法,其特征在于包括下述步骤:
1.取栀子8-35g、知母8-35 g和山楂8-40g,加入其总重量10-50倍量的水,密闭浸泡0.5~12 h,煎煮两次,每次0.5~10 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁,备用;
2.将鲜参切成0.1~10mm的鲜参片,加入0.1-10倍量步骤1制备的酸寒药汁,浸泡1-24h,蒸制1-4 h,取出,置于蜜汁1-24h,再置于烘箱内在40~70℃条件下烘干1~24 h,取出,摊晾,即得。
该法通过10批次实验室放大试验证明,饮片质量稳定,经含量测定及药理实验研究均能达到降低温燥之性的目的,因此该炮制方法适合工业化生产。
附图说明
图1为蛋白标准曲线。
图2为试验用鼠(对照组、产品组)血压变化图。
具体实施方式
实施例一
一种低燥性人参的炮制方法:取栀子8g、知母8g、山楂8g,加入其总重量10倍的水,密闭浸泡0.5 h,煎煮两次,每次1 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁。取鲜人参,净制,切制成0.5 mm薄片,用0.3倍量酸寒药汁浸泡鲜参片4 h,蒸制1 h,取出,浸透蜜汁4 h,置于烘箱内50℃条件下烘干6 h,取出,摊晾,即得。
实施例二
一种低燥性人参的炮制方法:取栀子18g、知母18g、山楂12g,加入其总重量25倍量的水,密闭浸泡1.5 h,煎煮两次,每次1.5 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁。取鲜人参,净制,切制成1 mm薄片,用0.4倍量酸寒药汁浸泡鲜参片8 h,蒸制1.5 h,取出,浸透蜜汁8 h,置于烘箱内60℃条件下烘干8 h,取出,摊晾,即得。
实施例三
一种低燥性人参的炮制方法:取栀子24g、知母24g、山楂30g,加入其总重量30倍量的水,密闭浸泡3 h,煎煮两次,每次1 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁。取鲜人参,净制,切制成2 mm薄片,用0.6倍量酸寒药汁浸泡鲜参片12 h,蒸制2 h,取出,浸透蜜汁12 h,置于烘箱内65℃条件下烘干10 h,取出,摊晾,即得。
实施例四
一种低燥性人参的炮制方法:取栀子28g、知母28g、山楂36g,加入其总重量40倍量的水,密闭浸泡5 h,煎煮两次,每次2 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁。取鲜人参,净制,切制成4 mm薄片,用0.8倍量酸寒药汁浸泡鲜参片16 h,蒸制4 h,取出,浸透蜜汁16 h,置于烘箱内55℃条件下烘干15 h,取出,摊晾,即得。
实施例五
一种低燥性人参的炮制方法,是取栀子35g、知母35g、山楂40g,加入其总重量50倍量的水,静置,密闭浸泡8 h,煎煮两次,每次3 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,取上清液制成酸寒药汁。取鲜人参,净制,切制成5 mm薄片,用1倍量酸寒药汁浸泡鲜参片20 h,蒸制2.5 h,取出,浸透蜜汁20 h,置于烘箱内60℃条件下烘干20 h,取出,摊晾,即得。
低燥性人参药理实验研究
1.低燥性参对正常大鼠红细胞膜Na+ K+-ATP酶活力的影响
细胞膜上有钠-钾泵,简称钠泵,它是镶嵌于脂质双分子层中的一种蛋白质,分子量约25万,包括α和β两个亚单位。α-亚单位具有酶的催化作用;β-亚单位是一种糖蛋白,它决定钠泵的不同来源。钠泵具有酶活性,可分解三磷酸腺苷(ATP),故它是一种三磷酸腺苷酶。此酶受一定的Na+和K+浓度的激活,因此,钠泵的全名应称为Na+-K+依赖式ATP酶。钠泵使ATP分解产能,此能量用来逆浓度梯度转运Na+和K+,从而维持细胞内、外Na+和K+的浓度差,它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。Na+-K+-ATP酶活性的大小是反映细胞能量代谢和功能的重要指标。ATP酶可分解ATP产生ADP及无机磷,因此测定无机磷的量可以判断Na+-K+-ATP酶活力的高低。寒凉药常使Na+-K+-ATP酶活力降低,温热药则使Na+-K+-ATP酶活力增强。为了进一步研究低燥性参对能量代谢的影响,我们以正常大鼠为受试对象,观察低燥性参对其红细胞膜Na+ K+-ATP酶活力的影响。
材料
动物
SD大鼠,雌雄各半,体重180~220 g,辽宁中医药大学动物实验室。
药材
