CN104042973A

CN104042973A - 一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用

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Publication number: CN104042973A
Application number: CN201410207183.4A
Authority: CN
Inventors: 李兴尧; 李业明
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-05-15
Filing date: 2014-05-15
Publication date: 2014-09-17
Also published as: US20170165307A1; US10987389B2; WO2015172618A1

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用，由中药原料药与发酵提取物掺混后制成，所述原料药组成为：黄药子、穿山甲、大黄、牡蛎、僵蚕、昆布、夏枯草、川芎、半枝莲、双花、白花蛇舌草、天花粉、知母、黄芩、当归、补骨脂、灵芝、薏苡仁；所述的发酵提取物侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060。本发明具有杀灭肿瘤细胞的功效和扶正固本、综合调理的作用。而且，由于所使用的原料药都是传统的中药，其用量均在药典和国家标准范围之内，无毒无副作用，安全可靠。

Description

一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药制剂领域，具体来说涉及一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用。

背景技术

人体肿瘤是正常细胞在致癌因素的作用下致使细胞恶变而形成的。细胞不受调控快速增殖，低分化或高分化癌细胞浸润和扩散破坏周围正常细胞并发生近处和远处转移，直至重要器官衰竭死亡。

目前世界上发现许多种癌细胞，全世界每年发现患有恶性肿瘤的患者有几百万人次，并呈上升趋势，癌症严重威胁着人类的健康。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种活血化瘀、软坚散结、息风止痛、消痛排脓、攻下积带、收敛固涩的抗肿瘤中药微生物发酵制剂及其制备方法和应用。利用传统中药和现代制剂技术相结合的方式，抑制并杀死肿瘤细胞，减少癌症患者的痛苦，有效延长他们的生存时间。

一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂，由中药原料药与发酵菌掺混后制成，所述原料药组成及重量份数为：黄药子15-40份、穿山甲2-30份、大黄5-35份、牡蛎2-30份、僵蚕5-40份、昆布5-25份、夏枯草5-30份、川芎2-20份、半枝莲2-30份、双花2-30份、白花蛇舌草8-40份、天花粉2-30份、知母2-40份、黄芩2-35份、当归2-35份、补骨脂8-30份、灵芝2-30份、薏苡仁2-30份；

所述发酵提取物的重量份数为：15-40份；

所述发酵提取物为侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日包藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060。

进一步地，其原料药组成及重量份数为：黄药子25份、穿山甲10份、大黄15份、牡蛎10份、僵蚕15份、昆布12份、夏枯草15份、川芎10份、半枝莲15份、双花15份、白花蛇舌草20份、天花粉15份、知母12份、黄芩15份、当归15份、补骨脂20份、灵芝15份、薏仁15份；

所述发酵提取物的重量份数为：25份。

所述发酵提取物侧耳的制备方法为：将侧耳接于PDA固体培养基，在20-35℃、培养70-120小时，得到侧耳纯培养单菌落，即侧耳的发酵提取物。

所述中药制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和/或口服液。

所述中药制剂为散剂。

所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取各原料药组分，研磨成细粉；

(2)称取与步骤(1)中匹配的发酵提取物；

(3)将步骤(1)与步骤(2)中所得掺混后，既得。

所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的应用：在治疗肿瘤疾病的药物中应用。

所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、脑癌、肝癌、肾癌等。

本发明的抗肿瘤中药微生物发酵制剂是参照君臣佐使的中药组方原则所设计的现代中药。采用的原料药的功效如下所示：

黄药子性平，味苦。含黄药子素A-H、8-表黄药子素E乙酸酯、薯蓣皂甙元、D-山梨糖醇、2，4，6，7-四羟基-9-10-二氢菲、2，4，5，6-四羟基菲、4-羟基-(2-反-3'，7'-dimethylocta-2'，6'-辛二烯基)-6-甲氧基苯乙酮、4，6-二羟基-2-O-(4'-羟丁基)苯乙酮、二氢薯蓣碱等。《本草经疏》中记载：黄药根，解少阴之热，相火自不妄动而喉痹瘳矣。蛇犬咬毒，亦血分受热所伤故也。苦寒能凉血，得土气之厚者，又能解百毒也。

