CN104546961B - 地桃花提取物在制备治疗和/或预防癌症药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及地桃花提取物的新用途,即在制备治疗和/或预防癌症药物方面的新用途。
Description
技术领域
本发明涉及地桃花提取物的新用途,即在制备治疗和/或预防癌症药物方面的新用途。
背景技术
恶性腹腔积液常见于各种晚期肿瘤患者,它使患者生活质量下降,生存期缩短。目前临床采用的穿刺放液、化疗等治疗方法达不到满意疗效,表现为副作用多,病人无法耐受,复发快,感染机会增多等,故应积极寻找新的治疗方法。
地桃花Urena lobata L.[U.lobata L.var.tomentosa(Bl.)Walp.],属锦葵科梵天花属植物,根或全草入药,多生于山野、路边、荒坡及干旱旷地。在我国主要分布于广西、福建、云南、四川、贵州等地区,性味甘、淡,凉。其药用价值早在我国古代就有记载,具有祛风利湿,清热解毒,活血化瘀之功效,主治感冒发热,风湿痹痛,痢疾,水肿,淋病,白带,吐血,痈肿,外伤出血。在现有的公开文献中,国内外对地桃花的研究主要集中在其化学成分、抗菌、抗氧化等方面,国内外未见公开关于地桃花抗肿瘤作用的报道,也未见对地桃花不同极性的化学部位进行了体内抑瘤作用的研究,本发明旨在提供地桃花抗肿瘤的有效部位,为进一步开发和利用地桃花资源提供依据。
发明内容
本发明的目的是提供地桃花提取物在制备治疗和/或预防癌症药物的用途;
本发明的目的是提供地桃花提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物的用途;
本发明的目的是提供地桃花乙醇提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物的用途;
本发明的另一目的是提供地桃花乙醇提取物的制备方法。
地桃花Urena lobata L.[U.lobata L.var.tomentosa(Bl.)Walp.],属锦葵科梵天花属植物,根或全草入药,多生于山野、路边、荒坡及干旱旷地。在我国主要分布于广西、福建、云南、四川、贵州等地区,性味甘、淡,凉。其药用价值早在我国古代就有记载,具有祛风利湿,清热解毒,活血化瘀之功效,主治感冒发热,风湿痹痛,痢疾,水肿,淋病,白带,吐血,痈肿,外伤出血。
发明人通过复制H22及S180荷瘤小鼠模型,对地桃花不同极性的化学部位进行了体内抑瘤作用的研究,旨在筛选出其抗肿瘤的有效部位,结果显示地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和水提部位对H22和S180荷瘤小鼠有不同程度的抑瘤作用,可作为地桃花抑瘤作用的有效部位。地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位对肝癌H22小鼠(包括实体瘤和腹水瘤)的影响比对肉瘤S180小鼠更显著。
因此,申请人提供地桃花提取物用于制备治疗和/或预防癌症药物方面的新用途;
优选地,地桃花提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物方面的新用途;
进一步优选地,地桃花乙醇提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物方面的新用途。
本发明公开了地桃花乙醇提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物的用途,所述地桃花乙醇提取物的制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50-90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,即得。
优选地,所述地桃花乙醇提取物进一步精制,其制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50-90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,得到地桃花浓缩液,将地桃花浓缩液干燥,加入蒸馏水煮沸,过滤后将滤液浓缩、离心、干燥,即得。
优选地,所述地桃花乙醇提取物还可以用不同极性溶剂萃取部位的进行更进一步的精制,其制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50-90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,得到地桃花浓缩液,将地桃花浓缩液,用石油醚萃取,石油醚萃取后的水相用乙酸乙酯、氯仿、或正丁醇萃取,萃取液减压浓缩、干燥、即得。
基于上述地桃花提取物,本发明的目的是提供以上组合物的一种新用途,即在制备治疗和/或预防癌症药物的用途。它可以制成注射液、注射用粉针剂,注射用冻干粉针剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂、滴丸剂制剂,优选制成注射液、注射用冻干粉针剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
以下是本发明中药制剂的药材来源:
地桃花Urena lobata L.[U.lobata L.var.tomentosa(Bl.)Walp.],属锦葵科梵天花属植物,根或全草入药,多生于山野、路边、荒坡及干旱旷地。
