KR20120079387A - 글루코코티코이드 호르몬에 반응하는 형질전환 닭 및 그 제조방법 - Google Patents
글루코코티코이드 호르몬에 반응하는 형질전환 닭 및 그 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 형질전환 닭 및 그 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 닭의 배반엽단계 수정란(stage-X)에 재조합 렌티바이러스(lentivirus)를 이용하여 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 결합된 GFP 유전자가 도입된 형질전환 닭 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입된 제2세대 형질전환 닭(G1) 및 그 제조방법이 제공될 수 있다. 본 발명을 통해 제조된 형질전환 닭은 질병 조기식별 활용 가능성을 제공한다.
Description
본 발명은 형질전환 닭 및 그 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 닭의 배반엽단계 수정란(stage-X)에 재조합 렌티바이러스(lentivirus)를 이용하여 FK506 결합 단백질 51 (FK506-binding protein 51, FKBP51) 유전자의 프로모터와 결합된 녹색형광단백질 (Green Fluorescence Protein, GFP) 유전자가 도입된 형질전환 닭 및 그 제조방법에 관한 것이다.
지구온난화 등 생태계의 급격한 환경변화는 전 세계적으로 다양한 종류의 인수공통 신변종 바이러스들이 주기적으로 출현하고 있다. 그리고 현대 교통수단의 발달은 사람뿐만 아니라 동물의 장거리 이동이 가능하게 됨에 따라, 이들 신변종 바이러스의 대륙간 전파가 빠른 속도로 진행되고 있는 상황이다. 최근 들어 조류인플루엔자(avian influenza)가 자연숙주(natural host)인 철새로부터 닭과 돼지를 포함한 가축, 심지어 사람에게 전파되는 경우가 국내외적으로 자주 발생하고 있어, 이 인수공통바이러스의 인체 및 가축에 대한 감염으로 인한 경제적 및 사회적 피해가 우려되고 있는 상황이다. 그러나 이러한 질병의 심각성에도 불구하고 현재 조류인플루엔자 발생시 매몰과 소각 등 수동적 대책만 이루어지므로 질병예방을 통한 경제적 손실 방지가 시급히 요구되고 있는 상황이다.
글루코코티코이드(Glucocorticoid)는 콩팥의 부신 피질에서 분비되는 스트레스 호르몬이다. 글루코코티코이드는 외부의 스트레스와 같은 자극에 맞서 몸이 최대의 에너지를 만들어 낼 수 있도록 하는 과정에서 분비되어 혈압과 포도당 수치를 높이는 것과 같은 역할을 수행한다. 이 호르몬은 스트레스와 같은 외부 자극에 맞서 신체가 대항할 수 있도록 신체 각 기관으로 더 많은 혈액을 방출시키도록 한다. 그 결과 맥박과 호흡이 증가한다. 또한 근육을 긴장시키고 정확하고 신속한 상황 판단을 하도록 하기 위해 정신을 또렷하게 하며 감각 기관을 예민하게 한다. 또한 우리 몸의 에너지원인 포도당이 뇌로 바로 전달될 수 있도록 집중시키는 일도 한다. 그러나 문제는 스트레스를 지나치게 받거나, 만성스트레스가 되면 글루코코티코이드의 혈중농도가 높아지고 그 결과 식욕이 증가하게 되어, 지방의 축적을 가져온다. 또한 혈압이 올라 고혈압의 위험이 증가하며, 근조직의 손상도 야기될 수 있다. 불안과 초조 상태가 이어질 수 있고 체중의 증가와 함께 만성피로, 만성두통, 불면증 등의 증상이 나타날 수 있다. 또한 면역 기능이 약화되어 감기와 같은 바이러스성 질환에 쉽게 노출될 우려도 있다.
FK506 결합 단백질 51 (FKBP51)은 이뮤노필린(immunophilin)의 일종으로 스트레스나 감염에 의해 분비되어지는 글루코코르티코이드, 프로게스테론 그리고 안드로겐등과 같은 스테로이드 호르몬에 의해 그 발현이 증가되는 것으로 알려진 유전자이다.
