CN108220408B

CN108220408B - 一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法

Info

Publication number: CN108220408B
Application number: CN201810029015.9A
Authority: CN
Inventors: 李春苗; 赵振华; 黎寿丰; 黄华云; 王钱保; 黄正洋; 梁忠; 薛龙岗
Original assignee: Yangzhou Xianglong Poultry Development Co ltd; Jiangsu Institute Poultry Sciences
Current assignee: Yangzhou Xianglong Poultry Development Co ltd; Jiangsu Institute Poultry Sciences
Priority date: 2018-01-12
Filing date: 2018-01-12
Publication date: 2021-07-06
Anticipated expiration: 2038-01-12
Also published as: CN108220408A

Abstract

本发明公开了一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法，属于分子育种技术领域。本发明采用分子辅助选择方法鉴定了鸡隐性白羽基因和性连锁矮小基因的基因型，可以快速判定基因型，生产出基因型为cc/dwdw的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系。本方法可以避免测交选育的繁琐，缩短世代间隔，仅2个世代就可以选育出节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系，有效降低了培育成本。采用本发明选育的节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系具有个体小、耗料少、基础代谢低、产蛋率高、肉味鲜美、饲养密度大、饲料报酬高、节约成本等优点，可作为商品鸡直接进行生产，也可以配套应用。

Description

一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法

技术领域

本发明涉及一种节粮型青胫白羽肉鸡新品系的选育方法，具体涉及一种利用PCR技术快速鉴定基因型和基因片段缺失的方法，属于家禽分子育种技术领域。

背景技术

随着人们经济收入的不断增长和生活水平的提高，禽产品在口感、风味和安全性等方面的指标愈来愈受到消费者的重视。目前在肉鸡生产中，国外进口的快大型白羽肉鸡或有色羽肉鸡品种的饲养数量开始下降，优质黄羽肉鸡的饲养量在不断上升。特别是在我国大部分地区尤其以青脚、麻羽的优质肉鸡更加受到消费者的亲睐，市场售价比其它仿土鸡或快大肉鸡要高出15～40%左右，其市场应用前景十分广阔。

就目前国内青腿麻鸡配套生产的现状来说，一般采用青腿麻羽的地方鸡种公鸡作第一父本与隐性白羽品系杂交，再采用另一青腿麻羽公鸡作第二父本组成三元配套。但在这些杂交配套中存在的主要问题是：由于在配套中采用了引进的速生型隐性白羽鸡种，首先是母本的耗料多，对生产不经济，其次是商品鸡具有较多的外血而直接影响了肉质风味，再者是制种复杂，增加商品代鸡的生产成本，同时，商品鸡的适应性较差，不适合我国目前生态放牧饲养方式。因此，培育小型优质高产的母本品系参与配套，是进行优质青腿麻鸡生产的技术关键和发展趋势。

鸡的白羽分为显性白羽和隐性白羽，而其中隐性白羽又有多种，TYR（络氨酸酶）基因控制的隐性白羽是其中重要的一种。TYR基因位于常染色体上，正常的TYR基因控制的性状是有色羽，当TYR两等位基因中插入了一个逆转录病毒后导致出现隐性白羽。因此当等位基因含有正常TYR基因时多数是有色羽（携带有显性白羽的鸡种如白来航除外），若等位基因均为逆转录病毒插入的TRY基因时则为隐性白羽。鸡TYR基因的DNA结构包括5个外显子和4个内含子，据报道其第四内含子的5899处有一个大约为7.7kb的禽类逆转录病毒的插入片段，有这一片段插入的个体表现为全白的羽毛，没有插入的为非全白；