本发明公开了地桃花提取物在治疗癌症中的新用途,地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位、水提部位各剂量组与模型组比较能明显减少H22腹水瘤小鼠腹围及腹水量,其中地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位效果最明显,其次为水提部位。各用药组肝组织病理切片与模型组比较,地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位、水提部位肝细胞排列整齐,胞界清晰,核仁明显,未见异型细胞,特别是地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位、水提部位高剂量组的肝细胞形态接近环磷酰胺组,说明地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和水提部位对H22小鼠肝脏具有一定的保护作用。
在对H22和S180两种实体瘤小鼠的影响实验中,环磷酰胺组小鼠摄食量均明显减少,体重增加不明显,胸腺系数和脾脏系数值最低,但抑瘤率和生命延长率却是最高的,说明环磷酰胺在抑制肿瘤的同时抑制了食欲,降低了机体的免疫能力,不良反应明显。地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位、水提部位与模型组和环磷酰胺组比较,能不同程度增加小鼠的摄食量和体重,延长生存时间,增加胸腺系数和脾脏系数。提示地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位及水提部位对肿瘤有一定抑制作用,而且对机体免疫抑制作用较小。按照《现代肿瘤治疗药物学》关于抗肿瘤中草药有效性的标准,认为抑瘤率>30%有效,对H22实体瘤的抑瘤率大于30%的有地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位高、中、低剂量组,地桃花乙醇提取物的水提部位水提部位高、中剂量组,对S180实体瘤的抑瘤率大于30%的有地桃花乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位和水提部位高、中、低剂量组,且相同剂量的极性部位对H22实体瘤各方面的影响(包括摄食量、体重抑瘤率、生命延长率、胸腺系数等)均比对S180实体瘤的明显。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是,本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明,本发明中的百分数是重量百分数(乙醇为体积百分比)。
实施例1:地桃花乙醇提取物
取地桃花粗粉400g,加入地桃花粗粉重量4倍的50%的乙醇回流提取,过滤后滤液挥干乙醇,即得。
实施例2:地桃花乙醇提取物
取地桃花粗粉400g,加入地桃花粗粉重量2倍的90%的乙醇回流提取,过滤后滤液挥干乙醇,干即得。
实施例3:地桃花乙醇提取物
取地桃花粗粉400g,加入地桃花粗粉重量3倍的70%的乙醇回流提取,过滤后滤液挥干乙醇,即得。
实施例4:地桃花乙醇提取物水提取
取实施例1-3所得地桃花乙醇提取物,加入蒸馏水煮沸,过滤后将滤液浓缩、离心、干燥,即得地桃花乙醇提取物1、2、3。
实施例5:地桃花乙醇提取物乙酸乙酯萃取
取实施例1-3所得地桃花乙醇提取物,分别用石油醚萃取,石油醚萃取后的水相用乙酸乙酯萃取,萃取液减压浓缩、干燥、即得地桃花乙醇提取物4、5、6。
实施例6:地桃花乙醇提取物氯仿萃取
取实施例1-3所得地桃花乙醇提取物,分别用石油醚萃取,石油醚萃取后的水相用氯仿萃取,萃取液减压浓缩、干燥、即得地桃花乙醇提取物7、8、9。
实施例7:地桃花乙醇提取物正丁醇萃取
取实施例1-3所得地桃花乙醇提取物,分别用石油醚萃取,石油醚萃取后的水相用正丁醇萃取,萃取液减压浓缩、干燥、即得地桃花乙醇提取物10、11、12。
药效实验
地桃花不同极性部位对小鼠H22及S180抑瘤作用的研究
1材料
1.1药品与试剂
地桃花(购自广西柳州市城站药材综合市场,经中国科学院广西植物研究所韦发南研究员鉴定为真品),地桃花各极性部位由实验室自行制备,具体操作见2.1项;石油醚(60~90℃,分析纯,成都市科龙化工试剂厂,批号:20110926);氯仿(分析纯,西陇化工股份有限公司,批号:1203252);乙酸乙酯(分析纯,成都市科龙化工试剂厂,批号:20110414);正丁醇(分析纯,成都市科龙化工试剂厂,批号:20120308);环磷酰胺(陕西普德药业股份有限公司,批号:04120703)。
1.2仪器
RE-52旋转式蒸发器(上海安亭实验仪器有限公司);BSC-1300ⅡA2生物安全柜(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);SB-3200DTDN超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司);电子分析天平(塞多利斯科学仪器北京有限公司);-80℃超低温冰箱(995,ThermoScientific Forma);TKY-TSH生物组织智能脱水机(湖北泰康医疗设备有限公司);TKY-BMB型石蜡包埋机(湖北泰康医疗设备有限公司);RM2235轮转切片机(德国徕卡);NP-P型生物组织摊片烤片机(孝感市诺普电子科技有限公司);BX-53F显微镜(日本Olympus公司)。
