CN103555658A - 一种bhk-21细胞全悬浮培养的无血清培养基 - Google Patents

一种bhk-21细胞全悬浮培养的无血清培养基 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基中，包含有氨基酸部分，维生素部分，无机盐部分和其他添加物部分。本发明的有益效果为：本发明提供的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，该培养基培养细胞密度高，成分明确，不含动物血清，有利于下游产品的纯化，提高产品品质，且配制和使用方便，适用于生物制品的规模化生产。

Description

一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基
技术领域
本发明涉及一种无血清培养基，具体涉及一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
背景技术
BHK-21细胞即叙利亚仓鼠肾细胞，英文名称：Baby Hamster Kidney cell简称BHK-21或BHK21，该细胞系于1961年由Macpherson IA、Stoker MGP建系，源自5只未辨性别的1天龄仓鼠肾，1963年进行了单细胞克隆。原始的细胞株是成纤维细胞，贴壁依赖性生长，但后来经无数次传代驯化后可悬浮生长并用于病毒性疫苗的生产，如口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、乙脑疫苗等。采用无血清培养工艺将提高疫苗的品质，主要表现在以下几个方面：1）工艺中不再使用动物血清（传统工艺生产疫苗时培养基中要添加牛血清），降低了疫苗注射时引起动物的副反应，提高疫苗的安全性；2）基质细胞的无血清全悬浮培养工艺，生产规模可线性放大，细胞单罐培养体积的增加，可提高疫苗产品的稳定性；3）基质细胞的无血清全悬浮培养工艺将采用成套的生物反应器及培养技术，实现了程序化可控的工艺操作流程，降低了人为因素对产品的影响。然而无血清培养基是该工艺的实现产业化的技术难点，采用成分明确、细胞能高细胞的培养密度，而且还有较高的病毒表达量，将起到事半功倍的效果。现有技术中，国外细胞无血清培养基配方保密且价格高，同时市场上已有培养基（国内、国外）成分均不明确。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种低成本、成分明确的适用于BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              200-300 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        350-500 mg/L，
L-天冬酰胺            200-300 mg/L，
L-天冬氨酸            50-85 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    10-45 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        25-50 mg/L，
L-谷氨酸              100-155 mg/L，
L-谷氨酰胺            300-405 mg/L，
甘氨酸                150-200 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        155-200 mg/L，
L-异亮氨酸            100-150 mg/L，
L-亮氨酸              150-180 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        150-250 mg/L，
L-蛋氨酸              45-80 mg/L，
L-苯丙氨酸            20-50 mg/L，
L-脯氨酸              100-125 mg/L，
L-丝氨酸              200-250 mg/L，
L-苏氨酸              100-150 mg/L，
L-色氨酸              150-190 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        50-90 mg/L，
L-缬氨酸              100-135 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.001-0.005 mg/L，
氯化胆碱              5-15 mg/L，
D-泛酸钙              2-5 mg/L，
叶酸                  2-5 mg/L，
烟酰胺                2-5 mg/L，
盐酸吡哆醇            2-5 mg/L，
核黄素                0.1-0.5 mg/L，
盐酸硫胺素            0.1-0.5 mg/L，
肌醇                  10-15 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            100-125 mg/L，
氯化钾                300-350 mg/L，
氯化镁                25-35 mg/L，
无水硫酸镁            30-40 mg/L，
氯化钠                5000-7200 mg/L，
磷酸二氢钠            50-70 mg/L，
磷酸氢二钠            60-70 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.1-0.5 mg/L，
七水硫酸锌            0.1-0.5 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              3000-5000 mg/L，
丙酮酸钠              100-150 mg/L，
亚油酸                0.01-0.1 mg/L，
大豆卵磷脂            5-10 mg/L，
胆固醇                2-5 mg/L，
硫辛酸                0.1-0.5 mg/L，
胸苷                  0.1-0.5 mg/L，
腺嘌呤                1-5 mg/L，
胸腺嘧啶              0.01-0.1 mg/L，
重组胰岛素            5-20 mg/L，
转铁蛋白              5-20 mg/L，
酵母粉                100-500 mg/L，
酚红钠盐              8-10 mg/L。
PF-68                 100-500mg/L，
Anti-Clumping         100-500 mg/L。
进一步的，上述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              213.1 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        372.75 mg/L，
L-天冬酰胺            153.5 mg/L，
L-天冬氨酸            75.65 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    22.71 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        31.29 mg/L，
L-谷氨酸              109.4 mg/L，
L-谷氨酰胺            365 mg/L，
