CN107047468B - 一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于动物育种技术领域，公开了一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法，包括如下步骤：S1.从黄色卷羽麒麟鸡群中选出白色卷羽公鸡和白色卷羽母鸡进行人工受精，得F1代；S2.将F1代中白色卷羽公鸡和白色卷羽母鸡进行人工受精，得F2代；S3.从F2代中选取白色卷羽母鸡与F1代中白色卷羽公鸡进行测交，得F3代；S4.将F3代中白色卷羽鸡自交四代得到纯种隐性白色卷羽麒麟鸡；本发明所述方法为隐性白色卷羽麒麟鸡纯系的选育奠定了基础，所培育的隐性白色卷羽麒麟鸡生长速度快、肉质好、抗热应激强，为国内纯种隐性白羽鸡品种选育提供了很好的材料。
Description
技术领域
本发明属于动物育种技术领域，具体地，涉及一种隐性白色卷羽麒麟鸡(白菊鸡)的培育方法。
背景技术
国内隐性白羽鸡主要是引入品种，成本高，地方隐性白羽品种较少，多数隐性白羽鸡品系存在着羽毛黑色素扩散基因、银色羽基因、与横斑羽基因等修饰基因，影响杂交后代白羽的隐性率，因此有必要选育出国内纯种隐性白羽鸡种。
麒麟鸡又名卷毛鸡、翻毛鸡，是粤西地区的地方优质鸡种，具有很好的肉用性能，有治胃病、风湿杂症及妇科病的功效，还具有观赏价值，其全身羽毛向外翻卷，部分皮肤裸露，能很好的适应夏季持续高温高湿的环境。卷羽鸡羽毛的羽轴向身体外弯曲，羽小枝间不能闭合，有钩羽小枝和无钩羽小枝不能与相邻羽小枝相勾连，不能形成闭合羽片，羽毛结构散热性好，因此对炎热的环境适应性强。麒麟鸡主要以黄羽为主，白羽数量较少。目前纯种隐性白卷羽麒麟鸡还未见报道，若能成功培育出纯种的隐性白色卷羽鸡，将会为国内纯种隐性白羽鸡的选育做出巨大贡献。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中隐性白羽鸡育种的缺陷和不足，提供一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法。
本发明的目的是提供一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的。
一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法，包括如下步骤：
S1.从黄色卷羽麒麟鸡群中选出白色卷羽公鸡和白色卷羽母鸡进行人工受精，得F1代；
S2.将F1代中白色卷羽公鸡和白色卷羽母鸡进行人工受精，得F2代；
S3.从F2代中选取白色卷羽母鸡与F1代中白色卷羽公鸡进行测交，得F3代；
S4.将F3代中白色卷羽鸡自交四代后挑取若干只提取DNA，用TYR基因等位基因引物进行PCR检测，若扩增出345bp的单条带，则成功培育得到纯种隐性白色卷羽麒麟鸡；
所述TYR基因等位基因引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示。
其中，TYR基因等位基因是证明是否为隐性白性状的重要基因。
优选地，所述人工受精、测交和自交均按公母1:6～12进行。
优选地，所述F1代出壳后戴套，进行疫苗免疫。
再优选地，所述疫苗免疫为1日龄颈部皮下注射马立克氏疫苗，7日龄滴鼻点眼新支二联苗，40日龄打新城疫1系疫苗。
优选地，所述各代鸡在育雏阶段平养，后期单体笼养。
优选地，所述PCR检测反应体系为TYR基因等位基因引物各0.3μL，2×Taq-Neo PCRMasterMix 10μL，超纯水8.1μL，模板1μL，共20μL。
优选地，所述PCR检测反应程序为94℃预变性2min，94℃变性30s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共34个循环，72℃终延伸5min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述方法可以选育出纯种隐性白色卷羽麒麟鸡；
(2)本发明所述方法培育得到的纯种隐性白色卷羽麒麟鸡生长速度快、肉质好、抗热应激强，为国内纯种隐性白羽鸡品种选育提供了很好的材料。
附图说明
图1为本发明亲本及后代图片；其中A为黄色卷羽麒麟鸡中挑出的白色卷羽公鸡，B为培育好的隐性白色卷羽麒麟育成鸡，C为黄色卷羽麒麟鸡中挑出的白色卷羽母鸡。
