CN105288278A - 一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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CN105288278A CN201510737696.0A CN201510737696A CN105288278A CN 105288278 A CN105288278 A CN 105288278A CN 201510737696 A CN201510737696 A CN 201510737696A CN 105288278 A CN105288278 A CN 105288278A
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Abstract

本发明涉及发酵微生物中药制剂领域,具体来说是一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用。发酵制剂将发酵提取物侧耳在中药原料中发酵所得,发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10;所述侧耳为Pleurotus?sp,已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCC?No.9060。本发明制剂具有杀灭肿瘤细胞的功效和扶正固本、综合调理的作用。而且,由于所使用的原料药都是传统的中药,其用量均在药典和国家标准范围之内,无毒无副作用,安全可靠。

Description

一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及发酵微生物中药制剂领域,具体来说是一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用。
背景技术
目前临床上治疗恶性肿瘤是威胁人类健康的大敌,“谈癌色变”不仅是一般人的心里状态,而且也是许多医学工作者攻克癌症的严重思想障碍,随着医学科学的发展,在许多癌症工作者的艰苦努力之下,虽然有不少的癌症病人被治愈了,打破了那种是“癌症治不好,治好不是癌”的悲观论点,但是由于恶性肿瘤的病因和发病机理尚没有彻底阐明,使预防和治疗措施至今仍未能从根上得到解决。从而历来被称为治疗癌症之把“刀”的手术、放射治疗、化学药物治疗,现在仍是治疗癌症的中药手段。
中医肿瘤学者多强调在积极治疗恶性肿瘤的同时。应以认为本,注重癌症患者生存质量的提高和生存期的延长突出中医辨证理论的特色。
发明内容
本发明针对上述问题,提供一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法与应用。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
一种发酵微生物中药制剂,将发酵提取物侧耳在中药原料中发酵所得,所述中药原料按重量计:仙鹤草15-60g、红花15-50g、牡丹皮25-60g、三七15-45g、半枝莲20-60g、芦根20-50g、黄岑30-60g、槐花30-60g、龙胆草25-55g、黄柏30-60g、青蒿20-50g、天花粉30-60g、射干20-50g、地骨皮30-60g、牛蒡子30-60g、益母草30-60g、茜草25-55g、虎杖25-55g、地龙20-50g、大枣30-60g、柏子仁25-55g、山茱萸30-60g、五味子30-60g、补骨脂30-60g、枳实30-60g、川楝子20-50g、槟榔20-50g、合欢花30-60g、川贝母30-60g、石菖蒲30-60g、瓜蒌皮30-60g、茯苓30-60g、猪苓30-60g、广藿香30-60g、白巩20-50g、菟丝子30-60g、鸡血膝25-55g、蜈蚣20-50g、升麻30-60g;其中,发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10;
所述侧耳为Pleurotussp.,已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060。
所述中药原料按重量计:仙鹤草30g、红花20g、牡丹皮30g、三七15g、半枝莲30g、芦根20g、黄岑30g、槐花30g、龙胆草25g、黄柏30g、青蒿20g、天花粉30g、射干20g、地骨皮30g、牛蒡子30g、益母草30g、茜草25g、虎杖25g、地龙20g、大枣30g、柏子仁25g、山茱萸30g、五味子30g、补骨脂30g、枳实30g、川楝子20g、槟榔20g、合欢花30g、川贝母30g、石菖蒲30g、瓜蒌皮30g、茯苓30g、猪苓30g、广藿香30g、白巩20g、菟丝子30g、鸡血膝25g、蜈蚣20g、升麻30g。
一种发酵微生物中药制剂的制备方法,按以下步骤:
