CN105412195A - 具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，本发明以菊的茎叶为原料，先用乙醇提取，取乙醇提取后的药渣，加水提取，得水提物，然后加入乙醇沉淀得到粗多糖；再用5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，再加乙醇沉淀除蛋白，过滤得精制多糖。本发明以废弃物菊的茎叶为原料，通过优选方法，制备得到具有很好防治结肠炎功效的精制多糖提取物，本发明能够变废为宝，充分利用中药资源，可实现菊资源的综合利用，具有很好的经济效益和绿色环保价值。

Description

具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物及其应用
技术领域
本发明涉及一种中药提取物，具体涉及一种从菊花的茎叶中提取分离得到的具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物及其应用。
背景技术
结肠炎是指各种原因引起的结肠炎症性病变。根据不同病因，结肠炎可分为溃疡性结肠炎、缺血性结肠炎、伪膜性结肠炎等。主要临床表现腹泻、腹痛、黏液便及脓血便、甚则大便秘结、数日内不能通大便；常伴有消瘦乏力等，多数患者反复发作，迁延不愈，一方面它严重影响病人生活质量，另一方面它能使结直肠癌变风险增加，病程越长，炎性程度越高，癌变的可能性越大；其中溃疡性结肠炎(UC)能使癌变的风险增加约2.4倍；患者病程10年、20年和30年的癌变率分别为2％、8％和18％。同时，炎症性肠炎(IBD)相关的结直肠癌(colorectalcancer,CRC)具有年轻化、呈散播性和多灶性病变的特点，其病理学及发病机制均不同于散发性CRC。结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤，发生率仅次于胃癌和食道癌，目前我国结直肠癌的发病率呈上升趋势，国内发病率的上升速度约为4.8％，远远超过国际水平(2％)，因此结肠炎的治疗及结直肠癌的防治受到国内外学者的普遍关注。
目前结肠炎的一线治疗方法包括口服或直肠给予美沙拉嗪及前体药物柳氮磺吡啶和巴柳氮等，但具有严重的毒副作用，限制了它们的应用。目前结直肠癌的治疗原则是以手术切除为主的综合治疗，联合化疗、放疗等以提高患者生存率，对于转移扩散，不能切除的结直肠癌主要采用化疗联合靶向治疗和放疗等方法来延长患者的生存期和提高患者的生存质量。然而结直肠癌术后五年生存率仍不足50％，晚期更是不到30％。因此，开发有效治疗结肠炎的药物具有重要意义和良好应用前景。
中药资源性产品是国家重要的战略物资，是保障国民健康、发展民族医药产业的物质基础，中医药事业的健康发展有赖于中药资源的高效利用和可持续发展。中药及天然药物资源是我国自然资源的重要组成部分，其资源的稀缺性及有限性始终是制约资源经济发展的关键要素。资源的原料生产、加工、产业化制造过程不可避免的产生大量废弃物，从废弃物中有效回收利用资源性物质和能量用于再生产，以实现节约资源，发展循环经济的目的。这是衡量一个国家及其行业科学技术、生产力水平高低的重要标志，关系到国家经济社会与生态环境健康可持续发展的重大战略问题。
在中药资源生产及其利用过程中产生的废弃物大体包括:药材生产与加工过程中产生的非药用部位和废弃组织器官；中药制药等资源性产品生产过程中产生的大量废渣、废水、废气以及废弃的可利用物质等；近年来我国中药及天然药用生物资源生产面积已超过2.40×106hm2，药材产量可达5.40×106吨，而废弃的植物根系、地上茎叶等组织器官生物量高达1.1×107-1.6×107吨，造成严重的资源浪费和环境污染。据初步统计，以中药制药为主体的中药资源产业化过程中每年消耗植物类药材约7.0×105吨，产生的废弃组织器官、废渣等高达数百万吨，例如：当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels在药材生产过程中仅利用了当归根部，其地上茎叶的生物产量约为根部的1.5倍，未被利用全部废弃；菊ChrysanthemummorifoliumRamat，具有疏散风热、清热解毒，抗菌、消炎，降低高血压、防止冠心病等功效。在采摘花蕾或开放的头状花序时其株高可达1m左右，废弃的植株生物产量约10余倍于花序产量。目前尚没有菊的茎叶提取物在治疗结肠炎方面的报道。
发明内容
