CN110531003A - 一种测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,包括如下步骤:(1)制备对照品溶液:称取葡萄糖标准品加超纯水溶解、稀释、摇匀,得对照品溶液;(2)制备供试品溶液:量取复方电解质葡萄糖注射液加超纯水稀释、摇匀,即得供试品溶液,所述步骤(1)中对照品溶液中葡萄糖的浓度与供试品溶液中葡萄糖浓度之比为1∶1;(3)通过高效液相色谱仪检测并读取对照品溶液、供试品溶液色谱峰面积,结合对照品溶液浓度采用外标法计算获得葡萄糖浓度。本发明方法测定精度高,操作简便。
Description
技术领域
本发明涉及葡萄糖含量测定的方法,特别涉及一种测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法。
背景技术
目前复方电解质葡萄糖MG3注射液中葡萄糖的含量测定的方法有旋光度法,是通过待测试样的旋光度与纯物质的已知比旋光度来确定复方制剂中葡萄糖含量的,该方法对环境温度的控制要求高,测定时易受到环境因素的影响;其次,当制剂中含有多个具有旋光性的化合物时,旋光度测定法无法准确地测定葡萄糖的含量。目前市场上出售的很多复方葡萄糖制剂中同时含有两个或两个以上具有旋光性的化合物,例如:复方电解质葡萄糖MG3注射液,同时含有具有旋光性的乳酸钠和葡萄糖,此外,制剂中的潜在有关物质果糖也具有旋光性。在这种情况下,无法用旋光度测定法进行葡萄糖含量的测定。对药品质量的进一步提高产生障碍。
现有技术中并未记载高效液相色谱-示差折光检测器法(HPLC-RI)测定复方葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法。
发明内容
发明目的:本发明目的是提供一种精确度高、操作简便的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法。
技术方案:本发明提供一种测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,包括如下步骤:
(1)制备对照品溶液:称取葡萄糖加超纯水溶解、稀释、摇匀,得对照品溶液;
(2)制备供试品溶液:量取复方电解质葡萄糖注射液加超纯水稀释、摇匀,即得供试品溶液,所述步骤(1)中对照品溶液中葡萄糖的浓度与供试品溶液中葡萄糖浓度之比为1∶1;
(3)通过高效液相色谱仪检测并读取对照品溶液、供试品溶液色谱峰面积,结合对照品溶液浓度采用外标法计算获得葡萄糖浓度。
进一步地,所述步骤(3)中高效液相色谱仪检测的参数设置如下:
色谱柱:全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相;流速:1.4-1.6mL/min;柱温:28-32℃;进样量:10μL:流动相:乙腈-水;检测器:示差折光检测器;检测器温度:35-45℃。
进一步地,所述步骤(3)中高效液相色谱仪检测的参数设置如下:
色谱柱:Shodex Asahipak NH2P-50 4E;流速:1.6mL/min;柱温:32℃;进样量:10μL;流动相:乙腈-水;检测器:示差折光检测器;检测器温度:40℃。
进一步地,所述高效液相色谱仪附带示差折光检测器。
进一步地,所述流动相中乙腈-水的体积比为70∶30-90∶10。
进一步地,所述流动相中乙腈-水的体积比为80∶20。
进一步地,所述步骤(3)供试品溶液检测前经过0.22μm滤膜过滤。
进一步地,所述步骤(3)中外标法计算公式如下:
式中,Ci:供试品溶液中葡萄糖浓度(mg/ml);Cs:对照品溶液浓度(mg/ml);
Ai:供试品溶液色谱峰面积(μRIU*min);As:对照品溶液色谱峰面积(μRIU*min);
示差检测器(RI)是目前通用的检测器,其检测原理为连续检测样品流路与参比流路间液体折光指数差值,是根据折射原理设计的,属偏转式类型。当测量池中流过被测样品时,引起折射率变化使照在双光电阻上的光束发生偏转,使双光敏电阻阻值发生变化,此时由电桥输出讯号,即反映了样品浓度的变化情况。