(1)按重量计,将仙鹤草15-60g、红花15-50g、牡丹皮25-60g、三七15-45g、半枝莲20-60g、芦根20-50g、黄岑30-60g、槐花30-60g、龙胆草25-55g、黄柏3060g、青蒿20-50g、天花粉30-60g、射干20-50g、地骨皮30-60g、牛蒡子30-60g、益母草30-60g、茜草25-55g、虎杖25-55g、地龙20-50g、大枣30-60g、柏子仁25-55g、山茱萸30-60g、五味子30-60g、补骨脂30-60g、枳实30-60g、川楝子20-50g、槟榔20-50g、合欢花30-60g、川贝母30-60g、石菖蒲30-60g、瓜蒌皮30-60g、茯苓30-60g、猪苓30-60g、广藿香30-60g、白巩20-50g、菟丝子30-60g、鸡血膝25-55g、蜈蚣20-50g、升麻30-60g的中药原料混合,粉碎至60目,待用;
(2)将发酵提取物侧耳接种到上述混合中药原料中发酵,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述侧耳(Pleurotussp.),已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060,保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述步骤(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10的量混合,并在35-65℃、PH在5.0-6.2下发酵1-7天。其中,发酵提取物侧耳是将其接于PDA固体培养基中,在20-35℃、培养70-120小时,得发酵提取物侧耳;而后将单菌落再接种于中药原料混合物中。
所述发酵产物可制成散剂、片剂、丸剂、胶丸、胶囊剂、乳剂、糖浆或口服液。
一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂的应用,发酵制剂作为制备预防或治疗抗肿瘤药物中的应用。
所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、脑癌、肝癌或肾癌。
本发明的抗肿瘤中药微生物发酵制剂是将菌株在中药混合物中发酵,其是多酶反应体的酶解工艺,在常温、常压、无菌,PH在5.0-6.2之间,湿度80-90%的环境中60-65℃进行烘干,保证产物的细胞活性,以酸至酸,达到防病治病强身健体的目的,制剂的有效成分是传统工艺的4-28倍,活性多糖分子量的大小决定其药理活性,只有分子量在1万到10万之间的活性多糖才具有极强药理的活性。
本发明所需原料、设备均为市购商品。
本发明的有益效果在于:
1.具有杀灭肿瘤细胞的功效和扶正固本、综合调理的作用。而且,由于所使用的原料药都是传统的中药,其用量均在药典和国家标准范围之内,无毒无副作用,安全可靠。
2、利用发酵菌生物技术,无毒副作用,无依赖性。有效成分全部破壁分解成小分子,并以氨基酸、亚麻酸、多肽等形式存在,具有细胞活性的小分子活性蛋白对人体的八大系统均有修复和改善的显著效果。
3、有效成分含有脂溶性成分,起效快,通过粘膜吸收在细胞内血液中发挥作用。有效成分可激活自我免疫修复细胞核血液中的修复因子,促使机体恢复原有生理功能。有效成分可锁住生物细胞血液,真正供给人体带有正能量的细胞核血液细胞多肽类活性物质。
具体实施方式
为了进一步说明本发明,结合以下实施例具体说明:
一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂,将发酵提取物侧耳在中药原料中发酵所得,所述中药原料按重量计:仙鹤草15-60g、红花15-50g、牡丹皮25-60g、三七15-45g、半枝莲20-60g、芦根20-50g、黄岑30-60g、槐花30-60g、龙胆草25-55g、黄柏3060g、青蒿20-50g、天花粉30-60g、射干20-50g、地骨皮30-60g、牛蒡子30-60g、益母草30-60g、茜草25-55g、虎杖25-55g、地龙20-50g、大枣30-60g、柏子仁25-55g、山茱萸30-60g、五味子30-60g、补骨脂30-60g、枳实30-60g、川楝子20-50g、槟榔20-50g、合欢花30-60g、川贝母30-60g、石菖蒲30-60g、瓜蒌皮30-60g、茯苓30-60g、猪苓30-60g、广藿香30-60g、白巩20-50g、菟丝子30-60g、鸡血膝25-55g、蜈蚣20-50g、升麻30-60g;其中,侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10;
所述侧耳为Pleurotussp.,已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060。
所述发酵提取物侧耳的制备方法为:将侧耳接于PDA固体培养基,在20-35℃、培养70-120小时,得到侧耳纯培养单菌落,即侧耳的发酵提取物。
一种发酵微生物中药制剂的制备方法
(1)按重量计,将中药原料混合,待用;
