CN103830374A - 三叶糖脂清在高尿酸血症中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种药物组合物在制备治疗、抑制或预防高尿酸血症的药物中的应用,其中所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶6~25份,荷叶6~25份,山楂叶6~25份,丹参6~25份和赤芍6~25份。采用该药物组合物可有效抑制血液中尿酸的升高。
Description
技术领域
本发明涉及采用中药治疗高尿酸血症的方法。
背景技术
高尿酸血症(Hyperuricemia,HUA)是指在正常饮食状态下,由嘌呤代谢紊乱、尿酸生成增多和/或排泄减少,造成尿酸在体内蓄积,使血液中的尿酸浓度升高的状态(参见叶任高,陆再英主编《内科学》第6版,人民卫生出版社,2004:862-5;和Choi HK,Liu S,Curhan G.,Intake of purine-rich foods,protein,and dairy products and relationship to serum levels of uric acid:the Third NationalHealth and Nutrition Examination Survey,Arthritis Rheum,2005年1月,52(1):283-289)。
尿酸生成抑制药别嘌呤醇(allpopurinol)是一种抑制尿酸合成的药物,别嘌呤醇及其主要代谢产物氧化嘌呤醇分别是次黄嘌呤、黄嘌呤的类似物,通过竞争性抑制黄嘌呤氧化酶,黄嘌呤、次黄嘌呤不能转化为尿酸,使尿酸生成减少,可迅速降低血尿酸值(参见Fields M,Lewis CG,Lure MD,Allopurinol,aninhibitor of xanthine oxidase,reduces uric acid levels and modifies the signsassociated with copper deficiency in rats fed fructose,Free RadicBiol Med.,1996年,20(4):595-600)。
因此,仍然存在开发新的治疗或抑制或预防高尿酸血症药物尤其是中药的需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的采用中药治疗、抑制或预防高尿酸血症的方法。
为达到上述目的,本发明提供一种药物组合物,即三叶糖脂清,在制备用于治疗、抑制或预防高尿酸血症的药物中的应用。
三叶糖脂清是本发明人早期开发的一种治疗糖尿病及糖耐量减低的一个中药组方(参见中国专利申请CN1927289A,通过引用该申请全文并入本文中)。该组方采用桑叶为君药,荷叶和山楂叶共为臣药,丹参和赤芍为佐药,五药合用,共奏清热养阴、生津润燥、化痰降浊、活血化瘀之功效,能有效治疗糖尿病,改善糖耐量减低的症状。
本发明的进一步研究惊奇地发现该组方在治疗、抑制或预防高尿酸血症方面也具有显著的效果。具体地,本发明提供一种药物组合物在制备用于治疗、抑制或预防高尿酸血症的药物中的应用,其中所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶6~25份,荷叶6~25份,山楂叶6~25份,丹参6~25份和赤芍6~25份。
根据优选的实施方式,所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶10~14份,荷叶10~14份,山楂叶10~14份,丹参13~17份和赤芍13~17份。
根据最优选的实施方式,所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶12份,荷叶12份,山楂叶12份,丹参15份和赤芍15份。
本发明的药物组合物进一步包括一种或多种适于口服制剂的药用赋形剂。这些药用赋形剂是本领域中常用的那些,在此不再赘述。
本发明的药物组合物可为片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、口服液、分散片、口崩片核滴丸中的任一种剂型。本方中,桑叶苦寒泄热、甘寒益阴、善清肺热、润肺燥,乃古人止渴佳品,为君药。荷叶味苦泄热、善清热除烦、生津止渴,可辅助君药消除热盛伤津的症状;升发清阳、补助脾胃,可辅助君药增强助脾利湿、化浊降脂之功;且能祛瘀行滞,可辅助君药增强化淤降浊之力。山楂叶味酸、性平,归肝经,具有活血化淤、化浊降脂之功,与荷叶共为臣药。丹参味苦泄降、微寒清热,有活血化淤、清心除烦之功,可佐助君药活血祛瘀、化浊降脂。赤芍苦寒性降,走血分,善行血滞,有清肝泻火、活血化淤之功,可佐助君药增强化淤降浊之力,与丹参共为佐药。五药合用,共奏清热养阴、生津润燥、化痰降浊、活血化淤的功能。
