CN111213613A - 黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，将黑羽青脚蛋鸡品系与黑麻羽青脚地方鸡杂交生产F1代，利用基因导入育种策略和分子标记辅助育种技术，将黑羽青脚蛋鸡品系高产蛋基因导入黑麻羽青脚地方鸡地方品种中，最终获青脚粉壳黑麻羽的肉蛋兼用型鸡新品系。实验表明，本发明成功实现了具有多个优良性状的鸡新品系的快速选育，可以获得具有土鸡体形外貌，同时产蛋量与蛋鸡的相似，体型外貌和产蛋性能稳定的鸡配套系，既提高了地方品种的产蛋量，同时又保留了地方品种蛋小、肉质佳和麻羽的特点。本发明可应用于同时携带黑麻羽、青脚和粉壳蛋鸡品系的快速简捷培育，以及相关品系的性能研究与生产等方面。

Description

黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法

技术领域

本发明属于家禽育种技术领域，尤其涉及一种黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法。

背景技术

随着我国社会和经济的快速发展，人们对于生活品质要求越来越高，近十年来，我国在禽肉方面的消费量快速增长，人们对于禽类的消费越来越讲究，因此蛋重、蛋壳颜色、壳光亮度、色泽度变得尤其重要；同时，在禽类的外观上，人们更加倾向于表型特征倾向于土鸡的禽类，而黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡由于外观符合消费者对颜色的喜好和需求，同时产粉壳蛋，壳色均匀、光亮、色泽度好、蛋大小适中，克服了目前粉壳蛋鸡配套生产中蛋重大、蛋壳色不均匀、壳光亮度、色泽度差等缺陷。因此，黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的培育为市场提供更好选择的新品种，对于之后在产蛋产肉性状上的进一步选育提供原材料，打下坚实的基础。

广西地方鸡遗传资源丰富，目前主要以肉用为主，由于产蛋量偏低，生产成本高，遇到种苗市场低迷的时候种蛋作菜蛋出售亏损更大。目前，国内也培育了较多高产的蛋鸡品种，但是，蛋和肉的品质风味远不如地方土鸡。近年来养禽业的市场波动幅度很大，种苗、肉鸡生产的淡旺季节区分十分明显。单一用途品种难以应对市场的变化，黑麻羽青脚蛋鸡具有优秀的产蛋性状但是其在肉质风味和蛋品质等方面仍有不足。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种选育进程快、选育准确性高的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，该法提高了地方品种的产蛋量，同时又保留了地方品种蛋小、肉质佳和麻羽的特点。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，将黑羽青脚蛋鸡品系与黑麻羽青脚地方鸡杂交生产F1代，利用MC1R基因黑羽分子标记剔除黑羽纯合子个体，并根据黑羽青脚蛋鸡产蛋量与地方鸡外貌特征进行淘汰；留种的F1公母鸡进行横交，扩大群体规模和固定优良性状，获得F2代幼雏，再次利用MC1R基因黑羽分子标记剔除黑羽纯合子个体，保留F2代中黑麻羽青脚粉壳蛋高产鸡，最终获青脚粉壳黑麻羽的肉蛋兼用型鸡新品系；黑羽青脚蛋鸡品系为京粉8号，黑麻羽青脚地方鸡为茶花鸡。

上述黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，包括以下步骤：

(1)选择茶花鸡(黑麻羽、青胫、粉壳蛋，广西贵港市港丰农牧有限公司自有黑麻羽品系)和京粉8号(黑羽、青胫、粉壳蛋，北京市华都峪口禽业有限责任公司)，通过表型选择从两个基础群中选择优秀个体，建立家系，每个家系公鸡与母鸡的比例以1：8的比例进行杂交产生后代F1；

