CN102552702B - 铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸药物中应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及铁皮石斛的新用途，旨在提供铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸药物中应用。本发明揭示了铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用，和基于铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物的制备方法。本发明为慢性萎缩性胃炎低胃酸的治疗提供了一种新手段。除具有减轻体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，以及减轻异型增生和肠化的作用以外，有显著增加胃酸分泌量的作用。本发明的铁皮枫斗颗粒配方平和，适合于脾胃虚弱，或者因虚致实，导致虚实夹杂的脾胃病的调理康复。中医药治疗安全性较好，可以长期服药，具有巩固疗效、防止复发以及全身调整等综合作用。

Description

铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸药物中应用

技术领域

本发明涉及铁皮石斛的新的应用，尤其涉及铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。

背景技术

慢性萎缩性胃炎属于中医“胃脘痛”、“痞满”、“嘈杂”等范畴，目前现代医学仍无特效疗法。中医理论认为其病因病机有虚实两个方面，脾气亏虚或胃阴不足，本虚是其内在原因，病理过程中，或者因虚致实，导致虚实夹杂。因而本虚标实、虚实夹杂是本病的病理特点。在治疗上历代医家有主张以养胃生津，促进通降为主要治法，如叶天士在《临证指南医案》中所谓：“胃宜降则和，非用辛开苦降，亦非苦寒下夺，以损胃气，不过甘平或甘凉濡润以养胃阴，则津液来复，使之通降而已矣。此义即宗内经所谓：六腑者传化物而不藏，以通为用之理也”。也有少数比例患者中医诊断属于湿困脾胃，表现为泛酸、嗳气、腹胀等，西医检查高胃酸，但这一类型患者并不适用养胃阴治疗方法。

现代研究文献各家报告中，有滋阴养胃，健脾益气作为主要治疗方法；也有益气养阴化淤(活血)、益气养阴解毒等兼顾作为主要治疗方法。本研究应用铁皮枫斗颗粒以益气养阴、养胃生津，综合了滋阴养胃和益气的治疗方法，获得较好疗效。这正好符合了相关传统文献记载与现代文献报告。

现代研究文献各家报告中存在不少问题：如慢性萎缩性胃炎的诊断、分型、疗效评价没有统一标准；临床研究中缺乏严格的对照，研究设计不够严谨，急需制定严格的慢性萎缩性胃炎科研标准以及临床观察标准，使疗效更具客观性及说服力，从而将中医治疗慢性萎缩性胃炎的研究推向更高的水平；慢性萎缩性胃炎的临床治疗中，应用了文献报告中的药物，而实际取得的疗效没有文献报告的那么好，说明必须建立可以重复的研究和评价体系来实事求是地研究慢性萎缩性胃炎的中医药诊疗，以提高临床实际疗效。

一般认为从正常胃黏膜发展到癌的病理变化过程是：正常胃黏膜→浅表性胃炎→慢性萎缩性胃炎→伴发肠化生→伴发异型(不典型)增生→胃癌。低胃酸是慢性萎缩性胃炎胃黏膜由于炎症破坏、萎缩后的重要病理改变，促进慢性萎缩性胃炎低胃酸恢复，有利于胃内环境恢复正常，提高胃粘膜的抗炎、康复能力，在慢性萎缩性胃炎治疗中具有重要意义。

有研究认为，慢性萎缩性胃炎患者中多为低胃酸型，也有正常胃酸型，以及高胃酸型。也有学者认为早期正常胃酸型有一定比例，晚期低胃酸型多见。促进慢性萎缩性胃炎低胃酸恢复，具有重要意义。

目前现代医学治疗慢性萎缩性胃炎以及低胃酸还没有疗效较好的方法，只有采用稀盐酸、乳酸菌片等帮组消化的方法，并没有让慢性萎缩性胃炎，以及低胃酸得到有效恢复的手段。

发明内容

本发明要解决的问题是，克服现有技术中的不足，提供一种铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。为解决技术问题，本发明的解决方案是：

提供一种铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用。

本发明所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒，该药物通过下述方法制备获得：

(1)将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用，备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为0.67～1.50∶1；

(2)将铁皮枫斗用温水浸泡半小时后热提取3次，每次提取8小时，每次提取后均将提取液离心、过滤，合并3次滤液得提取液；将提取液减压浓缩为45～55℃下时相对密度为1.00～1.20的浓缩液，备用；

(3)将西洋参用70％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液；减压回收乙醇，减压浓缩为80～90℃下时相对密度为1.05～1.25的浓缩液，备用；

(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混匀，将葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，得到铁皮枫斗颗粒；所述葡萄糖为辅料，其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量；