发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，以菊采摘后的废弃物菊的茎叶为原料，通过优选方法，制备得到具有很好防治结肠炎功效的精制多糖提取物。本发明变废为宝，充分利用中药资源，可实现菊的综合利用，具有很好的经济效益和绿色环保意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
一种具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊的茎叶，去杂质，干燥，加入干药材重量8～12倍体积量的乙醇，回流提取，取乙醇回流提取后的药渣，加入干药材重量8～15倍体积量的水，回流提取1～3次，合并水提液，浓缩，过滤，减压浓缩至含生药量10～20g/mL的水提浸膏；
(2)取步骤(1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其体积浓度为80～85％，静置，沉淀，过滤得上清滤液和沉淀，沉淀即为粗多糖；
(3)取步骤(2)制得的粗多糖，加水制成质量浓度为10～20％多糖水溶液，然后加入多糖水溶液等体积的5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，重复1～3次，合并上清液，加乙醇使乙醇体积浓度为80～85％，静置，沉淀，过滤得精制多糖。
作为优选方案，以上所述的具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊的茎叶，去杂质，干燥，加入干药材重量8-12倍体积量的乙醇，回流提取，取乙醇回流提取后的药渣，加入干药材重量8-15倍体积量的水，回流提取1～3次，每次3小时，合并水提液，浓缩，过滤，减压浓缩至含生药量10-20g/mL的水提浸膏；
(2)取步骤(1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其体积浓度为80-85％，静置，沉淀，过滤得上清滤液和沉淀，沉淀即为粗多糖；
(3)取步骤(2)制得的粗多糖，加水制成质量浓度为10％多糖水溶液，然后加入多糖水溶液等体积的5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，重复1-3次，合并上清液，加乙醇使其体积浓度为80-85％，静置，沉淀，过滤得精制多糖。
本发明提供的具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物在制备防治急性结肠炎药物中的应用。
一种具有治疗急性结肠炎功效的中药制剂，它由本发明提供的菊茎叶精制多糖提取物和药学上可接受的载体制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或口服液等制剂。
本发明在制成片剂时，将菊茎叶精制多糖提取物添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。
本发明在制成胶囊剂时，将菊茎叶精制多糖提取物添加载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
本发明在制成颗粒剂时，把菊茎叶精制多糖提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
有益效果：本发明和现有技术相比具有以下优点：
(1)本发明以废弃物菊的茎叶为原料，通过优选方法，制备得到具有很好防治结肠炎功效的精制多糖提取物，本发明能够变废为宝，充分利用中药资源，可实现菊的综合利用，具有很好的经济效益和绿色环保意义。
(2)实验结果表明，本发明提供的菊茎叶精制多糖提取物可明显降低小鼠结肠组织中IL-17、TNF-a和IFN-r含量，表明本发明提供的菊茎叶精制多糖提取物具有很好的防治结肠炎的功效，并且实验过程中，未见有毒副作用，安全性好。
(3)本发明提供的菊茎叶精制多糖提取物可以方便和药学载体制备成多种剂型，临床上服用方便，并且使用安全，长期服用无毒副作用。
附图说明
图1为各组对DSS诱导的急性结肠炎小鼠结肠组织中IL-17相对含量的柱状图。
图2为各组对DSS诱导的急性结肠炎小鼠结肠组织中IFN-γ相对含量的柱状图。