邵伯鸡配套系由江苏省家禽科学研究所主持进行攻关，通过在我国优质地方鸡种中导入dw基因，在国内外首次育成矮小型青腿黄羽优质肉鸡品系（S3系）并参与配套。该配套系已通过国家级品种（配套系）审定（农09新品种证字第12号），是具有自主知识产权的首个国家级优质肉鸡配套系。经鉴定，该项技术成果达国际先进水平。性连锁矮小基因（dw）是生长激素受体（GHR）基因缺陷型，Dw基因是位于Z染色体上的伴性遗传基因，处于肝脏坏死基因in位点和无翼基因we位点之间，靠近银色（S）、金色（s）羽基因和慢羽（K）、快羽（k）基因。正常基因DW对dw为显性，因此只有矮小型纯合型公鸡和携带矮小型基因的母鸡表现出矮小性状。dw和DW为不完全等位基因，dw基因同时具有质量性状基因和数量性状基因的特性，矮小型鸡是纯合型性连锁矮小基因（dw）的表型，具有个体小、耗料少、基础代谢低、产蛋率高、饲养密度大、饲料报酬高、节约成本等优点。

发明内容

本发明的目的是在于克服传统育种方法时间长的缺陷，寻找一种快速、可靠的用于鸡隐性白羽基因和矮小基因鉴定的分子生物学方法，快速培育出一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系，可用于优质青腿麻鸡的配套生产。本发明建立的方法，可以快速鉴定隐性白羽基因和矮小基因，扩大携带隐性白羽基因和矮小基因的繁殖群体，缩短育种时间。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，包括以下步骤：

（1）利用邵伯鸡S3系（黄羽、青矮胫）作为父本，隐性白羽鸡（隐性白羽、正常黄胫）作为母本进行杂交，生产出F1代；

（2）在F1代中选择白羽、青矮胫的母鸡作为母本，选择白羽、正常青胫的公鸡作为父本；

（3）利用AS-PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型

根据鸡隐性白羽控制基因（插入逆转录病毒的TYR基因）和有色羽控制基因（TYR基因）的核苷酸序列分别设计引物对P1和引物对P2；其中，引物对P1用于检测有色羽C等位基因，引物对P2用于检测隐性白羽c等位基因；提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对P1和引物对P2同时进行PCR扩增，根据电泳结果判断鸡的羽色基因型：若只有引物对P1扩增出产物或引物对P1和引物对P2同时扩增出产物，则是非隐性白羽纯合子（表型可能为有色或白羽），基因型表现为CC/Cc；若只有引物对2扩增出产物，则为隐性白羽纯合子（表型为白羽），基因型表现为cc。

所述引物对P1的上游引物根据TYR基因第4内含子核苷酸序列设计，下游引物根据TYR基因第5外显子核苷酸序列设计；引物对P2上游引物根据TYR基因第4内含子核苷酸序列设计（与引物对P1相同），下游引物根据插入鸡TYR基因的逆转录病毒核苷酸序列设计。

所述的引物对P1为：

上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’。

所述引物对P2为：

上游引物，P2-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；(同P1-F)

下游引物，P2-R：5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’。

（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代。

（5）利用普通PCR方法测定F2代中纯合隐性白羽，青胫公母鸡的矮小基因。

根据dw基因（即GHR基因外显子9和3’非翻译区1.7kb的缺失片段）核苷酸序列设计引物对P3用于检测矮小基因，提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对P3进行PCR扩增，根据电泳结果判断鸡的矮小基因型：若有扩增产物，说明GHR基因没有片段缺失，基因型为DWDW或DW/dw（表型为正常胫），若没有扩增产物，说明GHR基因有缺失片段，基因型为dwdw（表型为矮小胫）。

所述引物对P3的上、下游引物均根据GHR基因外显子9和3’非翻译区1.7kb缺失片段的核苷酸序列设计。

所述引物对P3为：

上游引物P3-F：5’-cagcttgggcttgtgtgctgaaacca-3’

下游引物P3-R：5’-tcataattaaactacatcatgtagt-3’

（6）在F2代个体中挑选矮脚青胫隐性白羽个体用引物对P3进行矮小基因验证。确保矮小基因的导入。

本发明提供的上述引物可以作为节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系分子鉴定标记的应用。

此外，本发明还提供了一种快速鉴定隐性白羽和矮小基因的方法，以受测鸡种在血液中提取的DNA为模板，用权利要求所述引物P1和P2同时进行有色羽基因和隐性白羽基因PCR扩增，1.5%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，根据条带判断是否含有逆转录病毒的TYR基因，扩增片段为284bp或284/771bp条带，基因型为CC/Cc，表型为有色羽或白羽；扩增片段仅为771bp条带，基因型为cc，表型为隐性白羽。用权利要求所述引物3进行dw基因PCR扩增，扩增片段有483bp的条带，说明GHR基因没有缺失，表现为正常胫；若没有扩增片段则说明GHR基因有缺失，表现为矮小胫。

所述AS-PCR 扩增的反应体系为25.0 μL，所述反应体系由以下成分组成：10×PCRBuffer 2.5 μL， dNTP 2.0 μL（2 mmol/L），TaqDNA聚合酶(5 U/μL ) 0.5 μL，P1或P2上游引物为1.0μL、P1、P2下游引物均为0.5ul， DNA模板1.0 μL，ddH₂O 17.0 μL。

所述普通PCR 扩增的反应体系为25.0 μL，所述反应体系由以下成分组成：10×PCR Buffer 2.5 μL， dNTP 2.0 μL（2 mmol/L），TaqDNA聚合酶(5 U/μL ) 0.5 μL，所述引物P3的上、下游引物各1.0 μL，DNA模板1.0 μL，ddH₂O 17.0 μL。

所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10分钟，4℃保存。P1/P2和P3的退火温度分别为65℃和59℃。

所述琼脂糖凝胶电泳检测步骤为：取3.0ul PCR扩增产物与0.8ul 6×LoadingBuffer混合后用1.5%琼脂糖凝胶电泳120 V电压下30 min，凝胶成像系统拍照。

与现有技术相比，本发明具有以下优势：

第一，本发明提取待测样本鸡的基因组DNA，用AS-PCR方法鉴定隐性白羽基因，隐性白羽扩增产物仅有771bp条带，有色羽或白羽扩增产物有771/284bp或仅有284bp的条带，此方法可以快速判断出控制有色羽的TYR基因是否有逆转录病毒的插入，找出基因型为cc的隐性白羽鸡；正常胫P3引物扩增产物有483bp条带，矮小胫P3扩增产物没有任何条带，鉴别矮小基因，此方法可以快速鉴定GHR基因是否有片段缺失，找出基因型为dwdw的矮小胫鸡。本发明直接用受测鸡种的基因组DNA为模板，采用分子辅助选择技术检测隐性白羽基因和dw基因的片段大小，本发明的优越性体现在：操作简单、检测快速、结果准确、通用性强、成本低廉，能有效避免测交选育的繁琐，缩短选育的世代间隔，加快育种进程，降低育种成本。用本方法选育的一种节粮型青胫白羽肉鸡新品系具有个体小、耗料少、基础代谢低、产蛋率高、肉味鲜美、饲养密度大、饲料报酬高、节约成本等优点，可作为商品鸡直接进行生产，也可以配套应用。

第二，本发明公开了一种节粮型青胫白羽肉鸡新品系选育方法的分子鉴别标记的应用。本发明包括：TYR基因和dw基因PCR扩增的上下游引物混合物和PCR反应试剂。PCR反应试剂为10×buffer，dNTP，Taq酶。本发明中用于检测隐性白羽基因型的引物，是针对TYR基因第4外显子7.7kb逆转录病毒的插入设计的。这样引物P1和引物P2的上游引物均设在TYR基因第4外显子，因此设计上可以为同一引物，P1下游引物设计在TYR基因第5外显子上，P2下游引物设计在TYR基因插入逆转录病毒序列上，这样根据AS-PCR方法通过扩增片段大小即可判断出纯合隐性白羽基因。本发明方法效果显著，检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响。本发明应用于一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法的鉴定，设计合理，使用方便、结果可靠且成本低廉。

附图说明

图1为本发明实施例1中各样本TYR基因和TYR基因插入逆转录病毒基因有色羽或隐性白羽位点的PCR电泳图。

注：泳道自左至右分别代表DNA Marker 2000和基因型Cc、cc、cc、Cc、Cc、Cc、cc、Cc、Cc、Cc的电泳带型。

图2为本发明实施例1中各样本dw基因各基因型的PCR电泳图。

注：泳道自左至左至右分别代表DNA Marker 2000和基因型dwdw、DWDW/DWdw、dwdw、DWDW/DWdw、dwdw、DWDW/DWdw、DWDW/DWdw、DWDW/DWdw、dwdw、DWDW/DWdw的电泳带型。

具体实施方式

下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，不构成对本发明的任何限制。

实施例1

本实施例中一种节粮型青胫白羽肉鸡新品系的选育方法，包括以下步骤：

（3）利用AS- PCR检测技术测定F1代中作为母本的白羽、青矮胫鸡和作为父本的白羽、正常胫鸡的羽色基因型，具体包括以下步骤：

①样品的采集

对F1代选留的白羽、青矮胫母鸡和白羽、正常胫的公鸡静翅脉采血1ml，加入含有0.3ml抗凝剂的离心管中，用蛋白酶K法提取血液DNA，于4℃冰箱保存备用。

②引物设计

以TYR基因序列（GenBank NC_006088）为模板，在TYR基因第4内含子和TYR基因第5外显子设计引物对P1，如下所示：

所述引物对P1为：

上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’。

以TYR基因序列（GenBank NC_006088）和逆转录病毒基因序列（GenBankDQ118701）为模板，在TYR基因第4外显子和插入逆转录病毒序列设计引物对P2，如下所示：

上游引物，P2-F： 5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；(同P1-F)

下游引物，P2-R： 5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’。

③PCR扩增

以引物对P1和P2为引物建立25.0μL扩增体系：10×PCR Buffer 2.5 μL， dNTP2.0 μL（2 mmol/L），TaqDNA聚合酶(5 U/μL ) 0.5 μL（购自北京天根生物有限公司），P1或P2上游引物为1.0μL、P1、P2下游引物均为0.5ul， DNA模板1.0 μL，ddH₂O 17.0 μL。

反应程序为：

95℃预变性5min，95℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10分钟，4℃保存。

④PCR扩增产物的检测与结果判定

取7.0μLPCR扩增后产物，3.0μL 6×Loading Buffer, 1.5%的琼脂糖凝胶电泳（电泳电压：120V；电泳时间：30min）点样，电泳结束后，用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶照相检测，电泳图谱见图1，根据电泳图谱中出现的条带大小进行判定：仅出现284bp条带时，则为有色羽纯合子（CC基因型）；当出现284bp和771bp条带时，则为有色羽杂合子（Cc基因型），仅出现770条带时则隐性白羽纯合子（cc基因型）。

（4）根据基因型判定结果，选留基因型为cc基因型隐性白羽纯合子的个体，淘汰显性白羽（Cc基因型）和有色羽个体(CC基因型)，得到纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡。

（5）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代。

（6）利用普通PCR检测技术测定F2代中青胫隐性白羽个体的胫长基因型，具体包括以下步骤：

①样品的采集

对F2代选留的纯合隐性白羽、青矮胫公、母鸡静翅脉采血1ml，加入含有0.3ml抗凝剂的离心管中，用蛋白酶K法提取血液DNA，于4℃冰箱保存备用。

②引物设计

以GHR基因序列（GenBank NC_006127）为模板，在dw基因（即GHR基因第9外显子和3’非翻译区缺失部分序列）设计引物对P3，如下所示：

所述引物对P3为：

上游引物P3-F：5’-cagcttgggcttgtgtgctgaaacca-3’

下游引物P3-R：5’-tcataattaaactacatcatgtagt-3’

③PCR扩增

以引物对P3建立25.0μL扩增体系：10×PCR Buffer 2.5 μL， dNTP 2.0 μL（2mmol/L），TaqDNA聚合酶(5 U/μL ) 0.5 μL（购自北京天根生物有限公司），P3上、下游引物均为1.0 μL， DNA模板1.0 μL，ddH₂O 17.0 μL。

