CN102949621A - 中药基因信息修复素及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药基因信息修复素，由以下重量份原料制成：黄芪15~17、生地19~21、熟地20~23、猪苓15~17、茯苓17~20、薏仁22~25、泽泻30~33、川椒目25~28、瓜蒌皮30~33、桑皮15~17、苏子18~20、白芥子20~22、车前子18~21、葶苈子15~17、大戟15~17、龙葵20~23、白花蛇草22~25、守宫20~23、冬虫夏草15~20以及若干药物辅料；将中药材原料萃取三次后得出的物质均匀混合，制成母液，将母液制成中药提取物粉，以及将中药提取物粉加入若干药物辅料制成胶囊剂或片剂或颗粒剂。本发明的有益效果为：可以帮助病人重建免疫功能，增强病人抗癌能力。

Description

中药基因信息修复素及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种中药基因信息修复素及其制备方法。 

背景技术

基因（遗传因子）是遗传的物质基础，是DNA或RNA分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列。基因通过复制把遗传信息传递给下一代，使后代出现与亲代相似的性状。人类大约有几万个基因，储存着生命孕育、生长、凋亡过程的全部信息，通过复制、表达、修复，完成生命繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定人体健康的内在因素。这些存储在由DNA(少数RNA)分子片段组成的基因中的生物遗传信息就叫做基因信息。生物代代相传的正是决定他们的种类及个体生命性状特征的信息。这些生物性状包括：结构与功能，如形体、外貌、智力、器官基质及其特征、对某些疾病的敏感性、神经系统等；总数超过104个不同的酶；细胞内的复杂过程；形成化合物的聚合物；先天性本能活动的控制等。基因信息的功能实现主要是通过蛋白质，其中酶起到了至关重要的作用，如果酶的表达发生异常就会产生疾病，而微量元素的不足也会引发疾病的发生。 

平时中药煎熬后出现基因信息的遗失、微量元素锌和硒等的遗失，真正留下来的只是少部分的有用的东西。而本发明将中药的有效物质通过分子流超临界萃取达到有效物质化合物采取分子切割，在分子的三维空间加入信息磁场，先由物质变成物质活性，再由物质活性变成生物活性，最后在磁场的作用下有选择性的提取有效信息。这样中药有效的生物分子就有效的保留了，并且信息磁场和人类细胞信息磁场的结构是同步的。当细胞吸收这些富含锌和硒以及含有众多有效成分的药物和营养品后起到阻止原始基因复制、转录、最终表达。达到修复基因，避免疾病的作用，使变异的细胞修复到正常状态。 

发明内容

本发明的目的是提供一种中药基因信息修复素及其制备方法，其可以帮助病人重建免疫功能，并能够调动、激发病人的自身免疫功能，达到增强病人抗癌能力，减少延缓复发转移的发生，巩固手术或放疗效果的临床治疗目的，对无疾病的人体则有强身健体的功效。 

本发明的目的是通过以下技术方案来实现： 

一种中药基因信息修复素，其由以下重量份数的原料制成：黄芪15~17、生地19~21、熟地20~23、猪苓15~17、茯苓17~20、薏仁22~25、泽泻30~33、川椒目25~28、瓜蒌皮30~33、桑皮15~17、苏子18~20、白芥子20~22、车前子18~21、葶苈子15~17、大戟15~17、龙葵20~23、白花蛇草22~25、守宫20~23、冬虫夏草15~20以及若干药物辅料；所述药物辅料为分散剂、润湿剂、助流剂和滑石粉润膏；所述分散剂为淀粉，润湿剂为淀粉浆或乙醇，助流剂为硬脂酸镁。

上述的中药基因信息修复素的制备方法，包括以下步骤： 

（1）称取上述重量份数的黄芪、生地、熟地、猪苓、茯苓、薏仁、泽泻、川椒目、瓜蒌皮、桑皮、苏子、白芥子、车前子、葶苈子、大戟、龙葵、白花蛇草、守宫、冬虫夏草，经挑选、洗净后，加入萃取釜中三次萃取，萃取方式为分子流超临界萃取；

一次萃取：称取上述重量份数的中药材原料，经挑选、洗净后，加入萃取釜后，将萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ予加热，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在1.5~2小时即90~120分钟，解压并收回气体，收回的萃取物呈浅黄色。

