CN104119419B - 一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 - Google Patents
一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104119419B CN104119419B CN201410299702.4A CN201410299702A CN104119419B CN 104119419 B CN104119419 B CN 104119419B CN 201410299702 A CN201410299702 A CN 201410299702A CN 104119419 B CN104119419 B CN 104119419B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methanol
- cotton leaf
- wild cotton
- extract
- triterpene saponin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从野棉花叶中提取的三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途，其特点将干燥野棉花叶粉碎，平均粒度为300～500μm，按料液比1g∶15～25mL加入正己烷，室温下震荡18～30h，过滤、分离正己烷萃取液；回收脱脂野棉花叶，按料液比1g∶20～30mL加入甲醇提取剂，室温震荡24～48h，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后得甲醇浸膏；得率10～14％；再将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇50～100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为2～4mL/min；收集上述100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到样品，用半制备高效液相色谱分离纯化得到该三萜皂苷类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及一种从野棉花叶中提取的三萜皂苷类化合物ClematosideS及其制备方法和用途，属于植物化学化领域。
背景技术
三萜皂苷是由三萜皂苷元和糖组成的一类化合物，常见的苷元为四环三萜和五环三萜。三萜皂苷类化合物具有抗肿瘤作用、中枢神经系统作用、抗炎、抗菌、降低胆固醇及心血管活性等。该类化合物广泛分布于双子叶植物，如豆科、五加科、伞形花科、桔梗科、毛茛科。野棉花(UrenalobataL.)为锦葵科梵天花属植物，主要分布于我国广西、四川、云南、贵州。其根或全草可入药，具有祛风利湿、活血消肿、清热解毒等功效。研究表明，野棉花全草中含有氨基酸和蛋白质、糖类、皂苷、鞣质、酚类、有机酸类、黄酮类等成分(谢臻，陈勇，韦涛.地桃花化学成分预实验及紫外-可见光谱研究[J].广西科学院学报，2010，26(3)：225-227)。中国专利，ZL201210246966.4已报道了野棉花叶经柱层析后，甲醇洗脱组分有较强的酵母菌抑制活性，但未对其活性成分进行研究。因此，本发明对野棉花叶中具有抑菌活性的化合物进行了分离鉴定，首次分离得到了一种三萜皂苷类化合物ClematosideS，并对其抑制食品腐败酵母菌活性进行了测定。
在食品腐败中，由微生物污染所引起的腐败变质最为常见，由于食品性质、来源和加工处理不同，引起食品腐败的微生物种类也有所差异，通常细菌、霉菌、酵母都能引起食品腐败。酵母是一种单细胞真菌，属于兼性厌氧菌。第一，它能在食品中产生的大量次级代谢产物如酒精、有机酸、酯类等，从而对食品的感官质量产生影响；第二，酵母具有降解胶质和淀粉的能力，破坏了食品的质感、粘性；第三，酵母能产生一些列挥发性含硫化合物，会影响食品的气味和风味。因此，从天然产物中寻找具有酵母菌抑制活性的抑制剂已成为人们的研究热点。也是该领域所期盼的研究、发展方向。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种从野棉花叶中提取具有食品腐败酵母菌抑制活性的三萜皂苷类化合物ClematosideS及其制备方法和用途。其特点是从野棉花中制备食品腐败酵母菌抑制剂的抑制效果好，其对不同种食品腐败酵母菌显示了较强的抑菌活性。
本发明的目的由以下技术实施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份数。
从野棉花叶中提取的三萜皂苷类化合物ClematosideS及其制备方法和用途，
从野棉花叶中提取的三萜皂苷类化合物为ClematosideS，其结构式如下：
从野棉花叶中提取的三萜皂苷类化合物的方法包括以下步骤：
(1)将干燥野棉花叶粉碎，平均粒度为300～500μm，按料液比1g∶15～25mL加入正己烷，在室温下震荡18～30h，过滤、分离除去正己烷萃取液；
(2)将上述脱脂野棉花叶，按料液比1g∶20～30mL加入甲醇作为提取剂，在室温下震荡24～48h，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后获得甲醇浸膏；