反应程序为：

95℃预变性5min，95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10分钟，4℃保存。

④PCR扩增产物的检测与结果判定

取7.0μLPCR扩增后产物，3.0μL 6×Loading Buffer, 1.5%的琼脂糖凝胶电泳（电泳电压：120V；电泳时间：30min）点样，电泳结束后，用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶照相检测，电泳图谱见图2，根据电泳图谱中出现的条带大小进行判定：出现483bp条时，则为DWDW或DWdw基因型，表现为正常胫；没有扩增条带时，则为dw纯合基因型（dwdw基因型），表现为矮小胫。

（7）根据基因型判定结果，选留基因型为dwdw基因型的dw纯合基因型，隐性白羽纯合子的个体，淘汰基因型为DWDW或DWdw基因型的隐性白羽纯合子的正常胫的个体，生产出一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系。

<110>江苏省家禽科学研究所扬州翔龙禽业发展有限公司

<120>一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法

<160>9

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P1-F

<222>（1）…（25）

<400>1

TAGCACTGGA AATAGTAAAC CCAGT 25

<210>2

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P1-R

<222>（1）…（25）

<400>2

AGATCTGATG GGCTTGCTTG AGGTA 25

<210>3

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P2-F

<222>（1）…（25）

<400>3

TAGCACTGGA AATAGTAAAC CCAGT 25

<210>4

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P2-R

<222>（1）…（25）

<400>4

TGCTGAAAGG ACTGCTTTTG GGGCT 25

<210>5

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P3-F

<222>（1）…（25）

<400>5

CAGCTTGGGC TTGTGTGCTG AAACCA 26

<210>6

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<221>引物P3-R

<222>（1）…（25）

<400>6

TCATAATTAA ACTACATCAT GTAGT 25

<210>7

<211>284

<212>DNA

<213>鸡（Gallus gallus）

<221>TYR gene

<222>（1）…（284）

<400>7

tagcactgga aatagtaaac ccagttccct tcaatttcaa cacaaaaatt gggaaacttt 60

aaggactggt ggaatttgct tagaattatt tgtaaccttc agacaatttt cttcacttca 120

ataatcattt ttcactctga gccttccagt gttatctgtt acacaatctg tatacactgg 180

tactgcattg catcatgtaa aaggacctct gtttttctcc tttctagcac ttggttcttt 240

ccaggacttt ttaatcccct acctcaagca agcccatcag atct 284

<210>8

<211>771

<212>DNA

<213>鸡（Gallus gallus）

<221>TYR基因插入逆转录病毒gene

<222>（1）…（771）

<400>8

tagcactgga aatagtaaac ccagttccct tcaatttcaa cacaaaaatt gggaaacttt 60

aaggactggt ggaatttgct tagaattatt tgtaaccttc agacaatttt cttcacttca 120

ataatcattt ttcactctga gccttccagt gttgaagcct tcagcttcat tcaggtgttc 180

gcaatcgtta gggactcaac ggtctgtcca tctacccagg tgcacaccaa tgtggtgaat 240

ggtaaaatgg cgtttatttg atggtggcaa cagcttatat aatcgtgcat agcttcgtct 300

acgcccatat gtccttgcgt cattccttcc ttatctagtt gccaccaatg agcatatgga 360

atgtcttgct ttttccttat ttggtcttta gactattcaa gttgcctctg gctctatttg 420

actacatttc cccctcccta tgcaaaagcg caactactat atcctgaggg gactcctaac 480

cgcgtacaac cgaagccccg cctttcgcct atacatacta tggtcccctc agtcaagcct 540

tgccccgtta cagcccgatt cgcaagtttc ataccaccac ccacgtactg ctttacactg 600

ctccattttc gggctgccta caagcctttt gcaacttctt atattccgtg tgatagctga 660

ttgaattatt aatcatcttt cggatgctac tggacacaaa ttgcaaaagg caaggcaggc 720

acactactag caacaagata actacaagcc ccaaaagcag tcctttcagc a 771

<210>9

<211>483

<212>DNA