三叶糖脂清组方的科学合理的配伍,采用常规的提取方法均可达到理想的治疗效果。例如,可以将各药材分别提取、制成干膏后再混合;也可以将全部药材混合后再提取、制成干膏;还可以将药材部分混合后提取制成干膏,然后与其余药材分别提取制成的干膏混合。其中所述提取方法是常规的中药提取方法,包括:浸溃、回流或渗漉,提取溶剂是水或30~95%乙醇。
药材提取后可以经过也可以不经过大孔树脂纯化处理。如果需要降低出膏率以达到减少患者服用量的目的,则可以用大孔树脂处理。优选大孔树脂为非极性或弱极性大孔树脂,包括以苯乙烯或乙基苯乙烯或α-甲基苯乙烯为骨架的大孔树脂。如果没必要降低出膏率,则可以不用大孔树脂处理,而直接制成所需剂型。
优选的制备方法包括以下步骤:(1)桑叶、荷叶一起用30~90%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩干燥为干膏;(2)山楂叶用30~90%的乙醇水溶液回流提取,浓缩提取液,然后任选地用大孔树脂柱纯化,其中用40~95%的乙醇水溶液洗脱,最后浓缩干燥为干膏;(3)丹参用30~95%的乙醇水溶液渗漉提取,浓缩提取液,然后任选地用大孔树脂柱进行纯化,其中用pH为2-6的酸水洗后,再以40~95%的乙醇水溶液进行洗脱,最后浓缩干燥为干膏;(4)赤芍用水提取,浓缩水提液,然后任选地用大孔树脂柱纯化,其中用40~95%的乙醇水溶液洗脱,最后浓缩干燥为干膏;(5)将步骤(1)-(4)所得干膏混合均匀,或者根据本发明的一种实施方式可选地与一种或多种药用赋形剂,以便制成适当的口服制剂,如片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、口服液、分散片、口崩片、滴丸等。
在更优选的制备方法包括以下步骤:(1)桑叶、荷叶一起用50~70%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩干燥为干膏;(2)山楂叶用50~70%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩后用大孔树脂柱纯化,其中用50~70%的乙醇水溶液洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;(3)丹参用50%的乙醇水溶液渗漉提取,提取液浓缩后用大孔树脂柱进行纯化,其中用pH为4的酸水洗后,再以70%的乙醇水溶液进行洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;(4)赤芍用水提取,然后用80%乙醇水溶液醇沉,经过滤、浓缩滤液除去乙醇后用大孔树脂柱纯化,其中用70%的乙醇水溶液洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;(5)将步骤(1)-(4)所得干膏混合均匀。
特别需要加以说明的是,很多药材的提取物都有市售品,因此本发明的药物组合物也可以用相应的市售提取物来替换;提取物的配比是根据出膏率、指标成分的含量折算成相当于所述原料药材的配比,这些均属本发明的保护范围。
本发明人出人预料地发现三叶糖脂清能有有效地治疗、抑制或预防高尿酸血症。
具体实施方式
下面将结合本发明的优选实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本文所公开的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
三叶糖脂清的制备
桑叶666.7g 荷叶666.7g 山楂叶666.7g
丹参833.3g 赤芍833.3g
按上述用量取桑叶和荷叶,用14倍50%乙醇加热回流提取两次,每次2小时;再用12倍水提取2小时;提取液减压回收乙醇,至相对密度约1.05~1.1,浓缩液经喷雾干燥得桑叶-荷叶干浸膏,备用。
按上述用量取山楂叶,用10倍量70%乙醇加热回流提取2次,每次2小时。提取液减压浓缩回收乙醇,至相对密度约1.05(60-70℃)后,加水至每毫升含0.5g生药,滤过,滤液经预先处理的D101大孔树脂吸附,生药量与树脂体积之比为1:1(g/ml),树脂柱径高比约为1:5。上样后,先以2倍树脂床体积的水洗涤,弃去水洗液,用4倍树脂床体积的70%乙醇洗脱。收集洗脱液,减压浓缩,回收乙醇至相对密度约1.1,真空干燥,得山楂叶干浸膏,备用。