图2为本发明育成的隐性白色卷羽麒麟鸡与贵妃鸡杂交后代；其中A为杂交后代公鸡，B为杂交后代母鸡。
图3为本发明鸡血液DNA提取的琼脂糖凝胶电泳检测图。
图4为本发明隐性白羽麒麟鸡与贵妃鸡杂交后代TYR基因等位基因PCR扩增电泳检测图；其中，M为2,000mark，1、2为白色卷羽麒麟鸡与贵妃鸡杂交F1代Cc型，3为白色卷羽麒麟鸡cc型，4为贵妃鸡CC型。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一种隐性白色卷羽麒麟鸡(隐性白卷羽鸡)的培育技术
1、培育步骤
S1.从黄色卷羽麒麟鸡群体中发现并选出羽色为白色卷羽的公鸡和母鸡进行人工授精(公母比例按1:6～12)，得F1代；F1代出壳后戴翅号，进行疫苗免疫：1日龄颈部皮下注射马立克氏疫苗，7日龄滴鼻点眼新支二联苗，40日龄打新城疫1系疫苗；
S2.选择F1代中白色卷羽麒麟鸡的公鸡和母鸡再进行人工授精，得到F2代；
S3.从F2代中选取白色卷羽母鸡与F1代中白色卷羽公鸡进行测交，得F3代；
S4.将F3代中白色卷羽鸡自交四代后随机挑取若干只公母鸡，采集血液并提取DNA，用TYR基因等位基因引物进行PCR扩增电泳检测，若扩增产物为纯合345bp的单条带，证明成功选育纯种隐性白色卷羽麒麟鸡，如图1所示。
同时，将步骤S4选育出的白色卷羽麒麟鸡与贵妃鸡测交，后代均为有色半卷羽，如图2所示，进一步证实步骤S4选育得到了纯种隐性白色卷羽麒麟鸡；然后随机挑取若干只杂交后代进行TYR基因等位基因PCR检测。
上述分子检测的具体步骤为：随机挑选白羽麒麟鸡公母各30只、贵妃鸡各10只、白色卷羽麒麟鸡与贵妃鸡正反交F1代100只，翅静脉采血，ACD抗凝(柠檬酸钠1.32g，柠檬酸0.48g，葡萄糖1.47g，加水100mL高压备用)，用成都福际试剂盒提取DNA，DNA提取结果如图2所示，说明DNA质量良好可以进行后续试验，将提取的DNA进行PCR扩增或-20℃保存备用。
PCR检测所需引物由上海生工合成，所述引物序列如下所示：
引物a：5'-CCTCTGGCTCTATTTGACTACACAGT-3'；
引物b：5'-CAAAACCATAAATAGCACTGGAAATAG-3'；
引物c：5'-TTGAGATACTGGAGGTCTTTAGAAATG-3'。
PCR扩增体系为各引物0.3μL，2×Taq-Neo PCR MasterMix 10μL，超纯水8.1μL，模板1μL，共20μL。
PCR扩增程序为94℃预变性2min，94℃变性30s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共34个循环，再72℃终延伸5min；PCR扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测或4℃保存备用。
PCR产物电泳结果如图4所示：白色卷羽麒麟鸡仅有一条345bp的条带，为隐性纯合子，用cc表示，其羽色均表现为白色；白色卷羽麒麟鸡和贵妃鸡杂交后代有345bp和481bp两条带，为隐性白杂合子，用Cc表示，其羽毛表现为有色羽；贵妃鸡电泳扩增结果为仅有一条481bp的单一条带，为野生型纯合子，用CC表示，羽毛表现为有色羽。
从上述结果可以看出，通过本发明方法得到的白色卷羽麒麟鸡为隐性白。
2、隐性白色卷羽麒麟鸡性能测定
将培育得到的纯种隐性白色卷羽麒麟鸡的生长性状及血液生理生化指标和屠宰性能进行测定，结果如表1～4所示。
表1 16周龄(112日龄)隐性白色卷羽麒麟鸡体尺测定结果
注：同行数据上标※※表示公母之间差异极显著(P<0.01)，同行数据上标※间表示公母间差异显著(P<0.05)。
从表1的16周龄(112日龄)隐性白色卷羽麒麟鸡体尺的测定结果可以看出，隐性白色卷羽麒麟鸡公母间在各项指标中的差异都表现出公鸡显著大于母鸡。
表2 16周龄隐性白色卷羽麒麟鸡的血液生理指标测定结果
注：同行数据上标※※表示公母之间差异极显著(P<0.01)，同行数据上标※间表示公母间差异显著(P<0.05)。
从表2所示的16周龄样品的血液中所测定的生理指标可以看出，平均红细胞血红蛋白含量和血小板含量两个指标差异极显著和显著。公鸡的平均红细胞血红蛋白(MCH)极显著高于母鸡(P<0.01)，公鸡血小板含量显著高于母鸡(P<0.05)。而其他生理指标均差异均不显著(P>0.05)。这两组数据所测的指标值变异范围比较小，即变异系数均小于30％。