(2)将发酵提取物侧耳接种到上述混合中药原料中发酵,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述侧耳(Pleurotussp.),已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060,保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述步骤(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10的量混合,并在35-65℃、PH在5.0-6.2下发酵1-7天。其中,发酵提取物侧耳是将其接于PDA固体培养基中,在20-35℃、培养70-120小时,得发酵提取物侧耳;而后将单菌落再接种于中药原料混合物中。
所述发酵产物可制成散剂、片剂、丸剂、胶丸、胶囊剂、乳剂、糖浆或口服液。
药制剂作为制备预防或治疗抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、脑癌、肝癌、肾癌等。
实施例1:
按上述方法制备的中药复方散剂:
(1)按重量计,将各原料药的重量配比如下:仙鹤草30g、红花20g、牡丹皮30g、三七15g、半枝莲30g、芦根20g、黄岑30g、槐花30g、龙胆草25g、黄柏30g、青蒿20g、天花粉30g、射干20g、地骨皮30g、牛蒡子30g、益母草30g、茜草25g、虎杖25g、地龙20g、大枣30g、柏子仁25g、山茱萸30g、五味子30g、补骨脂30g、枳实30g、川楝子20g、槟榔20g、合欢花30g、川贝母30g、石菖蒲30g、瓜蒌皮30g、茯苓30g、猪苓30g、广藿香30g、白巩20g、菟丝子30g、鸡血膝25g、蜈蚣20g、升麻30g混合粉碎至60目,待用;
(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:6的量混合,并在60℃、PH在5.0-6.2下发酵7天,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述发酵提取物侧耳的制备方法为:将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基,在28℃、培养96小时,得到侧耳纯培养单菌落,即侧耳的发酵提取物。
实施例2:
按上述方法制备的中药复方散剂:
(1)按重量计,将各原料药的重量配比如下:仙鹤草15g、红花15g、牡丹皮25g、三七20g、半枝莲20g、芦根20g、黄岑30g、槐花30g、龙胆草25g、黄柏30g、青蒿20g、天花粉30g、射干20g、地骨皮30g、牛蒡子30g、益母草30g、茜草25g、虎杖25g、地龙20g、大枣30g、柏子仁25g、山茱萸30g、五味子30g、补骨脂30g、枳实30g、川楝子20g、槟榔20g、合欢花30g、川贝母30g、石菖蒲30g、瓜蒌皮30g、茯苓30g、猪苓30g、广藿香30g、白巩20g、菟丝子30g、鸡血膝25g、蜈蚣20g、升麻30g混合,粉碎至60目,待用;
(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:8的量混合,并在50℃、PH在5.0-6.2下发酵5天,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述发酵提取物侧耳的制备方法为:将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基,在28℃、培养96小时,得到侧耳纯培养单菌落,即侧耳的发酵提取物。
实施例3:
按上述方法制备的中药复方散剂:
(1)按重量计,将各原料药的重量配比如下:仙鹤草40g、红花30g、牡丹皮20g、三七30g、半枝莲30g、芦根50g、黄岑40g、槐花50g、龙胆草50g、黄柏40g、青蒿30g、天花粉60g、射干40g、地骨皮50g、牛蒡子40g、益母草40g、茜草50g、虎杖30g、地龙50g、大枣50g、柏子仁40g、山茱萸60g、五味子40g、补骨脂50g、枳实50g、川楝子30g、槟榔40g、合欢花50g、川贝母40g、石菖蒲50g、瓜蒌皮40g、茯苓30g、猪苓40g、广藿香60g、白巩40g、菟丝子60g、鸡血膝55g、蜈蚣50g、升麻60g混合,粉碎至60目,待用;
(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:10的量混合,并在65℃、PH在5.0-6.2下发酵6天,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述发酵提取物侧耳的制备方法为:将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基,在28℃、培养96小时,得到侧耳纯培养单菌落,即侧耳的发酵提取物。
试验例:
本发明的中药复方散剂配成10%的混悬液,冰箱保存,用前振摇混匀。
瘤株:Heps、S180、ESC均为市购产品。
动物:昆明种小鼠,由沈阳药科大学和中国药科大学动物室提供。
方法:参照文献进行,
文献1:徐淑云主编。药理实验方法学,北京:人民卫生出版社1982,1115-1125.
文献2:中国肿瘤药理及化疗学术会议:抗癌药物体内药效试验规程,内部资料。1989.