상기 유전자의 조절기전을 이용하면 조류인플루엔자 감염 등의 스트레스에 반응하는 양상을 관찰할 수 있다. 즉, 스트레스에 의해 분비되는 글루코코티코이드에 반응하는 리포터 유전자를 발현하는 형질전환 동물을 개발하면, 앞서 설명한 바와 같이 인수공통바이러스의 인체 및 가축에 대한 감염으로 인한 경제적 및 사회적 피해를 줄일 수 있는 응용기술의 개발에 이용할 수 있는 장점이 있어 관련 기술 및 이를 위한 형질전환 동물의 개발이 요구된다.
이와 같은 기술적 배경 하에서, 본 발명자들은 예의 노력한 결과, 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입되어 조기에 질병을 진단할 수 있는 형질전환 닭을 생산하기에 이르렀다.
결국 본 발명의 목적은 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입된 형질전환용 벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입된 형질전환 닭을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입된 형질전환 닭의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터가 제공될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 스트레스에 반응하는 조류 유전자는 FKBP51일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벡터로 형질전환된 수정란이 제공될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벡터로 형질전환된 닭이 제공될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터를 제조하는 단계; 상기 벡터를 닭의 수정란에 형질도입하는 단계; 및 상기 수정란을 부화시켜 제2세대에서 형질전환된 개체를 확인하는 단계를 포함하는 형질전환 닭의 생산 방법이 제공될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 스트레스에 반응하는 조류 유전자는 FKBP51일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP일 수 있다.
본 발명에 따르면, 닭의 FKBP51 유전자의 프로모터와 GFP 유전자가 도입된 제2세대 형질전환 닭(G1) 및 그 제조방법이 제공될 수 있다. 본 발명을 통해 제조된 형질전환 닭은 질병 조기식별 활용 가능성을 제공한다.
도 1은 닭 FK506 binding protein 51 (FKBP51) 유전자의 프로모터(promoter)와 GFP 유전자가 결합된 렌티바이러스 벡터(lentiviral vector)의 모식도이다.
도 2는 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자의 인서트 구조를 나타낸다.
도 3은 A549와 HeLa 세포에서 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 감염시킨 후, 글로코코티코이드(glucocorticoid) 호르몬 유도체인 덱사메토손(dexamethosone) 처리시의 반응성 조사 결과를 나타낸다.
도 4는 후보형질전환 닭(G0)들의 정액 PCR 분석결과를 나타낸다.
도 5는 후보형질전환 닭(G1)들의 혈액 PCR 분석결과를 나타낸다.
도 6은 제2세대 형질전환 닭의 서던(Southern) 분석결과를 나타낸다.
도 7은 제2세대 형질전환 닭(G1)의 눈동자에서 GFP 발현 모습을 나타낸다.
도 8은 제2세대 형질전환 닭의 기관지 상피세포의 덱사메토손 (DEXA) 처리시 결과를 나타낸다.
도 2는 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자의 인서트 구조를 나타낸다.
도 3은 A549와 HeLa 세포에서 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 감염시킨 후, 글로코코티코이드(glucocorticoid) 호르몬 유도체인 덱사메토손(dexamethosone) 처리시의 반응성 조사 결과를 나타낸다.
도 4는 후보형질전환 닭(G0)들의 정액 PCR 분석결과를 나타낸다.
도 5는 후보형질전환 닭(G1)들의 혈액 PCR 분석결과를 나타낸다.
도 6은 제2세대 형질전환 닭의 서던(Southern) 분석결과를 나타낸다.
도 7은 제2세대 형질전환 닭(G1)의 눈동자에서 GFP 발현 모습을 나타낸다.
도 8은 제2세대 형질전환 닭의 기관지 상피세포의 덱사메토손 (DEXA) 처리시 결과를 나타낸다.