甘氨酸                178.75 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        177.64 mg/L，
L-异亮氨酸            134 mg/L，
L-亮氨酸              159.05 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        169.87  mg/L，
L-蛋氨酸              63.37 mg/L，
L-苯丙氨酸            35.48 mg/L，
L-脯氨酸              103.75 mg/L，
L-丝氨酸              200 mg/L，
L-苏氨酸              113.45 mg/L，
L-色氨酸              171.02 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        55.79 mg/L，
L-缬氨酸              117.23 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.0042 mg/L（国药试剂，67000260），
氯化胆碱              8.98 mg/L，
D-泛酸钙              2.73 mg/L，
叶酸                  2.65 mg/L，
烟酰胺                2.02 mg/L，
盐酸吡哆醇            2.03 mg/L，
核黄素                0.22 mg/L，
盐酸硫胺素            0.2 mg/L，
肌醇                  12.6 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            116.69 mg/L，
氯化钾                311.8 mg/L，
氯化镁                28.64 mg/L，
无水硫酸镁            30-80 mg/L，
氯化钠                6995.5 mg/L，
磷酸二氢钠            62.5 mg/L，
磷酸氢二钠            60-100 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.42 mg/L，
七水硫酸锌            0.432 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              4500 mg/L，
丙酮酸钠              115 mg/L，
亚油酸                0.036 mg/L，
大豆卵磷脂            6.1 mg/L，
胆固醇                3.2 mg/L，
硫辛酸                0.26 mg/L，
胸苷                  0.27 mg/L，
腺嘌呤                3.1 mg/L，
胸腺嘧啶              0.065 mg/L，
重组胰岛素            5.6 mg/L，
转铁蛋白              11.4 mg/L，
酵母粉                300 mg/L，
酚红钠盐              9.3 mg/L，
PF-68                 301 mg/L，
Anti-Clumping         328 mg/L。
进一步的，上述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，将所述原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于10℃-30℃蒸馏水中混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
进一步的，上述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，将所述原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于10℃-30℃蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
本发明的有益效果为：本发明提供的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，该培养基培养细胞密度高，成分明确，不含动物血清，有利于下游产品的纯化，提高产品品质，且配制和使用方便，适用于生物制品的规模化生产。
附图说明
图1为本发明提供的BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基与现有市售的市售的BHK-21细胞无血清培养基在细胞活力和细胞密度方面的对比结果示意图。
具体实施方式
实施例1：
一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于23.1℃混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.15，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              200 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        350 mg/L，
L-天冬酰胺            200 mg/L，
L-天冬氨酸            50 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    10 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        25 mg/L，
L-谷氨酸              100 mg/L，
L-谷氨酰胺            300 mg/L，
甘氨酸                150 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        155 mg/L，
L-异亮氨酸            100 mg/L，
L-亮氨酸              150 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        150 mg/L，
L-蛋氨酸              45 mg/L，
L-苯丙氨酸            20 mg/L，
L-脯氨酸              100 mg/L，
L-丝氨酸              200 mg/L，
L-苏氨酸              100 mg/L，
L-色氨酸              150 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        50 mg/L，
L-缬氨酸              100 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.001 mg/L，
氯化胆碱              5 mg/L，
D-泛酸钙              2 mg/L，
叶酸                  2 mg/L，
烟酰胺                2 mg/L，
盐酸吡哆醇            2 mg/L，
核黄素                0.1 mg/L，
盐酸硫胺素            0.1 mg/L，
肌醇                  10 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            100 mg/L，
氯化钾                300 mg/L，