穿山甲为鲮鲤科动物穿山甲的鳞片，善于走窜、行散。有活血通络、消肿排脓、祛风止痛、通乳等功能。

大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。性味：苦，寒。归经：脾、胃、大肠、肝、心包经。功效：攻积滞；清湿热；泻火；凉血；祛瘀；解毒。主治：实热便秘；热结胸痞；湿热泻痢；黄疸；淋病；水肿腹满；小便不利；目赤；咽喉肿痛；口舌生疮；胃热呕吐；吐血；咯血；衄血；便血；尿血；蓄血；经闭；产后瘀滞腹痛；症瘕积聚；跌打损伤；热毒痈疡；丹毒；烫伤。大黄中具有致泻作用的主要成分是蒽醌甙及双蒽酮甙，其泻下作用较其相应甙元作用为强.蒽醌甙有：大黄酚-1-葡萄糖甙或大黄酚甙、大黄素-6-葡萄糖甙、芦荟大黄素-8-葡萄糖甙、大黄素甲醚葡萄糖甙、大黄酸-8-葡萄糖甙；掌叶大黄中还含有大黄素双葡萄糖甙、芦荟大黄素双葡萄糖甙、大黄酚双葡萄糖甙。双蒽酮甙有番泻甙A、B、C、D、E、F。大黄的致泻效力与其中的结合性大黄酸含量成正比，游离的蒽醌类成分无致泻作用。番泻甙的泻下作用较蒽醌甙为强，但含量则远较后者为少。游离型蒽醌类主要有：大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。大黄又含有大黄鞣酸及其相关物质,如没食子酸、儿茶精、大黄四聚素。

牡蛎为牡蛎科动物近江牡蛎、长牡蛎及大连湾牡蛎、密鳞牡蛎等的贝壳。性味归经：咸，微寒；归肝、胆、肾经。功能：平肝息风药；养阴药。重镇安神，潜阳补阴，软坚散结，收敛固涩。用于惊悸失眠，眩晕耳鸣，瘰疬痰核，徵瘕痞块，自汗盗汗，遗精崩带，胃痛泛酸。煅牡蛎收敛固涩。用于自汗盗汗，遗精崩带，胃痛吞酸。

僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕4～5龄的幼虫感染白僵菌而致死的干燥体。气微腥。味微咸。主要用于惊风抽搐，咽喉肿痛，颌下淋巴结炎，面神经麻痹，皮肤瘙痒等病症。僵蚕是一味常用中药，具有祛风解痉，化痰散结的功效，临床多用于治有形之包块，如结节，咽肿痛，瘰疬，风疮瘾疹等，皆取其通散之能。主治祛风定惊，化痰散结。用于惊风抽搐，咽喉肿痛，颌下淋巴结炎，面神经麻痹，皮肤瘙痒。僵蚕主要含蛋白质，脂肪。尚含多种氨基酸以及铁、锌、铜、锰、铬等微量元素。白僵蚕体表的白粉中含草酸铵。僵蚕醇水浸出液对小鼠、家兔均有催眠、抗惊厥作用；其提取液在体内、外均有较强的抗凝作用；僵蚕粉有较好的降血糖作用；体外试验，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有轻度的抑菌作用，其醇提取物体外可抑制人体肝癌细胞的呼吸，可用于直肠瘤型息肉的治疗。僵蚕治疗风热头痛，目赤，咽痛，风疹瘙痒。僵蚕辛散，入肝、肺二经，有祛外风、散风热、止痛、止痒之功。僵蚕用治肝经风热上攻之头痛、目赤肿痛、迎风流泪等症，常与桑叶、木贼、荆芥等疏风清热之品配伍，如白僵蚕散(《证治准绳》)；僵蚕用治风热上攻，咽喉肿痛、声音嘶哑者，可与桔梗、薄荷、荆芥、防风、甘草等同用，如六味汤(《咽喉秘集》)；僵蚕治疗风疹瘙痒，如《圣惠方》用僵蚕为末，内服，治风疮瘾疹，可单味研末服，或与蝉蜕、薄荷等疏风止痒药同用。僵蚕治疗痰核，瘰疬。僵蚕味咸，能软坚散结，又兼可化痰，故可用治痰核、瘰疬，可单用为末，或与浙贝母、夏枯草、连翘等化痰散结药同用。僵蚕亦可用治乳腺炎、流行性腮腺炎、疔疮痈肿等症，可与金银花、连翘、板蓝根、黄芩等清热解毒药同用。僵蚕治疗惊痫抽搐。僵蚕咸辛平，入肝、肺二经，既能息风止痉，又能化痰定惊，故对惊风、癫痫而挟痰热者尤为适宜。治高热抽搐者，可与蝉衣、钩藤、菊花同用。僵蚕治急惊风，痰喘发痉者，以僵蚕同全蝎、天麻、朱砂、牛黄、胆南星等配伍，如千金散(《寿世保元》)；僵蚕若用治小儿脾虚久泻，慢惊搐搦者，又当与党参、白术、天麻、全蝎等益气健脾，息风定惊药配伍，如醒脾散(《古今医统》)；僵蚕用治破伤风角弓反张者，则与全蝎、蜈蚣、钩藤等配伍，如撮风散(《证治准绳》)。风中经络，口眼歪斜。