<213>鸡（Gallus gallus）

<221>dw gene 缺失序列

<222>（1）…（483）

<400>9

cagcttgggc ttgtgtgctg aaaccaaaat gaagtctaaa cgtttgtcgt ggttcttaca 60

agtttatctc gattgttgaa acataaaata ttcatcaaaa tattcctctt gttctgtaaa 120

tattatctat gaatttgtct tgagactgct taactagctg tgactgtctt gttcttgtgg 180

gtgttgattt ttgtgatact aaacattgaa atgactatgt ttaatgtaca gtaaatcatg 240

ctttttgata aagctataga taaggtggtc taaaatctga gaacttagta aaaatcatgc 300

agttgacgga gatctttcta tcagtaattg ggaactgagc atgaaagtga aaaaaaaaac 360

acaaaaatag tttgaataaa atatctattt tgatctatat aaattaataa aatatatttt 420

aatattttag tcacaaaagc ttagatgttt tatattacac tacatgatgt agtttaatta 480

tga 483

Claims

1.一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）利用邵伯鸡S3系作为父本，隐性白羽鸡作为母本进行杂交，生产出F1代；邵伯鸡S3系为黄羽、青矮胫，隐性白羽鸡为隐性白羽、正常黄胫；

（3）利用AS-PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型，选留基因型为cc型的纯合隐性白羽、青矮胫母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡，淘汰基因型为CC或Cc的有色羽或白羽公母鸡；

（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代；

（5）利用普通PCR方法测定F2代中青胫公母鸡的矮小基因的基因型，选留纯合矮小基因dwdw基因型个体，淘汰DWDW/DWdw基因型个体，得到节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系；

所述步骤（1）中隐性白羽鸡为TYR基因第4内含子插入7.7kb逆转录病毒后产生的隐性白羽鸡；

所述步骤（3）中利用AS-PCR测定F1代留种的青胫白羽鸡羽色基因型的方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P1和P2的混合引物扩增TYR基因和插入逆转录病毒基因，对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡羽色基因型；

所述的引物对P1为：

上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’；

所述引物对P2为：

上游引物， P2-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P2-R：5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’；

所述的鉴定鸡隐性白羽基因型的方法为：CC基因型仅为284bp条带，表现有色羽；Cc基因型为284bp和771bp条带，表现为有色羽或白羽；cc基因型仅为771条带，表现为隐性白羽；

所述的鉴定的鸡矮小基因的方法为：DWDW基因型和DW/dw基因型均为483bp条带，表现为正常胫，dwdw基因型为没有任何条带，表现为矮小胫；

所述的AS-PCR反应体系为：10×PCR Buffer 2.5 μL，2 mmol/L dNTP 2.0 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.5 μL，P1或P2上游引物为1.0μL，P1和P2下游引物均为0.5μL， DNA模板1.0μL，ddH₂O 17.0 μL。

2.根据权利要求1所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述步骤（5）中利用普通PCR方法测定F2代留种的青矮胫隐性白羽鸡矮小基因的基因型方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P3的混合引物扩增dw基因，对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡dw基因的基因型；

所述引物对P3为：

上游引物P3-F：5’-cagcttgggcttgtgtgctgaaacca-3’

下游引物P3-R：5’-tcataattaaactacatcatgtagt-3’。

3.根据权利要求2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述的普通PCR反应体系为：10×PCR Buffer 2.5 μL， 2 mmol/L dNTP 2.0 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.5 μL，所述引物P3的上、下游引物各1.0 μL，DNA模板1.0 μL，ddH2O 17.0 μL。

4.根据权利要求1或2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述AS-PCR或普通PCR扩增的反应条件相同，具体为：95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10分钟，4℃保存；P1/P2和P3的退火温度分别为65℃和59℃。

5.根据权利要求1或2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述AS-PCR或普通PCR扩增的琼脂糖凝胶电泳的浓度为1.5%，所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为30min。