氯化镁                25 mg/L，
无水硫酸镁            30 mg/L，
氯化钠                5000 mg/L，
磷酸二氢钠            50 mg/L，
磷酸氢二钠            60 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.1 mg/L，
七水硫酸锌            0.1 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              3000 mg/L，
丙酮酸钠              100 mg/L，
亚油酸                0.01 mg/L，
大豆卵磷脂            5 mg/L，
胆固醇                2 mg/L，
硫辛酸                0.1 mg/L，
胸苷                  0.1 mg/L，
腺嘌呤                1 mg/L，
胸腺嘧啶              0.01 mg/L，
重组胰岛素            5 mg/L，
转铁蛋白              5 mg/L，
酵母粉                100 mg/L，
酚红钠盐              8 mg/L，
PF-68                 265 mg/L，
Anti-Clumping         170 mg/L。
实施例2：
一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于25.9℃混合，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.21，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              300 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        500 mg/L，
L-天冬酰胺            300 mg/L，
L-天冬氨酸            85 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    45 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        50 mg/L，
L-谷氨酸              155 mg/L，
L-谷氨酰胺            405 mg/L，
甘氨酸                200 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        200 mg/L，
L-异亮氨酸            150 mg/L，
L-亮氨酸              180 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        250 mg/L，
L-蛋氨酸              80 mg/L，
L-苯丙氨酸            50 mg/L，
L-脯氨酸              125 mg/L，
L-丝氨酸              250 mg/L，
L-苏氨酸              150 mg/L，
L-色氨酸              190 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        90 mg/L，
L-缬氨酸              135 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.005 mg/L，
氯化胆碱              15 mg/L，
D-泛酸钙              5 mg/L，
叶酸                  5 mg/L，
烟酰胺                5 mg/L，
盐酸吡哆醇            5 mg/L，
核黄素                0.5 mg/L，
盐酸硫胺素            0.5 mg/L，
肌醇                  15 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            125 mg/L，
氯化钾                350 mg/L，
氯化镁                35 mg/L，
无水硫酸镁            40 mg/L，
氯化钠                7200 mg/L，
磷酸二氢钠            70 mg/L，
磷酸氢二钠            70 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.5 mg/L，
七水硫酸锌            0.5 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              5000 mg/L，
丙酮酸钠              150 mg/L，
亚油酸                0.1 mg/L，
大豆卵磷脂            10 mg/L，
胆固醇                5 mg/L，
硫辛酸                0.5 mg/L，
胸苷                  0.5 mg/L，
腺嘌呤                5 mg/L，
胸腺嘧啶              0.1 mg/L，
重组胰岛素            20 mg/L，
转铁蛋白              20 mg/L，
酵母粉                500 mg/L，
酚红钠盐              10 mg/L，
PF-68                 155 mg/L，
Anti-Clumping         190 mg/L。
实施例3：
一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，将原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于25.3℃蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如上所述，调节所得混合液的pH值至7.23，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              213.1 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        372.75 mg/L，
L-天冬酰胺            153.5 mg/L，
L-天冬氨酸            75.65 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    22.71 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        31.29 mg/L，
L-谷氨酸              109.4 mg/L，
L-谷氨酰胺            365 mg/L，
甘氨酸                178.75 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        177.64 mg/L，
L-异亮氨酸            134 mg/L，
L-亮氨酸              159.05 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        169.87  mg/L，
L-蛋氨酸              63.37 mg/L，
L-苯丙氨酸            35.48 mg/L，