二次萃取：将第一次萃取后的滤渣干燥后加入无水乙醇，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在2小时范围内，解压收回萃取物，用旋转蒸发器将乙醇蒸发，得棕褐色提取物。 

三次萃取：将第二次萃取后的滤渣干燥后加10倍重量的水，用超声波提取机连续三次提取，温度控制在40~45℃之间，时间每次30分钟，得褐色胶状物。 

（2）将步骤（1）萃取出的物质均匀混合，制成母液，并将母液通过真空干燥成固体，同时将所得固体粉碎并过80~120目筛制得中药提取物粉；以及 

（3）将步骤（2）制得的中药提取物粉加入若干药物辅料，制成胶囊剂或片剂或颗粒剂，即可。其中中药提取物粉与药物辅料的重量配比为1:0.5~4。

所述制成胶囊剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的乙醇，制成软材，经过筛制粒、烘干、过筛整粒后，加入适量的硬脂酸镁混合均匀，经装胶囊，即可制得胶囊剂；所述制成片剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的淀粉浆，制成软材，经过筛制粒、烘干、过筛整粒后，加入适量的硬脂酸镁和滑石粉润膏混合均匀，压片，即可制得片剂；所述制成颗粒剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的乙醇，制成软材，经过筛制粒、烘干，即可制得颗粒剂。 

本发明的有益效果为：本发明含有硒、锌等微量元素，可以帮助病人重建免疫功能，并能够调动、激发病人的自身免疫功能，达到增强病人抗癌能力，减少延缓复发转移的发生，巩固手术或放疗效果的临床治疗目的，对无疾病的人体则有强身健体的功效。 

附图说明

下面根据附图对本发明作进一步详细说明。 

图1是发明应用实施例一所述的中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用效果图一； 

图2是发明应用实施例一所述的中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用效果图二；

图3是发明应用实施例二所述的中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用效果图一；

图4是发明应用实施例二所述的中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用效果图二；

图5是发明应用实施例三所述的中药基因信息修复素抑制环磷酰胺导致的骨髓微核情况的效果图；

图6是发明应用实施例三所述的中药基因信息修复素减轻环磷酰胺对白细胞DNA的损伤情况的效果图。

具体实施方式

具体实施例一 

本发明实施例所述的一种中药基因信息修复素，其由以下重量份数的原料制成：黄芪15g、生地19g、熟地20g、猪苓15g、茯苓17g、薏仁22g、泽泻30g、川椒目25g、瓜蒌皮30g、桑皮15g、苏子18g、白芥子20g、车前子18g、葶苈子15g、大戟15g、龙葵20g、白花蛇草22g、守宫20g、冬虫夏草15g以及若干药物辅料；所述药物辅料为分散剂、润湿剂、助流剂和滑石粉润膏；所述分散剂为淀粉，润湿剂为淀粉浆或乙醇，助流剂为硬脂酸镁。

本发明实施例所述的中药基因信息修复素的制备方法，包括以下步骤： 

（1）称取上述重量份数的黄芪、生地、熟地、猪苓、茯苓、薏仁、泽泻、川椒目、瓜蒌皮、桑皮、苏子、白芥子、车前子、葶苈子、大戟、龙葵、白花蛇草、守宫、冬虫夏草，经挑选、洗净后，加入萃取釜中三次萃取，萃取方式为分子流超临界萃取；

一次萃取：称取上述重量份数的中药材原料，经挑选、洗净后，加入萃取釜后，将萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ予加热，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在1.5~2小时即90~120分钟，解压并收回气体，收回的萃取物呈浅黄色。

二次萃取：将第一次萃取后的滤渣干燥后加入无水乙醇，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在2小时范围内，解压收回萃取物，用旋转蒸发器将乙醇蒸发，得棕褐色提取物。 

三次萃取：将第二次萃取后的滤渣干燥后加10倍重量的水，用超声波提取机连续三次提取，温度控制在40~45℃之间，时间每次30分钟，得褐色胶状物。 

（2）将步骤（1）萃取出的物质均匀混合，制成母液，并将母液通过真空干燥成固体，同时将所得固体粉碎并过80~120目筛制得中药提取物粉；以及 

（3）将步骤（2）制得的中药提取物粉加入若干药物辅料，制成胶囊剂或片剂或颗粒剂，即可。其中中药提取物粉与药物辅料的重量配比为1:0.5~4。

制成胶囊剂时，100g提取物粉与75g淀粉混合，用30%乙醇润湿，制成软材，过100目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用100目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁混匀，经装胶囊，可制得胶囊1000粒。 