(2)F1代4周龄，采集血液并提取基因组DNA，利用MC1R基因黑羽性状的分子标记检测鉴定F1代个体的基因型，剔除黑羽纯合子基因型的公鸡和母鸡；

(3)F1代公鸡在6周龄左右，选留鸡冠发育明显的个体；母鸡在8周龄左右，淘汰鸡冠未发育及面部黄色的个体，选留周龄体重、开产日龄、开产体重在平均数±10％、300日龄产蛋量在平均数以上的个体或家系；10周龄全群个体称重，主要选择生长发育的均匀度；上笼前根据羽毛颜色的表型验证分子筛选结果，淘汰倒冠、不起冠，残次个体；

(4)使用留种的公、母鸡个体以混精的方式进行横交，收集种蛋、孵化，获得F2代幼雏；

(5)于F2代3-4周龄，采集血液并提取基因组DNA，使用MC1R基因黑羽分子标记进行检测鉴定，剔除黑羽纯合子基因型的个体；

(6)根据生长发育速度和300日龄体重确定父系，根据300日龄产蛋量确定其为母系；根据正反反复选择法，结合纯系性能和杂交配合力测定结果，对纯系进行选择，采用家系育种方法，进行纯系的选育提高；

步骤(3)中选择生长发育的均匀度是选种前抽称群体10％个体体重，统计平均值，公鸡以平均值5～10％作为留种范围，母鸡以平均值±8％作为留种范围。

上述黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，还包括以下步骤：

(7)净化各品系沙门氏菌和鸡白血病。

MC1R基因黑羽分子标记的检测引物为引物MC1R-F和引物MC1R-R，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。

检测鉴定的PCR反应条件和反应程序分别为：

反应条件：20.0μL反应体系，包括1.0U Taq DNA聚合酶、1.0μL 10×buffer、50ng模板DNA、引物MC1R-F和引物MC1R-R各3.0pmol/L、4种dNTP各2.0μmol/L；

反应程序：95℃预变性5分钟，95℃变性20秒，59℃退火30秒，72℃延伸2分钟，72℃最后延伸5分钟。

针对目前黑麻羽青脚蛋鸡存在的问题，发明人建立了一种黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，将黑羽青脚蛋鸡品系与黑麻羽青脚地方鸡杂交生产F1代，利用基因导入育种策略和分子标记辅助育种技术，将黑羽青脚蛋鸡品系高产蛋基因导入黑麻羽青脚地方鸡地方品种中，最终获青脚粉壳黑麻羽的肉蛋兼用型鸡新品系。实验表明，本发明成功实现了具有多个优良性状(黑麻羽、青脚、粉壳、蛋小和肉质好)的鸡新品系的快速选育，可以获得具有土鸡体形外貌，同时产蛋量与蛋鸡的相似，体型外貌和产蛋性能稳定的鸡配套系，既提高了地方品种的产蛋量，同时又保留了地方品种蛋小、肉质佳和麻羽的特点。本发明可应用于同时携带黑麻羽、青脚和粉壳蛋鸡品系的快速简捷培育，以及相关品系的性能研究与生产等方面。

相对于传统家禽育种因无法对目标性状的基因型进行直接选择，导致了选择效率和准确性较低的问题，本发明因其在早期可以提前开展分子标记筛选，所以具有可以节省中间饲养费用等优点，而且分子标记辅助选择可显著提高选择效率和准确性，加快育种进程。用京粉8号作为母本，利用黑麻羽、青胫、粉壳蛋茶花鸡作为父本，生产出的F1代产粉壳蛋，该粉壳蛋壳色均匀、光亮、色泽度好、蛋大小适中、克服了目前粉壳蛋鸡配套生产中蛋重大，蛋壳色不均匀，壳光亮度、色泽度差等缺陷，可作为土鸡蛋销售。同时，该品系体型外貌像土鸡，淘汰鸡又可满足了消费者对土鸡口味以及外貌特征的偏好，提高经济效益。