1、中药复方散剂对Heps实体瘤的作用
结果如表1所示,本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性Heps实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到59.54%,低剂量最低为33.09%。经统计学处理后其P值均小于0.05。
表1.本发明的中药复方散剂口服对小鼠肝癌实体瘤的作用
2、中药复方散剂对S180实体瘤的作用
结果如表2所示,本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性S180实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到62.36%,低剂量最低为30.46%。经统计学处理后其P值均小于0.05。
表2.复方散剂口服对小鼠S180实体瘤的作用
3、中药复方散剂对ESC实体瘤的作用
结果如表3所示,本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性ESC实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到62.84%,低剂量最低为41.98%。经统计学处理后其P值均小于0.01。
表3.复方散剂口服对小鼠艾氏实体瘤的作用
4、急性毒性实验
取小鼠20只,雌雄各半。口服5克/公斤(水)本发明的中药复方散剂后连续观察7天无一死亡。表明了本发明的中药复方散剂的LD50在5克/公斤以上。
此外,我们还初步观察了本发明的中药复方散剂口服对EAC腹水型的作用。结果表明,本发明的中药复方散剂对腹水型无效。
综上所述,通过以上研究,结果表明,本发明的中药复方散剂口服4、2、1克/公斤连续给药9天,对上述三种瘤株均有明显的抗癌活性。抑制率可达到或超过国内规定标准(30%),说明本发明的中药复方散剂有明显的抗肿瘤作用。急性毒性实验证明本发明的中药复方散剂口服的LD50大于5克/公斤,说明毒性较小。据目前临床观察也表明本发明的中药复方散剂对多种恶性肿瘤有较好的疗效。值得对本发明的中药复方散剂进行深入的临床和制剂研究,以便推广应用。
5、临床实验
患者均持各地各大医院诊断报告及X光、CT片诊断报告、病理切片报告、镜检报告,疗效观察500例,经半年的观察,对肺癌、肠癌、胃癌、食道癌等其他癌症、病状有不同程度的改善,患者服用后,饭量及体重增加,精神好转,经用药前后对照观察,本发明的复方散剂具有抗癌功能,使瘤体控制、提高肌体免疫功能的作用。
本复方散剂治疗肺癌249例,病状改善,使癌体前后对比稳定和不同程度的缩小,此类临床疗效比较显著。患者服药后,精神明显好转、饭量增加、体重增多、疼痛减轻、咳嗽呼吸困难好转,多由卧床不起到能够参加室外活动,还有的能参加正常工作,其治疗效果如表4所示。
表4.复方散剂治疗分析表
治疗总抑瘤率为82.8%,总有效率为96.5%。
备注:其中有39例病人因记录地址不清未随访,因此未做统计。
结果证明:复方散剂试用临床观察,对中晚期癌症患者,具有明显的抑制作用,能抗癌、瘤体缩小。或消灭或使癌细胞溶化,从水中消灭或从血液中消灭。能延长生命,无毒副作用,用药方便,安全可靠。
检测侧耳(Pleurotussp.)的DNA:
(1)DNA提取
用FastDNASPIN土壤DNA提取试剂盒(MPBiomedicals,SantaAna,CA)提取真菌DNA。
(2)PCR扩增
PCR扩增引物:
ITS1:5’CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA3′
ITS4:5’TCCTCCGCTTATTGATATGC3′
PCR扩增程序
三、测序
将PCR产物委托上海生物工程有限公司测序
基因序列结果:
CTCTCCGGGGGGAACCTTGGGGAGGGTCCTTTAATGATTCCCTTAGGGAGTGGTGGTGGCCTTTAGGGGCCAGGTCCCGGTTCCATAGTTTTTTCACCCCCCGTGGACTTTTGAAAGGTTTGGGGAATTGTTTTTCCAATTGTTCAGATTGGTTTGCTGGGATTTAAACGTCTCGGTGTGACTACGCAGTCTATTTACTTACCCCCCCCCAAAGGAAGTTTTCGAAAGTCCATTAAAGGGCCCTGGGCCTTTTAACCCTTAATCCAACTTTCACCAAGGATTTTTTGGCTTTTGCCATGAAGGAAGAAGCAAGGAAAATGGGTAAAGAAAGGGAAATGCCGAAATCCAGGGATCCTTGGATTCTTGGACCCCCCCTGCCCCCCCTGGTATTTCGGGGGGCCAGCCCGGTTGGGGGGCCATTAATTTTTCAAATCCCTTTGGTTTTTTTCCAATTGTGATGTTTGGATTGTTGGGGGCTGCTGGCCTTGACAGGTCGGCTCCTCTTAAATGCATTAGCAGGACTTCTCATTGCCTCTGCGCATGATGTGATAATTATCACTCATCAATAGCACGCATGAATAGAGTCCAGCTCTCTAATCGTCCGCAAGGACAATTTGACAATTGACCTCAAATCAGGTAGACAGCCGGATTCT
四、比对结果
经NCBI(NationalCenterofBiotechnologyInformation[www.ncbi.nlm.nih.gov])数据库比对,结果如下:
PleurotusostreatusisolateNW42618SribosomalRNAgene(登录号:EU622251.1)
Pleurotusostreatus即,侧耳。

Claims (8)

1.一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂,其特征在于:将发酵提取物侧耳在中药原料中发酵所得,所述中药原料按重量计:仙鹤草15-60g、红花15-50g、牡丹皮25-60g、三七15-45g、半枝莲20-60g、芦根20-50g、黄岑30-60g、槐花30-60g、龙胆草25-55g、黄柏30-60g、青蒿20-50g、天花粉30-60g、射干20-50g、地骨皮30-60g、牛蒡子30-60g、益母草30-60g、茜草25-55g、虎杖25-55g、地龙20-50g、大枣30-60g、柏子仁25-55g、山茱萸30-60g、五味子30-60g、补骨脂30-60g、枳实30-60g、川楝子20-50g、槟榔20-50g、合欢花30-60g、川贝母30-60g、石菖蒲30-60g、瓜蒌皮30-60g、茯苓30-60g、猪苓30-60g、广藿香30-60g、白巩20-50g、菟丝子30-60g、鸡血膝25-55g、蜈蚣20-50g、升麻30-60g;其中,发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10;
所述侧耳为Pleurotussp.,已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060。
2.按权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂,其特征在于:所述中药原料按重量计:仙鹤草30g、红花20g、牡丹皮30g、三七15g、半枝莲30g、芦根20g、黄岑30g、槐花30g、龙胆草25g、黄柏30g、青蒿20g、天花粉30g、射干20g、地骨皮30g、牛蒡子30g、益母草30g、茜草25g、虎杖25g、地龙20g、大枣30g、柏子仁25g、山茱萸30g、五味子30g、补骨脂30g、枳实30g、川楝子20g、槟榔20g、合欢花30g、川贝母30g、石菖蒲30g、瓜蒌皮30g、茯苓30g、猪苓30g、广藿香30g、白巩20g、菟丝子30g、鸡血膝25g、蜈蚣20g、升麻30g。
3.一种权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法,其特征在于:
(1)按重量计,将仙鹤草15-60g、红花15-50g、牡丹皮25-60g、三七15-45g、半枝莲20-60g、芦根20-50g、黄岑30-60g、槐花30-60g、龙胆草25-55g、黄柏30-60g、青蒿20-50g、天花粉30-60g、射干20-50g、地骨皮30-60g、牛蒡子30-60g、益母草30-60g、茜草25-55g、虎杖25-55g、地龙20-50g、大枣30-60g、柏子仁25-55g、山茱萸30-60g、五味子30-60g、补骨脂30-60g、枳实30-60g、川楝子20-50g、槟榔20-50g、合欢花30-60g、川贝母30-60g、石菖蒲30-60g、瓜蒌皮30-60g、茯苓30-60g、猪苓30-60g、广藿香30-60g、白巩20-50g、菟丝子30-60g、鸡血膝25-55g、蜈蚣20-50g、升麻30-60g的中药原料混合,待用;
(2)将发酵提取物侧耳接种到上述混合中药原料中发酵,所得发酵物即为发酵微生物中药制剂;
所述侧耳(Pleurotussp.),已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏编号为CGMCCNo.9060,保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4.按权利要求3所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)将发酵提取物侧耳与中药原料混合物的重量份数比为1:5-10的量混合,并在35-65℃下发酵1-7天。
5.按权利要求3或4所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法,其特征在于:所述发酵提取物侧耳是将其接于PDA固体培养基中,在28-35℃、培养70-120小时,得发酵提取物侧耳。
6.按权利要求3所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法,其特征在于:所述发酵微生物中药制剂可制成散剂、片剂、丸剂、胶丸、胶囊剂、乳剂、糖浆或口服液。
7.一种权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的应用,其特征在于:发酵制剂作为制备预防或治疗抗肿瘤药物中的应用。
8.按权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的应用,其特征在于:所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、脑癌、肝癌或肾癌。
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