(3)将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇50～100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为2～4mL/min；
(4)分别收取各组分的甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到样品，用制备高效液相色谱继续分离纯化得到化合物：制备色谱的分离条件：色谱柱为制备柱，流动相为水和甲醇，等度洗脱；
(5)将上述步骤(3)或步骤(4)收集的100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到样品，用制备高效液相色谱继续分离纯化，分析条件如下：ODS-4251-K色谱柱(10×250mm，5μm)；流速，2.8mL/min；柱温，25℃；检测波长，205nm；等度洗脱液：40min，80％甲醇(0.1％甲酸)；收集14.7min的色谱峰，减压除去溶剂，即得具有抑制活性的三萜皂苷类化合物。
从野棉花叶中制备的具有食品腐败酵母菌抑制活性的三萜皂苷类化合物用于食品抗腐败。
性能测试
1、采用快速原子轰击质谱测定法(FAB-MS)对ClematosideS的分子量测试得到了证实，如图1所示。
2、根据核磁共振(NMR)数据鉴定ClematosideS的化学结构，氢谱(1H-NMR)和碳谱(13C-NMR)数据分析结果如下：1H-NMRδ(600MHz,methanol-d4)ppm(JinHz):0.699(3H,s,H-23),0.802(3H,s,H-26),0.899(3H,s,H-29),0.932(3H,s,H-30),0.964(3H,s,H-25),0.984(1H,overlap,H-1a),1.071(1H,m,H-15a),1.118(1H,m,H-19a),1.167(3H,s,H-27),1.200(1H,m,H-21a),1.230(3H,m,H-6”),1.255(1H,m,H-7a),1.260(1H,m,H-5),1.359(1H,m,H-6a),1.390(1H,m,H-21b),1.513(1H,m,H-6b),1.525(1H,m,H-22a),1.600(1H,m,H-1b),1.611(1H,m,H-16a),1.618(1H,m,H-9),1.625(1H,m,H-7b),1.685(1H,m,H-19b),1.735(1H,m,H-22b),1.740(1H,m,H-2a),1.756(1H,m,H-15b),1.850(1H,m,H-2b),1.870(1H,m,H-11a),1.890(1H,m,H-11b),2.010(1H,m,H-16b),2.835(1H,m,H-18),3.365(1H,m,H-24b),3.500(1H,d,J＝6.6,H-5’b),3.525(1H,m,H-24a),3.605(1H,m,H-3),3.665(1H,d,J＝13.2,H-5”’a),3.670(1H,d,J＝3.2,H-2”’),3.691(1H,m,,H-2’),3.691(1H,m,H-3’),3.752(1H,dd,J＝13.8,6.6,H-4’),3.758(1H,dd,J＝13.2,6.6,H-4”’),3.826(1H,d,J＝6.6,H-5’a),3.828(1H,d,J＝13.8,H-3”),3.890(1H,d,J＝13.2,H-5”’b),3.900(1H,d,J＝7.2,H-5”),3.963(1H,d,J＝3.2,H-3”’),4.052(1H,d,J＝2.4,H-2”),4.514(1H,d,J＝6.0,H-1’),4.993(1H,d,J＝4.3,H-1”’),5.214(1H,d,J＝1.6,H-1”),5.231(1H,m,H-12)；13C-NMRδ(600MHz,methanol-d4):13.794(C-23),16.398(C-25),17.752(C-26),17.992(C-6”),18.802(C-6),20.048(C-16),23.971(C-30),24.515(C-11),26.461(C-27),26.575(C-2),28.817(C-15),31.593(C-20),33.386(C-7),33.567(C-29),33.805(C-22),34.883(C-21),37.611(C-10),39.671(C-1),40.501(C-8),42.724(C-18),42.962(C-14),48.151(C-5),43.954(C-4),43.954(C-24),47.216(C-19),47.627(C-17),48.151(C-5),49.000(C-9),65.129(C-5”’),65.435(C-5’),68.659(C-3”’),69.644(C-4’),70.166(C-4”’),70.328(C-5”),71.730(C-2”),72.598(C-2”’),72.960(C-4”),74.210(C-3’),76.327(C-2’),80.696(C-3”),82.279(C-3),101.518(C-1”),104.179(C-1”’),104.628(C-1’),123.599(C-12),145.213(C-13),181.879(C-28).