1.3动物
健康昆明种小鼠,雌雄各半,体质量18~23g,广西医科大学实验动物中心(许可证号:SCXK桂2009-0002);H22肝癌荷瘤小鼠及S180肉瘤荷瘤小鼠购自广西中医药研究院。
2方法
2.1地桃花提取物的制备
地桃花醇提浓缩液用不同极性溶液提取的样品制备:
样品1:实施例4中用水提取的地桃花乙醇提取物3;
样品2:实施例5中用乙酸乙酯萃取的地桃花乙醇提取物6;
样品3:实施例6中用氯仿萃取的地桃花乙醇提取物9;
样品4:实施例7中用正丁醇地桃花乙醇提取物12。
2.2地桃花不同极性部位对H22腹水瘤小鼠的影响
将接种7d腹水饱满的H22肝癌荷瘤小鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下抽取乳白色腹水,用无菌生理盐水将瘤细胞稀释成1×107个·ml-1的细胞悬液,昆明种小鼠140只,腹部皮肤消毒后腹腔注射H22腹水瘤细胞悬液0.2ml·只-1。次日随机将小鼠分成14组,10只·组-1,雌雄各半。分组后立即灌胃给药,药量经预实验确定,每天用药1次,连续10d。分组及给药量分别为:模型组(蒸馏水20ml·kg-1)、环磷酰胺组(0.1g·kg-1)、样品1高、中、低剂量组(3.0g·kg-1、1.5g·kg-1、0.75g·kg-1)、样品2高、中、低剂量组(1g·kg-1、0.5g·kg-1、0.25g·kg-1)、样品3高、中、低剂量组(1.0g·kg-1、0.5g·kg-1、0.25g·kg-1)、样品4高、中、低剂量组(1.0g·kg-1、0.5g·kg-1、0.25g·kg-1)。给药第1、4、7、10天测量小鼠腹围,给药第11d处死小鼠,抽取全部腹水后计算腹水抑制率。抽取腹水后立即摘取小鼠肝脏肉眼观察并做病理切片。
2.3地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠的影响
选择接种7d腹水饱满的H22肝癌荷瘤小鼠,颈椎脱臼处死,无菌条件下用一次性注射器抽取乳白色腹水,用无菌生理盐水稀释成1×107个·ml-1的细胞悬液,接种于小鼠右前肢腋部皮下,0.2ml·只-1,共280只,雌雄各半。次日分组及给药,组别及给药方法同2.2项,但20只·组-1,雌雄各半。给药期间小鼠自由饮水,定量喂食饲料,次日称量剩余饲料计算小鼠平均摄食量,于给药第1d、5d、10d称取小鼠体重。第11d各组随机处死10只小鼠,剩余小鼠停药正常饲养并记录生存天数以计算生命延长率;处死的小鼠将其瘤组织、胸腺及脾脏剥离后称重,计算抑瘤率、胸腺系数和脾脏系数。
2.4地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠的影响
选择接种7d腹水饱满的S180肝癌荷瘤小鼠,颈椎脱臼处死,无菌条件下用一次性注射器抽取乳白色腹水,用无菌生理盐水稀释成1×107个·ml-1的细胞悬液,接种于小鼠右前肢腋部皮下,0.2ml·只-1,共280只,雌雄各半。次日分组及给药,组别、给药方法及检测指标同2.3项。
2.5统计学处理
采用SPSS13.0for windows统计软件,组间均数比较用单因素方差分析,P<0.05或P<0.01差异显著,有统计学意义,数据以表示。
3结果
3.1地桃花不同极性部位对H22腹水瘤小鼠的影响
3.1.1地桃花不同极性部位对H22腹水瘤小鼠腹围和腹水量的影响
结果见表1。
表1 地桃花不同极性部位对H22腹水瘤小鼠腹围和腹水量的影响
注:与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05;与环磷酰胺组比较,ΔΔp<0.01,Δp<0.05。
由表1可知:给药第10d,样品1、样品2各剂量组及样品5高剂量组的腹围均明显小于模型组(P<0.05或P<0.01)。第11d处死小鼠抽取腹水,发现地桃花样品1、样品2各剂量组及样品4高剂量组腹水量均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),其中样品2腹水量最少;样品3高、中、低剂量组小鼠的腹水量与模型组比较无显著性差异。样品2腹水抑制率最高,但与环磷酰胺组(腹水抑制率为73.35%)比较仍有一定差距。
3.1.2肝组织病理学观察
肉眼观察:模型组有7只小鼠的肝脏局部颜色偏暗红,有不同程度肿胀;地桃花氯仿部位组8只小鼠的肝脏略有肿胀;其他用药组肝脏未见异常。HE染色病理学检查:模型组肝细胞排列不整齐,疏松,肿胀,可见大片肝细胞溶解,未见细胞核;脉管内可见癌细胞浸润,癌细胞异型性明显,核大且深染,可见脂肪变性;环磷酰胺组肝细胞排列整齐,肝小叶结构正常,肝索、肝窦结构清晰,未见癌细胞浸润;样品2高、中、低剂量组及水提部位高、中剂量组肝组织病理学改变情况与环磷酰胺组相似,但胞浆淡染,细胞变大,胞界不清晰;样品1低剂量组和样品4高剂量组肝小叶结构完整,部分肝细胞肿胀,核膜可见但核仁变淡;其他部位各剂量组肝细胞排列紊乱,细胞肿胀明显,核膜不清,甚至肝细胞溶解,未见核仁;各用药组均未见癌细胞浸润。
3.2地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠的影响
3.2.1地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠体重和摄食量的影响,结果见表2.