在上述药物的制备过程中，每1000g铁皮枫斗颗粒使用铁皮枫斗120～180g。

本发明所述的药物的使用方法是：以成人用量计，6～24包/日，3～4次/日，2～6包/次，3g/包，生药量0.9g/包，以水冲服。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明的铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎(伴有异型增生)模型大鼠的胃液分泌实验说明，除具有减轻模型大鼠体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，以及减轻异型增生和肠化的作用以外，有显著增加胃酸分泌量的作用。

(2)本发明的铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎(伴有异型增生)模型大鼠的胃液分泌作用较为显著，对正常大鼠的胃液分泌作用较小，有较好的安全性。

(3)本发明的铁皮枫斗颗粒配方平和，适合于脾胃虚弱，或者因虚致实，导致虚实夹杂的脾胃病的调理康复。中医药治疗安全性较好，可以长期服药，具有巩固疗效、防止复发以及全身调整等综合作用，展现了中医药在该研究领域的广阔前景。

具体实施方式

石斛为兰科植物，它分铁皮、金钗、马鞭、黄草、铜皮等几十种。同为石斛，同科同属但不同种，其药效和市场价格也往往有着天壤之别。石斛中以铁皮石斛最为稀有名贵，它因外表呈深绿色或铁青色而得名，中药界有“北有人参，南有枫斗”的说法。谚语称：“野山人参壮阳气，像太阳；铁皮石斛滋阴精，似月亮”。

新鲜石斛不能久存，经整理、烘焙、加箍、干燥四个步骤将其炮制成螺旋状的干品，即枫斗。铁皮石斛(其幼茎粗壮、粘汁浓厚、纤维较少)加工后被称为铁皮枫斗。铁皮枫斗的外观饱满、坚实，外表光亮、耐泡，由于铁皮石斛多糖分子量较其它品种的石斛高得多，因而滋阴效果最佳，价格也最贵。

【实施例1】铁皮枫斗颗粒的制备

(1)按处方比例称取铁皮枫斗167g，西洋参133g，备用。

(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为1.00(55℃)的浓缩液，备用。

(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.05(90℃)浓缩液，备用。

(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混匀，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成1000g颗粒，即得。

【实施例2】铁皮枫斗颗粒的制备

(1)按处方比例称取铁皮枫斗120g，西洋参180g，备用。

(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15(51℃)的浓缩液，备用。

(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.15(87℃)浓缩液，备用。

(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混匀，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成1000g颗粒，即得。

【实施例3】铁皮枫斗颗粒的制备

(1)按处方比例称取铁皮枫斗180g，西洋参120g，备用。

(2)将铁皮枫斗药材用温水浸泡半小时，热提取3次，每次提取8小时。每次提取后提取液离心、过滤，合并3次滤液，得提取液。提取液减压浓缩，浓缩至相对密度为1.20(45℃)的浓缩液，备用。

(3)将西洋参置于多功能提取罐中，用70％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，减压回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.25(80℃)浓缩液，备用。

(4)将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并，混匀，将适量葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，制成1000g颗粒，即得。

以下通过试验实施例证明本发明所述药物铁皮枫斗颗粒在治疗慢性萎缩性胃炎中的应用。

1、实验材料与检验统计方法

1.1实验药物

1.1.1受试药物

铁皮枫斗颗粒，颗粒剂，每袋3g，内含生药铁皮石斛0.5g、西洋参0.4g。主要功能益气养阴、养胃生津。由浙江天皇药业有限公司生产，制备方法与实施例中相同。批号：091004，有效期2年。

1.1.2对照药物

养胃舒颗粒，颗粒剂，每袋10g，内含党参、陈皮、黄精、山药、玄参、乌梅、山楂、北沙参、干姜、菟丝子、白术(炒)等，由合肥神鹿双鹤药业有限公司生产，临床人体用药量20g/日。批号：0902206，有效期3年。