3、ClematosideS对食品腐败酵母菌的抑制测试方法及测试结果如下：
待测溶液包括甲醇(阴性对照)、10mg/mLClematosideS甲醇溶液。测试结果见表1所示。
本发明具有如下优点：
(1)上述的野棉花叶提取物在制备活性植物酵母菌抑制剂中的应用，具有工艺简单、操作方便的优点；
(2)抑制活性强。实验证明，利用本发明提供的制备方法所获得的有效组分显示了很强的酵母菌抑制活性，在浓度为10mg/mL时，本实验的提取物对酵母菌的抑菌圈直径为11～13mm。
附图说明
图1：ClematosideS化合物的快速原子轰击质谱(FAB-MS)图。
如图1所示，结果表明该化合物的分子量为m/z882。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
实施例1：
(1)将干燥野棉花叶100g粉碎，平均粒度为500μm，按料液比1g∶25mL加入正己烷，在室温下震荡30h，过滤、分离除去正己烷萃取液；
(2)将上述脱脂野棉花叶，按料液比1g∶30mL加入甲醇作为提取剂，在室温下震荡48h，分离上清液，将上清液浓缩干燥后获得甲醇浸膏12.37g，得率为12.37％；
(3)将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为4mL/min；
(4)将上述有活性的100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到酵母菌抑制剂样品1.65g。取样品甲醇溶解至40mg/mL用制备高效液相色谱继续分离纯化，分析条件如下：ODS-4251-K色谱柱(10×250mm，5μm)；流速，2.8mL/min；柱温，25℃；检测波长，205nm；等度洗脱液：40min，80％甲醇(0.1％甲酸)；收集14.7min的色谱峰，浓缩干燥后得到白色固体95.0mg，得率为5.76％。
实施例2：
(1)将干燥野棉花叶100g粉碎，平均粒度为400μm，按料液比1g∶20mL加入正己烷，在室温下震荡24h，过滤、分离除去正己烷萃取液；
(2)将上述脱脂野棉花叶，按料液比1g∶25mL加入甲醇作为提取剂，在室温下震荡36h，分离上清液，将上清液浓缩干燥后获得甲醇浸膏13.04g，得率为13.04％；
(3)将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为3mL/min；
(4)将上述有活性的100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到酵母菌抑制剂样品1.37g。取样品甲醇溶解至40mg/mL用制备高效液相色谱继续分离纯化，分析条件如下：ODS-4251-K色谱柱(10×250mm，5μm)；流速，2.8mL/min；柱温，25℃；检测波长，205nm；等度洗脱液：40min，80％甲醇(0.1％甲酸)；收集14.7min的色谱峰，浓缩干燥后得到白色固体95.9mg，得率为7％。
实施例3：
(1)将干燥野棉花叶100g粉碎，平均粒度为300μm，按料液比1g∶15mL加入正己烷，在室温下震荡18h，过滤、分离除去正己烷萃取液；
(2)将上述脱脂野棉花叶，按料液比1g∶20mL加入甲醇作为提取剂，在室温下震荡24h，分离上清液，将上清液浓缩干燥后获得甲醇浸膏10.71g，得率为10.71％；
(3)将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为2mL/min；
(4)将上述有活性的100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到酵母菌抑制剂样品0.92g。取样品甲醇溶解至40mg/mL用制备高效液相色谱继续分离纯化，分析条件如下：ODS-4251-K色谱柱(10×250mm，5μm)；流速，2.8mL/min；柱温，25℃；检测波长，205nm；等度洗脱液：40min，80％甲醇(0.1％甲酸)；收集14.7min的色谱峰，浓缩干燥后得到白色固体56.1mg，得率为6.1％。
应用实例1
由上述实施例中获得的ClematosideS的酵母菌抑制活性试验方法及结果如下：
供试菌株包括：实验前期从腐败葡萄中分离得到4株菌种，分别标记为1、2、3、4号菌株，经过26SrDNA序列分析得知：1、2、4号菌为子囊菌门(Ascomycetes)酵母属(Saccharomyces)啤酒酵母(S.cerevisiae)；3号菌为子囊菌门(Ascomycetes)酵母属(Saccharomyces)布拉迪酵母菌(S.boulardii)。本实验中实验的菌株由四川大学食品科学与技术四川省重点实验室提供。
酵母菌固体培养基主要组成成分如下：酵母膏1g，蛋白胨2g，琼脂2g，葡萄糖2g，水100mL。
抗菌活性测定采用牛津杯法。牛津杯在121℃条件下高压灭菌20min，冷却干燥备用。将受试物用95％甲醇溶液稀释成10mg/mL溶液并用0.22μm细菌滤器过滤除菌备用。将牛津杯放置于已冷却的含菌双碟平板表面，吸取200μL的受试物稀释液分别注入牛津杯中，然后放入30℃培养36h，观察各平板抑菌圈直径大小。每组3个平板，每个平板放置3个牛津杯，重复3次，用游标卡尺测定并记录结果，抑菌圈直径取平均值。-
测试结果如表1所示：
表1ClematosideS对酵母菌抑制活性
a实验浓度为10mg/mL,每个平板注入200_μl,每个平板含提取物2mg。
b用100％甲醇溶解提取物，故采用100％甲醇做阴性对照。
实验结果表明，当ClematosideS浓度达到10mg/mL时，其对受试菌都有良好的抑菌作用，如表1所示，而相同浓度下的阴性对照都显示无抑菌作用。
Claims (1)
1.一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法，所述三萜皂苷类化合物为ClematosideS.，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)将干燥野棉花叶粉碎，平均粒度为300～500μm，按料液比1g:15～25mL加入正己烷，在室温下震荡18～30h，过滤、分离除去正己烷萃取液；
(2)将上述脱脂野棉花叶，按料液比1g:20～30mL加入甲醇作为提取剂，在室温下震荡24～48h，分离上清液，并将上清液浓缩干燥后获得甲醇浸膏；
(3)将上述甲醇浸膏悬浮于甲醇50～100mL，上大孔吸附树脂DiaionHP-20层析柱，用甲醇-水梯度洗脱，浓度为0wt％、20wt％、40wt％、60wt％、80wt％、100wt％，洗脱流速为2～4mL/min；
(4)分别收取步骤(3)各组分的甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到样品，用制备高效液相色谱继续分离纯化得到化合物：制备色谱的分离条件：色谱柱为制备柱，流动相为水和甲醇，等度洗脱；
(5)将上述步骤(4)收集100wt％甲醇洗脱液，浓缩干燥后得到样品，用制备高效液相色谱继续分离纯化，分析条件如下：ODS-4251-K色谱柱，5μm；流速，2.8mL/min；柱温，25℃；检测波长，205nm；等度洗脱液：40min，80％甲醇+0.1％甲酸；收集14.7min的色谱峰，减压除去溶剂，即得具有抑制活性的三萜皂苷类化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410299702.4A CN104119419B (zh) | 2014-06-27 | 2014-06-27 | 一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410299702.4A CN104119419B (zh) | 2014-06-27 | 2014-06-27 | 一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104119419A CN104119419A (zh) | 2014-10-29 |
