CN103563846A - 一种快大型乌肤鸡品系的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快大型乌肤鸡品系的培育方法,属于分子育种技术领域。本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡乌肤位点基因型,可以快速判定出该位点的基因型,克服了传统常规育种中测交繁琐、世代间隔长等缺点。采用本发明的方法生产基因型为FmFm的乌肤鸡品系,不仅避免了测交选育的繁琐,缩短了世代间隔,加快了育种进程,降低了培育成本;而且该品系乌肤性状均一,屠体更加美观;肉质细嫩,营养价值高。此外,该品系用作父本与快大型白羽肉鸡杂交配套,可生产出高生长性能的乌肤鸡。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种快大型乌肤鸡品系的培育方法,属于分子育种技术领域。
背景技术
乌骨鸡是闻名中外的药用家禽,1874年被国际上承认为标准品种,它具有特殊的药用、营养及观赏价值。而国外的快大型白羽肉鸡长速快。为了提高其生长性能,育种工作者在育种实践中往往要导入快大型肉鸡的血缘,这会使得乌肤性状发生分离。乌鸡的药用价值主要在于其黑色素的作用,乌肤性状是消费者对黑色素表达最直接的判定。为了能够在提供生长性能的同时又保持乌肤的性状,乌肤位点基因型的判定就显得非常重要。传统育种中常常采用测交的方法,依据杂交后代鸡的表型性状留种。即通过测交、繁殖扩群来淘汰隐性乌鸡群体里的乌肤杂合子个体。但是测交过程较为繁琐,周期长,且会受到扩群的大小的影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种快大型乌肤鸡品系的培育方法。
为了实现以上目的,本发明所采用的技术方案是:
一种快大型乌肤鸡品系的培育方法,包括以下步骤:
(1)利用乌肤鸡品种作为父本与快大型白羽肉鸡品种作为母本进行杂交,生产出F1代鸡,选留F1代乌肤鸡;
(2)F1代自交得到F2代,选留F2代乌肤鸡;
(3)利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡个体的基因型,选留乌肤位点为FmFm基因型的个体,淘汰乌肤位点为Fmfm基因型的个体,得到乌肤位点为FmFm基因型的公母鸡;
(4)对得到的FmFm基因型个体进行横交和扩繁,按照家系选择和个体选择方法,提高生长速度,同时提纯和固定乌肤性状,经过4个世代以上的选育后,得到乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡品系。
所述步骤(1)中的乌肤鸡品种为丝羽乌骨鸡、江山乌骨鸡、金湖乌凤鸡、余干乌骨鸡、郧阳乌骨鸡、雪峰乌骨鸡、四川山地乌骨鸡、乌蒙乌骨鸡、腾冲雪鸡、略阳鸡(黑河乌鸡)、他留乌骨鸡、无量山乌骨鸡、盐津乌骨鸡等。
所述步骤(1)中的快大型白羽肉鸡品种为罗斯308、科宝、艾维茵、哈巴德、艾拔益加(AA)、海波罗、迪高等。
所述步骤(3)中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡个体基因型的方法,包括以下步骤:以包含EDN3基因的待测鸡全血基因组DNA为模板,以引物对P为引物进行荧光定量PCR扩增,扩增片段的DNA序列如SEQ IDNo.3所示;
所述的引物对P为:
上游引物P-F:5’-CTTGACTTTTGGGATTTACCT-3’(如SEQ ID No.1所示),
下游引物P-R:5’-ACTGGTGCAGTATTTTCTGTT-3’(如SEQ ID No.2所示)。
该扩增序列的全长为134bp,位于鸡乌肤位点EDN3基因上,能够检测鸡乌肤基因位点EDN3基因是否存在拷贝数变异。
所述的荧光定量PCR扩增反应体系为:荧光定量PCR2×缓冲液10μL,ddH2O7μL,P-F0.5μL,P-R0.5μL,DNA模板2μL。
所述的荧光定量PCR2×缓冲液的成分为:5U/μL Taq DNA Polymerase,10×Buffer,25mM MgCl2,2mM dNTPs,SYBR Green I。
所述的荧光定量PCR扩增反应程序为:95℃预变性2min;40个循环:95℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸30s;72℃延伸10min;20℃保存。
具体的,所述步骤(3)中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因拷贝数,确定F2代乌肤鸡基因型的方法,还包括以下步骤:利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数,根据其拷贝数鉴定鸡乌肤位点的基因型。
所述的标准曲线的制作方法为:以白肤鸡全血基因组DNA作为荧光定量标准品,浓度分别为80,40,20,10,5,2.5ng/μL,以引物对P为引物进行荧光定量PCR扩增,以上述六个标准品的Ct值为纵坐标,以浓度的对数值为横坐标,建立标准曲线,求得标准曲线方程。
所述的利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数的方法为:荧光定量PCR扩增前,先将待测鸡的DNA稀释到同一浓度10ng/μL,再将待测鸡的Ct值代入标准曲线方程中,求出其对应的对数浓度,再转化为浓度,即为该待测鸡EDN3基因的相对拷贝数。
所述的根据拷贝数鉴定鸡乌肤位点的基因型的方法为:当待测鸡EDN3基因的相对拷贝数为2时,该个体为乌肤纯合子(FmFm);当待测鸡EDN3基因的相对拷贝数为1.5时,该个体为乌肤杂合子(Fmfm);当待测鸡EDN3基因的相对拷贝数为1,该个体为非乌肤纯合子(fmfm)。
优选的,将步骤(4)得到的乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡作为父本与快大型白羽肉鸡品种杂交配套,生产出更高生长性能的乌肤鸡。
本发明的有益效果:
采用本发明的方法生产基因型为FmFm的乌肤鸡品系,不仅避免了测交选育的繁琐,缩短了世代间隔,加快了育种进程,降低了培育成本;而且该品系乌肤性状均一,屠体更加美观;肉质细嫩,营养价值高。此外,该品系用作父本与快大型白羽肉鸡杂交配套,可生产出高生长性能的乌肤鸡。
本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡乌肤位点基因型,可以快速判定出该位点的基因型,缩短育种时间,提高育种效率,克服了传统常规育种中测交繁琐、世代间隔长等缺点。
具体实施方式
下述实施例仅对本发明作进一步详细说明,但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
本实施例中快大型乌肤鸡品系的培育方法,包括以下步骤:
(1)利用丝羽乌骨鸡纯系公鸡作为父本与罗斯308母鸡作为母本进行杂交,生产出F1代鸡,选留F1代乌肤鸡;
(2)F1代自交得到F2代,选留F2代乌肤鸡;
(3)利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡个体的基因型,具体包括以下步骤:
①样品的采集
对F2代选留的乌肤鸡翅静脉采血,加1/3抗凝剂,用蛋白酶K法提取血液DNA;
②DNA样品浓度调整
将待测样品的DNA利用微量分光光度仪进行浓度测定,根据所测浓度,将每一个待测样品DNA浓度加TE稀释至10ng/μL,稀释后用微量紫外分光光度计测定,4℃冰箱保存备用;
③标准品的制备
随机取一个白羽肉鸡的DNA样本,测定浓度后,将其稀释至80ng/μL,作为标准品母液,将母液倍比稀释为80,40,20,10,5,2.5ng/μL,作为制作标准曲线的6个标准品;
④引物设计
基因型鉴定所用到的引物对P的序列如下:
上游引物P-F:5’-CTTGACTTTTGGGATTTACCT-3’,
下游引物P-R:5’-ACTGGTGCAGTATTTTCTGTT-3’;
⑤qPCR扩增
以引物对P为扩增引物,建立20μL体系:荧光定量PCR2×缓冲液(包括5U/μL Taq DNAPolymerase,10×Buffer,25mM MgCl2,2mM dNTPs,SYBR Green I)10μL,ddH2O7μL,P-F0.5μL,P-R0.5μL,DNA模板2μL;反应程序为:95℃预变性2min;95℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸30s,40个循环;72℃延伸10min;20℃保存;
⑥qPCR扩增数据处理和基因型结果的判定
以80、40、20、10、5、2.5ng/μL的6个标准品的Ct值为纵坐标,以浓度的对数为横坐标,建立标准曲线,求出标准曲线的方程y=-0.285x+7.665,R2=0.9986和该反应的扩增效率92.72%;
将待测个体的Ct值带入方程,求出其对应的对数浓度,再转化为浓度,即为该待测个体EDN3基因的相对拷贝数;
将白肤个体的EDN3基因的相对拷贝数设为1,当待测个体的相对拷贝数为2时,该位点的基因型为FmFm;当待测个体的相对拷贝数为1.5时,该位点的基因型为Fmfm(由于待测样本DNA浓度标定和荧光定量PCR试验都会存在一定的试验误差,将此误差控制在20%之内即可,不影响对乌肤位点的判型);
(4)根据基因型判定结果,选留乌肤位点为FmFm基因型的个体,淘汰乌肤位点为Fmfm基因型的个体;
(5)对得到的FmFm基因型个体进行横交和扩繁,按照家系选择和个体选择方法,提高生长速度,同时提纯和固定乌肤性状,经过4个世代以上的选育后,得到乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡品系;
(6)将得到的乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡作为父本与快大型白羽肉鸡品种杂交配套,生产出更高生长性能的乌肤鸡。
Claims (10)
1.一种快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)利用乌肤鸡品种作为父本与快大型白羽肉鸡品种作为母本进行杂交,生产出F1代鸡;
(2)F1代自交得到F2代,选留F2代乌肤鸡;
(3)利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡个体的基因型,选留乌肤位点为FmFm基因型的个体,淘汰乌肤位点为Fmfm基因型的个体;
(4)对得到的FmFm基因型个体进行横交和扩繁,按照家系选择和个体选择方法,提高生长速度,同时提纯和固定乌肤性状,经过4个世代以上的选育后,得到乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡品系。
2.根据权利要求1所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述步骤(1)中的乌肤鸡品种为丝羽乌骨鸡、江山乌骨鸡、金湖乌凤鸡、余干乌骨鸡、郧阳乌骨鸡、雪峰乌骨鸡、四川山地乌骨鸡、乌蒙乌骨鸡、腾冲雪鸡、略阳鸡、他留乌骨鸡、无量山乌骨鸡或盐津乌骨鸡。
3.根据权利要求1所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述步骤(1)中的快大型白羽肉鸡品种为罗斯308、科宝、艾维茵、哈巴德、艾拔益加、海波罗或迪高。
4.根据权利要求1所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述步骤(3)中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡基因型的方法,包括以下步骤:以包含EDN3基因的待测鸡全血基因组DNA为模板,以引物对P为引物进行荧光定量PCR扩增,扩增片段的DNA序列如SEQ ID No.3所示;
所述的引物对P为:
上游引物P-F:5’-CTTGACTTTTGGGATTTACCT-3’,
下游引物P-R:5’-ACTGGTGCAGTATTTTCTGTT-3’。
5.根据权利要求4所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述的荧光定量PCR扩增反应体系为:荧光定量PCR2×缓冲液10μL,ddH2O7μL,P-F0.5μL,P-R0.5μL,DNA模板2μL。
6.根据权利要求4所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述的荧光定量PCR扩增反应程序为:95℃预变性2min;40个循环:95℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸30s;72℃延伸10min;20℃保存。
7.根据权利要求4所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述步骤(3)中利用荧光定量PCR测定F2代乌肤鸡EDN3基因的相对拷贝数,确定F2代乌肤鸡个体基因型的方法,还包括以下步骤:利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数,根据其相对拷贝数鉴定鸡乌肤位点的基因型。
8.根据权利要求7所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述的利用标准曲线求得待测鸡EDN3基因的相对拷贝数的方法为:荧光定量PCR扩增前,先将待测鸡的DNA稀释到同一浓度10ng/μL,再将待测鸡的Ct值代入标准曲线方程中,求出其对应的对数浓度,再转化为浓度,即为该待测鸡EDN3基因的相对拷贝数。
9.根据权利要求7所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:所述的根据其相对拷贝数鉴定鸡乌肤位点的基因型的方法为:当待测鸡EDN3基因的相对拷贝数为2时,该个体为乌肤纯合子;当待测鸡EDN3基因的相对拷贝数为1.5时,该个体为乌肤杂合子。
10.根据权利要求1所述的快大型乌肤鸡品系的培育方法,其特征在于:将步骤(4)得到的乌肤位点为FmFm基因型的快大型乌肤鸡作为父本与快大型白羽肉鸡品种杂交配套,生产出更高生长性能的乌肤鸡。
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