1.2实验动物

Wistar大鼠，雌雄各半，均由上海斯莱克实验动物有限公司提供。

实验动物均饲养于25±2℃的屏障实验室内。

1.3实验仪器

721可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司生产；

HR40-IIA2生物安全柜，青岛海尔特种电器有限公司生产；

XQ-280SD高压灭菌器，嘉兴市中新医疗仪器有限公司生产；

GS-6R离心机，Beckman公司；

XT-1800iv五分类血细胞分析仪，日本希森美康公司生产；

RM2235 LEICA病理切片机，德国莱卡公司；

EG1150C LEICA生物组织冷冻机、EG1150H LEICA生物组织包埋机，德国莱卡公司；

ASP200 LEICA生物组织自动脱水机，德国莱卡公司；

BX41 OLYMPUS显微镜，日本OLYMPUS(ォリンパス)株式会社；

BU200S电子精密天平(0.001-200g)，北京赛多利斯天平有限公司生产；

生物安全动物饲养笼柜，苏州市金净净化设备科技有限公司生产；

Nikon ECLIPSE Ti显微摄像系统，日本Nikon株式会社；

Leica QWin彩色<RG>图像分析系统，德国莱卡公司。

1.4实验试剂

无水乙醇：500ml/瓶，成都市科龙化工试剂有限公司，批号：20091124、20100712；

一次性使用真空采血管：2.0ml，内含：乙二胺四乙酸(EDTA二钾)，浙江康是医疗器械有限公司，批号：100821；

亚硝基胍(MNNG)：5g/瓶，上海蓝季生物公司购买，由日本东京化成工业株式会社生产，批号：PL2XF；

碘(I¹²⁵)胃泌素放射免疫分析药盒：北京北方生物技术研究所，批号：110320；

免疫组化试剂：

胃黏膜上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)：NeoMarkers生产，批号：MS-106-PO；

抗凋亡基因(Bcl-2)：Millipore生产，批号：NG1736345；

抑癌基因(P53)：Millipore生产，批号：LBC1794857。

1.5病理组织学检查方法

标本：标本为全胃，上段留0.5cm食管，下段留1.5cm十二指肠；沿胃大弯剪开，用大头针，塑料泡沫板固定，浸于10％中性福尔马林。在浸于福尔马林前大体观拍照。

取材：从前胃到十二指肠纵向全长、全层取材，侧壁一条取材为标准的病理取材。

包埋切片：石蜡包埋，作4μm切片。

染色：HE染色、AB染色、银染，以及免疫组化PCNA、Bcl-2、P53的染色，按照相关要求操作：

HE染色：Harris染色法；

AB染色：阿尔辛蓝染色法；

银染色：W-S法；

PCNA染色、Bcl-2染色、P53染色：Envison二步法。

光镜观察：

(1)胃黏膜炎症情况：用半定量法，即在低倍镜下观察整个胃黏膜，然后在胃窦部取10个视野，参照1994年美国休斯顿提出的胃炎诊断标准，按炎症细胞浸润的程度分为0～3七个级别。具体如下：0级：无炎症；0.5级：镜下观察炎症介于0与1之间；1级：在胃小凹区或固有腺底部可见多个慢性炎细胞浸润；1.5级：镜下观察炎症介于1与2之间；2级：在胃黏膜小凹至黏膜肌层均有较多炎细胞浸润；2.5级：镜下观察炎症介于2与3之间；3级：胃黏膜内可见成堆炎细胞聚集灶。

(2)胃黏膜腺体厚度：每张切片取胃窦部黏膜5个视野，用测微器测出每个视野的胃窦黏膜腺体厚度，得出每张切片5个视野的平均值(μm)。

(3)胃腺体数目：100倍镜下，找到每只大鼠的幽门环0.2-1.2mm(200～1200μm)之间(即1mm范围)胃窦固有腺体总个数，单位以“个/mm”表示。

(4)异型增生：每张切片取5个高倍镜视野观察胃黏膜上皮细胞有无细胞核多形性，腺体异型增生。(采用轻、中、重级别报告)

(5)壁细胞、主细胞数目：400倍镜下，每张切片取前胃和胃体部交界以下1.0mm开始的胃体部黏膜5个视野平均值。

(6)肠上皮化生表现：AB染色，观察胃黏膜的肠化情况(杯状细胞等)。根据正常大鼠胃黏膜AB染色就能见到一定比例的大鼠有1/3以下面积呈现阳性，参照《中药新药治疗慢性萎缩性胃炎的临床研究指导原则》(2002试行版)，2006中国上海慢性胃炎共识意见，以及文献报告，将临床的人体胃黏膜肠化标准：肠化分为无(0)、轻(+)、中(++)、重(+++)，修改为大鼠的胃黏膜肠化标准：肠化分为无(0)-轻(+)、中(++)、重(+++)，即将无(0)-轻(+)合并为一个等级，为正常大鼠：

无(0)-轻度(+)：无肠化-肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3以下(为正常大鼠)。一般胃窦部黏膜深部有极少量染色呈阳性，胃体部浅表部有染色呈阳性；

中(++)：肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3-2/3；

重(+++)肠化表面上皮或/和腺体占黏膜总面积的1/3以上。

AB染色图象分析方法：每个动物切片随机取胃窦部胃黏膜5张照片，采用NikonECLIPSE Ti显微摄像系统，400倍拍摄，各组在相同条件下操作拍摄。采用Leica QWin彩色<RG>图像分析系统分析，各组以相同条件下选取每张照片的阳性总面积与所分析照片总面积的比例(％)，取每个动物切片5张照片的平均阳性面积比(％)，进行组间统计比较。

