CN103954718B - 一种毛蚶多糖的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，提供一种毛蚶多糖的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。
Description
技术领域
本发明涉及药品检测方法，具体涉及一种毛蚶多糖的鉴别方法，属药品技术领域。
背景技术
毛蚶肉含丰富的蛋白质、维生素及人体所必需的氨基酸，自古就有着食用、药用价值，《医林纂要》注“蚶肉补心血、散瘀血、除烦醒酒、破结消痰”，《日华子本草》注“蚶肉益血色”。近年来，研究报道显示毛蚶有抗肿瘤作用，具有清除体内自由基、提高机体免疫力的功效。毛蚶肉制剂对肺癌、肾癌、胃癌、肝癌等多种癌症具有较好的治疗作用，且安全性良好。
根据文献报道毛蚶多糖是毛蚶的主要生物活性成分之一，具有抗肿瘤、调节免疫的功效。现有文献动植物多糖的含量测定方法较多，但对动植物多糖的专属性报道很少，更未见对毛蚶多糖专属性鉴别方法的研究报道。无法在生产和使用中有效的保证产品质量，进而药品疗效得不到保证。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种毛蚶多糖的专属性鉴别方法，使毛蚶制剂在生产和使用中有效的保证产品质量，进而保证药品疗效。
本发明是这样实现的：
一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于使用凝胶色谱柱高效液相色谱法，具体步骤如下：
色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：30℃-45℃；流速：0.5ml-1ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于3000；
制备毛蚶多糖：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约0.5-5g的样品，加10-20倍的石油醚：乙醇=1：0.5-2的溶液，于30℃-50℃水浴保温1-3hr，超声提取15-45min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水10-30ml，用氢氧化钠溶液调pH至6.5～8.5，70℃-90℃水浴0.5-4hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5-50ml，继续水浴搅拌0.5-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水5-50ml，70℃-90℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。
制备毛蚶多糖供试品溶液：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得。
测定：取毛蚶多糖供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定;
多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为参照，计算2特征峰与S峰的相对保留时间：峰1为0.56±10%、峰2为0.68±10%、峰S为1。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，优化为色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.5ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于5000；
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，制备毛蚶多糖优化为：
取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约1-3g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1-1.5的溶液，于35℃-45℃水浴保温2-3hr，超声提取20-40min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水15-25ml，用氢氧化钠溶液调pH至7～8，80℃水浴1-3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水10-40ml，继续水浴1-2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加2-3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水15-25ml，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，制备毛蚶多糖进一步优化为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约2g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1的溶液，于40℃水浴保温3hr，超声提取30min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水20ml，用氢氧化钠溶液调pH至7.5～8，80℃水浴3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水20ml，继续水浴2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，制备毛蚶多糖供试品溶液优化为：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液，即得。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，测定优化为取毛蚶多糖供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，测定进一步优化为取毛蚶多糖供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，可用于毛蚶提取物各种制剂的鉴别。
上述的一种毛蚶多糖的鉴别方法，可用于魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝提取物及其各种制剂的鉴别。
本发明的有益效果在于：提供一种毛蚶多糖的鉴别方法，能准确的鉴别毛蚶近源物种魁蚶、泥蚶、扇贝、花蛤等来源的多糖。
下面通过试验例，进一步说明本发明的有益效果。
主要仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，示差折光检测器，GPC软件（Agilent-Addon）；色谱柱：TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）；流动相：0.1mol/L的硫酸钠溶液，柱温：35℃，流速0.5～0.7ml/min。理论板数按葡萄糖峰计算为5500；
