CN102327489B - 铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及铁皮石斛的新用途,旨在提供铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。本发明揭示了铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用,和基于铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物的制备方法。本发明为幽门螺杆菌感染性慢性萎缩性胃炎的治疗提供了一种新手段。本发明的铁皮枫斗颗粒对慢性萎缩性胃炎有明显的治疗效果,对伴有HP感染患者,促进HP转阴,对HP转阴率达62.50%,疗效显著。
Description
技术领域
本发明涉及铁皮石斛的新的应用,尤其涉及铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。
背景技术
慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)是一种常见病,多发病,以胃黏膜上皮和腺体萎缩,黏膜变薄,黏膜下肌层增厚及肠化生、不典型性增生为特点,病程迁延,常反复发作,严重影响患者的工作和身心健康。更为重要的是,由于CAG肠化生和不典型性增生极易进一步发展成胃癌,因此,于1978年世界卫生组织(WHO)将CAG的胃黏膜萎缩、肠化生和不典型性增生列为胃癌的癌前病变。据统计,在我国CAG的发病率在7.2%以上,居各种胃病之首,发展成胃癌的占2%-8%。目前,全世界胃癌的发病率和死亡率居恶性肿瘤的第二位,居消化道肿瘤的第一位。所以,开发治疗CAG药物的研究,有效控制CAG,不仅具有重大的社会意义,而且还具有重大的经济价值。
CAG病因复杂,现代医学认为CAG与生物因素、理化因素、免疫因素以及遗传因素密切相关。自1983年Warren和Masball首次从胃黏膜中分离幽门螺杆菌(Hp)以来,CAG病因学得到快速发展。同时随着分子生物学、电子胃镜等新技术不断在基础和临床研究中的广泛应用,以及Hp研究的不断深入,使得CAG病因病机研究和临床治疗手段等方面均有了较大进展。
目前研究证明,Hp是CAG主要病因之一,其产生的尿素酶、过氧化物酶、蛋白水解酶、磷脂酶A对胃黏膜均有破坏作用。CagA基因型和VacA基因型Hp菌株还能分泌CagA和VacA细胞毒素,二者均可导致胃黏膜细胞空泡样变性坏死。而且二者还有很强的免疫原性,引起宿主产生抗体和宿主胃黏膜局部产生IL-1、IL-8等多种细胞因子,进而引起炎症反应、黏膜损伤,最终导致黏膜萎缩。鉴此,控制Hp感染,根治Hp是当前治疗CAG的重要手段。目前对于治疗Hp感染方法有多种,抗生素治疗占有重要地位,应用抗生素能很好地达到减轻临床症状和胃黏膜修复的效果。近10年来,临床研究证实,任何单一药物都不能将Hp根除,常常需要两种以上药物联合治疗。在联合治疗方案中,已经建立了标准剂量质子泵抑制剂(PPI)/枸橼酸雷尼替丁(RBC)+两中抗生素的一线治疗方案和PPI+铋剂+两种抗生素的二线治疗方案。随着抗生素的广泛应用,Hp耐药菌株在不断增加,临床研究发现,在用于控制Hp感染的抗生素中,甲硝唑耐药菌株已高达80%,克拉霉素耐药菌株也已接近10%。
近十年来,中医从辨证、治则、方药等方面对CAG进行了广泛而卓有成效的研究。中医药通过保护胃黏膜,改善胃黏膜血液循环,增强胃黏膜上皮细胞的再生和修复功能,提高患者的胃蛋白酶活性,改变胃内环境,促进幽门螺杆菌(HP)转阴,然而,至目前,这类研究仍无突破性进展。因此,研究开发此类药物有其重要临床价值。
发明内容
本发明要解决的问题是,克服现有技术中的不足,提供一种铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。为解决技术问题,本发明的解决方案是:
提供一种铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用。
本发明所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒,该药物通过下述方法制备获得:
(1)将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用,备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为0.67~1.50∶1;