表2 地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠体重和摄食量的影响
注:与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05;与环磷酰胺组比较,ΔΔp<0.01,Δp<0.05。
由表2可知:给药期间,多组小鼠摄食量逐日减少,环磷酰胺组平均摄食量最低,样品2高剂量组平均摄食量最高,样品1高剂量组次之,与模型组比较均有显著差异(P<0.05或P<0.01),说明地桃花乙醇提取物用乙酸乙酯萃取部位及水提部位对小鼠食欲抑制不明显。用药10d后,样品2各剂量组和水提部位高、中剂量组体重明显比模型组和环磷酰胺组大(P<0.01)。其他各用药组由于摄食量的减少和肉瘤的影响,体重与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。
3.2.2地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠肿瘤、生命延长率、胸腺系数和脾脏系数的影响,结果见表3。
表3 地桃花不同极性部位对H22实体瘤小鼠肿瘤、生命延长率、胸腺系数和脾脏系数的影响
注:与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05;与环磷酰胺组比较,ΔΔp<0.01,Δp<0.05。
由表3可知,与模型组比较,样品1和样品2各剂量组均有不同程度的抑瘤作用,其中样品2高剂量组抑瘤效果最明显,抑瘤率为50.36%,生命延长率为48.21%;样品3抑瘤作用非常弱;样品4对小鼠肿瘤无抑制作用。与模型组比较,样品1和样品2能明显提高胸腺系数(P<0.05或P<0.01);样品2高、中剂量和水提高剂量能明显提高脾脏系数(P<0.05或P<0.01),说明地桃花乙醇提取物用乙酸乙酯萃取和水提取得到的提取物对H22实体瘤小鼠免疫器官有保护作用。
3.3地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠的影响
3.3.1地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠体重和摄食量的影响,结果见表4
表4 地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠体重和摄食量的影响
注:与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05;与环磷酰胺组比较,ΔΔp<0.01,Δp<0.05。
由表4可知,给药期间,环磷酰胺组小鼠摄食量减少最明显,小鼠体重增长缓慢;样品3各剂量组摄食量减少,给药10d后体重比模型组的轻,说明地桃花乙醇提取物氯仿萃取部位可抑制小鼠食欲使体重增长减慢;样品4各剂量组的小鼠摄食量减少,给药10d后体重却比模型组高,说明地桃花乙醇提取物正丁醇萃取部位在抑制小鼠食欲时并未影响小鼠体重的增长;样品1和样品2的高剂量组摄食量均较高,小鼠体重增长明显(P<0.01)。
3.3.2地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠肿瘤、生命延长率、胸腺系数和脾脏系数的影响,结果见表5。
表5 地桃花不同极性部位对S180实体瘤小鼠肿瘤、生命延长率、胸腺系数和脾脏系数的影响
注:与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05;与环磷酰胺组比较,ΔΔp<0.01,Δp<0.05。
由表5可知,与模型组比较,样品1、样品2各剂量组和样品4高剂量组能不同程度抑制小鼠S180实体瘤的生长(P<0.05或P<0.01),其中样品1和样品2的高、中剂量组可显著延长小鼠生存时间(P<0.01),样品2高、中剂量组亦可明显提高胸腺系数(P<0.05)。样品2高剂量组的抑瘤效果最好,抑瘤率为45.50%,生命延长率为43.27%。
Claims (4)
1.地桃花乙醇提取物在制备治疗和/或预防肝癌药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述地桃花乙醇提取物的制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50‐90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,即得。
3.如权利要求2所述的用途,其特征在于,所述地桃花乙醇提取物的制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50‐90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,得到地桃花浓缩液,将地桃花浓缩液干燥,加入蒸馏水煮沸,过滤后将滤液浓缩、离心、干燥,即得。
4.如权利要求2所述的用途,其特征在于,所述地桃花乙醇提取物的制备方法包括以下步骤:将地桃花粗粉用50‐90%的乙醇提取,过滤后滤液挥干乙醇,得到地桃花浓缩液,将地桃花浓缩液,用石油醚萃取,石油醚萃取后的水相用乙酸乙酯萃取,萃取液减压浓缩、干燥、即得。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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