2试验方法及结果
2.1方法分别制备毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多糖。
分别取干毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝肉，粉碎，过60目筛，加8倍量的水，加热提取2次，每次45分钟，合并提取液，过滤，取滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15（60℃）时，80℃以下，减压干燥，粉碎，分别制得毛蚶、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝提取物。
分别取毛蚶提取物胶囊内容物、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒粉碎，分别得毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒粉。
分别制备多糖，分别取毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊粉、毛蚶提取物片剂粉、毛蚶提取物丸剂粉、毛蚶提取物颗粒粉、魁蚶肉提取物、泥蚶肉提取物、花蛤肉提取物、扇贝肉提取物2g，加石油醚：乙醇=1：1的溶液30ml，于40℃水浴保温3hr，超声提取25min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水30ml，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，80℃水浴3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水40ml，继续水浴搅拌2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加乙醇40ml，沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水40ml，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入乙醇40ml，沉淀6hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，分别得毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多糖。
分别取毛蚶肉、毛蚶肉提取物、毛蚶提取物胶囊、毛蚶提取物片剂、毛蚶提取物丸剂、毛蚶提取物颗粒、魁蚶肉、泥蚶肉、花蛤肉、扇贝肉多糖，加流动相使溶解并稀释分别制成每1ml中约含10mg的溶液，注入液相色谱仪，测定。
结果
不同多糖的图谱结果见表1。
表1不同多糖的图谱结果
注：tR：保留时间；r-tR：相对保留时间。
药材、毛蚶提取物结果发现，毛蚶肉、毛蚶提取物及其制剂样品HPLC图中均有2个特征色谱峰，其中“峰1（平均保留时间12.808min；参照峰S的保留时间0.563，RSD：0.43%）”、“峰2（平均保留时间15.377min；相对峰S的保留时间0.676，RSD：2.01%）”为毛蚶多糖样品所特有，可用于毛蚶肉、毛蚶提取物及制剂多糖的专属性鉴别；“参照峰S（平均保留时间22.730min，RSD：0.17%）”为毛蚶药材、毛蚶提取物、魁蚶、泥蚶、花蛤、扇贝HPLC图共有峰，且泥蚶、花蛤、扇贝样品色谱图主要以单一突出的“峰S”为特点；另外，魁蚶样品在平均保留时间21.458min（参照峰S的平均保留时间0.946，RSD：2.21%）处有一强峰S1（峰高仅略低于峰S），该峰在毛蚶、泥蚶、花蛤、扇贝样品色谱图中不明显。
附图说明
图1：毛蚶肉HPLC图谱：图中峰1、峰2为毛蚶多糖的特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.708min，峰1保留时间为12.681min，峰2保留时间为15.931min，峰1相对于S峰的保留时间为0.558，峰2相对于S峰的保留时间为0.702。
图2：毛蚶提取物HPLC图谱：图中峰1、峰2为毛蚶多糖的特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.786min，峰1保留时间为12.812min，峰2保留时间为15.288min，峰1相对于S峰的保留时间为0.562，峰2相对于S峰的保留时间为0.671。
图3：毛蚶提取物胶囊HPLC图谱：峰1、峰2为毛蚶多糖的特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.750min，峰1保留时间为12.851min，峰2保留时间为15.237min，峰1相对于S峰的保留时间为0.565，峰2相对于S峰的保留时间为0.670。
图4：魁蚶HPLC图谱：图中峰S保留时间为22.692min，峰S1保留时间为21.353min，无毛蚶多糖特征峰。
图5：泥蚶HPLC图谱：图中峰S保留时间为22.705min，无毛蚶多糖特征峰。
图6：花蛤HPLC图谱：图中峰S保留时间为22.691min，无毛蚶多糖特征峰。
图7：扇贝HPLC图谱：图中峰S保留时间为22.799min，无毛蚶多糖特征峰。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：45℃；流速：1ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算为5100；
制备毛蚶提取物：取毛蚶肉，破碎，过40目筛，加入1.5倍量水，在10℃以下搅拌提取4小时，提取液过滤，离心。取上述离心液冻干，得毛蚶提取物。
制备毛蚶多糖：取毛蚶提取物适量，研细，取约0.5g，加石油醚5ml和乙醇5ml于40℃水浴保温2hr，超声30min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干。加去离子水10ml，用1mol/L氢氧化钠调pH7.5～8.0，80℃水浴3hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5ml继续水浴搅拌1hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr，弃上清液，下层液离心（3000转/min）15min，沉淀加去离子水5ml，80℃水浴2hr，离心（3000转/min）10min，取上清液。加1/2体积的氯仿:正丁醇（4:1），剧烈振摇1min，离心（3000转/min）10min，取上层液体，重复操作多次，至中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3倍量乙醇沉淀12hr，弃上清液，下层液离心（3000转/min）15min，取沉淀，50℃减压干燥6hr，制得毛蚶多糖。