鲜人参购自辽宁省本溪市桓仁县,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根及根茎。栀子购自安徽省亳州市药材总公司新特药公司,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实。知母购自安徽省亳州市药材总公司新特药公司,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为百合科植物知母Anemarrhena asphodeliides Bge.的干燥根茎。山楂购自安徽源和堂药业股份有限公司,经对照中华人民共和国药典2010年版鉴定为蔷薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果实。蜂蜜(河北省肃宁梦圆蜂蜜厂)。
试剂
Na+ K+-ATP酶测定试剂盒和牛血清蛋白购于南京建成生物工程研究所,批号为20130411,20130410。EDTA,生理盐水,蒸馏水。
仪器
U-3010紫外分光光度计(德国);电热恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司);80-2低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
2.方法
样品制备:
生晒参:取鲜参净制后切片,置烘箱内40~50℃条件下干燥。粉碎过100目筛,加蒸馏水配制成浓度为0.075 g·ml–1的混悬液。
低燥性参:低燥性制人参片,置烘箱内40~50℃条件下烘干。粉碎过100目筛,加蒸馏水分别配制成浓度为0.075 g·ml–1和0.225 g·ml–1的混悬液。
辅料液:用蒸馏水稀释成与0.075 g·ml–1低燥性参混悬液含有相同量的辅料液。
试验分组及给药
40只SD大鼠按雌雄各半,按体重随机分成五组,即生品组(0.075 g·ml–1的生晒参混悬液)、制品低剂量组(0.075 g·ml–1低燥性参混悬液)、制品高剂量组(0.225 g·ml–1的低燥性参混悬液)、辅料液组和对照组(生理盐水)。按20 mL·kg–1灌胃给药,一日2次,连续四周。
绘制蛋白质标准曲线
实验原理
蛋白质分子均具有酰胺基团,棕红色的考马斯亮蓝G-250染料上的阴离子与蛋白质的酰胺结合,使溶液变为蓝色,其最大吸收峰也由465 nm变为595 nm,蛋白质在1 ug~1000 ug范围内,蛋白质与色素物质结合物在595 nm波长的吸光度与蛋白质含量成正比,故可以测定蛋白质含量。
蛋白质标准溶液的制备
精密称取牛血清白蛋白5.00 mg,用少量蒸馏水溶解定容至50 mL,即为0.1 mg·mLˉ1蛋白标准液,4℃~5℃冰箱中保存。
考马斯亮蓝G-250溶液的制备
精密称取考马斯亮蓝G-250。100.00 mg加入95%乙醇50 mL,再加入85%磷酸100 mL,最后用蒸馏水定容至1000 mL,最终试剂含0.01%考马斯亮蓝G-250,4.7 %乙醇,8.5% 磷酸,置于棕色试剂瓶中备用。
标准曲线的制作
分别精密吸取标准蛋白质溶液0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10 mL于10 mL具塞试管中,各管加水至1 mL,加入考马斯亮蓝G-250溶液5 mL,混匀,放置10 min,于595 nm处测定其吸光度。结果见表1。
表1 不同浓度的标准蛋白质溶液的吸光度结果
根据上述结果绘制蛋白质标准曲线,如图1。Y=3.8x-0.0016,R=0.9994。
红细胞膜ATP酶的制备
大鼠眼眶采血,加EDTA抗凝,2500 rpm离心5 min,弃血浆及白细胞层,将红细胞置于3倍体积预冷的生理盐水中,温和搅拌悬浮,2500 r·pm离心,重复洗两次。将洗净的红细胞按1:30(v/v)加入预冷的低渗破膜液中,搅拌2 min后,以3000 rpm离心10 min,弃去上清液,重复上述条件3次,得到乳白色细胞膜沉淀,用少量破膜液悬浮。上述过程均在4℃条件下进行。以牛血清蛋白作为标准品,用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。用蒸馏水配成10 μL·mlˉ1的样品溶液,待测Na+ K+-ATP酶活性。
2.5Na+ K+-ATP酶活力的测定
原理
规定每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1 μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(μmolPi/mgprot/hour)。计算公式如下:
步骤
按试剂盒要求配置试剂十,试剂四,试剂六,进行以下实验
一、酶促反应
表2 酶促反应步骤
混匀,3000~4000转/分离心10分钟,取上清液定磷。
二、定磷
表3 定磷反应步骤
混匀,室温静置5分钟,在636 nm处,1 cm光径,蒸馏水调零,测各管吸光度值。
统计方法
3.结果