(2)将铁皮枫斗用30倍温水浸泡半小时后热提取3次,每次提取8小时,每次提取后均将提取液离心、过滤,合并3次滤液得提取液;将提取液减压浓缩为60~70℃下时相对密度为1.00~1.20的浓缩液,备用;
(3)将西洋参用70%乙醇回流提取3次,每次3小时,合并提取液;减压回收乙醇,减压浓缩为20~25℃下时相对密度为1.00~1.15的浓缩液,备用;
(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混匀,将葡萄糖置于沸腾床上,喷雾制粒,得到铁皮枫斗颗粒;所述葡萄糖为辅料,其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
本发明提供了铁皮石斛的一种用途,即用于制备铁皮枫斗颗粒应用于治疗HP感染中,为HP感染性慢性萎缩性胃炎的治疗提供一种新手段。
动物预实验研究发现,本发明的铁皮枫斗颗粒能明显增加大鼠胃液量、总酸排出量与胃蛋白酶排出量,促进大鼠胃肠推进运动,软化大便,但不增加湿粪数量,并有镇痛作用。推测,铁皮枫斗颗粒增加大鼠胃液量、总酸排出量与胃蛋白酶排出量这一作用,这不仅有利于能够有效改善胃内微环境,抑制胃内HP生长,进而有效抑制HP分泌蛋白溶解酶、过氧化物酶、磷脂酶A、VagA细胞毒素、VacA空泡毒素,而且还有利于降低抗HP抗体的形成,抑制HP抗体所造成的胃自身免疫性损伤。
人体受试研究发现,铁皮枫斗颗粒对慢性萎缩性胃炎有明显的治疗效果,对伴有HP感染患者,促进HP转阴,对HP转阴率达62.50%,疗效显著。
具体实施方式
石斛为兰科植物,它分铁皮、金钗、马鞭、黄草、铜皮等几十种。同为石斛,同科同属但不同种,其药效和市场价格也往往有着天壤之别。石斛中以铁皮石斛最为稀有名贵,它因外表呈深绿色或铁青色而得名,中药界有“北有人参,南有枫斗”的说法。谚语称:“野山人参壮阳气,像太阳;铁皮石斛滋阴精,似月亮”。
新鲜石斛不能久存,人们经整理、烘焙、加箍、干燥四个步骤将其炮制成螺旋状的干品,即枫斗。铁皮石斛(其幼茎粗壮、粘汁浓厚、纤维较少)加工后被称为铁皮枫斗。铁皮枫斗的外观饱满、坚实,外表光亮、耐泡,由于铁皮石斛多糖分子量较其它品种的石斛高得多,因而滋阴效果最佳,价格也最贵。
【实施例1】铁皮枫斗颗粒(P)的制备
(1)按处方比例称取铁皮枫斗1670g,西洋参1330g,备用。
(2)将铁皮枫斗药材用30倍温水浸泡半小时,热提取3次,每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤,合并3次滤液,得提取液。提取液减压浓缩,浓缩至相对密度为1.00-1.20(60-70℃)的浓缩液,备用。
(3)将西洋参置于多功能提取罐中,用70%乙醇回流提取3次,每次3小时,合并提取液,减压回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.00-1.15(20-25℃)浓缩液,备用。
(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并,混匀,将适量葡萄糖置于沸腾床上,喷雾制粒,制成1000g颗粒,即得。
【实施例2】铁皮枫斗颗粒(L)的制备
(1)按处方比例称取铁皮枫斗1200g,西洋参1800g,备用。
(2)将铁皮枫斗药材用30倍温水浸泡半小时,热提取3次,每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤,合并3次滤液,得提取液。提取液减压浓缩,浓缩至相对密度为1.00-1.20(60-70℃)的浓缩液,备用。
(3)将西洋参置于多功能提取罐中,用70%乙醇回流提取3次,每次3小时,合并提取液,减压回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.00-1.15(20-25℃)浓缩液,备用。
(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并,混匀,将适量葡萄糖置于沸腾床上,喷雾制粒,制成1000g颗粒,即得。
【实施例3】铁皮枫斗颗粒(H)的制备
(1)按处方比例称取铁皮枫斗1800g,西洋参1200g,备用。
(2)将铁皮枫斗药材用30倍温水浸泡半小时,热提取3次,每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤,合并3次滤液,得提取液。提取液减压浓缩,浓缩至相对密度为1.00-1.20(60-70℃)的浓缩液,备用。
(3)将西洋参置于多功能提取罐中,用70%乙醇回流提取3次,每次3小时,合并提取液,减压回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.00-1.15(20-25℃)浓缩液,备用。