昆布性味：咸；寒；无毒。归经：归肝、胃、肾经。功效与作用：消痰软坚；利水退肿。主瘰疬；瘿瘤；噎膈；(疒颓)疝脚气水肿。用于瘿瘤，瘰疬，睾丸肿痛，痰饮水肿。化学成分含藻胶素、甘露醇、半乳聚糖、海带氨酸、海带聚糖、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、维生素B1、C、P和碘、钾等。功能主治：软坚散结，消痰，利水。用于瘿瘤、瘰疬、睾丸肿痛、痰饮水肿。

夏枯草性寒，味甘、辛、微苦，具有清泄肝火、散结消肿、清热解毒、祛痰止咳、凉血止血的功效，适用于淋巴结核、甲状腺肿、乳痈、头目眩晕、口眼歪斜、筋骨疼痛、肺结核、血崩、带下、急性传染性黄疸型肝炎及细菌性痢疾等。现代药理研究表明，夏枯草有降低血压的作用，并能扩张血管，其所含芦丁有抗炎作用，并能降低血管通透性，减少脆性，降低肝脂。夏枯草还有抵制癌细胞的作用。

川芎性味：辛，温；归经：归肝、胆、心包经；功效：活血行气，祛风止痛。川芎嗪能扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，改善心肌的血氧供应，并降低心肌的耗氧量；川芎嗪可扩张脑血管，降低血管阻力，显著增加脑及肢体血流量，改善微循环；能降低血小板表面活性，抑制血小板凝集，预防血栓的形成，；所含阿魏酸的中性成分小剂量促进，大剂量抑制子宫平滑肌；水煎剂对动物中枢神经系统有镇静作用，并有明显而持久的降压作用；可加速骨折局部血肿的吸收，促进骨痂形成；有抗维生素E缺乏作用；能抑制多种杆菌；有抗组织胺和利胆作用。川芎含川芎嗪，黑麦草碱或含川哚，藁本内酯，川芎萘呋内酯，3-亚丁基苯酞，3-亚丁基-7-羟基苯酞，丁基苯酞，(3S)-3-正丁基-4-羟基苯酞，3-正丁基-3，6，7-三羟基-4，5，6，7-四氢苯酞，新川芎内酯，洋川芎内酯，洋川芎内酯B、C、D、E、F、G、H、Ⅰ、J、K、L、M、N、O、P、(E)-洋川芎内酯，2-甲氧基-4-(3-甲氧基-1-丙烯基)苯酚，2-戊酰基-苯甲酯，5-羟甲基-6-内-3-甲氧基-4-羟苯基-8-氧杂双环[3.2.1]辛-3-烯-2-酮,4-羟基-3-甲氧基苯已烯，1-羟基-1-(3-甲氧基-4-羟苯基)已烷、香草酸，咖啡酸，原儿茶酸，阿魏酸，大黄酚，瑟丹酮酸，L-异亮氨酰-L-缬氨酸酐，L-缬氨酰-L-缬氨酸酐，黑麦草碱，川芎酚，脲嘧啶，盐酸三甲胺，氯化胆碱，棕榈酸，香草醛，1-酰-β-咔啉，匙叶桉油烯醇，β-谷甾醇，亚油酸，二亚油酸棕榈酸甘油酯及蔗糖等。