与对照组比较生品组Na+ K+-ATP酶活力显著升高(P<0.01),辅料液组显著降低(P<0.01),低燥性参高、低剂量组无显著性差异(P>0.05)。与生品组比较低燥性参高低剂量组,辅料液组均显著降低(P<0.01)。结果见表4。
表4 低燥性参对大鼠细胞膜Na+ K+-ATP酶活力的影响( , )
组别 | Na+ K+-ATP酶活力(μmolPi/mgprot/hour) |
对照组 | 4.45±0.35 |
生品组 | 6.80±0.49** |
低燥性参低剂量组 | 4.67±0.50△△ |
低燥性参高剂量组 | 4.77±0.49△△ |
辅料液组 | 1.18±0.17** △△ |
注:*表示与对照组比较 ** P<0.01,* P<0.05;
△表示与生品组比较 △△P<0.01,△P<0.05。
4.结论
本实验结果表明与对照组比较人参生品组使Na+ K+-ATP酶活力显著升高、产热增加,辅料液组使Na+ K+-ATP酶活力显著降低、产热减少,而低燥性参高低剂量组与生品组比较使Na+ K+-ATP酶活力显著降低。说明栀子知母山楂制成的酸寒药汁炮制人参可以降低人参增强正常大鼠红细胞膜Na+ K+-ATP酶活力的作用,这与相反为制—以寒制热的传统炮制理论相符。
低燥性参对正常大鼠血压的影响
根据文献报道人参对血压的作用呈双向变化,并认为不同的剂量可以产生不同的作用,小剂量升高血压,大剂量降低血压。人参对血压的调节,虽然对不正常血压具有一定的治疗作用,但也使人参的安全使用受到了限制,如人参服用不当常出现血压升高,甚至导致高血压危象,因此患有高血压,心脑血管疾病的人应慎重服用;正常人长期服用也会导致血压升高,亦有少数人表现为低血压。为了探讨低燥性参对大鼠血压的作用,本实验以正常大鼠为受试对象,观察低燥性参对其血压的影响。
1.材料
1.1动物
SD大鼠,雌雄各半,体重180~220 g,辽宁中医药大学动物实验室。
1.2 药品
鲜人参购自辽宁省本溪市桓仁县,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根及根茎。栀子购自安徽省亳州市药材总公司新特药公司,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实。知母购自安徽省亳州市药材总公司新特药公司,经对照2010年版中华人民共和国药典鉴定为百合科植物知母Anemarrhena asphodeliides Bge.的干燥根茎。山楂购自安徽源和堂药业股份有限公司,经对照中华人民共和国药典2010年版鉴定为蔷薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果实。蜂蜜(河北省肃宁梦圆蜂蜜厂)。
1.3仪器
大鼠尾压测定装置(成都仪器厂),RM6240生物信号采集器(成都仪器厂),101型电热鼓风干燥箱。
2.方法
2.1样品制备
生晒参:取鲜参净制后切片,置烘箱内40~50℃条件下干燥。粉碎过100目筛,加蒸馏水配制成浓度为0.075 g·ml–1的混悬液。
低燥性参:取低燥性参片,置烘箱内40~50℃条件下烘干。粉碎过100目筛,加蒸馏水分别配制成浓度为0.075 g·ml–1和0.225 g·ml–1的混悬液。
辅料液:取辅料液用蒸馏水稀释成与0.075 g·ml–1低燥性参混悬液含有相同量的辅料液。
2.2试验分组及给药
40只大鼠按雌雄各半随机分成五组,即生品组(0.075 g·mL–1的生晒参混悬液)、低燥性参低剂量组(0.075 g·mL–1低燥性参混悬液)、低燥性参高剂量组(0.225 g·mL–1的低燥性参混悬液)、辅料液组和对照组(蒸馏水)。按20 mL·kg–1灌胃给药,一日2次,连续四周。
2.3试验方法与步骤
2.3.1试验方法的选择
实验室测量动物血压的技术主要分为直接测压法和间接测压法。颈总动脉直接测压法是目前应用于急性动物实验最广泛的方法。由于麻醉药物的作用以及手术创伤应激的影响,其测量值往往比正常状态的测量结果偏低。而且大鼠颈总动脉直径约为0. 8~1. 2 mm,插管难度较高,要求操作技能熟练。无创尾套法是一种间接测量清醒大鼠血压的方法。避免了麻醉和创伤对血压的影响,操作简便易行,可重复性好,尤其适用于慢性动物实验中血压的间断测量。
2.3.2实验原理
在大鼠尾根部加压,使之超过大鼠收缩期血压,阻止动脉血流入尾部,此时尾容积固定不变,当加于尾根部压力逐渐降低到等于或稍低于收缩期血压时,动脉血液即开始流入尾部,由于此时尾根部压力仍大大超过尾部静脉压,故尾部血液回流受阻,结果造成尾血管容积增大,当尾容积突然开始增加时即为大鼠的收缩期血压。
2.3.3实验步骤