按上述用量取丹参药材粉碎成粗粉,加入3倍量50%乙醇冷浸12小时,按2005版药典附录IO渗漉法,用50%乙醇以每公斤药材1~3ml/min的流速进行渗漉,收集渗漉液,至渗漉液总体积为生药量的6倍为止。渗漉液减压浓缩,回收乙醇,至相对密度约为1.1(60-70℃),加水至每毫升含0.5g生药,滤过,滤液经预先处理的D101大孔树脂吸附,生药量与树脂体积之比为1:2(g/ml),径高比约为1:5。上样后,先以1倍树脂床体积pH=4的水洗涤,弃去水洗液,用2倍树脂床体积的70%乙醇洗脱。收集洗脱液,减压浓缩,回收乙醇,浓缩液真空干燥,得丹参干浸膏,备用。
按上述用量取赤芍加水煎煮两次,第一次加水10倍量,第二次加水8倍量,每次2小时。将赤芍水提取液减压浓缩,至相对密度约1.05(60-70℃),加2倍量80%乙醇醇沉,放置过夜,滤过,滤液减压浓缩回收乙醇,加水至每毫升含0.5g生药,滤过,滤液经预先处理的D101大孔树脂吸附,生药量与树脂床体积之比为1:1(g/ml),径高比约为1:5。上样后,先以3倍树脂床体积的水洗涤,弃去水洗液,用4倍树脂床体积的70%乙醇洗脱。收集洗脱液,减压浓缩回收乙醇至相对密度约1.1,真空干燥,得赤芍干浸膏,备用。
将上述桑叶荷叶、山楂叶、丹参、赤芍等五味药所得干浸膏合并,粉碎,过80目,得三叶糖脂清浸膏粉420g。
再将本实施例重复两次,共得到三个批次的三叶糖脂清浸膏粉。
实施例2-5
以下表1所示的量,按照实施例1所述的方法,分别制备三叶糖脂清浸膏粉。
表1:实施例2-5各药味的量及所得浸膏粉的量
再将实施例2-5分别重复两次,分别得到三个批次的三叶糖脂清浸膏粉。
测试例1
三叶糖脂清样品含量测定
按照以下方法测定实施例1-5制备的三叶糖脂清浸膏粉中活性成分荷叶碱和芍药苷的含量。
仪器设备高效液相色谱仪(Waters600system with Dualλabsorbance UVdetector);色谱柱(PhenomsilC18(4.6mm×250mm,5μm,Phenomen TechnologyCo.Ltd.,USA))。
2-1荷叶碱按照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(33:64.8:1.5:0.7)为流动相;柱温25℃,检测波长为270nm。理论板数按荷叶碱峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取荷叶碱对照品(中国生物制品检定所,批号:111566-200402)适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含10μg的溶液。
样品溶液的制备对于每个实施例的三叶糖脂清浸膏粉,取3个批号的浸膏粉样品适量,研细,取约0.125g,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇适量,超声处理(功率250W,频率40kHz)10分钟,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和样品溶液5μl和15μl,注入高效液相色谱仪,测定,结果列于表2。
表2样品中荷叶碱含量测定结果
2-2芍药苷照高效液相色谱法(《中国药典》2005版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(14:86)为流动相;柱温25℃,检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品(National Institute for theControl ofPharmaceutical and Biological Products,China)适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含100μg的溶液。
样品溶液的制备对于每个实施例的三叶糖脂清浸膏粉,取3个批号的浸膏粉样品适量,研细,取约0.10g,精密称定,置25ml量瓶中,加水约20ml,超声处理(功率250W,频率40kHz)5分钟,用水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl,注入高效液相色谱仪,测定,结果列于表3。
表3样品中芍药苷含量测定结果
以上表1和表2的结果说明本发明的方法所制备的三叶糖脂清具有一致的组成。
以下进一步通过动物实验来说明采用三叶糖脂清治疗高尿酸血症的效果。