본 발명은 바이러스에 감염된 숙주의 면역반응[숙주의 바이러스 감염은 숙주의 방어기작의 하나로 사이토카인 interlukin-6의 분비를 촉진시키며 이어 글루코코티코이드(닭의 경우 주로 corticosterone)의 분비를 촉진하며 이어서 FK506 binding protein 51 유전자의 발현 증가로 이어지는 특징이 있음]을 이용한 생물학적인 질병조기식별 시스템을 개발하고자 한다. 즉 FK506 binding protein 51 유전자의 프로모터에 표지유전자인 GFP에 결합하여 바이러스 감염시 GFP 발현이 증가하는 형질전환 닭을 생산하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 닭 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자를 가지는 재조합 렌티바이러스 이용하여 닭의 배반엽단계 수정란에 재조합 렌티바이러스를 미세주입하여 닭 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자를 가지는 제2세대 형질전환 닭(G1)을 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명은 발현벡터구축과 재조합 렌티바이러스 생산, 세포수준에서 발현벡터의 호르몬 반응성 검증, 바이러스 미세주입과 수정란 인공배양, 제1세대 후보형질전환병아리 생산, 제1세대 형질전환 닭(G0) 선발, 목적유전자를 가지는 제2세대 형질전환 닭(G1) 생산, 그리고 최종적으로 선발된 제2세대 형질전환 닭에서 GFP 발현 검증 및 형질전환 닭의 기관지세포에서 호르몬 반응성 검증으로 구성된다.
본 발명의 일 측면에 따르면, 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터가 제공될 수 있다. 이 때의 리포터 유전자는 일반적으로 분자생물학 분야에서 형질전환된 유전자의 존재를 확인하기 위해 사용되는 리포터 유전자, 또는 기타의 물질이면 어느 것이든 상관없다.
일 실시예에 따르면, 상기 스트레스에 반응하는 조류 유전자는 FKBP51일 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기 리포터 유전자는 GFP일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벡터로 형질전환된 수정란이 제공될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 상기 벡터로 형질전환된 닭이 제공될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터를 제조하는 단계; 상기 벡터를 닭의 수정란에 형질도입하는 단계; 및 상기 수정란을 부화시켜 제1세대에서 형질전환된 개체를 확인하는 단계를 포함하는 형질전환 닭의 생산 방법이 제공될 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.
1.
렌티바이러스
벡터 구축과 재조합바이러스 생산
본 발명은 닭의 FK506 binding protein 51 유전자의 대략 2kb (1950bp) 크기의 프로모터 영역에 GFP 유전자가 결합된 렌티바이러스 벡터를 제공한다. 먼저 닭의 FKBP51 유전자 프로모터 영역과 GFP 유전자를 PCR 방법으로 증폭하여 각각 대략 2.0과 0.8kb 크기의 DNA 단편을 획득하였다. 그리고 증폭한 유전자들은 분자생물학적인 방법을 이용하여 도 1과 같은 렌티바이러스 벡터를 구축하였다. 구축한 바이러스 벡터는 염기서열 분석을 통하여 클로닝 하고자 한 프로모터 영역과 GFP 유전자가 정확히 클로닝 되었음을 확인하였다(서열번호 1 참조). 그리고 클로닝된 GFP 유전자는 단백질 합성의 시작(ATG)과 마지막(TAA)을 알리는 코돈이 정확히 존재함을 확인하였다.
닭의 FK506 binding protein 51 유전자 프로모터 영역과 GFP 유전자를 가지는 렌티바이러스 벡터를 이용하여 바이러스 패키징(packaging) 세포인 293FT에서 재조합 렌티바이러스를 생산하였다. 생산된 재조합 렌티바이러스의 타이터(titer)는 재조합바이러스 표면단백질인 gag 단백질의 양을 웨스턴 블롯(Western blot) 분석 방법으로 정량하였다.
2. 세포수준에서 발현벡터의 호르몬 반응성 조사
사람의 폐암(A549)과 자궁경부암(HeLa) 세포에 각각 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 감염시킨 후, 글루코코티코이드(glucocorticoid) 호르몬 유도체인 100nM 덱사메토손(dexamethosone)을 처리하였다. 호르몬 처리 후 3일차에 각각의 세포들에서 처리한 호르몬에 대한 반응성을 GFP유전자의 발현정도를 통하여 판단하였다. 도 3에 나타난 바와 같이, 두 종류의 세포 모두에서 GFP 발현이 증가되었다. 도 3의 (+)는 처리군을, (-)는 미처리군을 나타낸다. 특히 A549세포는 GFP발현의 증가 정도가 두드러져 보였다. 이상의 결과는 구축한 렌티바이러스 벡터가 세포수준에서 발명이 목적한 바와 같이 작동함을 나타낸다.