半枝莲性味：味辛；苦；性寒。归经：归肺经；肝经；肾经。治吐血，衄血，血淋，赤痢，黄疸，咽喉疼痛，肺痈，疔疮，瘰疬，疮毒，癌肿，跌打刀伤，蛇咬伤。半枝莲具有清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛、抗癌等功能。全草含：红花素，异红花素，高山黄芩素，高山黄钤甙，β-谷甾醇，硬脂酸，生物碱多糖等。从地上部分分离得到汉黄芩素，半枝莲素，半枝莲种素，柚皮素，芹菜素，粗毛豚草素，圣草素，木犀草素，5，7，4-三羟基-8-甲氧基黄烷酮，4-羟基汉黄芩素，7-闳基-5，8-二甲氧基黄酮，对-闳基苯甲西藏，对-闳基苄基丙酮，对-香豆酸，原儿茶酸，熊果酸，植物甾醇，植物甾醇β-D-葡萄糖甙等。

双花即金银花。金银花性寒，味甘，入肺、心、胃经，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风的功效，主治胀满下疾、温病发热，热毒痈疡和肿瘤等症。其对于头昏头晕、口干作渴、多汗烦闷、肠炎、菌痢、麻疹、肺炎、乙脑、流脑、急性乳腺炎、败血症、阑尾炎、皮肤感染、痈疽疔疮、丹毒、腮腺炎、化脓性扁桃体炎等病症均有一定疗效。金银花自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。现代研究证明，金银花含有绿原酸、木犀草素苷等药理活性成分，对溶血性链球菌、金黄葡萄球菌等多种致病菌及上呼吸道感染致病病毒等有较强的抑制力，另外还可增强免疫力、抗早孕、护肝、抗肿瘤、消炎、解热、止血(凝血)、抑制肠道吸收胆固醇等，其临床用途非常广泛，可与其它药物配伍用于治疗呼吸道感染、菌痢、急性泌尿系统感染、高血压等40余种病症。

白花蛇舌草味苦、淡，性寒。主要功效是清热解毒、消痛散结、利尿除湿。主治：肺热喘咳；咽喉肿痛；肠痈；疖肿疮疡；毒蛇咬伤；热淋涩痛；水肿；痢疾；肠炎；湿热黄疸；擅长治疗多种癌肿。全草含车叶草甙，车叶草甙酸，去乙酸，基车叶草甙酸，都桷子甙酸，鸡屎藤次甙，鸡屎藤次甙甲酯，6-O-对-羟基桂皮酰鸡屎藤次甙甲酯，6-O-对-甲氧基桂皮酰鸡屎藤次甙甲酯，6-O-阿魏酰鸡屎藤次甙甲酯，2-甲基-3-羟基蒽醌，2-甲基-3-甲氧基蒽醌，2-甲基-3-羟基-4-甲氧基蒽醌等，以及熊果酸，β-谷甾醇，三十一烷，豆甾醇，齐墩果酸，β-谷甾醇-β-葡萄糖甙，对-香豆酸等。

天花粉为葫芦科植物栝蒌的根，是一种中药，为清热泻火类药物，其具体功效是清热泻火，生津止渴，排脓消肿。性味归经：甘、微苦，微寒。归肺、胃经。功效：清热生津，消肿排脓。主治：用于热病烦渴，肺热燥咳，内热消渴，疮疡肿毒，治热病口渴、消渴、黄疸、肺燥咳血、痈肿、痔痿。从鲜根汁中分离出天花粉蛋白。还得到多种氨基酸：α羟甲基丝氨酸，天冬氨酸，瓜氨酸，丝氨酸，谷氨酸，苏氨酸，甘氨酸，缬氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，组氨酸，赖氨酸，精氨酸，鸟氨酸以及肽类，核糖，木糖，阿拉伯糖，葡萄糖，半乳糖等；根含具有隆血糖作用的多糖；栝楼根多糖A，B，C，D，E；根茎含具有抗癌和免疫活性的多糖，系由葡萄糖，半乳糖，果糖，甘露糖，木糖和小量蛋白质组成。鲜根还含7-豆甾烯-3β-醇，泻根醇酸，葫芦苦素B及D、23，24-二氢葫芦苦素B。

知母性苦、甘，寒。归肺、胃、肾经。功效：清热泻火，生津润燥。清热泻火，生津润燥。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。属清热下火药，主治：温热病、高热烦渴、咳嗽气喘、燥咳、便秘、骨蒸潮热、虚烦不眠、消渴淋浊。根茎中含总皂甙，其中有知母皂甙A-Ⅰ、A-Ⅱ、A-Ⅲ、A-Ⅳ，B-Ⅰ和B-Ⅱ，其中知母皂甙A-Ⅰ是萨尔萨皂甙元β-D-吡喃半乳糖甙，知母皂甙A-Ⅲ是萨尔萨皂甙元与知母双糖结合而成的双糖甙。知母根茎中的皂甙元有萨尔萨皂甙元、吗尔考皂甙元、新芰脱皂甙元。以前从知母中分离出来的皂甙知母宁是吗尔考皂甙、知母皂甙A-Ⅲ、A-Ⅳ、B等的混合物。亦分离出异菝葜皂甙元等皂甙类成分。尚含有黄酮类的芒果甙，异芒果甙；生物碱类的胆碱，尼克酰胺；有机酸类的鞣酸，烟酸以及四种知母多糖。另外尚含铁、锌、锰、铜、铬、镍等多种金属元素以及黏液质、还原糖等。临床应用用于热病烦渴、肺热咳嗽，阴虚燥咳、骨蒸潮热、用于阴虚消渴，肠燥便秘。

黄芩味苦、性寒，归肺、胆、脾、胃、大肠、小肠经。《药对》：“山茱萸、龙骨为之使。恶葱实。畏丹砂、牡丹、藜芦。配柴胡，通调表里，和解少阳；配白术，清热安胎；配半夏，苦降辛开；配黄连，清热燥湿；配枳实、厚朴，消食和胃。能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。

当归味甘；辛；苦；性温；归经：归肝；心；脾经。功效：补血；活血；调经止痛；润燥滑肠。主治：血虚诸证；月经不调；经闭；痛经；症瘕结聚；崩漏；虚寒腹痛；痿痹；肌肤麻木；肠燥便难；赤痢后重；痈疽疮疡；跌扑损伤。当归根含挥发油和非挥发性成分、挥发油中的中性油成分有：亚丁基苯酞、β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、对聚伞花素、β-水芹烯、月桂烯、别罗勒烯、6-正丁基-环庚二烯-1,4、2-甲基-十二烷-5-酮、苯乙酮、β-甜没药烯、异菖蒲烯、菖蒲二烯、花侧柏烯、α-雪松烯、藁本内酯、正丁基四氢化酜内酯、正丁基酜内酯、正丁烯酜内酯、正十二烷醇、佛手柑内酯等、尚含其他成分，如：豆甾醇、谷甾醇、豆甾醇-D-葡萄糖甙、十四醇-1、钩吻萤光素等。

补骨脂功效：补肾壮阳，固精缩尿，肾虚腰痛，小便频数，小儿遗尿，肾漏，温脾止泻，纳气平喘。主治：用于治疗肾虚阳痿，腰膝酸软冷痛，肾虚遗精，遗尿，尿频等。用于治疗脾肾阳虚引起的五更泄泻。用于治疗肾不纳气之虚寒喘咳。