给药前测正常血压,给药后每隔一周测一次血压。在试验开始前先将大鼠放于烘箱内,在37℃温度环境保温15到20 min,以保持温度使尾动脉扩张,再进行血压的测定。先将血压换能器的一端封住,另一端接加压套,将加压套套在大白鼠尾部近心端处,脉搏换能器置于尾中上1/3处,换能器表面对准尾腹部,固定好。待动物一时性扰动过后,打开RM6240软件操作系统,开始示波(第一通道接血压换能器,第二通道接脉搏换能器)可见有动脉脉搏信号出现。当规律性的脉搏波出现后,用加压装置的充气球使压套内压力升高到脉搏波完全消失,再加压升高30 mmHg(4.0kPa),然后通过气球阀门缓慢放气,从开始放气到管道内压力为零保持在5-6 s时间,仔细观察并读取脉搏波从无到刚开始出现第一个波时对应的压力值,此刻即动脉SBP。重复三次,取三次测量值的平均值。结果见表1。
2.4统计方法
结果
注:每组分别与其正常值相比, * P<0.05, ** P<0.01。
从表5试验结果可见给药后,分别与其正常值相比,生品组在1、2周SBP明显上升,由图2血压变化图可知生品组在3、4周SBP有下降趋势。辅料液组 SBP从第一周开始显著降低,低燥性参低剂量组,低燥性参高剂量组SBP无明显变化,对照组保持稳定。
结论
本实验研究结果表明人参生品组对血压确有双向调节作用,辅料液组可使大鼠血压下降,低燥性参高低剂量组大鼠血压无明显变化。根据文献报道栀子、知母、山楂都具有降压作用,由此说明以栀子、知母、山楂为辅料对人参进行炮制,缓和人参对血压的影响,使血压维持稳定。综上所述可以低燥性参在副作用方面有所改善,低燥性参提高了人参作为补益佳品使用的安全性,扩大了人参的应用范围。
Claims (6)
1.一种低燥性人参的炮制方法,其特征在于包括下述步骤:
(1)取栀子8-35g、知母8-35g和山楂8-40g,加入其总重量10-50倍量的水,密闭浸泡0.5~12 h,煎煮两次,每次0.5~10 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁,备用;
(2)将鲜参切成0.1~10mm的鲜参片,加入0.1-10倍量步骤1制备的酸寒药汁,浸泡1-24h,蒸制1-4 h,取出,置于蜜汁1-24h,再置于烘箱内在40~70℃条件下烘干1~24 h,取出,摊晾,即得。
2.根据权利要求1所述的一种低燥性人参的炮制方法,其特征是取栀子8g、知母8g、山楂8g,加入其总重量10倍的水,密闭浸泡0.5 h,煎煮两次,每次1 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁;取鲜人参,净制,切制成0.5 mm薄片,用0.3倍量酸寒药汁浸泡鲜参片4 h,蒸制1 h,取出,浸透蜜汁4 h,置于烘箱内50℃条件下烘干6 h,取出,摊晾,即得。
3.根据权利要求1所述的一种低燥性人参的炮制方法,其特征是取栀子18g、知母18g、山楂12g,加入其总重量25倍量的水,密闭浸泡1.5 h,煎煮两次,每次1.5 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁;取鲜人参,净制,切制成1 mm薄片,用0.4倍量酸寒药汁浸泡鲜参片8 h,蒸制1.5 h,取出,浸透蜜汁8 h,置于烘箱内60℃条件下烘干8 h,取出,摊晾,即得。
4.根据权利要求1所述的一种低燥性人参的炮制方法,其特征是取栀子24g、知母24g、山楂30g,加入其总重量30倍量的水,密闭浸泡3 h,煎煮两次,每次1 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁;取鲜人参,净制,切制成2 mm薄片,用0.6倍量酸寒药汁浸泡鲜参片12 h,蒸制2 h,取出,浸透蜜汁12 h,置于烘箱内65℃条件下烘干10 h,取出,摊晾,即得。
5.根据权利要求1所述的一种低燥性人参的炮制方法,其特征是取栀子28g、知母28g、山楂36g,加入其总重量40倍量的水,密闭浸泡5 h,煎煮两次,每次2 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁;取鲜人参,净制,切制成4 mm薄片,用0.8倍量酸寒药汁浸泡鲜参片16 h,蒸制4 h,取出,浸透蜜汁16 h,置于烘箱内55℃条件下烘干15 h,取出,摊晾,即得。
6.根据权利要求1所述的一种低燥性人参的炮制方法,其特征是取栀子35g、知母35g、山楂40g,加入其总重量50倍量的水,密闭浸泡8 h,煎煮两次,每次3 h,过滤,合并药液,1000~5000 r·pm离心10~30 min,静置,取上清液制成酸寒药汁;取鲜人参,净制,切制成5 mm薄片,用1倍量酸寒药汁浸泡鲜参片20 h,蒸制2.5 h,取出,浸透蜜汁20 h,置于烘箱内60℃条件下烘干20 h,取出,摊晾,即得。
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