该检测器对糖类检测灵敏度较高,其灵敏度可达ng级;稳定性好,操作方便。因此,对于无紫外吸收的葡萄糖,可选用示差折光检测器代替紫外检测器进行含量测定。
有益效果:本发明方法避免了旋光度测定法中环境因素的影响,同时也可有效防止复方制剂中多个具有旋光性的化合物对旋光度测定结果的影响;在本发明的色谱条件下,采用全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相的色谱柱,可排除复方制剂中钾、钠、钙盐等离子的影响,并且在无需采用梯度洗脱的条件下,实现了待测成分的有效分离;HPLC结合示差折光检测器(RI),可有效检测无紫外吸收的葡萄糖;本发明测定方法简单可行,测定指标精确,可进一步提高对药品的质量控制。
附图说明
图1为实施例1空白溶剂的专属性图谱;
图2为实施例1对照品溶液的专属性图谱;
图3为实施例1供试品溶液的专属性图谱;
图4为实施例2空白溶剂的专属性图谱;
图5为实施例2对照品溶液的专属性图谱;
图6为实施例2供试品溶液的专属性图谱;
图7为实施例31.4ml/min流速的耐用性图谱;
图8为实施例31.6ml/min流速的耐用性图谱;
图9为实施例3柱温28℃的耐用性图谱;
图10为实施例3柱温32℃的耐用性图谱。
具体实施方式
实施例1
1、仪器与试剂
Thermo-Ultimate 3000高效液相色谱仪(附带示差折光检测器),色谱柱为ShodexAsahipak NH2P-50 4E。
葡萄糖对照品(批号:R035J0,USP标准品);
葡萄糖(批号:201711070,石药集团圣雪葡萄糖有限公司);
氯化钠(批号:20170229,江苏省勤奋药业);
氯化钾(批号:20170713-1,江苏省勤奋药业);
乳酸钠(批号:180102,福悦实业有限公司);
复方电解质葡萄糖MG3注射液(批号:8J74F11,中国大冢制药有限公司);
乙腈(批号:191994,Thermo Fisher)
2.方法
2.1对照品溶液的制备
精密称取葡萄糖对照品100mg,置10ml量瓶中,加超纯水使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得10mg/ml的对照品溶液;
2.2供试品溶液的制备
精密量取复方电解质葡萄糖MG3注射液1ml,置10ml量瓶中,加超纯水稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液;
2.3线性配制
分别精密移取对照品贮备液(30mg/ml)2.4ml、2.0ml、1.6ml、1.2ml、0.8ml、0.4ml于5ml量瓶中,加超纯水稀释并定容至刻度,摇匀,即得。
制成表1所示线性溶液:
表1线性溶液中的葡萄糖浓度一览表
2.4色谱条件
流速:1.6mL/min,柱温32℃,进样量10μL,流动相为乙腈∶水(80∶20),检测器温度:40℃。
3.结果
3.1系统适用性试验
取适量对照品溶液,按“2.4”项下色谱条件上机检测,对照品溶液中葡萄糖色谱峰拖尾因子不大于2.0。
3.2专属性
取适量超纯水、对照品溶液、“2.2”项下制备的供试品溶液,按“2.4”项下色谱条件上机检测,结果见图1-3,表明空白溶剂、供试品中其余成分对葡萄糖的检测无干扰。
3.3滤膜吸附试验
取适量“2.2”项下制备的供试品溶液,经0.22μm的微孔滤膜分别弃初滤液0ml、0.25ml、0.5ml、1ml,取续滤液作为待测溶液;另取“2.2”项下制备的供试品溶液约1.5mL,10000rpm离心5min,取上清液作为对照溶液。按“2.4”项下色谱条件上机检测,结果见表2,结论:弃初滤液后进样,峰面积回收率均在98%-102%范围内,证明该滤膜对其均无吸附,后拟采用弃初滤液0.5ml进样。此外,该滤膜对葡萄糖无吸附作用,过0.22μm滤膜不影响含量测定。
表2滤膜吸附试验结果一览表
3.4线性关系
精密量取“2.3”项下所述线性溶液10μl,按“2.4”项下色谱条件上机检测,记录峰面积,以对照品浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,进行线性回归。