制成片剂时，100g提取物粉与70g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用80目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁、5g滑石粉混匀，压片，可制得1000片。 

制成颗粒剂时，100g提取物粉用递加稀释法与80g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干1小时，过筛整粒；制成颗粒剂，可分装成1000包。 

具体实施例二 

本发明实施例所述的一种中药基因信息修复素，其由以下重量份数的原料制成：黄芪16g、生地20g、熟地22g、猪苓16g、茯苓19g、薏仁24g、泽泻32g、川椒目27g、瓜蒌皮31g、桑皮16g、苏子19g、白芥子21g、车前子19g、葶苈子16g、大戟16g、龙葵22g、白花蛇草23g、守宫21g、冬虫夏草17g以及若干药物辅料；所述药物辅料为分散剂、润湿剂、助流剂和滑石粉润膏；所述分散剂为淀粉，润湿剂为淀粉浆或乙醇，助流剂为硬脂酸镁。

本发明实施例所述的中药基因信息修复素的制备方法，包括以下步骤： 

（1）称取上述重量份数的黄芪、生地、熟地、猪苓、茯苓、薏仁、泽泻、川椒目、瓜蒌皮、桑皮、苏子、白芥子、车前子、葶苈子、大戟、龙葵、白花蛇草、守宫、冬虫夏草，经挑选、洗净后，加入萃取釜中三次萃取，萃取方式为分子流超临界萃取；

一次萃取：称取上述重量份数的中药材原料，经挑选、洗净后，加入萃取釜后，将萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ予加热，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在1.5~2小时即90~120分钟，解压并收回气体，收回的萃取物呈浅黄色。

二次萃取：将第一次萃取后的滤渣干燥后加入无水乙醇，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在2小时范围内，解压收回萃取物，用旋转蒸发器将乙醇蒸发，得棕褐色提取物。 

三次萃取：将第二次萃取后的滤渣干燥后加10倍重量的水，用超声波提取机连续三次提取，温度控制在40~45℃之间，时间每次30分钟，得褐色胶状物。 

（2）将步骤（1）萃取出的物质均匀混合，制成母液，并将母液通过真空干燥成固体，同时将所得固体粉碎并过80~120目筛制得中药提取物粉；以及 

（3）将步骤（2）制得的中药提取物粉加入若干药物辅料，制成胶囊剂或片剂或颗粒剂，即可。其中中药提取物粉与药物辅料的重量配比为1:0.5~4。

制成胶囊剂时，100g提取物粉与75g淀粉混合，用30%乙醇润湿，制成软材，过100目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用100目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁混匀，经装胶囊，可制得胶囊1000粒。 

制成片剂时，100g提取物粉与70g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用80目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁、5g滑石粉混匀，压片，可制得1000片。 

制成颗粒剂时，100g提取物粉用递加稀释法与80g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干1小时，过筛整粒；制成颗粒剂，可分装成1000包。 

具体实施例三 

本发明实施例所述的一种中药基因信息修复素，其由以下重量份数的原料制成：黄芪17g、生地21g、熟地23g、猪苓17g、茯苓20g、薏仁25g、泽泻33g、川椒目28g、瓜蒌皮33g、桑皮17g、苏子20g、白芥子22g、车前子21g、葶苈子17g、大戟17g、龙葵23g、白花蛇草25g、守宫23g、冬虫夏草20g以及若干药物辅料；所述药物辅料为分散剂、润湿剂、助流剂和滑石粉润膏；所述分散剂为淀粉，润湿剂为淀粉浆或乙醇，助流剂为硬脂酸镁。

本发明实施例所述的中药基因信息修复素的制备方法，包括以下步骤： 

（1）称取上述重量份数的黄芪、生地、熟地、猪苓、茯苓、薏仁、泽泻、川椒目、瓜蒌皮、桑皮、苏子、白芥子、车前子、葶苈子、大戟、龙葵、白花蛇草、守宫、冬虫夏草，经挑选、洗净后，加入萃取釜中三次萃取，萃取方式为分子流超临界萃取；

一次萃取：称取上述重量份数的中药材原料，经挑选、洗净后，加入萃取釜后，将萃取釜、分离釜Ⅰ、分离釜Ⅱ予加热，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在1.5~2小时即90~120分钟，解压并收回气体，收回的萃取物呈浅黄色。