L-脯氨酸              103.75 mg/L，
L-丝氨酸              200 mg/L，
L-苏氨酸              113.45 mg/L，
L-色氨酸              171.02 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        55.79 mg/L，
L-缬氨酸              117.23 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.0042 mg/L，
氯化胆碱              8.98 mg/L，
D-泛酸钙              2.73 mg/L，
叶酸                  2.65 mg/L，
烟酰胺                2.02 mg/L，
盐酸吡哆醇            2.03 mg/L，
核黄素                0.22 mg/L，
盐酸硫胺素            0.2 mg/L，
肌醇                  12.6 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            116.69 mg/L，
氯化钾                311.8 mg/L，
氯化镁                28.64 mg/L，
无水硫酸镁            48.84mg/L，
氯化钠                6995.5 mg/L，
磷酸二氢钠            62.5 mg/L，
磷酸氢二钠            71.02 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.42 mg/L，
七水硫酸锌            0.432 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              4500 mg/L，
丙酮酸钠              115 mg/L，
亚油酸                0.036 mg/L，
大豆卵磷脂            6.1 mg/L，
胆固醇                3.2 mg/L，
硫辛酸                0.26 mg/L，
胸苷                  0.27 mg/L，
腺嘌呤                3.1 mg/L，
胸腺嘧啶              0.065 mg/L，
重组胰岛素            5.6 mg/L，
转铁蛋白              11.4 mg/L，
酵母粉                300 mg/L，
酚红钠盐              9.3 mg/L，
PF-68                 301 mg/L，
Anti-Clumping         328 mg/L。
培养验证过程：
1、仪器设备：
生物反应器，型号：BIOSTATEOR B plus（德国Sartorius）,培养罐体积5L 
2、细胞：
全悬浮培养型BHK-21细胞，由甘肃省动物细胞工程技术研究中心提供。 
3、培养方法：
将全悬浮培养型BHK-21细胞以5.0×105 cells/ml接种到生物反应器中，反应器参数设置为：温度37℃,转速90rpm/min，溶氧60%，pH值7.25。每24h取样计数和检查细胞活力。
4、培养结果如表1所示。
Figure 2013105467561100002DEST_PATH_IMAGE001
。
5、与现有产品对比，对比结果如图1所示，其中，对照用产品为市售的BHK-21细胞无血清培养基（清大天一，批号120703）。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，所述BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              200-300 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        350-500 mg/L，
L-天冬酰胺            200-300 mg/L，
L-天冬氨酸            50-85 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    10-45 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        25-50 mg/L，
L-谷氨酸              100-155 mg/L，
L-谷氨酰胺            300-405 mg/L，
甘氨酸                150-200 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        155-200 mg/L，
L-异亮氨酸            100-150 mg/L，
L-亮氨酸              150-180 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        150-250 mg/L，
L-蛋氨酸              45-80 mg/L，
L-苯丙氨酸            20-50 mg/L，
L-脯氨酸              100-125 mg/L，
L-丝氨酸              200-250 mg/L，
L-苏氨酸              100-150 mg/L，
L-色氨酸              150-190 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        50-90 mg/L，
L-缬氨酸              100-135 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.001-0.005 mg/L，
氯化胆碱              5-15 mg/L，
D-泛酸钙              2-5 mg/L，
叶酸                  2-5 mg/L，
烟酰胺                2-5 mg/L，
盐酸吡哆醇            2-5 mg/L，
核黄素                0.1-0.5 mg/L，
盐酸硫胺素            0.1-0.5 mg/L，
肌醇                  10-15 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            100-125 mg/L，
氯化钾                300-350 mg/L，
氯化镁                25-35 mg/L，
无水硫酸镁            30-40 mg/L，
氯化钠                5000-7200 mg/L，
磷酸二氢钠            50-70 mg/L，
磷酸氢二钠            60-70 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.1-0.5 mg/L，
七水硫酸锌            0.1-0.5 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              3000-5000 mg/L，
丙酮酸钠              100-150 mg/L，
亚油酸                0.01-0.1 mg/L，
大豆卵磷脂            5-10 mg/L，
胆固醇                2-5 mg/L，
硫辛酸                0.1-0.5 mg/L，
胸苷                  0.1-0.5 mg/L，
腺嘌呤                1-5 mg/L，
胸腺嘧啶              0.01-0.1 mg/L，
重组胰岛素            5-20 mg/L，
转铁蛋白              5-20 mg/L，
酵母粉                100-500 mg/L，
酚红钠盐              8-10 mg/L，
PF-68                 100-500mg/L，
Anti-Clumping         100-500 mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，所述BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为：
氨基酸部分：
L-丙氨酸              213.1 mg/L，
L-精氨酸盐酸盐        372.75 mg/L，
L-天冬酰胺            153.5 mg/L，
L-天冬氨酸            75.65 mg/L，
L-半胱氨酸一水合物    22.71 mg/L，
L-胱氨酸盐酸盐        31.29 mg/L，
L-谷氨酸              109.4 mg/L，
L-谷氨酰胺            365 mg/L，
甘氨酸                178.75 mg/L，
L-组氨酸盐酸盐        177.64 mg/L，
L-异亮氨酸            134 mg/L，
L-亮氨酸              159.05 mg/L，
L-赖氨酸盐酸盐        169.87  mg/L，
L-蛋氨酸              63.37 mg/L，
L-苯丙氨酸            35.48 mg/L，
L-脯氨酸              103.75 mg/L，
L-丝氨酸              200 mg/L，
L-苏氨酸              113.45 mg/L，
L-色氨酸              171.02 mg/L，
L-酪氨酸二钠盐        55.79 mg/L，
L-缬氨酸              117.23 mg/L，
维生素部分：
生物素                0.0042 mg/L，
氯化胆碱              8.98 mg/L，
D-泛酸钙              2.73 mg/L，
叶酸                  2.65 mg/L，
烟酰胺                2.02 mg/L，
盐酸吡哆醇            2.03 mg/L，
核黄素                0.22 mg/L，
盐酸硫胺素            0.2 mg/L，
肌醇                  12.6 mg/L，
无机盐部分：
无水氯化钙            116.69 mg/L，
氯化钾                311.8 mg/L，
氯化镁                28.64 mg/L，
无水硫酸镁            30-80 mg/L，
氯化钠                6995.5 mg/L，
磷酸二氢钠            62.5 mg/L，
磷酸氢二钠            60-100 mg/L，
七水硫酸亚铁          0.42 mg/L，
七水硫酸锌            0.432 mg/L，
其余添加物部分：
D-葡萄糖              4500 mg/L，
丙酮酸钠              115 mg/L，
亚油酸                0.036 mg/L，
大豆卵磷脂            6.1 mg/L，
胆固醇                3.2 mg/L，
硫辛酸                0.26 mg/L，
胸苷                  0.27 mg/L，
腺嘌呤                3.1 mg/L，
胸腺嘧啶              0.065 mg/L，
重组胰岛素            5.6 mg/L，
转铁蛋白              11.4 mg/L，
酵母粉                300 mg/L，
酚红钠盐              9.3 mg/L，
PF-68                 301 mg/L，
Anti-Clumping         328 mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，将所述原料物质根据其各自溶解特性分类溶解，然后将所得溶液于10℃-30℃蒸馏水中混合，使各原料物质终浓度如权利要求1或2所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
4.根据权利要求1或2所述的一种BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基，其特征在于，将所述原料物质混合后磨成细粉，然后将所得细粉于10℃-30℃蒸馏水中溶解，使各原料物质终浓度如权利要求1或2所述，调节所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21细胞全悬浮培养的无血清培养基。
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Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104212759A (zh) * 2014-08-19 2014-12-17 青岛蔚蓝生物制品有限公司 一种用于无血清培养bhk21细胞的补充营养液
CN105018416A (zh) * 2014-07-15 2015-11-04 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法
CN105255812A (zh) * 2014-07-15 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合bhk-21细胞转瓶培养的低血清培养基及其配制方法
CN105255810A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞Sf-9的无血清无动物源培养基
CN105255811A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞生长的无血清无动物源培养基添加物的制备方法
CN105505853A (zh) * 2015-12-23 2016-04-20 中农威特生物科技股份有限公司 一种用于bhk-21细胞高密度悬浮培养的低血清培养基及其在口蹄疫病毒增殖中的应用
CN105567628A (zh) * 2016-01-30 2016-05-11 令世鑫 一种全悬浮培养mdck细胞的低血清培养基
CN106119186A (zh) * 2016-06-24 2016-11-16 广东温氏大华农生物科技有限公司 一种用于全悬浮培养mdck细胞的无血清培养基及其制备方法
CN107236708A (zh) * 2017-06-23 2017-10-10 王晓柯 一种支持HeLa细胞贴壁培养的无血清培养基
CN108103003A (zh) * 2017-12-12 2018-06-01 四川百诺吉科技有限公司 一种适应pk-15全悬浮生长的无血清培养基及其制备方法和细胞全悬浮驯化方法
CN109609444A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 苏州工业园区旭太生物工程有限公司 一种bhk21细胞无血清培养基
CN112210542A (zh) * 2020-10-15 2021-01-12 山东信得动物疫苗有限公司 一种用于培养df-1细胞的无血清培养基及其制备方法
CN113755427A (zh) * 2021-10-13 2021-12-07 无锡多宁生物科技有限公司 一种优化后的bhk21细胞无血清悬浮培养基
CN113817666A (zh) * 2021-10-13 2021-12-21 无锡多宁生物科技有限公司 一种全悬浮培养bhk-21细胞的cd培养基及其摇瓶培养工艺