葡萄糖在2.4~14.4mg/ml范围内与峰面积线性关系良好,回归方程Y=0.7102x+0.1445(r=0.9995);
3.5准确度试验
按照处方量称取葡萄糖原料药1g,乳酸钠22.4mg,氯化钠17.5mg,氯化钾15.0mg,至100ml量瓶中,用超纯水溶解并定容,按照“2.2”供试品方法制备成葡萄糖浓度为10mg/ml的溶液,平行配制6份,每份平行进样2针测定。结果见表3,复方电解质葡萄糖MG3注射液中葡萄糖的平均回收率为107.44%,RSD为1.8%。
表3准确度实验结果一览表
3.6精密度试验
取样品6份,按“2.2”供试品方法制备,测定峰面积。计算6份样品中葡萄糖的RSD为1.50%。结果表明,本方法精密度良好。
3.7稳定性试验
取样品,按“2.2”供试品方法制备,在0、2、4、8、12、24h内进样6次,测定峰面积,计算24h内葡萄糖含量的平均回收率为98.502%,在98-102%范围内,结果表明,供试品溶液在24h内稳定。
实施例2
1、仪器与试剂
Thermo-Ultimate 3000高效液相色谱仪(附带示差折光检测器),色谱柱为ShodexAsahipak NH2P-50 4E。
葡萄糖对照品(批号:R035J0,USP标准品);
葡萄糖(批号:201711070,石药集团圣雪葡萄糖有限公司);
氯化钠(批号:20170229,江苏省勤奋药业);
氯化钾(批号:20170713-1,江苏省勤奋药业);
乳酸钠(批号:180102,福悦实业有限公司);
氯化钙(批号:03170509,天津海光药业);
复方乳酸钠葡萄糖注射液(批号:9D72F1,中国大冢制药有限公司)
乙腈(批号:191994,Thermo Fisher)
2.方法
2.1对照品溶液的制备
精密称取葡萄糖对照品100mg,置10ml量瓶中,加超纯水使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得10mg/ml的对照品溶液;
2.2供试品溶液的制备
精密量取复方乳酸钠葡萄糖注射液1ml,置5ml量瓶中,加超纯水稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液;
2.3色谱条件
流速:1.6mL/min,柱温32℃,进样量10uL,流动相为乙腈∶水(80∶20),检测器温度:40℃。
3.结果
3.1专属性
取适量超纯水、对照品溶液、“2.2”项下制备的供试品溶液,按“2.4”项下色谱条件上机检测,结果见图4-6,表明空白溶剂、供试品中其余成分对葡萄糖的检测无干扰。
3.2滤膜吸附试验
取适量“2.2”项下制备的供试品溶液,经0.22μm的微孔滤膜分别弃初滤液0ml、0.25ml、0.5ml、1ml,取续滤液作为待测溶液;另取“2.2”项下制备的供试品溶液约1.5mL,10000rpm离心5min,取上清液作为对照溶液。按“2.4”项下色谱条件上机检测,表明该滤膜对葡萄糖无吸附作用,过0.22μm滤膜不影响含量测定
3.3准确度试验
按照处方量称取葡萄糖原料药1g,乳酸钠62mg,氯化钠120mg,氯化钾6mg,氯化钙4mg至100ml量瓶中,用超纯水溶解并定容,按照“2.2”供试品方法制备成葡萄糖浓度为10mg/ml的溶液,平行配制6份,每份平行进样2针测定。结果见表4,复方乳酸钠葡萄糖注射液中葡萄糖的平均回收率为103.67%,RSD为3.0%。
表4准确度试验结果一览表
3.6精密度试验
取样品6份,按“2.2”供试品方法制备,测定峰面积。计算6份样品中葡萄糖的RSD为1.90%。结果表明,本方法精密度良好。
实施例3
耐用性检测:取对照品溶液,照“2.4”项下色谱条件进行调整,分别为流速1.4ml/min,1.6ml/min;柱温28℃,32℃;上机检测,结果见图7-10,在调整的色谱条件范围内,对照品溶液中葡萄糖色谱峰拖尾因子不大于2.0,可适用于对葡萄糖进行检测。
4、讨论
4.1采用旋光度法测定复方电解质葡萄糖MG3注射液中葡萄糖的含量。然而在实际应用中发现复方制剂中往往含有多种具有旋光性的化合物,传统旋光度法不适用于复方制剂中葡萄糖含量的测定。为提升产品的质量标准,本文建立了一种准确、便捷、稳定的高效液相色谱-示差折光检测器法(HPLC-RI)测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖的含量。