3. 바이러스 미세주입 및 수정란 인공배양
본 발명에서 사용한 수정란(stage-X)은 농촌진흥청 국립축산과학원에서 보유중인 갈색실용계가 산란한 수정란들을 사용하였다. 수정란의 인공배양은 국립축산과학원 계사 연구실에서 확립되어 있는 방법에 준하여 수행하였고, 방법을 간단히 표현하면 아래와 같다. 먼저 선발된 수정란보다 대략 3g 정도 무거운 일반계란들을 2차용 대리난각으로 선발하였으며, 선발된 계란의 뾰족한 부분을 직경 3.5cm로 자른 후, 계란 내부에 있던 난백과 난황을 모두 버리고 사용하였다. 바이러스 미세주입에 앞서 선발된 수정란들은 파각하여 대리난각으로 옮기고, 현미경하에서 모세유리관을 이용하여 대략 1μl정도의 FKBP51 유전자 프로모터 영역과 GFP 유전자를 가지는 재조합 렌티바이러스 미세주입하였다. 그리고 준비된 배양액을 이용하여 대리난각을 완전히 채운 후, 랩으로 밀봉하고 온도 37.6℃, 습도 65%-70%의 배양기에서 11분마다 90°씩 전란시키면서 3일간 2차 배양하였다. 3일간의 2차 배양이 끝난 후, 3차용 대리난각은 수정란의 무게보다 약 25g 무거운 신선란을 선별하여 둔단부를 직경 4cm로 자른 다음 대리난각으로 사용하였다. 준비된 대리난각으로 수정란과 내용물을 옮긴 후 랩으로 밀봉하고, 온도 37.6℃, 습도 65%-70%의 배양기에서 30분마다 30°씩 전란 시키면서 15일간 배양하였다. 이후 부화까지는 전란의 과정 없이 배양하였다. FKBP51 유전자 프로모터 영역과 GFP 유전자를 가지는 재조합 렌티바이러스를 269개의 수정란들에 미세주입하고 대리난각을 이용한 인공배양결과 84수의 후보형질전환병아리가 부화에 성공하였으며, 부화 후 일주일이상 생존한 후보형질전환병아리는 73수였다. 그리고 바이러스의 미세주입 없이 대리난각을 이용한 인공배양만을 행한 대조군은 전체 31개의 수정란에서 14수의 병아리가 정상적으로 부화하였다. 이는 대리난각을 이용한 닭의 수정란 배양시스템이 정상적으로 작동되었음을 보여주고 있다. 대리난각 방법을 이용한 전체적인 수정란 인공배양과 후보형질전환병아리 생산 결과는 표 1과 같다.
| 그룹 |
Stage-X 배아(n) |
배양 후 생존한 배아 |
부화한 병아리 (%) |
1주차 병아리(%) |
쌍동이 수(%) |
||
| 4 days (%) |
11 days (%) | 19 days (%) | |||||
| GFP | 269 | 250 (92.9) |
194 (72.1) |
171 (63.6) |
84 (31.2) |
73 (27.1) |
4 (1.5) |
| 대조군 | 31 | - | - | - | 14 (45.2) |
- | - |
4. 제1세대 후보형질전환 닭(
G0
) 유전분석
배반엽단계 수정란에 재조합 렌티바이러스를 주입하는 방법으로 생산된 제1세대 형질전환 닭(G0)은 100% 모자이크 형태로 생산된다. 그러므로 완전한 형질전환 닭은 생식선을 통해 형질전환 유전자가 다음 세대로 전이되어 제2세대 형질전환 닭(G2)이 생산되어야 형질전환 닭이 생산되었다고 말을 할 수 있다. 이러한 방법상의 특징으로 인하여 재조합바이러스에 운반된 외래유전자를 생식선(정액)에 가지는 제1세대 형질전환 닭(G0)의 선발은 필수적인 과정이다. 닭의 FKBP51 유전자 프로모터 영역과 GFP 유전자를 가지는 재조합바이러스를 미세주입하여 생산된 후보형질전환 닭의 수컷들의 정액 분석결과 2마리의 정액에서 목적유전자가 존재함을 확인하였다. 도 4는 후보형질전환 닭(G0)들의 정액 PCR 분석결과를 나타내며, Pc는 양성대조군, Nc는 음성대조군, B3, 7, 8 및 15: 후보형질전환 닭을 나타낸다. 이 때, PCR 검증에 사용한 프라이머들(primers)과 PCR 조건은 아래와 같다. 성 성숙이 완료된 후보형질전환 닭들에서 인공적으로 정액을 채취하고, 이들에서 게놈 DNA를 분리하여 다음의 primer들[서열번호 2의 GR2-GFP-F (5-CGA AAC TAC CAA TGG AAG GTG AGC AGA G-3)와 서열번호 3의 GR2-GFP-R (5-CGC TGA ACT TGT GGC CGT TTA CGT C-3)]과 taq-polymerase (AccuPrime SuperMix II, Invitrogen)를 사용하여 94℃-2분, 94℃-45초, 62℃-30초, 68℃-20초의 조건으로 PCR를 수행하여 정액에 목적유전자를 가지는 개체를 선별하였다.