(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并,混匀,将适量葡萄糖置于沸腾床上,喷雾制粒,制成1000g颗粒,即得。
以下通过试验实施例证明本发明所述药物铁皮枫斗颗粒在治疗幽门螺杆菌感染中的应用,这些实施例包括临床前动物药效学试验和临床疗效观察试验。
【实验例1】铁皮枫斗颗粒治疗小鼠HP感染的实验研究:
1、实验样品:铁皮枫斗颗粒(P)、铁皮枫斗颗粒(L)、铁皮枫斗颗粒(H)由浙江天皇药业有限公司提供;丽珠胃三联广州丽珠公司产品。
2、实验动物:Wistar大鼠,上海史莱克动物中心提供。SS1螺杆菌菌株,国家疾控馈赠。
3、实验方法:
3.1分组:实验用6周龄的雌雄各半Wistar大鼠120只,体重180-200g,随机分正常对照组,模型组,铁皮枫斗颗粒(P)高、中、低剂量组,铁皮枫斗颗粒(L)组,铁皮枫斗颗粒(H),丽珠胃三联对照组,共8组,每组15只。
3.2造模:除正常对照组外,每组大鼠禁食12小时,给予5.0%的碳酸氢钠2ml灌胃,10分钟后给予从培养基上冲洗下来的HP菌液(1×108cfu)1.5ml灌胃,半小时后恢复饮食,每周感染1次,重复感染5次。
3.3给药:HP重复感染5次造模成功后,正常对照组和模型对照组均给予等体积的生理盐水;铁皮枫斗颗粒(P)高、中、低剂量组分别给予1.2、0.6、0.3g生药/kg的铁皮枫斗颗粒;铁皮枫斗颗粒(L)组给予0.6g生药/kg的铁皮枫斗颗粒(L);铁皮枫斗颗粒(H)组给予0.6g生药/kg的铁皮枫斗颗粒(H);丽珠胃三联阳性对照组给予0.2g/kg丽珠胃三联。每组动物每天给药1次,连续给药4周。
3.4处理分析:于最后1次给药后,动物禁食过夜,乙醚麻醉处死。取出大鼠胃,然后用无菌生理盐水冲洗胃内容物,收集冲洗液,离心,取上清液在微需氧条件下培养1周,培养液涂片,在光学显微镜下观察有无HP细菌生长;另从大鼠胃幽门环部位取5块2×3mm组织,匀浆后行尿素酶活力检测;另沿胃大弯从贲门至胃窦剪5条条形组织,10%甲醛固定,石蜡包埋、切片,行HE染色,观察粘膜炎症情况。
4、结果:
4.1对HP生长的影响:
铁皮枫斗颗粒灌胃4周后,取胃内容物按上述方法体外培养检测;结果发现,与模型组比较,铁皮枫斗颗粒处理各组HP阳性率明显下降,其中,高剂量组与丽珠胃三联阳性对照组接近,该结果与尿素酶检测的结果基本一致,结果见表1。
表1.铁皮枫斗颗粒对HP生长情况的影响
注:*与模型组比较,p<0.05;**与模型组比较,p<0.01。
4.2对胃炎模型炎症的影响:
实验结束后,将上述切片置于光学显微镜下,观察并比较每组动物胃组织炎症情况。炎症情况检查方法:采用半定量法,即在低倍显微镜下观察胃粘膜,然后在胃窦部取10个视野,参照1994年美国休士顿胃炎诊断标准,按炎症细胞浸润程度分为0-3七个级别。具体分级方法为:0级:无炎症;0.5级:镜下观察炎症介于0与1之间;1级:在胃小凹区或固有腺底部可见多个慢性炎症细胞浸润;1.5级:镜下观察炎症介于1-2之间;2级:在胃小凹至粘膜肌层均有较多炎症细胞浸润;2.5级:镜下观察炎症介于2与3之间;3级:胃粘膜内可见成堆炎症细胞集聚灶。
研究证实,按照本法经5次HP反复感染后,模型组感染成功率达86.67%,结果表明,采用本法建造HP感染模型方法可行;在此基础上的研究发现,铁皮枫斗颗粒各组经4周的治疗,胃粘膜水肿、炎症细胞浸润情况均明显改善,炎症指数较模型组亦有不同程度的下降,结果如下表2。
表2.铁皮枫斗颗粒对大鼠HP感染性胃炎炎症的影响
注:**与模型组比较,p<0.01。
5、结论:
铁皮枫斗颗粒能够显著抑制HP在实验大鼠胃内生长,并能显著改善由此引起的胃粘膜炎症反应,高剂量铁皮枫斗颗粒作用效果与丽珠胃三联相当,结果提示,本品对HP感染相关疾病如胃炎、慢性萎缩性胃炎或胃溃疡具有潜在的治疗价值。
【实验例2】铁皮枫斗颗粒治疗慢性萎缩性胃炎伴HP感染的临床研究:
1、研究设计方法及分组:采用随机数字表随机平行对照设计,随机分铁皮枫斗颗粒试验组和养胃舒颗粒(合肥神鹿双鹤药业有限公司产品)对照组,开放(非盲法)试验,每组各40例,共80例,观察12周疗程后对慢性萎缩性胃炎及HP的疗效。
2、给药方案:铁皮枫斗颗粒组服用铁皮枫斗颗粒:3g/包,2包/次,3次/日,于早、中、晚三餐用温开水冲服;对照组服用养胃舒颗粒:10g/袋,1袋/次,2次/日,于早、晚餐时用温开水冲服。两组治疗12周为一疗程,治疗观察一个疗程。治疗期间,禁止使用影响疗效评价的药物。