动物体内的尿酸酶是建立高尿酸血症模型的主要障碍,氧嗪酸钾的结构与尿酸的嘌呤环有相似结构,通过竞争性结合尿酸酶,从而抑制其活性,减少尿酸的分解与排泄。应用此法建立高尿酸血症模型,可在一定程度上消除人类与动物在尿酸代谢上的主要差别(参见Nguyen MT,Awale S,Tezuka Y,et al.,Hypouricemic effects of acacetin and4,5-o-dicaffeoylquinicacid methyl ester on serum uric acid levels in potassium oxonate-pretreatedrats,Biol Pharm Bull,2005年12月,28(12):2231-2234;和Johnson WJ,Stavric B,Chartrand A,Uricase inhibition in the rat by s-triazines:an animalmodel for hyperuricemia and hyperuricosuria,ProcSocExpBiol Med,1969年5月,131(1):8-12)。
测试例2
三叶糖脂清对高尿酸血症小鼠的治疗作用
动物:昆明种小鼠(中国医学科学院放射医学研究所,中国天津),雄性,体重25~30g。实验前适应环境1周,自由饮水、进食,每日12h照明,室温(25±2)℃。
实验分组及给药:昆明种雄性小鼠35只,随机分为5组,即空白对照组,模型组,别嘌呤醇组(5.0mg/kg,塞宝,重庆科瑞制药有限公司,中国重庆),三叶糖脂清高、低剂量组(500mg/kg/d,100mg/kg/d,按实施例1方法制备),每组7只。三叶糖脂清各剂量组、别嘌呤醇组(作为阳性药对照组)分别灌胃给药,给药容积为15mL/kg,空白对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水。
动物造模:采用氧嗪酸钾盐法诱导小鼠产生高尿酸血症,每天在给药前1h,除空白对照组灌胃给予等量生理盐水外,其余各组分别灌胃给予氧嗪酸钾溶液(300mg/kg,#156124,Sigma-Aldrich Co.LLC.,USA),给药容积为15mL/kg。
实验取材:连续给药8天,在第8天给药后0.5h、1h、2h,小鼠眼球后静脉丛取血0.5mL(取血前12h禁食,不禁水),于4℃、3500rpm离心10min,取100mL血清,于-20℃条件下保存。
小鼠血清尿酸测定:采用酶比色法尿酸试剂盒(尿酸测定试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司,中国)测定血清中尿酸水平。
实验结果:三叶糖脂清对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠血清尿酸含量的影响:与正常组相比较,各时间点模型组小鼠血清尿酸含量均显著增高(0.5h和1h P<0.01,2h P<0.05),模型复制成功。给药0.5h时,三叶糖脂清各剂量组与模型组相比较,均有显著性降低(P<0.01);给药1h时,三叶糖脂清各剂量组与模型组相比较,均有显著性降低(P<0.01);给药2h时,三叶糖脂清500mg/ml组和100mg/ml组与模型组相比较,均有显著性降低(P<0.05)(结果见表4)。
表4三叶糖脂清对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠血清尿酸含量的影响
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
测试例3三叶糖脂清对高尿酸血症大鼠的治疗作用
动物:SD大鼠(北京华阜康生物科技股份有限公司,中国北京),雄性,体重180~200g。实验前适应环境1周,自由饮水、进食,每日12h照明,室温(25±2)℃。
实验分组及给药:SD雄性大鼠36只,随机分为6组,即空白对照组,模型组,别嘌呤醇组(5.0mg/kg)(阳性药组),三叶糖脂清高、中、低剂量组(500mg/kg/d,200mg/kg/d,100mg/kg/d,按实施例1方法制备),每组6只。各组分别灌胃给药,给药容积为15mL/kg,对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水。
动物造模:采用氧嗪酸钾盐法诱导大鼠产生高尿酸血症,每天在给药前1h,除空白对照组灌胃给予等量生理盐水外,其余各组分别灌胃给予氧嗪酸钾溶液(300mg/kg,#156124,Sigma-Aldrich Co.LLC.,USA),给药容积为15mL/kg。
实验取材:连续给药3天,在第3天给药后0.5h、1h、2h,大鼠眼球后静脉丛取血1.0mL(取血前12h禁食,不禁水),于4℃、8000rpm离心10min,取300mL血清,于-20℃条件下保存。