| CN104119419B true CN104119419B (zh) | 2016-06-29 |
Family
ID=51765079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410299702.4A Expired - Fee Related CN104119419B (zh) | 2014-06-27 | 2014-06-27 | 一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104119419B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104546961B (zh) * | 2014-12-31 | 2017-11-24 | 广西科技大学 | 地桃花提取物在制备治疗和/或预防癌症药物的用途 |
| CN106912899A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-07-04 | 嵊州市派特普科技开发有限公司 | 从打碗花叶中提取酵母菌抑制剂的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102742920A (zh) * | 2012-07-17 | 2012-10-24 | 四川农业大学 | 从野棉花叶中提取酵母菌抑制剂的方法 |
-
2014
- 2014-06-27 CN CN201410299702.4A patent/CN104119419B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102742920A (zh) * | 2012-07-17 | 2012-10-24 | 四川农业大学 | 从野棉花叶中提取酵母菌抑制剂的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Antimicrobial Activity of Saponins from Medicago sp.: Structure-Activity Relationship;Pinarosa Avato, et al.;《PHYTOTHERAPY RESEARCH》;20061231;第20卷;第454-457页 * |
| 粗齿铁线莲的化学成分研究;赵美等;《中南药学》;20110531;第9卷(第5期);第338-342页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104119419A (zh) | 2014-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102030795B (zh) | 葫芦烷型苦瓜皂苷的制备方法 | |
| CN109705188B (zh) | 青龙衣中一种三萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| Farheen et al. | Triterpenoids and triterpenoid saponins from the aerial parts of Fagonia indica Burm | |
| CN115232187B (zh) | 一种从龙脑樟中提取7β-羟基白桦脂酸的方法及应用 | |
| CN110818669B (zh) | 沉香四氢2-（2-苯乙基）色酮类化合物及其分离方法和应用 | |
| CN104119419B (zh) | 一种从野棉花叶中提取三萜皂苷类化合物的制备方法 | |
| CN104327148A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的化合物、其制备方法及应用 | |
| CN112300242B (zh) | 一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法 | |
| CN108042590B (zh) | 一种低农残人参茎叶提取物及其制备方法 | |
| CN104277090B (zh) | 金花茶皂苷a标准品及其制备方法 | |
| CN103342689B (zh) | 从瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法 | |
| CN105061545B (zh) | 文冠果中三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN101284861B (zh) | 一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途 | |
| CN103304611A (zh) | 一种从瓜蒌皮中分离纯化3种黄酮苷的方法 | |
| CN113666894B (zh) | 一种从老鹰茶中提取分离呋喃酮类化合物的方法及其应用 | |
| Karabey et al. | Cycloartane-type glycosides from Astragalus schottianus | |
| CN102532243B (zh) | 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法 | |
| CN113666984B (zh) | 唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺及其应用 | |
| CN103193855A (zh) | 一种金樱子皂苷单体的制备方法 | |
| CN107474092A (zh) | 一种草菇子实体活性成分及其应用 | |
| CN102924545A (zh) | 一种木通皂苷d的富集和纯化方法 | |
| CN106554340A (zh) | 一种紫藤瘤中单体化合物的用途及其分离纯化方法 | |
| CN103601788B (zh) | 从黧蒴锥叶子中提取分离三萜鞣花单宁类化合物的方法 | |
| CN101704873A (zh) | 一种从枇杷叶提取熊果酸的方法 | |
| Li et al. | Application of high-speed counter-current chromatography for isolation of triterpenes from Schisandra chinensis (Turcz.) Baill and induction apoptosis mechanism of HSC-T6 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160629 Termination date: 20170627 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |