CN108795940A - 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 - Google Patents
一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108795940A CN108795940A CN201810705708.5A CN201810705708A CN108795940A CN 108795940 A CN108795940 A CN 108795940A CN 201810705708 A CN201810705708 A CN 201810705708A CN 108795940 A CN108795940 A CN 108795940A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- juvenile hormone
- cyp15c1
- jhamt
- fold
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
- A01N57/10—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds
- A01N57/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds containing heterocyclic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法。该方法通过饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA(即dsRNA)导入到幼虫体内，实现防治鳞翅目害虫的目的；本发明方法用于防治鳞翅目害虫，防治特异性强，防治效果持久，安全，对哺乳动物等无害。
Description
技术领域
本发明涉及生物防治技术领域，具体的说，涉及一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法。
背景技术
鳞翅目昆虫，主要包括蛾、蝶两类昆虫。全世界已知约20万种，中国已知约8000余种。其中蛾类6000种，蝶类2000种。同时也是农、林害虫最多的一个目。绝大多数种类的幼虫为害各类栽培植物，体形较大者常食尽植物叶片或钻蛀枝干。体形较小者往往卷叶、缀叶、结鞘、吐丝结网或钻入植物组织取食为害。鳞翅目幼虫绝大多数为陆生，多为植食性，是一种广泛分布于全球的害虫。目前主要通过物理诱杀和化学杀虫剂进行防治，效果均有限，且杀虫剂的施用很可能带来生物安全性问题和抗性的产生，亟需发现新方法。
RNA干扰技术近年来发展迅速，利用dsRNA对基因表达水平进行下调很可能成为害虫防治的新手段。RNA干扰的成功与否主要取决于靶基因的选择，目前对昆虫的研究主要集中在神经、代谢以及生殖发育相关酶类，对于保幼激素合成的研究还较少。保幼激素作为调节昆虫生长发育的重要激素，其生物合成中涉及的酶类具有作为RNAi靶标的潜力。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法，其以保幼激素生物合成相关酶基因作为RNAi靶标，抑制害虫保幼激素的合成，调控鳞翅目害虫生长发育。
本发明的实现方式为，用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法，利用饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA导入到鳞翅目害虫体内，抑制其相关酶的表达，抑制保幼激素合成，导致幼虫的死亡，达到防治鳞翅目害虫的目的。本发明的技术方案具体介绍如下。
一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法，通过饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA导入到幼虫体内，实现防治鳞翅目害虫的目的；其中：针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA的合成步骤如下：
(1)提取总RNA，反转录全部mRNA为cDNA，根据已知的鳞翅目害虫的FOLD、JHAMT和CYP15C1基因设计特异性引物，引物均添加T7启动子，PCR扩增特异片段，利用琼脂糖凝胶电泳对引物进行验证；
(2)以咽侧体cDNA作为扩增的模板，这些碎片再一次进行克隆放大，dsRNA(法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1基因的双链RNA)的合成与纯化采用MEGA script RNAi试剂盒，扩增产物进行消化反应以去除混有的模板DNA和单链RNA；
(3)解剖鳞翅目害虫的幼虫，取出咽侧体，进行RNA提取，完成后续反转录步骤，采用q-RT-PCR检测表达水平，实现dsRNA的体外培养。
本发明中，步骤(1)中，扩增FOLD基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示；扩增JHAMT基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示；扩增CYP15C1基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:6所示。
本发明中，饲喂时，法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1基因的双链RNA和食物总重量的投料比分别在2.5～3.5mg/g之间。
本发明中，鳞翅目害虫包括烟草天蛾和棉铃虫。
本发明中，针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA，即dsFOLD、dsJHAMT、dsCYP15C1和dsGFP的序列分别如SEQ IDNO:9～SEQ ID NO:12所示。
和现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)因采用RNAi这种针对基因序列的技术，故防治特异性很强；
(2)双链RNA在体内可以持久存在，对于烟草天蛾等鳞翅目害虫的防治效果持久；
(3)保幼激素是昆虫体内的一类重要激素，广泛影响其生长发育，其合成途径普遍存在于昆虫中，而在哺乳动物中不存在。以该生物合成途径中的酶作为靶标，既可以影响鳞翅目害虫的生长发育，也可以使其死亡；而且对哺乳动物等无害。
附图说明
图1是离体培养RNAi对相关基因表达影响图示。
图2是离体培养RNAi对保幼激素合成影响图示。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步阐述，其目的仅在于更好理解本发明的内容。因此，本发明的保护范围不受所举之例的限制。
实施例1、防治烟草天蛾
(1)虫源及饲养方法，
烟草天蛾(Manduca sexta)的卵于Carolina Biological Supply Company(Burlington，NC)公司购买，在光照培养箱中进行人工饲养，光周期为L16：D8，饲养温度为26±1℃，相对湿度70％～90％。幼虫使用烟草天蛾专用饲料饲养，成蛾使用蔗糖液体饲料饲养(经121℃高温灭菌20min、质量分数为8％的蔗糖水溶液)。幼虫达到五龄后期出现蜕裂线时，单独转移至遮光的小管内，幼虫停止摄取食物，并在接下来的一日内蜕皮成蛹。将蛹转移至羽化箱内，羽化箱具有长时间光照以及放置烟草或其他茄科植物，不久蛹羽化为成虫，进行交配及产卵。
(2)实验方法
①RNA提取和引物设计
总RNA提取，用天根生化科技公司(TIANGEN)的RNA preppure动物组织总RNA提取试剂盒提取烟草天蛾总RNA。
反转录，用上海生工生物工程公司(Sangon Biotech)的M-MuLV First StrandcDNA Synthesis Kit反转录烟草天蛾的mRNA为cDNA。
引物设计，根据已报道的烟草天蛾FOLD、JHAMT和CYP15C1基因，dsGFP基因，设计特异性引物，进行PCR扩增后用琼脂糖凝胶电泳进行验证。引物序列见表1。
表1三种酶的引物
引物序列均在5’端添加T7启动子序列
②dsRNA的合成
合成FOLD、JHAMT、CYP15C1的特异性dsRNA片段为dsFOLD、dsJHAMT和dsCYP15C1，EGFP基因特异性dsRNA片段为dsGFP。
dsRNA合成和纯化采用Ambion公司的MEGA script RNAi kit。最后获得针对烟草天蛾FOLD、JHAMT、CYP15C1基因的dsRNA片段和针对EGFP的dsRNA片段，其序列分别如SEQ IDNO:9～12所示。
③dsRNA的离体培养
A.dsRNA导入，解剖五龄第一天的幼虫，取出咽侧体，转移到分别添加了1μL dsRNA的100μL Medium 199中进行培养，每一个培养管内放置10个CA，遮光置于摇床培养4h，环境温度为30℃。6h后将CA转移出培养管并进行总RNA提取。对照组添加dsGFP，其余条件相同。
B.RNA干扰后烟草天蛾相关基因表达检测，上述咽侧体经培养后用接种环挑出，进行RNA提取，完成后续反转录步骤，采用q-RT-PCR检测表达水平。设置三个生物学重复，三个技术重复，内参基因采用beta-actin。
C.RNA干扰后烟草天蛾保幼激素合成水平的检测，培养结束后，利用200μl正己烷对上述培养液进行萃取，涡旋混合2min，离心分离(3200rpm)。取出150μl正己烷层萃取液，利用GC-MS/MS对保幼激素进行测定。检测方法参考文献J.Chromatogr.A,2018,1538,67–74。
④dsRNA的饲喂
A.dsRNA导入，将孵化出的烟草天蛾幼虫置于添加了FOLD、JHAMT和CYP15C1 dsRNA的人工食物上，根据食物的重量称取相应的dsRNA，使其终浓度为3mg/g。每天更换一次食物。对照组添加相应重量的dsGFP，其余条件与实验组一致，每个实验组包含10个重复，每组内放置1只幼虫。
B.RNA干扰后烟草天蛾幼虫死亡率统计，记录三龄起每一龄的死亡率直至幼虫停止进食化蛹为止。
C.RNA干扰后烟草天蛾幼虫表型的观察，观察幼虫体型大小与对照组差异，死亡幼虫的表型特点。
(3)结果
离体培养RNAi对相关基因表达影响结果见图1。
由图1可见，以FOLD、JHAMT、CYP15C1为靶标的RNAi抑制了相关基因的表达。FOLD、JHAMT和CYP15C1 dsRNA的导入，使编码基因的表达水平下降了45.5％、94.8％和64.5％。
离体培养RNAi对保幼激素合成影响结果见图2。
由图2可见，RNAi抑制了保幼激素的合成。添加了FOLD、JHAMT和CYP15C1 dsRNA的实验组保幼激素合成量下降了64.4％、75.4％和70.6％。
表2提供了FOLD、JHAMT、CYP15C1为靶标的RNAi烟草天蛾死亡率。由表2可见，饲喂dsRNA的烟草天蛾幼虫的生长相比于对照组不同程度地有所抑制，尤其是CYP15C1。添加了CYP15C1 dsRNA的实验组幼虫在五龄化蛹之前全部死亡，尤其是四龄蜕皮至五龄阶段，蜕皮受阻。使用添加了JHAMT和FOLD dsRNA的人工食物饲喂后，幼虫在四龄时出现大量死亡，少数进入五龄阶段的幼虫体型明显小于正常生长的五龄幼虫，且出现停止进食，表皮发黑变红等现象。
实验结果表明，通过RNAi的方法，干扰保幼激素相关酶的表达，利用离体培养和饲喂的方法，即可抑制保幼激素合成，影响烟草天蛾幼虫生长。证明FOLD、JHAMT和CYP15C1作为RNAi靶标防治鳞翅目害虫具有开发潜力。
表2 FOLD、JHAMT、CYP15C1为靶标的RNAi烟草天蛾死亡率
实施例2、防治棉铃虫
(1)虫源及饲养方法，
本发明所用的棉铃虫于科云生物购买，后经实验室饲养繁殖。
饲料为人工饲料，由本实验室配置。水源为自来水。饲养条件为28±1℃，相对湿度为50％-70％，光周期为L14：D10。
(2)试验方法
①dsRNA的合成参考实施例1。FOLD、JHAMT和CYP15C1的dsRNA的序列分别如SEQ IDNO:9～11所示。
②dsRNA的饲喂
A.dsRNA导入，将孵化出的棉铃虫幼虫置于添加了FOLD、JHAMT和CYP15C1 dsRNA的人工食物上，根据食物的重量称取相应的dsRNA，使其终浓度为3mg/g。每天更换一次食物。对照组添加相应重量的dsGFP(序列如SEQ ID NO:12所示)，其余条件与实验组一致，每个实验组包含10个重复，每组内放置1只幼虫。
B.RNA干扰后棉铃虫幼虫死亡率统计，记录三龄起每一龄的死亡率直至幼虫停止进食化蛹为止。
C.RNA干扰后棉铃虫幼虫表型的观察，观察幼虫体型大小与对照组差异，死亡幼虫的表型特点。
(3)结果与分析
dsRNA饲喂后棉铃虫死亡结果见表3。
实验结果表明，根据棉铃虫FOLD、JHAMT和CYP15C1序列保守区设计的dsRNA，能有效干扰棉铃虫幼虫相应酶的表达，可以造成棉铃虫幼虫的大量死亡。证明以这三种酶作为RNAi靶标用于鳞翅目害虫的控制具有极大潜力。
表3 FOLD、JHAMT、CYP15C1为靶标的RNAi棉铃虫死亡率
序列表
<110> 上海应用技术大学 上海市农业科学院
<120> 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法
<141> 2018-07-02
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 1
taatacgact cactataggg tctcttcaac ccgaaactgg 40
<210> 2
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 2
taatacgact cactataggg cttgaacgag acaagggagc 40
<210> 3
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 3
taatacgact cactataggg agcctacaaa gagggacg 38
<210> 4
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 4
taatacgact cactataggg cctgctgtca tgatacggtg 40
<210> 5
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 5
taatacgact cactataggg tggagaccgt atcgaacaca 40
<210> 6
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 6
taatacgact cactataggg tccccctcgg gtatttttag 40
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 7
tgtggacggt gctactcttt 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 8
ttaacccagt tgattgcggc 20
<210> 9
<211> 367
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 9
gtaggttcgt aattcaaatt actaaggtgt cgtttttatt ttttgtgtaa taatatcctg 60
gcaacattta aactaaaagt attttataat actaacgtat ggtggtgacc cataaaataa 120
aaaataaata aatctcttga aatttatgtt catttgaagc atttgagcga caagcaatta 180
agcgaagaag atgtcatgag ggttattgat gtgaatttaa aagggcctgt tatttgttcg 240
cggcacgcag ttgcttctat gaagaaagct ggattcgatg gacacattat aaacattaac 300
agtgtggctg gacattacgt gccatttgat actatgttta atttgtactc gccatcgaag 360
cacgcag 367
<210> 10
<211> 499
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 10
cagcctacaa aagagggacg ctgtcgaatg tctagaagag tacgctaaaa atattaaatg 60
gaaaaaatat gctgatagag tcatagacat aggatgtgct gacggcagcg tgacgaatat 120
attgaaaagt tatatgccta ttaattataa gcagctactg ggctgtgata taagtgagaa 180
aatggtgaaa ttcgcgaacg atcatcacgg tgtagggagg acgtcgttta gagtcctgaa 240
catcgaagga gaactgcccg acgagctcag ggatagcttc gaccacgcct tctcgttcta 300
cacgcttcat tggattagaa atcaggagaa agcattcaaa aatatattcg atatattggc 360
aaacggtggt gactgtttac ttttatttat gggccatact ccgatattcg acgtgtatcg 420
aaaattatct cgcagtaaca aatggagctc ctggttgaaa gacgtcgacc gttacgtctc 480
accgtatcat gacagcagg 499
<210> 11
<211> 493
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 11
tggagaccgt atcgaacaca gcagtcttta tgctgcttca tattgtacgg aacgatactg 60
ttcaacagag acttcaagaa gaaataaaag ctgtgattgg tcaagaacgt tttcctacgc 120
tgaatgatag aataaaaatg ccatacaccg aagcggtact tctagagtcg ttgcgcatat 180
ccagtgtggc agcaatgggc attccacata tggccctcaa agatacacaa ctgggcaact 240
ataatatacc aaagggaaca tttatattaa tgtcactgta tgatcttcat aacggaggtc 300
attggaaaga ccccgatgtg tttaaaccag aacgatttct tacaaaggat cgaaatgtaa 360
ttcaggatga ctggctcatg ccgtttggga ctggaaaaag gaggtgcatc ggcgaaggat 420
tggctcgagc ggagttgttt atgtttgtta ctcatttact gcagaaattc agtctaaaaa 480
tacccgaggg gga 493
<210> 12
<211> 505
<212> DNA
<213> 人工序列(人工序列)
<400> 12
gaacacatta ctcgaggcca gaggaaaggt tgccaagcaa gcactcactt ttatttcaga 60
tggttgtaaa attctaactc actcccgatc tcgcgtagtt ctgcaagcaa tgttagaagc 120
agcaaaagca aacaggcggt ttcaagtgtt tgtcacagtt tctgctcctg acaatactgg 180
tgaaataatg cacaaacagc tggtcgaagc tggtatcgac gccacgttga ttcttgactc 240
agccgtggga tacatcatgg aacaggttga tatagtcatg cttggtgccg aaggagtcac 300
cgaaagcgga ggaattatta ataaggttgg aacctactca ataggaattt cagcattgga 360
gctgaaaaag cccgtatttg tactgacaga aagtttcaaa ttcgcacgaa tatacccact 420
gaaccagcaa gatgtcccca aggagttcaa atacctatct agtacgctaa agtctggcaa 480
agatctgtcg aaagaacacc cactg 505
Claims (5)
1.一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法，其特征在于，通过饲喂的方式将针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA导入到幼虫体内，实现防治鳞翅目害虫的目的；其中：法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA的合成步骤如下：
(1)提取总RNA，反转录全部mRNA为cDNA，根据已知的鳞翅目害虫的FOLD、JHAMT和CYP15C1基因设计特异性引物，引物均添加T7启动子，PCR扩增特异片段，利用琼脂糖凝胶电泳对引物进行验证；
(2)以咽侧体cDNA作为扩增的模板，这些碎片再一次进行克隆放大，dsRNA的合成与纯化采用MEGA script RNAi试剂盒，扩增产物进行消化反应以去除混有的模板DNA和单链RNA；
(3)解剖鳞翅目害虫的幼虫，取出咽侧体，进行RNA提取，完成后续反转录步骤，采用q-RT-PCR检测表达水平，实现dsRNA的体外培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，扩增FOLD基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示；扩增JHAMT基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:4所示；扩增CYP15C1基因片段的上游引物的序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:6所示。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，饲喂时，法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1基因的双链RNA和食物总重量的投料比分别在2.5～3.5mg/g之间。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，鳞翅目害虫包括烟草天蛾和棉铃虫。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对法尼醇脱氢酶FOLD、保幼激素甲基转移酶JHAMT、保幼激素环氧酶CYP15C1相关基因的双链RNA，即dsFOLD、dsJHAMT、dsCYP15C1和dsGFP的序列分别如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810705708.5A CN108795940A (zh) | 2018-07-02 | 2018-07-02 | 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810705708.5A CN108795940A (zh) | 2018-07-02 | 2018-07-02 | 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108795940A true CN108795940A (zh) | 2018-11-13 |
Family
ID=64073939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810705708.5A Pending CN108795940A (zh) | 2018-07-02 | 2018-07-02 | 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108795940A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111849984A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 华中农业大学 | 一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA |
| CN114196673A (zh) * | 2021-11-04 | 2022-03-18 | 华南师范大学 | 一种胚胎特异的锌指蛋白在鳞翅目害虫防治方面的应用 |
| CN115777716A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-03-14 | 西南大学 | 靶向jhamt的小分子抑制剂在制备昆虫杀虫剂中的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103898112A (zh) * | 2012-12-26 | 2014-07-02 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因的dsRNA的重组杆状病毒 |