1.6PCNA、Bcl-2、P53读片方法：PCNA、P53阳性染色定位于细胞核；Bcl-2阳性染色定位于细胞质内，偶然可以伴有核着色。结果判断标准采用阳性细胞半定量分级法，随机观察5个高倍视野(×400)取平均数，计数细胞总数和阳性细胞数，得出阳性细胞百分比。先根据阳性细胞百分比计分：≤5％为0分，6％-25％为1分，26％-50％为2分，＞50％为3分；再根据阳性细胞染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；然后合计两积分：0分为阴性“-”，1-2分为弱阳性“+”，3-4分为中度阳性“++”，5-6分为强阳性“+++”。

1.7血细胞分析方法

需要取血的大鼠在将胃摘出前，戊巴比妥麻醉，腹主动脉取血，全血放置于一次性使用真空采血抗凝管，采用XT-1800iv五分类血细胞分析仪(日本希森美康公司生产)检查靴常规，自动生成分析结果报告。

1.8血浆胃泌素检测方法

采用添加EDTA的抗凝试管，离心取血浆，按照血浆胃泌素检测放免试剂盒说明书要求操作。

1.9统计方法

采用SPSS统计，所有数据以均数

±标准差(S)表示，多组均数比较采用F检验，其中两组比较计量资料采用LSD-t检验，方差不齐时加做Dunnett T3检验，计数资料采用X²检验。

2、分实验方法与结果

2.1实验一

铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的实验

2.1.1MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠造模方法

以6周龄的雌雄各半Wistar大鼠，在饮水中加入MNNG。每星期先用蒸馏水配成1g/L浓度的储存液，避光冷藏保存。同时配成167μg/ml蒸馏水浓度的饮用液，装入200ml的水瓶，外涂黑色，每日更换，让大鼠尽量饮用。数周后胃黏膜可出现糜烂、炎症变化，逐渐加重，发生萎缩和异型增生等变化。2-3个月可成模，本次实验12周造模。

MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎(伴有异型增生)模型大鼠为各种造模方法的慢性胃炎模型大鼠中病情较重、较难治疗后恢复的模型，选用这种模型进行试验，能较可靠地说明药物的治疗作用。

2.1.2铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠分组治疗

造模完成时，取4只模型动物与4只正常动物做胃病理组织学检查，确定成模后，按照实验的分组要求(每组12只，其中正常组、模型组、高剂量组增加为22只)分组并开始给药。3组为铁皮枫斗颗粒低、中、高剂量组，分别给药折合生药量为0.6g、1.2g、2.4g/kg体重/日灌胃，1组为模型生理盐水对照组，给等容量生理盐水灌胃，1组为阳性药物对照组，给养胃舒颗粒4.0g/kg/日灌胃，此外，另取22只相同条件的大鼠给等容量生理盐水灌胃作为空白(未造模)对照组。根据预实验初步确定的疗程为5-6周，在给药第4、6周完成时，正常组、高剂量组、模型组分别各取2-4只大鼠，均托颈椎处死，迅速将胃摘出，用福尔马林固定，石蜡包埋，作4μm切片，染色，进行组织学检查，了解疗效。(在给药4、6周的实验中发现模型组有一定的胃肠大体观改变，在给药第8周中，模型组再取2只大鼠，处死，观察大体观，未见其它进一步改变)。初步了解有效后，在给药第8周完成时，6组大鼠均麻醉，腹主动脉取血，迅速将胃摘出，用福尔马林固定，石蜡包埋，作4μm切片，用HE、AB染色，进行组织学检查。

2.1.3铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的实验结果

(1)体重：见表1、表2、表3。

表1.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周的大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

表2.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周雄性大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

表3.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周雌性大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

根据表1、表2、表3体重数据

可见，治疗前MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠体重143.5±14.26较正常大鼠体重220.2±31.20非常显著下降(P＜0.01)，模型完成后治疗前各治疗组间体重没有显著性差异(P＞0.05)，各治疗组间体重丢失的恢复疗效有可比性。

各治疗组MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎大鼠治疗后体重较模型组，体重丢失有一定恢复。治疗第8周时铁皮枫斗颗粒高剂量组大鼠体重220.1±36.62，非常显著高于模型组体重173.3±28.09，体重丢失有非常显著恢复(P＜0.01)。

雄性与雌性大鼠体重差异大，数据离散程度大，将雄性与雌性大鼠体重分别统计后，雌性大鼠治疗第8周时铁皮枫斗颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠体重，均显著高于模型组体重(均P＜0.05)，雌性大鼠的体重丢失恢复较雄性大鼠更显著。

治疗8周大鼠体重观察结果说明，铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠具有减轻体重丢失的疗效。

(2)病理：见表4、表5。

根据表4，对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周胃组织病理观察结果

模型组较正常组病理改变显著。高剂量组胃组织炎症等级1.68±0.54、腺体数量31.50±6.07(个/mm)、腺体厚度306.4±49.32um、主细胞数165.5±12.65(个/视野)、壁细胞数425.4±16.0(个/视野)、不典型增生6/14(42.86％)、肠化(“++”——“+++”的只数)4/14(28.57％)，比模型组(n＝14)胃组织炎症等级3.00±0.00、腺体数量26.86±6.41(个/mm)、腺体厚度244.3±51.82um、主细胞数148.7±6.38(个/视野)、壁细胞数407.2±18.6(个/视野)、不典型增生(只数)12/14(85.71％)、肠化(“++”——“+++”的只数)14/14(100％)，说明治疗组胃黏膜炎症非常显著减轻(P＜0.01)，胃黏膜厚度(腺体厚度)萎缩、不典型增生(异型增生)和肠化显著减轻(P＜0.01或P＜0.05)，主细胞数减少显著回升(P＜0.05)。中剂量组胃组织炎症等级、腺体厚度、主细胞数、肠化，比模型组也有显著改善(P＜0.01或P＜0.05)。

表4.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周胃组织病

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。◆表示方差不齐，与模型组比较，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

异型增生，肠化，表内p值为各组与模型组比较的2组X²检验；表内X²值为6组的多组行列表X²检验。

高中低三剂量关系比较：与中剂量比较

表示P＜0.05，

表示P＜0.01；与低剂量比较表示P＜0.05，

表示P＜0.01。

参照表5胃组织病理肠化生图像分析的定量数据看，阳性面积百分比模型组3.91±0.96，非常显著高于正常组0.95±0.72(P＜0.01)，高剂量1.74±1.13、中剂量1.81±0.66、低剂量2.36±1.08均非常显著低于模型组(P＜0.01)。胃组织病理肠化生图像分析的定量数据说明，铁皮枫斗颗粒治疗各组肠化生显著好转，与表4中的人工读片结果基本一致。

此外，铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量治疗组病理炎症表现还有一定的剂量关系，高剂量组炎症恢复显著大于中、低剂量组(P＜0.05和P＜0.01)，中剂量组炎症恢复非常显著大于低剂量组(P＜0.01)。

大鼠胃组织病理观察结果说明，铁皮枫斗颗粒对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周具有减轻炎症、减轻胃黏膜萎缩以及减轻异型增生、肠化生的疗效。

表5.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周胃组织病理肠化生图像分析(

单位：％)

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

(3)免疫组化：

胃黏膜上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、抗凋亡基因(Bcl-2)、抑癌基因(P53)：见表6。

表6.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周的胃组织PCNA、Bcl-2、P53表达(单位：只)

注：表内p值为各组与模型组比较的2组X²检验；表内X²值为6组的多组行列表X²检验。

根据表6结果，PCNA表达，模型组较正常组有非常显著增加(P＜0.01)，铁皮枫斗颗粒高剂量、低剂量组均较模型组有非常显著减少(P＜0.01)；Bcl-2表达，模型组较正常组有非常显著增加(P＜0.01)，铁皮枫斗颗粒高剂量、中剂量、低剂量组均较模型组有减少趋势，但无显著性(P＞0.05)；P53表达，各组均为阴性。

(4)血球分析：见表7。

表7.铁皮枫斗颗料对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周血球分析

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，与模型组比较，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

高中低三剂量关系比较：与中剂量比较

表示P＜0.05，

表示P＜0.01；

                      与低剂量比较表示P＜0.05，

表示P＜0.01。

根据表7，红细胞数(

10^12/L)，模型组较正常组有减少趋势，但无统计学显著意义(P＞0.05)，铁皮枫斗颗粒治疗8周后高剂量组、中剂量组较模型组有非常显著增加(P＜0.01)。此外，铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量治疗组红细胞数增加还有一定的剂量关系，高剂量组增加显著大于低剂量组(P＜0.05)；

血红蛋白

模型组132.1±7.76较正常组145.6±6.26有非常显著减少(P＜0.01)，铁皮枫斗颗粒治疗8周后高剂量145.3±5.90、中剂量139.3±5.71、低剂量137.5±7.56较模型组有显著增加(P＜0.01或P＜0.05)。此外，铁皮枫斗颗粒高、中、低剂量治疗组血红蛋白增加还有一定的剂量关系，高剂量组增加显著大于中、低剂量组(P＜0.05)；

嗜酸性细胞数(10^9/L)，模型组0.0221±0.0105较正常组0.0386±0.0188显著减少(P＜0.05)，铁皮枫斗颗粒治疗8周后高剂量组0.0586±0.0211、中剂量0.0391±0.0164较模型组有显著增加(P＜0.01或P＜0.05)；

嗜酸性细胞比例

模型组0.97±0.37较正常组1.97±0.89非常显著减少(P＜0.01)，铁皮枫斗颗粒治疗8周后高剂量组2.09±0.56较模型组有非常显著增加(P＜0.01)；

血小板数(10^9/L)，模型组804.0±117.85较正常组905.4±68.85非常显著减少(P＜0.01)，铁皮枫斗颗粒治疗8周后高剂量组860.7±56.02较模型组有增加趋势，但无显著性(P＞0.05)。

由以上血球分析结果可见，铁皮枫斗颗粒对对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠具有减轻血红蛋白、嗜酸性白细胞、血小板的减少作用。

(5)血浆胃泌素：见表8。

表8.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周血浆胃泌素(

单位：pg/ml)

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

根据表8，血浆胃泌素模型组大鼠比正常组大鼠有降低的趋势，但无显著差异(P＞0.05)，铁皮枫斗颗粒高剂量组大鼠血浆胃泌素治疗8周后有高于模型组的趋势，但无显著差异(P＞0.05)。

2.1.4实验一小结

铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的实验结果说明：该药品对模型大鼠具有减轻体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，减轻异型增生和肠化，减轻血红蛋白、嗜酸性白细胞、血小板的减少的作用。观察到该药品减轻模型大鼠PCNA、Bcl-2的过高表达，这与胃黏膜炎症减轻、黏膜损伤减少有关，这一结果也可能是该药品对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗作用的机理之一。

2.2实验二

铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌影响的实验

2.2.1MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠造模方法

以6周龄的雌雄各半Wistar大鼠，在饮水中加入MNNG。每星期先用蒸馏水配成1g/L浓度的储存液，避光冷藏保存。同时配成167μg/ml蒸馏水浓度的饮用液，装入200ml的水瓶，外涂黑色，每日更换，让大鼠尽量饮用。数周后胃黏膜可出现糜烂、炎症变化，逐渐加重，发生萎缩和异型增生等变化。2-3个月可成模，本次实验12周造模。

实验一(2.1.2)的分组治疗疗效观察实验与以下实验二(2.2.2)的胃液分泌影响实验，两个实验同时进行，同批造模型，可以相互比较。

2.2.2铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌影响的分组治疗

按照实验的分组要求：模型组、高剂量组、正常组3组每组10只，开始给药。高剂量组：给药铁皮枫斗颗粒折合生药量为2.4g/kg体重/日灌胃；模型组：给等容量生理盐水灌胃；正常组：另取10只相同条件的大鼠给等容量生理盐水灌胃作为空白(未造模)对照组。在给药第8周完成时，禁食24小时，麻醉，剖腹，结扎幽门，缝合腹腔，两小时后，3组大鼠均麻醉，结扎贲门，迅速将胃摘出，收集胃液，离心，计胃液量并测定胃酸浓度和胃蛋白酶活性。收集胃液完成时，用福尔马林固定，石蜡包埋，作4μm切片，用HE、AB染色，进行组织学检查。观察治疗8周的疗效，以及对胃液分泌的影响。

胃液酸度测定：用移液管分别吸取离心胃液0.5ml，置10ml三角烧瓶中，滴1滴酚酞。用0.02mol/L氢氧化钠(经标定)滴定，按照氢氧化钠消耗的数量，计算总酸度：总酸度(mmol/L)＝0.02(mmol/ml)*氢氧化钠消耗(ml)/0.5(ml)*1000。

胃液蛋白酶活性测定：参照《中药药理实验方法学》第502-509页(上海科技出版社，2006年10月第2版)。

2.2.3铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌影响的实验结果

(1)体重：见表9、表10、表11。

表9.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发慢性萎缩性胃炎胃液分泌模型大鼠治疗8周大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验3组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

表10.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎胃液分泌模型大鼠治疗8周雄性大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验3组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

表11.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎胃液分泌模型大鼠治疗8周雌性大鼠体重(

单位：g)

注：F检验为本实验3组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

根据表9、表10、表11体重数据

可见，治疗前MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠(胃液分泌实验)体重144.0±10.92较正常大鼠体重216.9±31.32非常显著下降(P＜0.01)，模型完成后治疗前高剂量组与模型组间体重没有显著性差异(P＞0.05)，治疗组与模型组间体重丢失的恢复疗效有可比性。

高剂量(胃液分泌实验)治疗组MNNG诱发的慢性萎缩性胃炎大鼠治疗后体重较模型组，体重丢失有非常显著恢复(P＜0.01)。治疗第8周时铁皮枫斗颗粒高剂量组大鼠体重221.7±31.50，非常显著高于模型组体重179.0±11.95，体重丢失有非常显著恢复(P＜0.01)。

(2)病理：见表12。

表12.铁皮枫斗颗粒对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌实验胃组织病理观察

注：(1)F检验为本实验3组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

(2)◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

(3)不典型增生，肠化：表内p值为各组与模型组比较的2组X²检验；表内X²值为3组的多组行列表X²检验。

表12-2.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发慢性萎缩性胃炎模型大鼠取胃液实验操作对胃组织病理观察的影响

注：(1)本表p值为两组比较t检验。

(2)不典型增生，肠化：表内p值为两组X²检验。

根据表12、表12-2，参照表4(2.5.4的病理)，表12的实验由于取胃液的操作，结扎胃的上口和下口，一定程度引起胃组织的炎症或水肿改变，其炎症显著比表4(未经过取胃液操作的)严重(正常组P＜0.01，高剂量组P＜0.05)。取了胃液后的大鼠胃组织病理观察结果说明，铁皮枫斗颗粒对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠治疗8周具有一定的减轻炎症、减轻胃黏膜萎缩以及减轻异型增生、肠化生的疗效。

MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌实验治疗8周胃组织病理观察结果

模型组较正常组病理改变显著。治疗组(高剂量组n＝10)胃组织炎症等级2.20±0.42、腺体数量29.70±4.16(个/mm)、腺体厚度288.8±30.48um、主细胞数180.80±7.60(个/视野)、壁细胞数420.3±13.2(个/视野)、不典型增生即异型增生(只数)1/10(10.00％)、肠化(“++”——“+++”的只数)4/10(40.00％)，与模型组(n＝10)胃组织炎症等级3.00±0.00、腺体数量24.70±3.02(个/mm)、腺体厚度236.6±18.93um、主细胞数177.40±7.50(个/视野)、壁细胞数403.8±13.1(个/视野)、异型增生(只数)7/10(70.00％)、肠化(“++”——“+++”的只数)9/10(90％)比较，说明治疗组胃黏膜炎症非常显著减轻(P＜0.01)，胃黏膜萎缩显著减轻(P＜0.01)，异型增生和肠化显著减轻(P＜0.05)。

(3)胃液分泌与胃液分析：见表13。

根据表13，每小时总酸排出量(mmol/h)模型组大鼠0.0105±0.008比正常组大鼠0.0175±0.015有降低的趋势，但无显著差异(P＞0.05)，铁皮枫斗颗粒高剂量组治疗8周后0.0365±0.038显著高于模型组(P＜0.05)。每小时胃酸浓度(mmol/L)模型组大鼠6.38±5.22比正常组大鼠10.63±7.98有降低的趋势，但无显著差异(P＞0.05)，铁皮枫斗颗粒高剂量组治疗8周后15.63±11.29显著高于模型组(P＜0.05)。

铁皮枫斗颗粒治疗8周后对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠除胃黏膜炎症、萎缩改善外，有显著增加胃酸分泌量的作用。

表13.铁皮枫斗颗粒对MNNG诱发慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌量影响与胃液分析

注：F检验为本实验6组比较。本表p值为LSD-t检验，各组与模型组比较。

◆表示方差不齐，如果采用Dunnett T3检验，P＞0.05。

2.2.4实验二小结

铁皮枫斗颗粒对亚硝基胍类化合物(MNNG)诱发的慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌影响的实验结果说明：该药品对模型大鼠具有减轻体重丢失，减轻胃黏膜炎症、萎缩，减轻异型增生和肠化作用，还有显著增加胃酸分泌量的作用。

2.3实验三

铁皮枫斗颗粒对正常大鼠胃液分泌影响的实验

2.3.1大鼠胃液分泌影响的实验方法：以12周龄雌雄各半Wistar大鼠12只，分为铁皮枫斗高剂量组6只、正常组6只，开始给药。高剂量组：给药铁皮枫斗颗粒折合生药量为2.4g/kg体重/日灌胃；正常组：给等容量生理盐水灌胃。在给药第2周完成时，禁食24小时，麻醉，剖腹，结扎幽门，缝合腹腔，两小时后，2组大鼠均麻醉，结扎贲门，迅速将胃摘出，收集胃液，离心，计胃液量并测定胃酸浓度。

胃液酸度测定：参照文献⁽⁶⁾，用移液管分别吸取离心胃液0.5ml，置10ml三角烧瓶中，滴1滴酚酞。用0.02mol/L氢氧化钠(经标定)滴定，按照氢氧化钠消耗的数量，计算总酸度：总酸度(mmol/L)＝0.02(mmol/ml)*氢氧化钠消耗(ml)/0.5(ml)*1000。

2.3.2铁皮枫斗颗粒对正常大鼠胃液分泌影响的实验结果

(1)体重：见表14。

根据表76体重数据

可见，治疗后大鼠体重与正常对照组无显著差异(P＞0.05)。

表14.铁皮枫斗颗粒对正常大鼠胃液分泌量影响的大鼠体重(

单位：g)

注：本表p值为t检验。

(2)胃液分泌与胃液分析：见表15。

表15.铁皮枫斗颗粒对正常大鼠胃液分泌量影响与胃液分析

注：本表p值为t检验。

根据表15，2小时胃液总量(ml)高剂量组大鼠2.32±1.26比正常组大鼠2.00±0.89有增加的趋势，但无显著差异(P＞0.05)；每小时总酸排出量(mmol/h)高剂量组大鼠0.0237±0.0269比正常组大鼠0.0181±0.0091有增加的趋势，但无显著差异(P＞0.05)；每小时胃酸浓度(mmol/L)高剂量组大鼠比正常组大鼠稍有增加的趋势，但无显著差异(P＞0.05)。

2.3.3实验三小结

铁皮枫斗颗粒灌胃2周对正常大鼠有一定增加胃酸分泌量的趋势，但无显著性。

结合铁皮枫斗颗粒对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃液分泌影响的实验结果：铁皮枫斗颗粒能显著增加胃炎模型大鼠的胃酸分泌量。这说明铁皮枫斗颗粒对正常大鼠胃酸分泌量有一定增加但幅度不大，而对MNNG法慢性萎缩性胃炎模型胃酸分泌量有一定减少情况下的大鼠，胃酸分泌量增加较显著。

2.4铁皮枫斗颗粒在治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸时的用量

在上述动物实验中，大鼠受试药物剂量：铁皮枫斗颗粒剂量分为低、中、高剂量组，分别给药折合生药量为0.6g、1.2g、2.4g/kg体重/日灌胃。

其中，高用量：大鼠生药量2.4g/kg体重/日灌胃，折合人用量为成人每天约3g/包*24包，生药量0.9g/包。以水冲服，3g/包(生药量0.9g/包)，6包/次，4次/日，共24包/日。

其中，低用量：大鼠生药量0.6g/kg体重/日灌胃，折合人用量为成人每天约3g/包*6包，生药量0.9g/包。以水冲服，3g/包(生药量0.9g/包)，2包/次，3次/日，共6包/日。

注：“生药量”是中药学的最基本概念，指在中药成药中所含有的所有制剂提取前单味中药材重量的和。

Claims (1)

1.铁皮石斛在制备治疗慢性萎缩性胃炎低胃酸的药物中的应用，其特征在于，所述的慢性萎缩性胃炎是指由亚硝基化合物诱发的慢性萎缩性胃炎；所述的药物是掺有西洋参的铁皮枫斗颗粒，该药物通过下述方法制备获得：

（1）将铁皮石斛炮制为铁皮枫斗后与西洋参备用，备用的铁皮枫斗与西洋参重量比为0.67～1.50∶1；

（2）将铁皮枫斗用温水浸泡半小时后热提取3次，每次提取8小时，每次提取后均将提取液离心、过滤，合并3次滤液得提取液；将提取液减压浓缩为45～55℃下时相对密度为1.00～1.20的浓缩液，备用；

（3）将西洋参用70%乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液；减压回收乙醇，减压浓缩为80～90℃下时相对密度为1.05～1.25的浓缩液，备用；

（4）将上述铁皮枫斗提取浓缩液和西洋参提取浓缩液合并、混匀，将葡萄糖置于沸腾床上，喷雾制粒，得到铁皮枫斗颗粒；所述葡萄糖为辅料，其在铁皮枫斗颗粒中的含量为药学上可接受的辅料用量；

在上述药物的制备过程中，每1000g铁皮枫斗颗粒使用铁皮枫斗120～180g；

所述的药物的使用方法是：以成人用量计，24包/日，4次/日，6包/次，3g/包，生药量0.9g/包，以水冲服。