二次萃取：将第一次萃取后的滤渣干燥后加入无水乙醇，设定温度为萃取温度45~50℃；分离釜Ⅰ温度为40~45℃、分离釜Ⅱ温度为30~35℃，开启CO气瓶，流速控制在10~15kg/h，同时对系统加压，当萃取压力达4.5~5.5MPa，分离釜Ⅰ压力达5.5~6.5 MPa，分离釜Ⅱ压力达4.5~5.5MPa时关闭气瓶，萃取时间控制在2小时范围内，解压收回萃取物，用旋转蒸发器将乙醇蒸发，得棕褐色提取物。 

三次萃取：将第二次萃取后的滤渣干燥后加10倍重量的水，用超声波提取机连续三次提取，温度控制在40~45℃之间，时间每次30分钟，得褐色胶状物。 

（2）将步骤（1）萃取出的物质均匀混合，制成母液，并将母液通过真空干燥成固体，同时将所得固体粉碎并过80~120目筛制得中药提取物粉；以及 

（3）将步骤（2）制得的中药提取物粉加入若干药物辅料，制成胶囊剂或片剂或颗粒剂，即可。其中中药提取物粉与药物辅料的重量配比为1:0.5~4。

制成胶囊剂时，100g提取物粉与75g淀粉混合，用30%乙醇润湿，制成软材，过100目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用100目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁混匀，经装胶囊，可制得胶囊1000粒。 

制成片剂时，100g提取物粉与70g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干30分钟，用80目铁筛整粒；加入5g硬脂酸镁、5g滑石粉混匀，压片，可制得1000片。 

制成颗粒剂时，100g提取物粉用递加稀释法与80g淀粉混合，用70%乙醇润湿，制成软材，过80目尼龙筛制粒，70~80℃烘干1小时，过筛整粒；制成颗粒剂，可分装成1000包。 

应用实施例一 

1、实验名称：抑制肿瘤生长试验

肿瘤的传代保存与接种：小鼠肉瘤S180和宫颈癌U14细胞均接种于昆明种小鼠腹腔后，取腹水传代保存。取腹水传代第10日荷瘤小鼠，脱颈椎处死小鼠，消毒腹部皮肤，无菌注射器吸取乳白色腹水，以注射用生理盐水调整肿瘤细胞浓度为1×107/ml，用酒精棉球消毒昆明种小鼠右侧腋下皮肤，于皮下接种上述瘤细胞悬液（0.2ml/只），常规饲养。

2、方法：昆明种小鼠50只，腋下接瘤，次日将荷瘤小鼠随机分为5组，每组10只。分别为模型组、环磷酰胺（CP）组、中药基因信息修复素高、中、低剂量组。小鼠接瘤后第二日开始按表1所示剂量和方式给药，CP组仅于接瘤后第二日给药一次，中药基因信息修复素组每日给药一次，连续10天，给药体积为0.2 ml/10g体重。末次给药24小时后，脱颈椎处死小鼠，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。中药基因信息修复素的0.5%羧甲基纤维素钠溶液由本实验室自行制备，经预实验表明，空白溶剂本身不具有抑瘤活性，对CP抑瘤作用也未见影响，与未处理对照组一致，因此以下动物实验中仅设模型对照组。 

3、给药剂量、途径见表1： 

表1荷瘤小鼠给药剂量和方式

4、实验结果

通过中药基因信息修复素对荷瘤小鼠（接种S180肉瘤、U14宫颈癌肿瘤细胞）治疗研究发现，中药基因信息修复素可以剂量依赖性地抑制小鼠移植性实体瘤的生长（Fig4~1），在口服给药剂量为20 mg/kg时即可显著抑制以上2种肿瘤的生长（P<0.01）。剂量为10 mg/kg时，对S180肉瘤和U14宫颈癌的平均抑瘤率分别为24.4%和34.9%，20 mg/kg时，平均抑瘤率分别达31.5%和43.6%，这表明中药基因信息修复素对实体瘤具有一定的抑制作用。