图3为各组对DSS诱导的急性结肠炎小鼠结肠组织中TNF-α相对含量的柱状图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊茎叶，去土、石子等杂质，干燥，用干药材重量8倍体积量的95％乙醇回流提取3次，每次1小时。向醇回流后药材中加入干药材重量8倍的纯水，加热回流3小时，浓缩水提取液，过滤，减压浓缩至含生药量10-20g/ml，得水提浸膏。
(2)取步骤(1)所得水提浸膏，溶于纯水中，加入乙醇使含醇量达到80％，4℃静置，过夜，布氏漏斗过滤，得上清滤液和沉淀，上清滤液浓缩备用，沉淀即为粗多糖。
(3)将步骤(2)所得粗多糖制成10％多糖水溶液，利用5％三氯乙酸等体积混匀，静置，离心取上清，重复3次。上清加乙醇至80％含量，醇沉得精制多糖提取物。
实施例2
具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊的茎叶，去杂质，干燥，加入干药材重量12倍体积量的乙醇，回流提取，取乙醇回流提取后的药渣，加入干药材重量15倍体积量的水，回流提取2次，每次2小时，合并水提液，浓缩，过滤，减压浓缩至含生药量10-20g/mL的水提浸膏；
(2)取步骤(1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使乙醇体积浓度为85％，静置，沉淀，过滤得上清滤液和沉淀，沉淀即为粗多糖；
(3)取步骤(2)制得的粗多糖，加水制成质量浓度为20％多糖水溶液，然后加入多糖水溶液等体积的5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，重复3次，合并上清液，加乙醇使乙醇体积浓度为85％，静置，沉淀，过滤得精制多糖。
实施例3
取实施例1制备得到的菊茎叶精制多糖提取物，加入适量糊精、阿斯巴甜，制粒，干燥，整粒，分装，即得整粒剂。
实施例4
取实施例2制备得到的菊茎叶精制多糖提取物，加入淀粉适量，制粒，干燥，过筛，加入适量助流剂，压片，即得片剂。
实施例5
取实施例2制备得到的菊茎叶精制多糖提取物，加入适量淀粉，制粒，干燥，装胶囊，即得胶囊剂。
实施例6对结肠炎治疗作用研究
1、材料与方法
1.1实验用药物及试剂
葡聚糖硫酸钠盐(Dextransulfatesodiumsalt，DSS)，分子量为：36000～50000。IL-17，TNF-α，IFN-γELISA试剂盒，南京建成生物试剂有限公司。
受试药物：实施例1制备得到的菊茎叶精制多糖提取物。
1.2实验动物及饲养
SPF级雄性C57/BL6小鼠40只，体重(20±2)g，由昭衍(苏州)新药研究中心有限公司提供，合格证号：SCXK(苏)2013-003。
1.3实验仪器
酶标仪，恒温培养箱，离心机，精密移液器等。
2、实验方法
急性肠炎模型的建立和给药处理
动物分组：正常组，模型组和给药组(B-高剂量组，B-中剂量组，B-低剂量组，Z-高剂量组，Z-中剂量组，Z-低剂量组)(B：保护作用；Z：治疗作用)；
造模及给药方法：正常组组正常饮水，模型组和给药组自由饮用3％DSS水溶液，3～4天后，模型组即出现腹泻、便潜血阳性或显性便血；其中，B组造模同时给予本发明实施例1制备得到高、中、低剂量(300mg/kg，150mg/kg，75mg/kg)的菊茎叶精制多糖溶液，Z组是造模后给予本发明实施例1制备得到高、中、低剂量(300mg/kg，150mg/kg，75mg/kg)的多糖溶液，分别连续给药7天，期间每天观察动物的一般行为及动物体重，以及记录出现腹泻、便潜血阳性或显性便血的情况；给药结束后，乙醚麻醉处死小鼠，取小鼠肝脏、肾脏和结肠组织，以及粪便和结肠内容物。
3.样品检测，数据分析
3.1疾病活动指数检测及方法
参照MuranoM等建立评估标准，每日观察小鼠的体重、大便性状和隐血情况。DAI＝(体重下降+大便性状+出血情况)/3。
表1DAI值评分标准
注：正常大便：成形大便；松散大便：不粘附于肛门的糊状、半成形大便；稀便：可粘附于肛门的稀水样便。
3.2采用HE染色法，肝脏、肾脏和结肠组织切片进行染色和观察
3.3采用ELISA试剂盒对结肠组织中IL-17、TNF-α和IFN-γ含量进行检测
二，实验结果
1.对DSS诱导的急性结肠炎小鼠的症状及体重变化
饮用3％DSS的模型组第3天开始体重明显下降，部分小鼠出现体毛凌乱现象，懒动，第4天起部分小鼠出现稀便，肉眼血便。多糖保护作用组中，第4天开始体重回升，并于第5天开始体重趋于模型组和正常组之间，并且中低剂量组效果优于高剂量组；在多糖治疗作用组中，给药后第2天开始，小鼠体重开始回升，给药第4天开始，小鼠活动能力增强，体毛顺滑。同样可以看出，中低剂量组的治疗效果优于高剂量组。说明多糖对DSS诱导的急性结肠炎有一定的保护和治疗作用。DAI评分分别见表2，表3。