5. 주입한 목적유전자를 가지는 형질전환 닭 선발
정액에 주입한 외래유전자를 가지는 형질전환 닭 2수의 정액을 각각 정상의 암컷들에게 인공수정하여 제2세대 후보형질전환병아리들을 부화하였다. 후보형질전환병아리들의 날개 정맥에서 5μl의 혈액을 채취하여 PCR 유전분석에 필요한 게놈 DNA를 추출하였다. PCR 유전분석은 기 확립되어 있는 방법에 준하여 실시하였다. 도 5는 후보형질전환 닭(G1)들의 혈액 PCR 분석결과를 나타낸다. 도 5를 참조하면, Pc는 양성대조군, Nc는 음성대조군. 열 11, 13, 및 25는 형질전환된 닭을 나타낸다. 최종적으로 PCR 분석결과 14마리의 혈액에서 양성의 PCR 결과를 나타내었다. PCR 방법으로 1차적으로 선발된 닭들은 재검증을 위하여 다시 채혈, 게놈 DNA를 추출하고, 도 2에 표시된 EcoRI/XhoI 제한효소들로 처리한 후, GFP 유전자를 탐침으로 서던블롯 분석을 수행하였다. 그 결과는 도 6에 나타나 있다. 도 6에서 Bk는 blank lane, Nc는 음성대조군, Pc는 양성대조군, 열 1, 2, 3, 9, 10, 및 11은 형질전환된 닭을 나타낸다. PCR과 서던 분석은 동일한 결과를 나타내었다. 이상의 결과는 닭의 FKBP51 유전자 프로모터와 GFP 유전자가 모자이크 형태가 아닌 완전한 형태로 형질전환된 닭이 생산됨을 보여주고 있다. 제1세대에서 제2세대 형질전환 닭의 생산 결과를 종합하면 하기의 표 2와 같다. 간단히 요약하면 제1세대 형질전환 닭 2수에서 정액을 채취하여 각각의 정상의 암탉에 인공수정하여 약 1300개의 수정란을 생산하였으며, 이들로부터 690수의 후보형질전환병아리들을 생산하였으며, 부화에 성공한 모든 개체들에서 채혈, 게놈 DNA 분리, 그리고 PCR 분석을 수행하여 최종적으로 제2세대 형질전환 닭 14수를 생산하였다. 표 2는 제2세대 형질전환 닭(G1) 생산 결과를 나타낸다.