大鼠血清尿酸测定:采用酶比色法尿酸试剂盒(尿酸测定试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司,中国)测定血清中尿酸水平。
实验结果:三叶糖脂清对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠血清尿酸含量的影响:与正常组相比较,各时间点模型组大鼠血清尿酸含量均显著增高(P<0.01),模型复制成功。给药0.5h时,三叶糖脂清各剂量组与模型组相比较,均有显著性降低(P<0.01);给药1h时,三叶糖脂清500mg/ml组和200mg/ml组与模型组相比较,均有显著性降低(P<0.05);给药2h时,糖脂清各剂量组与模型组相比较,均有下降,但无显著性差异(结果见表5)。
表5三叶糖脂清对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠血清尿酸含量的影响
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
由以上实验结果可知本发明的药物组合物,即三叶糖脂清能够显著地降低尿酸浓度,因此其能够有效地用于治疗、抑制或预防高尿酸血症。
需要说明的是,在本文中,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等,均包含在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种药物组合物在制备治疗、抑制或预防高尿酸血症的药物中的应用,其中所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶6~25份,荷叶6~25份,山楂叶6~25份,丹参6~25份和赤芍6~25份。
2.如权利要求1所述的应用,其中所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶10~14份,荷叶10~14份,山楂叶10~14份,丹参13~17份和赤芍13~17份。
3.如权利要求2所述的应用,其中所述药物组合物由下述重量配比的药材制成:桑叶12份,荷叶12份,山楂叶12份,丹参15份和赤芍15份。
4.如权利要求1中任一项所述的应用,其中所述药物组合物进一步包括一种或多种适于口服制剂的药用赋形剂。
5.如权利要求4所述的应用,其中所述药物为选自片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、口服液、分散片、口崩片、滴丸中的任一种剂型。
6.如权利要求1-5中任一项所述的应用,其中所述药物组合物的制备方法包括:
(1)桑叶、荷叶一起用30~90%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩干燥为干膏;
(2)山楂叶用30~90%的乙醇水溶液回流提取,浓缩提取液,然后任选地用大孔树脂柱纯化,其中用40~95%的乙醇水溶液洗脱,最后浓缩干燥为干膏;
(3)丹参用30~95%的乙醇水溶液渗漉提取,浓缩提取液,然后任选地用大孔树脂柱进行纯化,其中用pH为2-6的酸水洗后,再以40~95%的乙醇水溶液进行洗脱,最后浓缩干燥为干膏;
(4)赤芍用水提取,浓缩水提液,然后任选地用大孔树脂柱纯化,其中用40~95%的乙醇水溶液洗脱,最后浓缩干燥为干膏;
(5)将步骤(1)-(4)所得干膏混合均匀。
7.如权利要求1-5中任一项所述的应用,其中所述药物组合物的制备方法包括:
(1)桑叶、荷叶一起用50~70%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩干燥为干膏;
(2)山楂叶用50~70%的乙醇水溶液回流提取,提取液浓缩后用大孔树脂柱纯化,其中用50~70%的乙醇水溶液洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;
(3)丹参用50%的乙醇水溶液渗漉提取,提取液浓缩后用大孔树脂柱进行纯化,其中用pH为4的酸水洗后,再以70%的乙醇水溶液进行洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;
(4)赤芍用水提取,然后用80%乙醇水溶液醇沉,经过滤、浓缩滤液除去乙醇后用大孔树脂柱纯化,其中用70%的乙醇水溶液洗脱,洗脱液浓缩干燥为干膏;
(5)将步骤(1)-(4)所得干膏混合均匀。
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