-
2018
- 2018-07-02 CN CN201810705708.5A patent/CN108795940A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103898112A (zh) * | 2012-12-26 | 2014-07-02 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因的dsRNA的重组杆状病毒 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHIEKA MINAKUCHI等: "RNAi-mediated knockdown of juvenile hormone acid O-methyltransferase gene causes precocious metamorphosis in the red flour beetle Tribolium castaneum", 《FEBS JOURNAL》 * |
| FERNANDO G. NORIEGA: "Juvenile hormone biosynthesis in insects: what is new, what do we know, and what questions remain?", 《INTERNATIONAL SCHOLARLY RESEARCH NOTICES》 * |
| 潘銮凤: "《分子生物学技术》", 31 October 2008 * |
| 顾晓军等: "内分泌干扰与害虫控制-以保幼激素为例", 《世界科技研究与发展》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111849984A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-30 | 华中农业大学 | 一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA |
| CN111849984B (zh) * | 2020-07-21 | 2021-07-16 | 华中农业大学 | 一种能提高金龟子绿僵菌防治白蚁效果的IDH基因dsRNA |
| CN114196673A (zh) * | 2021-11-04 | 2022-03-18 | 华南师范大学 | 一种胚胎特异的锌指蛋白在鳞翅目害虫防治方面的应用 |
| CN114196673B (zh) * | 2021-11-04 | 2022-07-26 | 华南师范大学 | 一种胚胎特异的锌指蛋白在鳞翅目害虫防治方面的应用 |
| CN115777716A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-03-14 | 西南大学 | 靶向jhamt的小分子抑制剂在制备昆虫杀虫剂中的应用 |
| CN115777716B (zh) * | 2022-11-26 | 2024-03-22 | 西南大学 | 靶向jhamt的小分子抑制剂在制备昆虫杀虫剂中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102358902B (zh) | 家蚕丝素重链基因突变序列及突变的方法和应用 | |
| CN104610440B (zh) | ABC转运蛋白基因ABCH1及其特异性dsRNA在小菜蛾防治和Bt抗性治理中的应用 | |
| CN103201385A (zh) | 下调昆虫害虫中的基因表达 | |
| CN106520792B (zh) | 一种分离的中黑盲蝽基因及其编码的蛋白 | |
| CN103719136A (zh) | 控制害虫的方法 | |
| CN108795940A (zh) | 一种运用RNAi有效防治鳞翅目害虫的方法 | |
| CN104178490A (zh) | 用于生物防控的禾谷孢囊线虫RNAi位点序列及其载体和应用 | |
| CN110117320A (zh) | 棉花GhCAL-D07基因在促进植物开花中的应用 | |
| CN109735562A (zh) | 一种经济植物有效根系转基因系统的构建方法 | |
| CN107278228A (zh) | 用于控制半翅目害虫的HUNCHBACK基因的亲代RNAi抑制 | |
| CN110195049B (zh) | 褐飞虱眼色基因NlGCHI及其编码蛋白、应用 | |
| CN108728369B (zh) | 西瓜枯萎病菌RNAi组份FonDCL1基因缺失突变体及其构建方法 | |
| CN108849890B (zh) | 水稻萜烯合成酶tps46基因在防治大螟方面的应用 | |
| CN114478735A (zh) | 一种蚜虫高致死基因及其在蚜虫防治中的应用 | |
| CN109679954A (zh) | 基于CRISPR/Cas9的小菜蛾APN3a基因的敲除和应用 | |
| CN109776659A (zh) | cry2Ah-vp基因在抗黏虫中的应用 | |
| CN104630275A (zh) | 一种通过灌溉防治害虫的RNAi技术及其应用 | |
| CN102851297B (zh) | 一种烟蚜hunchback基因cDNA及其应用 | |
| CN108559753B (zh) | 小麦条锈菌pstg_17694基因在条锈病防治中的应用和抗条锈菌小麦的培育方法 | |
| CN108034662B (zh) | 小麦条锈菌pstg_06025基因在条锈病防治中的应用和抗条锈菌小麦的培育方法 | |
| CN104313031B (zh) | 青虾蜕皮抑制激素基因及其在加速青虾蜕皮和生长中的应用 | |
| CN110583581A (zh) | 一种新型烟粉虱若虫rna干扰方法构建 | |
| CN102492688B (zh) | 大豆食心虫18srDNA基因及其应用 | |
| CN109680010A (zh) | 基于CRISPR/Cas9的小菜蛾ABCC3基因的敲除和应用 | |
| CN110951730B (zh) | 青翅蚁形隐翅甲V-ATPase-A基因的dsRNA及其人工饲料和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181113 |