| ID | 입란수수 | 부화수수(%) | 양성개체(G1) |
| B7(G0) | 658 | 335(50.9) | 7 |
| B8(G0) | 643 | 355(55.2) | 7 |
6. 제2세대 형질전환 닭의
GFP
발현 및
기관지상피세포에서
호르몬 반응성 조사
최종 선발한 형질전환 닭에서 GFP 발현을 조사한 결과 형질전환 닭의 눈동자에서만 GFP가 발현됨을 확인하였다. 도 7은 이러한 닭의 사진을 나타내고 있다. 그리고 글루코코르티코이드 호르몬 반응성을 조사하고자 형질전환 닭의 기관 상피세포를 추출하여 상기와 동일한 방법으로 글로코코티코이드 호르몬 유도체인 100nM 덱사메토손을 처리하고 24시간 후 GFP의 발현 양상을 조사하였다. 도 8을 참조하면, 글루코코티코이드 호르몬을 처리한 세포군에서 GFP 발현이 확연히 증가됨을 또한 확인하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항 들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION
<120> Glucocorticoid responsive transgenic chicken and producing method
thereof
<130> NPF18718
<160> 3
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 3932
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> FKBP51 promoter + GFP + IRES + Puro
<400> 1
ctagctgcac caacctgcag catggggctg gagaccataa atacatccca atgagaaaag 60
atgcgaggga gcagtgagcc aacctggcgg ccttgcaggg aaacgttttg ggtgcagaga 120
ggctttttat tttccaaatg cattgctgtt taccttggag tgctttgctc ggggctggtt 180
tgcaagggcg cccagcagca gaggtgggac cccaaggagc agccttggtt tatgggagtg 240
cacaggcacc tctgtgtcct tcaccttgct ccccactaaa ccctgcatca gggataaccc 300
ccaggtgccc gaaacctctg tttgaaccat gctggaggag catgtgcact aaccagggcg 360
agcacctcca ggctggagtt tcataagcag ttctctaggt ttgagtttta cagtttgcag 420
taatttgcag ttccggttcc taaaacacgg gctgcagtca aaatcctgca ttccagcttt 480
tgttacaacc tttccccacc ccctccccct cctctccatt ttaatctgag tacaaattgc 540
tgtcagcaca tcaagttcat gtgccagccg cactcggtac actgtgttct gagctcttca 600
aaaacaaaat cgctgcaggt accgggagaa caataagtca gcactgcagc tgaagggatg 660
tgcagagccc ggcgggggct ttgcttgctg taatccaaga gcaaccacag ccagctgacc 720
tgcttcagat agcgctgaaa tgctcctgga agccggagca gagatttccc cgttgctagt 780
gtgcaattag aatgagatct ctgcaccgtg catttcctgg cgtggggaag ttgacgtcag 840
cttgtgctct tctaacatcg aatttcctta caaacacgaa ttgcaaagtt ggggtggggg 900
aggacagagc accccccaca tcgtgctggt ggtacagcca ctggaagggc tctgttacag 960
aaacacctca gtgctctctt cctatgttta ttattgtata cgtttttttt tctgtgcaaa 1020
caaacaaatg gagcactacg gctgtgcaca acccactgca gccccccaca gctgctgctt 1080
tttaggactt tggctttatc acaggatcct gcacggggtg cagctgtgtc agtgaggacc 1140
cctccccgca gcactcacta cctggtggag cgaaatgcga agattcgggg gcaggaaatg 1200
cccttgagca gaagctggga tcactgggtc acaaatcggg gtgctgaggg cccgtagagc 1260
accacccagg gctggggatc cctggaagga caccggggga acctcctgga atggggcagc 1320
tcctgggtgg ggggtctacc ccggtttgca gggtcctggg gtgggagtgg ccacggcgac 1380
gttgctcgac ccctccagag gctctgctca aggctggggg agccccggag cattgcatga 1440
ctgggggacg gggtgtgccc ggggcggggg agatggggta ctgcatcggg acgaaaagct 1500
ccgggggcac tgcaggcagg gatgagacga tccccccgtg gttatcgcac ggaggtgaga 1560
ttacccccag aggcgtgaca tggagctgct cccttcgggg gcattgcatg gaggtgagga 1620
ccctccctag gtcaccgcac agggatgaga tttcccccaa ccagccccgg gaacattacg 1680
aacgtcctcc tccacccgac cccgttccgc tgctgcggcc ccgggcggtg cgtgaggagg 1740
gcggagctcc gcgggaacgg agcgggcggc ggggcgggaa aacgcactga tttgcataac 1800
acttccactc cagccaatga aaaagctctg cggacggtgt agagtggact ggcgggcgaa 1860
actaccaatg gaaggtgagc agaggggcgg ggcgaagcaa cggggagacc cggccggcgc 1920
gggcgcccgg tgccactccg agccgagcaa gctgggctgc aggaattcgc gtgttgatcc 1980
acaaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag 2040
ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc 2100
acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg 2160
cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac 2220
atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc 2280
atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac 2340
accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca aggaggacgg caacatcctg 2400
gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag 2460
aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag 2520
ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac 2580
aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac 2640
atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac 2700
aagtaaagcg gccgctcgag catgcattcg agggggggcc cggtacaatt ccccctctcc 2760
ctcccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt gtgcgtttgt 2820
ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc ggaaacctgg 2880
ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag gaatgcaagg 2940
tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac aaacaacgtc 3000
tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc tctgcggcca 3060
aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc acgttgtgag 3120
ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca aggggctgaa 3180
ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg gggcctcggt gcacatgctt 3240
tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaaacg tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt 3300
tttcctttga aaaacacgat gataagctta ccatgaccga gtacaagccc acggtgcgcc 3360
tcgccacccg cgacgacgtc cccagggccg tacgcaccct cgccgccgcg ttcgccgact 3420
accccgccac gcgccacacc gtcgacccgg accgccacat cgagcgggtc accgagctgc 3480
aagaactctt cctcacgcgc gtcgggctcg acatcggcaa ggtgtgggtc gcggacgacg 3540
gcgccgcggt ggcggtctgg accacgccgg agagcgtcga agcgggggcg gtgttcgccg 3600
agatcggccc gcgcatggcc gagttgagcg gttcccggct ggccgcgcag caacagatgg 3660
aaggcctcct ggcgccgcac cggcccaagg agcccgcgtg gttcctggcc accgtcggcg 3720
tctcgcccga ccaccagggc aagggtctgg gcagcgccgt cgtgctcccc ggagtggagg 3780
cggccgagcg cgccggggtg cccgccttcc tggagacctc cgcgccccgc aacctcccct 3840
tctacgagcg gctcggcttc accgtcaccg ccgacgtcga ggtgcccgaa ggaccgcgca 3900
cctggtgcat gacccgcaag cccggtgcct ga 3932
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> GR2-GFP-Forward
<400> 2
cgaaactacc aatggaaggt gagcagag 28
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> GR2-GFP-Reverse
<400> 3
cgctgaactt gtggccgttt acgtc 25
Claims (8)
- 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 스트레스에 반응하는 조류 유전자는 FKBP51인 것을 특징으로 하는 형질전환용 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP인 것을 특징으로 하는 형질전환용 벡터.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 벡터로 형질전환된 수정란.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 벡터로 형질전환된 닭.
- 스트레스에 반응하는 조류 유전자의 프로모터 및 상기 프로모터에 작동 가능하도록 리포터 유전자가 결합된 형질전환용 벡터를 제조하는 단계;
상기 벡터를 닭의 수정란에 형질도입하는 단계; 및
상기 수정란을 부화시켜 제1세대에서 형질전환된 개체를 확인하는 단계를 포함하는 형질전환 닭의 생산 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 스트레스에 반응하는 조류 유전자는 FKBP51인 것을 특징으로 하는 형질전환 닭의 생산 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP인 것을 특징으로 하는 형질전환 닭의 생산 방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110000637A KR20120079387A (ko) | 2011-01-04 | 2011-01-04 | 글루코코티코이드 호르몬에 반응하는 형질전환 닭 및 그 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110000637A KR20120079387A (ko) | 2011-01-04 | 2011-01-04 | 글루코코티코이드 호르몬에 반응하는 형질전환 닭 및 그 제조방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20120079387A true KR20120079387A (ko) | 2012-07-12 |
Family
ID=46712352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020110000637A KR20120079387A (ko) | 2011-01-04 | 2011-01-04 | 글루코코티코이드 호르몬에 반응하는 형질전환 닭 및 그 제조방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20120079387A (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103563846A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-02-12 | 河南农业大学 | 一种快大型乌肤鸡品系的培育方法 |
| CN103563851A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-02-12 | 河南农业大学 | 一种基于分子辅助选择的青胫显性白羽肉鸡品系的培育方法 |
-
2011
- 2011-01-04 KR KR1020110000637A patent/KR20120079387A/ko not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103563846A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-02-12 | 河南农业大学 | 一种快大型乌肤鸡品系的培育方法 |
| CN103563851A (zh) * | 2013-11-20 | 2014-02-12 | 河南农业大学 | 一种基于分子辅助选择的青胫显性白羽肉鸡品系的培育方法 |
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