中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用，如图1、图2所示。 

应用实施例二 

1、实验名称：对化疗药物环磷酰胺的增效作用

2、实验方法：昆明种小鼠接种肉瘤S180和宫颈癌U14细胞，方法同前述，接瘤后次日将荷瘤小鼠随机分为8组，每组10只，分别为模型组、CP组、中药基因信息修复素高、中、低剂量组，中药基因信息修复素高、中、低剂量分别与CP合用组。小鼠接瘤后第二日开始按表2所示剂量和方式给药，CP各组仅于接瘤后第二日给药一次；中药基因信息修复素各组每日给药一次，连续10天；合用组于接瘤后第二日给药CP一次并每日给药中药基因信息修复素溶液一次，连续10天。给药体积为0.2 ml/10g体重。末次给药24小时后，脱颈椎处死小鼠，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率，并称体重。

根据各组抑瘤率，按Burgi修正公式对联合用药组进行疗效判断。 

q值为0.85～1.15为单纯相加，q>1.15为增强，q<0.85为拮抗。 

3、给药剂量、途径见表2： 

表2 荷瘤小鼠给药剂量和方式

Tab 2 Administration dosage and method for tumor-bearing mice

4、实验结果

昆明种小鼠腋下接种小鼠宫颈癌细胞 U14 和肉瘤 S180 细胞造模，观察中药基因信息修复素对环磷酰胺抑瘤作用的影响。中药基因信息修复素口服剂量为 5和10 mg/kg 时，虽然也能表现出一定的抑瘤作用，但并不具有明显的统计学意义，20mg/kg 中药基因信息修复素对 U14 和 S180 细胞的抑瘤率分别是 43.6% 和 31.5%。当中药基因信息修复素与 CP 联合应用时，抑瘤活性明显提高（p<0.01）(Fig. 2)。高剂量的中药基因信息修复素（20 mg/kg）与 CP 有协同作用，低中剂量 (5 和 10 mg/kg) 时作用不太明显。而且高剂量中药基因信息修复素与CP联用组的抑瘤率为 65.7%，要明显高于 CP 单用组（##p<0.01）。

中药基因信息修复素与环磷酰胺联合对小鼠肿瘤的抑制作用，如图3、图4所示。 

应用实施例三 

1、简介：DNA损伤分析采用碱性单细胞电泳分析法 (Single cell micro gel electrophoresis (SCGE)，或称 comet assay)。这是一种测定单个哺乳动物细胞 DNA 损伤的快速、简便和灵敏的方法。实验按Franke等方案进行。环磷酰胺给药后 24 小时，每组取5只小鼠，摘眼球取血，加入肝素防止凝血。取 1.5 g/100ml 的高熔点琼脂糖，滴加在磨砂载玻片上，在4℃冷藏 10 min，取出载玻片加上细胞悬液与0.75 g/100 ml 低熔点琼脂糖混合液（7μl/93μl）在4℃冷藏 10 min；移去盖玻片，将载玻片置于平皿中，轻轻加入预冷的新鲜配置的细胞裂解混合液(PH 10.0)，在4℃下裂解 1.5 h。DNA 碱解旋：将载玻片置于水平电泳槽正极端，并列放置，不留空隙。倒入新配制的电泳缓冲液覆过载玻片胶面 0.25 cm左右，在4℃下放置30min。稳压25V，稳流300ｍＡ，电压、电流可用改变缓冲液面高低来调节，电泳时间为30 min，电泳后将载玻片置于平皿内，缓缓沿壁加入 0.4 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5) 缓冲液或双蒸水，漂洗2次，每次5 min，弃去Tris-HCl或双蒸水，使用PBS 洗干净，并用滤纸吸干水分。每张载玻片加2～3滴染色剂（常用50mg/ml溴化乙锭溶液染色），避光染色1~2 min。荧光显微镜下激发光波长为515~560 nm，滤光片波长为590 nm。未损伤细胞的 DNA 为圆形，而受到损伤的细胞 DNA 带有彗星样尾巴。每只小鼠照片中随机选用100个WBCs，利用CASP软件对DNA损伤情况进行分析。此软件分析结果中Olive tail moment（OTM）与DNA损伤情况呈正相关，因此采用OTM作为DNA损伤评价指标。其中

2、实验名称：骨髓微核实验

3、实验方法：方法参考Deborah方法，略加改动，小鼠骨髓细胞微核实验方法：取小鼠股骨，剪去骨的两端，用0.1 %柠檬酸钠溶液冲洗骨髓，直至骨髓腔发白为止（许重洁，2008）。将骨髓冲洗液2000g，离心5min，弃上清。每个载玻片滴一滴，涂开后于空气中自然干燥，甲醇固定10 min，晾干。参照Schmid 方案（Schmid W，1976），采用吖啶橙荧光显色进行观察（胡永宁等，1985），5μg/ml的AO染液染色10min在倒置荧光显微镜观察微核数，每只计数1000个嗜多染红细胞中有微核的细胞数，计算微核率和微核抑制率。