表3 16周龄隐性白色卷羽麒麟鸡血液生化指标测定结果
注：同行数据中上标※※表示公母之间差异极显著(P<0.01)，同行数据上标※表示公母间差异显著(P<0.05)。
从表3所示的16周龄白羽麒麟鸡血液所测定的血液生化指标可以看出，公、母鸡的总胆固醇(CHOL)、肌酸激酶(CK)两个指标的差异都极显著(P<0.01)，且母鸡高于公鸡。公、母鸡的γ-谷氨酸酰基转移酶(γ-GT)、甘油三酯(TG)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)等四个指标的差异都显著(P<0.05)，且母鸡高于公鸡(P<0.05)。公、母鸡的碱性磷酸酶(ALP)的指标值分别为298.03U/L、244.06U/L，且公鸡显著高于母鸡。这两组数据所测的指标的变异系数只有白麒麟母鸡的甘油三脂(TG)大于30％，其他变异的指标值均小于30％，其所测的指标值变异范围比较小。表3和表4的这些血液生理生化指标可以作为隐性白色卷羽鸡的生理指标特性。
就屠宰性能而言，本实施例中隐性白色卷羽麒麟鸡150日龄公鸡平均体重达1913.33g，母鸡平均体重达1745.67g，各项指标：屠体重、半净膛重、全净膛重、腹脂重、胸肌重、腿肌重、鸡胃重、心重、肝重、翅膀重、肌间脂肪宽和皮下脂肪厚如表4所示，表现出很好的屠宰性。
表4 150日龄隐性白色卷羽麒麟鸡的屠宰性能测定
另外，本发明培育得到的隐性白色卷羽麒麟鸡在广东炎热夏季饲养过程中，和同等饲养条件下其他片羽鸡品种相比，耐热能力强，表现为隐性白色卷羽麒麟鸡极少张口呼吸，且没有出现病症，可见该品种鸡的抗热应激性能好。
而且，本发明的鸡品种因其独特的外貌特征，具有很好的观赏价值。
本发明培育技术得到的隐性白色卷羽麒麟鸡受到当地养殖户的欢迎，群体已经逐渐扩大，具有良好的经济效益。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东海洋大学
<120> 一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法
<130> 2017
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
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<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ttgagatact ggaggtcttt agaaatg 27
Claims (1)
1.一种隐性白色卷羽麒麟鸡的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.从黄色卷羽麒麟鸡群中选出白色卷羽公鸡和白色卷羽母鸡进行人工受精，得F1代；
S2.选择F1代中白色卷羽麒麟鸡的公鸡和母鸡再进行人工受精，得到F2代；
S3.从F2代中选取白色卷羽母鸡与F1代中白色卷羽公鸡进行测交，得F3代；
S4.将F3代中白色卷羽鸡自交四代后挑取若干只提取DNA，用TYR基因等位基因引物进行PCR检测，若扩增出345bp的单条带，则成功培育得到纯种隐性白色卷羽麒麟鸡；所述TYR基因等位基因引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示；
所述人工受精、测交和自交均按公母1：6～12进行；
所述PCR检测反应体系为TYR基因等位基因引物各0.3μL，2×Taq-Neo PCRMasterMix10μL，超纯水8.1μL，模板1μL，共20μL；
所述PCR检测反应程序为94℃预变性2min，94℃变性30s，61℃退火1min，72℃延伸1min，共34个循环，72℃终延伸5min；
所述F1代出壳后戴套，进行疫苗免疫；
所述疫苗免疫为1日龄颈部皮下注射马立克氏疫苗，7日龄滴鼻点眼新支二联苗，
40日龄打新城疫1系疫苗；
各代鸡在育雏阶段平养，后期单体笼养。
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