取毛蚶多糖样品适量，加流动相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中呈现2个特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.785min，峰1保留时间为11.654min，峰2保留时间为14.012min，峰1相对于S峰的保留时间为0.510，峰2相对于S峰的保留时间为0.615。
实施例2
色谱条件及系统适应性试验用Agilent1100高效液相色谱仪，示差折光检测器，GPC软件（Agilent-Addon）；亲水球形高聚物为填充剂的TSKGELG4000PWXL（7.8mm×300mm）凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.7ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算为10000；
取干毛蚶肉，粉碎，过80目筛，加10倍量的水，加热提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，取滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15（60℃）时，80℃以下，减压干燥，粉碎，得毛蚶提取物。
制备毛蚶多糖：取毛蚶提取物制备的片剂研细，称取1g，含毛蚶提取物约0.8g的样品，加8ml石油醚和8ml乙醇，于30℃水浴保温3hr，超声提取15min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水30ml，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.5，90℃水浴0.5hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5ml，继续水浴搅拌0.5hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加5ml乙醇沉淀9hr，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml，70℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入10ml乙醇沉淀6hr，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃减压干燥，制得毛蚶多糖。
取毛蚶多糖样品适量，加流动相使溶解，制成每1ml含20mg的溶液，取100μl注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中呈现2个特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.584min，峰1保留时间为13.911min，峰2保留时间为16.893min，峰1相对于S峰的保留时间为0.616，峰2相对于S峰的保留时间为0.748。
实施例3
色谱条件及系统适应性试验用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.15mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：30℃；流速：0.5ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算为3000；
取鲜毛蚶肉，研碎，过80目筛，加10倍量的水，加热提取2次，每次1小时，合并提取液，过滤，取滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15（60℃）时，80℃以下，减压干燥，粉碎，得毛蚶提取物。
制备毛蚶多糖：取毛蚶提取物制备的胶囊内容物研细，称取3.3g，含毛蚶提取物约3g，加15ml石油醚和15ml乙醇=1：1的溶液，于50℃水浴保温1hr，超声提取40min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水25ml，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.5～8.5，70℃水浴4hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水30ml，继续水浴1.5hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加6ml乙醇沉淀10hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水25ml，90℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/3体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入12ml乙醇沉淀8hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，60℃减压干燥，制得毛蚶多糖。
取毛蚶多糖样品适量，加流动相使溶解，制成每1ml含25mg的溶液，取10μl注入液相色谱仪，测定，记录图谱。
图谱中呈现2个特征峰，S峰为参照峰，S峰的保留时间为22.713min，峰1保留时间为12.49min，峰2保留时间为15.444min，峰1相对于S峰的保留时间为0.55，峰2相对于S峰的保留时间为0.68。
实施例4：
按照实施例3中的毛蚶提取物制备方法指标毛蚶提取物。
制备毛蚶多糖：取毛蚶提取物制备的颗粒剂研细，称取5.5g，含毛蚶提取物约5g，加25ml石油醚和25ml乙醇，于45℃水浴保温2hr，超声提取45min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水30ml，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至7～8，85℃水浴2hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水50ml，继续水浴2hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加10ml乙醇沉淀12hr以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml，80℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/2体积的氯仿:正丁醇=4：1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加15ml乙醇沉淀10hr以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，7℃减压干燥，制得毛蚶多糖。
取毛蚶多糖，制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定：多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为1，峰1相对保留时间为0.53、峰2相对保留时间为0.61。