表2急性结肠炎保护作用组DAI评分
表3急性结肠炎治疗作用组DAI评分
2.对DSS诱导的急性结肠炎小鼠的结肠形态及病理学评分
正常组结肠组织结构清晰，上皮完整，腺管规则，杯状细胞丰富，固有层少量淋巴单核细胞浸润，模型组结肠可见明显水肿，有较大溃疡，长度相对正常组较短，部分有充血现象，周围粘膜组织有损，黏膜炎细胞浸润较正常组明显增加(P＜0.01)。多糖给药组，结肠长度显著增长(P＜0.01)，黏膜损伤较模型组有较大改善，炎性细胞浸润度较模型组明显减少(P＜0.01)。说明多糖对DSS诱导的急性结肠炎有一定的保护和治疗作用。病理组织学评分和结肠长度见表4。
表4病理组织学评分和结肠长度
**P＜0.01(模型组VS正常组；多糖组VS模型组)
3.对DSS诱导的急性结肠炎小鼠结肠组织中IL-17，INF-γ和TNF-α变化情况
通过ELISA实验，检测小鼠结肠组织中IL-17，INF-γ和TNF-α含量变化，结果显示，与正常组相比，模型组小鼠结肠组织中IL-17，INF-γ和TNF-α含量显著增加(P＜0.01)，在给药组的B保护组中，中低剂量组均能抑制IL-17，INF-γ和TNF-α的产生，而高剂量多糖反而增加了IL-17，INF-γ水平，其原因可能与菊多糖对免疫系统具有双向调节作用有关，即当机体处于免疫抑制状态时菊多糖可以增强免疫力，而当机体处于免疫紊乱时，如Th1/Th2不平衡时，菊多糖可以抑制过度反应的炎症状态，使Th1/Th2恢复平衡。具体机理有待进一步深入研究)。在治疗作用组中，高中低剂量的多糖都能抑制IL-17，INF-γ和TNF-α的产生，且中低剂量组效果显著。IL-17，INF-γ和TNF-α含量变化如图1、图2和图3。
以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.一种具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊的茎叶，去杂质，干燥，加入干药材重量8～12倍体积量的乙醇，回流提取，取乙醇回流提取后的药渣，加入干药材重量8～15倍体积量的水，回流提取1～3次，合并水提液，浓缩，过滤，减压浓缩至含生药量10～20g/mL的水提浸膏；
(2)取步骤(1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其体积浓度为80～85％，静置，沉淀，过滤得上清滤液和沉淀，沉淀即为粗多糖；
(3)取步骤(2)制得的粗多糖，加水制成质量浓度为10～20％多糖水溶液，然后加入多糖水溶液等体积的5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，重复1～3次，合并上清液，加乙醇使乙醇体积浓度为80～85％，静置，沉淀，过滤得精制多糖。
2.根据权利要求1所述的具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物，其特征在于，它是通过以下方法制备到：
(1)取菊的茎叶，去杂质，干燥，加入干药材重量8倍体积量的乙醇，回流提取，取乙醇回流提取后的药渣，加入干药材重量8倍体积量的水，回流提取1～3次，每次3小时，合并水提液，浓缩，过滤，减压浓缩至含生药量10-20g/mL的水提浸膏；
(2)取步骤(1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其乙醇体积浓度为80％，静置，沉淀，过滤得上清滤液和沉淀，沉淀即为粗多糖；
(3)取步骤(2)制得的粗多糖，加水制成质量浓度为10％多糖水溶液，然后加入多糖水溶液等体积的5％三氯乙酸，混匀，静置，离心取上清，重复3次，合并上清液，加乙醇使乙醇体积浓度为80％，静置，沉淀，过滤得精制多糖。
3.权利要求1或2所述的具有治疗急性结肠炎功效的菊茎叶精制多糖提取物在制备防治急性结肠炎药物中的应用。
4.一种具有治疗急性结肠炎功效的中药制剂，其特征在于，它由权利要求1或2所述的菊茎叶精制多糖提取物和药学上可接受的载体制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或口服液等制剂。
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