附图说明

图1是黑羽分子标记MC1R基因PCR电泳结果图，图中：M表示DNA分子量Marker，1-12表示MC1R分子标记检测12只鸡的PCR电泳的结果。

图2是黑羽分子标记MC1R基因测序峰图。

图3是黑麻羽青脚粉壳肉蛋用型纯系公母鸡。

具体实施方式

实施例1黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用品种的培育与获得

参照前述分子培育方法进行，具体如下：

通过横交方式分别提纯广西贵港市港丰农牧有限公司的黑麻羽青脚鸡和北京市华都峪口禽业有限责任公司的京粉8号，通过正反交测定各组合的配合力，最终确定广西贵港市港丰农牧有限公司的黑麻羽青脚鸡作母本，北京市华都峪口禽业有限责任公司的京粉8号公鸡作为父本，两两杂交具有较好的杂交效果。

广西贵港市港丰农牧有限公司引种的黑麻羽青脚母鸡8000只，选择1200只外貌、体型俱佳的母鸡个体，与150只从北京市华都峪口禽业有限责任公司的京粉8号公鸡以混精的方式进行杂交、收集种蛋、孵化，获得10040只F1代幼雏。

F1代4周龄，采集血液并提取基因组DNA(参照《分子克隆实验指南IV》，以下DNA提取相同)，利用MC1R基因黑羽性状的分子标记检测(见表1)F1代个体的基因型，剔除黑羽纯合子基因型的公鸡和母鸡。同时，在饲养过程中随时淘汰外貌不合格、畸形和不健康个体，F1代公鸡在42日龄左右，选留鸡冠发育明显的个体。母鸡在56日龄左右，淘汰鸡冠未发育及面部黄色的个体，选留周龄体重、开产日龄、开产体重在平均数±10％、300日龄产蛋量在平均数以上的个体或家系。70日龄全群个体称重，主要选择生长发育的均匀度。选种前抽称群体10％个体体重，统计平均值；公鸡以平均值-5～10％作为留种范围。母鸡以平均值±8％作为留种范围。上笼前淘汰倒冠、不起冠，残次个体最终鉴定出符合要求的公鸡130只、母鸡1000只。

符合要求的130只公鸡、1000只母鸡以混精的方式进行横交。收集种蛋、孵化，获得F2代幼雏14200只。整个饲养和筛选过程与操作同F1代，选育目标为同时携带土鸡外貌、蛋鸡产蛋量的公、母鸡纯合子个体，最终获得包括公鸡50只，母鸡480只的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型蛋鸡纯系。如表2所示，本发明培育的新品种在产蛋量、生产性能和外貌特征上兼具京粉8号和茶花鸡的优点，产蛋量较多，又保留了地方品种蛋小、肉质佳、麻羽的特点。

在选育过程中的选择依据为：(1)各世代个体和生产记录(开产蛋重、开产体重、开产日龄、300日龄产蛋量、300日龄体重、300日龄蛋重)，按照成绩由高到低的选留；(2)利用分子标记，早期剔除黑羽个体，可减少鸡群的饲养量，提高经济性；(3)外观性状(羽色和体型)，符合品系特征的个体选留；(4)根据家系孵化成绩、生长发育、屠宰性能等，建立综合选择指数，由高到低选留。

表1本发明中所用的分子标记检测引物信息、PCR反应程序及基因型判定标准

表2培育新品种产蛋量、生产性能和外貌特征

序列表

<110> 广西大学

<120> 黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgtcgatgc tggcccccct 20

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ctaccaggag cacagcacca c 21

<210> 3

<211> 1048

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gctttgtagg tgctgcagtt gtgctcgggg ccacggcccc cagccagggg gtccctgggg 60