4、实验结果：在骨髓微核试验中，20 mg/kg和40 mg/kg中药基因信息修复素对CP致骨髓损伤有保护作用，低剂量10 mg/kg与模型组没有差别，而单独给中药基因信息修复素组与正常组比较，也没有差异，说明中药基因信息修复素在高剂量对CP致骨髓损伤有减毒作用，本身不会致骨髓损伤。 

中药基因信息修复素抑制环磷酰胺导致的骨髓微核的情况，如图5所示。 

微核(micronuclei，MN) 是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物作用而产生的。在细胞有丝分裂的间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小在主核1/3 以下；其形成原因主要是由于染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损伤而丢失的整条染色体，在细胞分裂后期仍然遗留在细胞胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核被包在子细胞的胞质内，因比主核小，故称微核。小鼠微核试验是目前检测化学物质导致染色体损伤方便、快速的方法，是遗传毒理实验常用的细胞遗传学方法之一。 

在彗星电泳实验中，正常组细胞形态完整，几乎无彗星尾，OTM值约为2.5，给40 mg/kg CP由于细胞DNA受损，染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损伤而丢失的整条染色体，形成微核，在外加电场力的作用下，微核和细胞核质量不同加速度不同，最终形成彗星状。CP使细胞受损彗尾较长OTM值到达 27.2，给中药基因信息修复素后彗尾有很大程度的减短 OTM 值接近18.2，单独给中药基因信息修复素的与正常组相似，彗尾很短，OTM值约为3.0，与正常组没有显著差异，即中药基因信息修复素的本身不会造成DNA损伤。 

中药基因信息修复素减轻环磷酰胺对白细胞DNA的损伤的情况，如图6所示。 

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。 

Claims (8)

1.一种中药基因信息修复素，其特征在于，其由以下重量份数的原料制成：黄芪15~17、生地19~21、熟地20~23、猪苓15~17、茯苓17~20、薏仁22~25、泽泻30~33、川椒目25~28、瓜蒌皮30~33、桑皮15~17、苏子18~20、白芥子20~22、车前子18~21、葶苈子15~17、大戟15~17、龙葵20~23、白花蛇草22~25、守宫20~23、冬虫夏草15~20以及若干药物辅料；所述药物辅料为分散剂、润湿剂、助流剂和滑石粉润膏。

2.根据权利要求1所述的中药基因信息修复素，其特征在于：所述分散剂为淀粉，润湿剂为淀粉浆或乙醇，助流剂为硬脂酸镁。

3.根据权利要求1或2所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）称取上述重量份数的黄芪、生地、熟地、猪苓、茯苓、薏仁、泽泻、川椒目、瓜蒌皮、桑皮、苏子、白芥子、车前子、葶苈子、大戟、龙葵、白花蛇草、守宫、冬虫夏草，经挑选、洗净后，加入萃取釜中三次萃取；

（2）将步骤（1）萃取出的物质均匀混合，制成母液，并将母液通过真空干燥成固体，同时将所得固体粉碎并过80~120目筛制得中药提取物粉；以及

（3）将步骤（2）制得的中药提取物粉加入若干药物辅料，制成胶囊剂或片剂或颗粒剂，即可。

4.根据权利要求3所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中采用的萃取方式为分子流超临界萃取。

5.根据权利要求4所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的中药提取物粉与药物辅料的重量配比为1:0.5~4。

6.根据权利要求3所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中制成胶囊剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的乙醇，制成软材，经过筛制粒、烘干、过筛整粒后，加入适量的硬脂酸镁混合均匀，经装胶囊，即可制得胶囊剂。

7.根据权利要求3所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中制成片剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的淀粉浆，制成软材，经过筛制粒、烘干、过筛整粒后，加入适量的硬脂酸镁和滑石粉润膏混合均匀，压片，即可制得片剂。

8.根据权利要求3所述的中药基因信息修复素的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中制成颗粒剂的方法为：将中药提取物粉与适量的淀粉混合均匀，混合均匀后加入适量的乙醇，制成软材，经过筛制粒、烘干，即可制得颗粒剂。

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