灵芝归心、肝、脾、肺、肾五经。主治虚劳、咳嗽、气喘、失眠、消化不良，恶性肿瘤等。动物药理表明实验：灵芝对神经系统有抑制作用，循环系统有降压和加强心脏收缩力的作用，对呼吸系统有祛痰作用，此外，还有护肝、提高免疫功能，抗菌等作用。灵芝化学成分主要含麦角甾醇，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。在水溶性提取液中含有水溶性蛋白质，天门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，多肽及多糖类。尚含树脂、内酯、香豆精等。

薏苡仁味甘、淡，性微寒。有健脾利湿、清热排脓功能。用于脾虚泄泻水肿脚气、白带、湿、关节疼痛、肠痈、肺痿等症。

本发明所需原料、设备均为市购商品。

本发明的有益效果在于：

1、具有杀灭肿瘤细胞的功效和扶正固本、综合调理的作用。而且，由于所使用的原料药都是传统的中药，其用量均在药典和国家标准范围之内，无毒无副作用，安全可靠。

2、利用发酵菌生物技术，无毒副作用，无依赖性。有效成分全部破壁分解成小分子，并以氨基酸、亚麻酸、多肽等形式存在，具有细胞活性的小分子活性蛋白对人体的八大系统均有修复和改善的显著效果。

3、有效成分含有脂溶性成分，起效快，通过粘膜吸收在细胞内血液中发挥作用。有效成分可激活自我免疫修复细胞核血液中的修复因子，促使机体恢复原有生理功能。有效成分可锁住生物细胞血液，真正供给人体带有正能量的细胞核血液细胞多肽类活性物质。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：

一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂，由中药原料药与发酵提取物掺混后制成，所述原料药组成及重量份数为：黄药子15-40份、穿山甲2-30份、大黄5-35份、牡蛎2-30份、僵蚕5-40份、昆布5-25份、夏枯草5-30份、川芎2-20份、半枝莲2-30份、双花2-30份、白花蛇舌草8-40份、天花粉2-30份、知母2-40份、黄芩2-35份、当归2-35份、补骨脂8-30份、灵芝2-30份、薏苡仁2-30份；

所述发酵提取物的重量份数为：15-40份；

所述发酵提取物为侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

所述中药制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和/或口服液。

所述中药制剂为散剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取各原料药组分，研磨成细粉；

(2)称取与步骤(1)中匹配的发酵提取物；

(3)将步骤(1)与步骤(2)中所得掺混后，既得。

在治疗肿瘤疾病的药物中应用。

所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌等。

实施例1：

按上述方法制备的中药复方散剂，其中：各原料药的重量配比如下：黄药子15kg、穿山甲2kg、大黄5kg、牡蛎2kg、僵蚕5kg、昆布5kg、夏枯草5kg、川芎2kg、半枝莲2kg、双花2kg、白花蛇舌草8kg、天花粉2kg、知母2kg、黄芩2kg、当归2kg、补骨脂8kg、灵芝2kg、薏苡仁2kg；所述发酵提取物的重量份数为：15kg。

所述发酵提取物侧耳的制备方法为：将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基，在20℃、培养70小时，得到侧耳纯培养单菌落，即侧耳的发酵提取物。

实施例2：

按上述方法制备的中药复方散剂，其中：各原料药的重量配比如下：黄药子25kg、穿山甲10kg、大黄15kg、牡蛎10kg、僵蚕15kg、昆布12kg、夏枯草15kg、川芎10kg、半枝莲15kg、双花15kg、白花蛇舌草20kg、天花粉15kg、知母12kg、黄芩15kg、当归15kg、补骨脂20kg、灵芝15kg、薏苡仁15kg；所述发酵提取物的重量份数为：25kg。

所述发酵提取物侧耳的制备方法为：将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基，在28℃、培养96小时，得到侧耳纯培养单菌落，即侧耳的发酵提取物。

实施例3：

按上述方法制备的中药复方散剂，其中：各原料药的重量配比如下：黄药子40kg、穿山甲30kg、大黄35kg、牡蛎30kg、僵蚕40kg、昆布25kg、夏枯草30kg、川芎20kg、半枝莲30kg、双花30kg、白花蛇舌草40kg、天花粉30kg、知母40kg、黄芩35kg、当归35kg、补骨脂30kg、灵芝30kg、薏苡仁30kg；所述发酵提取物的重量份数为：40kg。