gctgaggccg gggccatgtc gatgctggcc cccctgcgcc tgctgcgcga gccctggaac 120

gccagtgagg gcaaccagag caacgccacg gccggggccg gaggtgcctg gtgccagggg 180

ctggacatcc ccaatgagct cttcctgacg ctggggctgg tgagcctggt ggagaacctg 240

ctggtggtgg ccgccatcct caagaacagg aatctgcact cgcccatgta ctacttcatc 300

tgctgcctgg ccgtctccga catgctggtg agcgtcagca acctggccga gacgctcttc 360

atgctgctga tggagcacgg cgtgctggtg atccgcgcca gcatcgtccg ccacatggac 420

aatgtcatcg acatgctcat ctgcagctcc gtcgtgtcct ccctctcctt cctgggggtc 480

atcgccgtgg accgctacat caccatcttc tatgcgctgc gctaccacag catcatgacg 540

ctgcagcgcg ccgtggtcac catggccagc gtctggctgg ccagcaccgt ctccagcacc 600

gtcttaatca cctactaccg caacaacgcc atcctgctct gcctcattgg cttcttcctc 660

ttcatgctgg tcctcatgct ggtgctctac attcacatgt tcgcgctggc gtgccaccac 720

gtgcgcagca tctccagcca gcagaagcag cccaccatct accgcaccag cagcctgaag 780

ggagccgtca cgctcaccat cctgctggga gtcttcttca tctgctgggg gcccttcttc 840

ttccacctca tcctcatcgt cacctgcccc accaacccct tctgcacctg cttcttcagc 900

tatttcaacc tcttcctcat cctcatcatc tgcaattcag tggtcgatcc cctgatctat 960

gccttccgga gccaggagct ccggcggacg ctgcgggagg tggtgctgtg ctcctggtag 1020

gaggcggcac agacaggagg atggatgg 1048

Claims (6)

1.一种黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于：将黑羽青脚蛋鸡品系与黑麻羽青脚地方鸡杂交生产F1代，利用MC1R基因黑羽分子标记剔除黑羽纯合子个体，并根据黑羽青脚蛋鸡产蛋量与地方鸡外貌特征进行淘汰；留种的F1公母鸡进行横交，获得F2代幼雏，再次利用MC1R基因黑羽分子标记剔除黑羽纯合子个体，保留F2代中黑麻羽青脚粉壳蛋高产鸡，最终获青脚粉壳黑麻羽的肉蛋兼用型鸡新品系；所述黑羽青脚蛋鸡品系为京粉8号，黑麻羽青脚地方鸡为茶花鸡。

2.根据权利要求1所述的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)选择茶花鸡和京粉8号，建立家系，每个家系公鸡与母鸡的比例以1：8的比例进行杂交产生后代F1；

(2)F1代4周龄，采集血液并提取基因组DNA，利用MC1R基因黑羽性状的分子标记检测鉴定F1代个体的基因型，剔除黑羽纯合子基因型的公鸡和母鸡；

(3)F1代公鸡在6周龄，选留鸡冠发育明显的个体；母鸡在8周龄，淘汰鸡冠未发育及面部黄色的个体，选留周龄体重、开产日龄、开产体重在平均数±10％、300日龄产蛋量在平均数以上的个体或家系；10周龄全群个体称重，主要选择生长发育的均匀度；

(4)使用留种的公、母鸡个体以混精的方式进行横交，收集种蛋、孵化，获得F2代幼雏；

(5)于F2代3-4周龄，采集血液并提取基因组DNA，使用MC1R基因黑羽分子标记进行检测鉴定，剔除黑羽纯合子基因型的个体；

(6)根据生长发育速度和300日龄体重确定父系，根据300日龄产蛋量确定其为母系。

3.根据权利要求2所述的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于步骤(3)中选择生长发育的均匀度是选种前抽称群体10％个体体重，统计平均值，公鸡以平均值5～10％作为留种范围，母鸡以平均值±8％作为留种范围。

4.根据权利要求2所述的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于还包括以下步骤：

(7)净化各品系沙门氏菌和鸡白血病。

5.根据权利要求2所述的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于：所述MC1R基因黑羽分子标记的检测引物为引物MC1R-F和引物MC1R-R，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2的碱基序列。

6.根据权利要求5所述的黑麻羽青脚粉壳肉蛋兼用型鸡的分子培育方法，其特征在于所述检测鉴定的PCR反应条件和反应程序分别为：

反应条件：20.0μL反应体系，包括1.0U Taq DNA聚合酶、1.0μL10×buffer、50ng模板DNA、引物MC1R-F和引物MC1R-R各3.0pmol/L、4种dNTP各2.0μmol/L；

反应程序：95℃预变性5分钟，95℃变性20秒，59℃退火30秒，72℃延伸2分钟，72℃最后延伸5分钟。

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