4.2由于葡萄糖无具有紫外吸收的官能团,无法通过常用的高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)进行检测。因此本文选用示差折光检测器代替常规的紫外检测器。示差折光检测器(RI)是一种高度稳定和灵敏的通用型检测器,基于连续测定流通池中溶液折射率的方法来测定样品浓度。光从一种介质进入另一种介质时,由于两种物质折射率的不同会产生折射。样品组分与流动相的折光指数不同,均可被检测,二者相差愈大则灵敏度愈高,在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。因此示差折光检测器可有效用于无紫外吸收的糖类物质的检测。
4.3本文采用了全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相的色谱柱。该色谱柱对糖类物质具有较好的分离效果,可同时对多种糖类进行分析检测,广泛应用于食品中糖类检测。此外,通过试验分析可知,该色谱柱可有效排除复方制剂中盐类离子的干扰,实现了待测成分的有效分离,便于对制剂中葡萄糖含量的分析检测。
Claims (8)
1.一种测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)制备对照品溶液:称取葡萄糖标准品加超纯水溶解、稀释、摇匀,得对照品溶液;
(2)制备供试品溶液:量取复方电解质葡萄糖注射液加超纯水稀释、摇匀,即得供试品溶液,所述步骤(1)中对照品溶液中葡萄糖的浓度与供试品溶液中葡萄糖浓度之比为1∶1;
(3)通过高效液相色谱仪检测并读取对照品溶液、供试品溶液色谱峰面积,结合对照品溶液浓度采用外标法计算获得葡萄糖浓度。
2.根据权利要求1所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述步骤(3)中高效液相色谱仪检测的参数设置如下:
色谱柱:全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相;流速:1.4-1.6mL/min;柱温:28-32℃;进样量:10μL;流动相:乙腈-水;检测器:示差折光检测器;检测器温度:35-45℃。
3.根据权利要求2所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述步骤(3)中高效液相色谱仪检测的参数设置如下:
色谱柱:Shodex Asahipak NH2P-504E;流速:1.6mL/min;柱温:32℃;进样量:10μL;流动相:乙腈-水;检测器:示差折光检测器;检测器温度:40℃。
4.根据权利要求2所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述高效液相色谱仪附带示差折光检测器。
5.根据权利要求2所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述流动相中乙腈-水的体积比为70:30-90:10。
6.根据权利要求5所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述流动相中乙腈-水的体积比为80:20。
7.根据权利要求1所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述步骤(3)供试品溶液检测前经过0.22μm滤膜过滤。
8.根据权利要求1所述的测定复方电解质葡萄糖注射液中葡萄糖含量的方法,其特征在于:所述步骤(3)中外标法计算公式如下:
式中,Ci:供试品溶液中葡萄糖浓度(mg/ml);Cs:对照品溶液浓度(mg/ml);
Ai:供试品溶液色谱峰面积(μRIU*min);As:对照品溶液色谱峰面积(uRIU*min)。
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