所述发酵提取物侧耳的制备方法为：将平菇(即侧耳)接于PDA固体培养基，在35℃、培养120小时，得到侧耳纯培养单菌落，即侧耳的发酵提取物。

试验例：

本发明的中药复方散剂配成10％的混悬液，冰箱保存，用前振摇混匀。

瘤株：Heps、S180、ESC均为市购产品。

动物：昆明种小鼠，由沈阳药科大学和中国药科大学动物室提供。

方法：参照文献进行，

文献1：徐淑云主编。药理实验方法学，北京：人民卫生出版社1982,1115-1125.

文献2：中国肿瘤药理及化疗学术会议：抗癌药物体内药效试验规程，内部资料。1989.

1、中药复方散剂对Heps实体瘤的作用

结果如表1所示，本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性Heps实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到59.54％，低剂量最低为33.09％。经统计学处理后其P值均小于0.05。

表1.本发明的中药复方散剂口服对小鼠肝癌实体瘤的作用

2、中药复方散剂对S180实体瘤的作用

结果如表2所示，本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性S180实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到62.36％，低剂量最低为30.46％。经统计学处理后其P值均小于0.05。

表2.复方散剂口服对小鼠S180实体瘤的作用

3、中药复方散剂对ESC实体瘤的作用

结果如表3所示，本发明的中药复方散剂口服给药剂量为0.4ml/10g、0.2ml/10g、0.1ml/10g对小鼠移植性ESC实体瘤有明显的抗癌活性。高剂量抑制率最高可达到62.84％，低剂量最低为41.98％。经统计学处理后其P值均小于0.01。

表3.复方散剂口服对小鼠艾氏实体瘤的作用

4、急性毒性实验

取小鼠20只，雌雄各半。口服5克/公斤(水)本发明的中药复方散剂后连续观察7天无一死亡。表明了本发明的中药复方散剂的LD₅₀在5克/公斤以上。

此外，我们还初步观察了本发明的中药复方散剂口服对EAC腹水型的作用。结果表明，本发明的中药复方散剂对腹水型无效。

综上所述，通过以上研究，结果表明，本发明的中药复方散剂口服4、2、1克/公斤连续给药9天，对上述三种瘤株均有明显的抗癌活性。抑制率可达到或超过国内规定标准(30％)，说明本发明的中药复方散剂有明显的抗肿瘤作用。急性毒性实验证明本发明的中药复方散剂口服的LD₅₀大于5克/公斤，说明毒性较小。据目前临床观察也表明本发明的中药复方散剂对多种恶性肿瘤有较好的疗效。值得对本发明的中药复方散剂进行深入的临床和制剂研究，以便推广应用。

5、临床实验

患者均持各地各大医院诊断报告及X光、CT片诊断报告、病理切片报告、镜检报告，疗效观察500例，经半年的观察，对肺癌、肠癌、胃癌、食道癌等其他癌症、病状有不同程度的改善，患者服用后，饭量及体重增加，精神好转，经用药前后对照观察，本发明的复方散剂具有抗癌功能，使瘤体控制、提高肌体免疫功能的作用。

本复方散剂治疗肺癌249例，病状改善，使癌体前后对比稳定和不同程度的缩小，此类临床疗效比较显著。患者服药后，精神明显好转、饭量增加、体重增多、疼痛减轻、咳嗽呼吸困难好转，多由卧床不起到能够参加室外活动，还有的能参加正常工作，其治疗效果如表4所示。

表4.复方散剂治疗分析表

治疗总抑瘤率为82.8％，总有效率为96.5％。

备注：其中有39例病人因记录地址不清未随访，因此未做统计。

结果证明：复方散剂试用临床观察，对中晚期癌症患者，具有明显的抑制作用，能抗癌、瘤体缩小。或消灭或使癌细胞溶化，从水中消灭或从血液中消灭。能延长生命，无毒副作用，用药方便，安全可靠。