实施例5：
按照实施例3中的毛蚶提取物制备方法指标毛蚶提取物。
制备毛蚶多糖：取毛蚶提取物制备的丸剂研细，称取4.5g，含毛蚶提取物约4g，加24ml石油醚和24ml乙醇，于35℃水浴保温3hr，超声提取25min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水25ml，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.5～8，75℃水浴2.5hr，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水40ml，继续水浴1hr，时时搅拌，过滤，滤液合并，加8ml乙醇沉淀8hr，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水25ml，75℃水浴2hr，离心，取上清液；加1/3体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入12ml乙醇沉淀9hr，弃上清液，下层液离心，取沉淀，750℃减压干燥，制得毛蚶多糖。
取毛蚶多糖，制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定：多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为1，峰1相对保留时间为0.57、峰2相对保留时间为0.70。
Claims (7)
1.一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于使用凝胶高效液相色谱法，具体步骤如下：
色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：30℃-45℃；流速：0.5ml-1ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于3000；
制备毛蚶多糖：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约0.5-5g的样品，加10-20倍的石油醚：乙醇=1：0.5-2的溶液，于30℃-50℃水浴保温1-3小时，超声提取15-45min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水10-30ml，用氢氧化钠溶液调pH至6.5～8.5，70℃-90℃水浴0.5-4小时，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水5-50ml，继续水浴搅拌0.5-2小时，时时搅拌，过滤，滤液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水5-50ml，70℃-90℃水浴2小时，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入2-5倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖；
制备毛蚶多糖供试品溶液：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得；
测定：取毛蚶多糖供试品溶液10-100μl，注入液相色谱仪，测定；
多糖图毛蚶谱中呈现2个特征峰，以图谱中的S峰为参照，计算2特征峰与S峰的相对保留时间：峰1为0.56±10%、峰2为0.68±10%、峰S为1。
2.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于色谱条件及系统适应性：用亲水球形高聚物为填充剂的凝胶色谱柱；以0.1mol/L的硫酸钠溶液为流动相；示差折光检测器；柱温：40℃；流速：0.5ml/min；理论板数按葡萄糖峰计算应不低于5000。
3.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约1-3g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1-1.5的溶液，于35℃-45℃水浴保温2-3小时，超声提取20-40min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水15-25ml，用氢氧化钠溶液调pH至7～8，80℃水浴1-3小时，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水10-40ml，继续水浴1-2小时，时时搅拌，过滤，滤液合并，加2-3倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水15-25ml，80℃水浴2小时，离心，取上清液；加1/4-1/2体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3-4倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。
4.根据权利要求1或权利要求3的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖为：取毛蚶制剂研细，称取含毛蚶提取物约2g的样品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1的溶液，于40℃水浴保温3小时，超声提取30min，脱脂棉过滤，取滤渣，挥干；加去离子水20ml，用氢氧化钠溶液调pH至7.5～8，80℃水浴3小时，时时搅拌，过滤，滤液另器保存，滤渣加去离子水20ml，继续水浴2小时，时时搅拌，过滤，滤液合并，加3倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，沉淀加去离子水20ml，80℃水浴2小时，离心，取上清液；加1/4体积的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，剧烈振摇，离心，取上层液体，重复操作多次，至液面中间蛋白层完全消失，取上层液体，加入3倍量乙醇沉淀6小时以上，弃上清液，下层液离心，取沉淀，80℃以下减压干燥，制得毛蚶多糖。
5.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于制备毛蚶多糖供试品溶液为：取毛蚶多糖，加流动相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液，即得。
6.根据权利要求1的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多糖供试品溶液10-50μl，注入液相色谱仪，测定。
7.根据权利要求1或权利要求6的一种毛蚶多糖的鉴别方法，其特征在于取毛蚶多糖供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。
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