CN113943694A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 无锡多宁生物科技有限公司 一种支持多种疫苗细胞贴壁或悬浮培养的通用型无血清培养基及其制备方法
CN115386534A (zh) * 2022-10-26 2022-11-25 天信和(苏州)生物科技有限公司 利用无血清培养基培养bhk21细胞的方法及其在制备疫苗中的用途
CN115433705A (zh) * 2022-10-27 2022-12-06 天信和(苏州)生物科技有限公司 用于培养bhk21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101760442A (zh) * 2010-01-15 2010-06-30 华东理工大学 适于mdck细胞大规模贴壁培养和单细胞悬浮培养的无血清培养基
CN101974481A (zh) * 2010-10-29 2011-02-16 国家兽用生物制品工程技术研究中心 一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基
CN102115729A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 北京清大天一科技有限公司 无血清培养bhk21细胞的方法和制备疫苗的方法
CN102154197A (zh) * 2011-03-02 2011-08-17 马忠仁 一种在低血清和无血清培养基中高密度悬浮培养的bhk-21细胞及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102115729A (zh) * 2009-12-31 2011-07-06 北京清大天一科技有限公司 无血清培养bhk21细胞的方法和制备疫苗的方法
CN101760442A (zh) * 2010-01-15 2010-06-30 华东理工大学 适于mdck细胞大规模贴壁培养和单细胞悬浮培养的无血清培养基
CN101974481A (zh) * 2010-10-29 2011-02-16 国家兽用生物制品工程技术研究中心 一种用于多种肾脏组织来源细胞生长的无血清培养基
CN102154197A (zh) * 2011-03-02 2011-08-17 马忠仁 一种在低血清和无血清培养基中高密度悬浮培养的bhk-21细胞及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
付智财 等: "悬浮培养型BHK-21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究", 《西北民族大学学报》 *

Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105018416B (zh) * 2014-07-15 2018-11-30 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法
CN105018416A (zh) * 2014-07-15 2015-11-04 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种悬浮培养bhk-21细胞的无血清无动物源培养基及其配制方法
CN105255812A (zh) * 2014-07-15 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合bhk-21细胞转瓶培养的低血清培养基及其配制方法
CN105255812B (zh) * 2014-07-15 2019-03-12 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合bhk-21细胞转瓶培养的低血清培养基及其配制方法
CN104212759A (zh) * 2014-08-19 2014-12-17 青岛蔚蓝生物制品有限公司 一种用于无血清培养bhk21细胞的补充营养液
CN105255810A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞Sf-9的无血清无动物源培养基
CN105255811A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞生长的无血清无动物源培养基添加物的制备方法
CN105505853A (zh) * 2015-12-23 2016-04-20 中农威特生物科技股份有限公司 一种用于bhk-21细胞高密度悬浮培养的低血清培养基及其在口蹄疫病毒增殖中的应用
CN105505853B (zh) * 2015-12-23 2019-03-15 中农威特生物科技股份有限公司 一种用于bhk-21细胞高密度悬浮培养的低血清培养基及其在口蹄疫病毒增殖中的应用
CN105567628A (zh) * 2016-01-30 2016-05-11 令世鑫 一种全悬浮培养mdck细胞的低血清培养基
CN105567628B (zh) * 2016-01-30 2019-07-12 令世鑫 一种全悬浮培养mdck细胞的低血清培养基
CN106119186B (zh) * 2016-06-24 2019-10-08 肇庆大华农生物药品有限公司 一种用于全悬浮培养mdck细胞的无血清培养基及其制备方法
CN106119186A (zh) * 2016-06-24 2016-11-16 广东温氏大华农生物科技有限公司 一种用于全悬浮培养mdck细胞的无血清培养基及其制备方法
US20170369836A1 (en) * 2016-06-24 2017-12-28 Zhaoqing Dahuanong Biological Medicine Co., Ltd Serum-free medium for full suspension culture of mdck cells and preparation method of serum-free medium
CN107236708A (zh) * 2017-06-23 2017-10-10 王晓柯 一种支持HeLa细胞贴壁培养的无血清培养基
CN108103003A (zh) * 2017-12-12 2018-06-01 四川百诺吉科技有限公司 一种适应pk-15全悬浮生长的无血清培养基及其制备方法和细胞全悬浮驯化方法
CN109609444A (zh) * 2019-01-30 2019-04-12 苏州工业园区旭太生物工程有限公司 一种bhk21细胞无血清培养基
CN112210542A (zh) * 2020-10-15 2021-01-12 山东信得动物疫苗有限公司 一种用于培养df-1细胞的无血清培养基及其制备方法
CN113755427A (zh) * 2021-10-13 2021-12-07 无锡多宁生物科技有限公司 一种优化后的bhk21细胞无血清悬浮培养基
CN113817666A (zh) * 2021-10-13 2021-12-21 无锡多宁生物科技有限公司 一种全悬浮培养bhk-21细胞的cd培养基及其摇瓶培养工艺
CN113943694A (zh) * 2021-10-13 2022-01-18 无锡多宁生物科技有限公司 一种支持多种疫苗细胞贴壁或悬浮培养的通用型无血清培养基及其制备方法
CN115386534A (zh) * 2022-10-26 2022-11-25 天信和(苏州)生物科技有限公司 利用无血清培养基培养bhk21细胞的方法及其在制备疫苗中的用途
CN115433705A (zh) * 2022-10-27 2022-12-06 天信和(苏州)生物科技有限公司 用于培养bhk21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用
CN115433705B (zh) * 2022-10-27 2023-03-03 天信和(苏州)生物科技有限公司 用于培养bhk21细胞的化学限定培养基、添加剂及其应用

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