3、观察指标:铁皮枫斗颗粒与养胃舒颗粒对照,观察对慢性萎缩性胃炎及HP的疗效。重点观察指标为CAG临床症状,胃粘膜胃镜检查,胃粘膜病理检查及HP检查等。
4、疗效评价标准:
临床综合疗效评价标准:参照《中药新药临床研究指导原则》2002年5月第1版125-129页,慢性萎缩性胃炎疗效评定标准(参考1989年11月中国中西医结合学会消化系统专业委员会制定的疗效评定标准):(1)临床痊愈:临床症状、体征消失,胃镜复查粘膜慢性炎症明显好转达轻度,病理组织学检查证实腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生恢复正常和消失;(2)显效:临床主要症状、体征消失,胃镜复查粘膜慢性炎症好转,病理组织学检查证实腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生恢复正常或减轻2个级别;(3)有效:主要症状、体征明显减轻,胃镜复查粘膜病变范围缩小1/2以上,病理组织学检查证实慢性炎症减轻1个级度以上,腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生减轻;(4)无效:达不到上述有效标准,或恶化者。
HP疗效评价标准:HP检查采用尿素酶法和14C呼气试验法。双法检查结果一致方可判断为阴性或阳性。双法检查治疗前均为阳性,治疗后均为阴性,判断为阳转阴。
5.结果:
5.1对CAG临床综合疗效:
经12周治疗,患者的气虚、阴虚中医症候明显改善,CAG临床主要症状减轻或消失,胃粘膜萎缩等病理改变显著改善或消失,铁皮枫斗颗粒组临床综合总有效率为97.5%,养胃舒对照组临床综合总有效率为85.7%,两组比较,铁皮枫斗颗粒组显著高于养胃舒颗粒对照组(P<0.01),结果见下表3。
表3.铁皮枫斗颗粒及养胃舒颗粒对慢性萎缩性胃炎临床综合疗效比较
Ridit检验,铁皮枫斗颗粒组与养胃舒颗粒对照组比较,p<0.01。
5.2对HP疗效:
治疗12周后,采用尿素酶法和14C呼气试验法两种方法检查HP感染状况,结果发现,于治疗前,铁皮枫斗颗粒组有16例为HP阳性,治疗后,HP阳性患者仅剩6例,有10例患者HP阳转阴,阳转阴占62.50%;养胃舒颗粒组,治疗后HP转阴例数3例/16例,占18.75%。经X2检验,铁皮枫斗颗粒组治疗后HP转阴比例显著高于对照组(P<0.05),结果见下表4。
表4.铁皮枫斗颗粒及养胃舒颗粒对CAG伴HP感染疗效比较
Ridit检验,铁皮枫斗颗粒组与养胃舒颗粒对照组比较,p<0.05。
5.3对CAG胃粘膜萎缩改善情况:12周治疗后胃镜检查发现,铁皮枫斗颗粒对CAG的粘膜萎缩改善率达58.97%,养胃舒颗粒对照组为21.43%;活组织检查发现,铁皮枫斗颗粒对CAG的粘膜萎缩改善率达65.79%,养胃舒颗粒对照组为46.43%;镜检及活检同时改善的,铁皮枫斗颗粒对CAG的粘膜萎缩改善率达47.37%,养胃舒颗粒对照组为17.86%;铁皮枫斗颗粒组显著优于对照组(p<0.05)。
6、结论:
6.1铁皮枫斗颗粒对CAG临床综合疗效达97.5%,疗效显著。
6.2铁皮枫斗颗粒对CAG伴HP感染有转阴效果,转阴率达62.50%,对伴有HP感染的CAG以及慢性胃炎等相关疾病有一定的治疗价值。
Claims (1)
1.铁皮石斛在制备治疗幽门螺杆菌感染的药物中的应用,其特征在于,所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒,该药物通过下述方法制备获得:
(1)将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用,备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为0.67~1.50∶1;
(2)将铁皮枫斗用30倍温水浸泡半小时后热提取3次,每次提取8小时,每次提取后均将提取液离心、过滤,合并3次滤液得提取液;将提取液减压浓缩为60~70℃下时相对密度为1.00~1.20的浓缩液,备用;
(3)将西洋参用70%乙醇回流提取3次,每次3小时,合并提取液;减压回收乙醇,减压浓缩为20~25℃下时相对密度为1.00~1.15的浓缩液,备用;
(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混匀,将葡萄糖置于沸腾床上,喷雾制粒,得到铁皮枫斗颗粒;所述葡萄糖为辅料,其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量。
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