检测侧耳(Pleurotus sp.)的DNA：

一、DNA提取

用FastDNA SPIN土壤DNA提取试剂盒(MP Biomedicals,Santa Ana,CA)提取真菌DNA。

二、PCR扩增

PCR扩增引物：

ITS1：5’CTTG GTCA TTTA GAGG AAGTAA3'

ITS4:5’TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC3'

PCR扩增程序

三、测序

将PCR产物委托上海生物工程有限公司测序

基因序列结果：

CTCTCCGGGGGGAACCTTGGGGAGGGTCCTTTAATGATTCCCTTAGGGAGTGGTGGTGGCCTTTAGGGGCCAGGTCCCGGTTCCATAGTTTTTTCACCCCCCGTGGACTTTTGAAAGGTTTGGGGAATTGTTTTTCCAATTGTTCAGATTGGTTTGCTGGGATTTAAACGTCTCGGTGTGACTACGCAGTCTATTTACTTACCCCCCCCCAAAGGAAGTTTTCGAAAGTCCATTAAAGGGCCCTGGGCCTTTTAACCCTTAATCCAACTTTCACCAAGGATTTTTTGGCTTTTGCCATGAAGGAAGAAGCAAGGAAAATGGGTAAAGAAAGGGAAATGCCGAAATCCAGGGATCCTTGGATTCTTGGACCCCCCCTGCCCCCCCTGGTATTTCGGGGGGCCAGCCCGGTTGGGGGGCCATTAATTTTTCAAATCCCTTTGGTTTTTTTCCAATTGTGATGTTTGGATTGTTGGGGGCTGCTGGCCTTGACAGGTCGGCTCCTCTTAAATGCATTAGCAGGACTTCTCATTGCCTCTGCGCATGATGTGATAATTATCACTCATCAATAGCACGCATGAATAGAGTCCAGCTCTCTAATCGTCCGCAAGGACAATTTGACAATTGACCTCAAATCAGGTAGACAGCCGGATTCT

四、比对结果

经NCBI(National Center of Biotechnology Information [www.ncbi.nlm.nih.gov])数据库比对，结果如下：

Pleurotus ostreatus isolate NW42618S ribosomal RNA gene(登录号： EU622251.1)

Pleurotus ostreatus即侧耳。

Claims

1.一种抗肿瘤中药微生物发酵制剂，其特征在于：

由中药原料药与发酵提取物掺混后制成，所述原料药组成及重量份数为：黄药子15-40份、穿山甲2-30份、大黄5-35份、牡蛎2-30份、僵蚕5-40份、昆布5-25份、夏枯草5-30份、川芎2-20份、半枝莲2-30份、双花2-30份、白花蛇舌草8-40份、天花粉2-30份、知母2-40份、黄芩2-35份、当归2-35份、补骨脂8-30份、灵芝2-30份、薏苡仁2-30份；

所述发酵提取物的重量份数为：15-40份；

所述发酵提取物为侧耳(Pleurotus sp.)，已于2014年4月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCC No.9060。

2.根据权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂，其特征在于：

其原料药组成及重量份数为：黄药子25份、穿山甲10份、大黄15份、牡蛎10份、僵蚕15份、昆布12份、夏枯草15份、川芎10份、半枝莲15份、双花15份、白花蛇舌草20份、天花粉15份、知母12份、黄芩15份、当归15份、补骨脂20份、灵芝15份、薏苡仁15份；

所述发酵提取物的重量份数为：25份。

3.根据权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂，其特征在于：所述中药制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和/或口服液。

5.根据权利要求4所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂，其特征在于：所述中药制剂为散剂。

6.一种权利要求5所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的制备方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)称取各原料药组分，研磨成细粉；

(2)称取与步骤(1)中匹配的发酵提取物；

(3)将步骤(1)与步骤(2)中所得掺混后，既得。

7.一种如权利要求1所述的抗肿瘤中药微生物发酵制剂的应用，其特征在于：在治疗肿瘤疾病的药物中应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述肿瘤疾病包括肺癌、胃癌、食道癌、直肠癌、脑癌、肝癌、肾癌。