CN104073464A - 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法 - Google Patents

一种cho细胞无血清培养基及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104073464A
CN104073464A CN201410321893.XA CN201410321893A CN104073464A CN 104073464 A CN104073464 A CN 104073464A CN 201410321893 A CN201410321893 A CN 201410321893A CN 104073464 A CN104073464 A CN 104073464A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chinese hamster
hamster ovary
ovary celi
composition
free medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410321893.XA
Other languages
English (en)
Inventor
张春颖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIBET TIANHONG SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
TIBET TIANHONG SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIBET TIANHONG SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical TIBET TIANHONG SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201410321893.XA priority Critical patent/CN104073464A/zh
Publication of CN104073464A publication Critical patent/CN104073464A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法，通过加入化学成分明确的多种氨基酸、维生素、无机盐、微量元素及生物碱、脂肪酸及激素等补充因子，使该培养基能使CHO细胞在悬浮培养条件下无需适应即可快速生长，细胞密度和细胞活性都可以与有血清培养基相当，既能满足CH0细胞培养需求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素，降低生产成本，可完全取代有血清培养基进行CHO细胞的大规模培养和生产。另外，通过采用粉末状保存的方式，可以有效规避产品运输风险，降低运输成本，满足对CHO细胞进行规模化培养生产的需求。

Description

一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法。
背景技术
传统的含血清培养基中的血清给科研和生产等带来多种不利因素。血清的主要作用在于给细胞提供生长增值所需的激素、生长因子、转移蛋白和其他营养物质，但其存在很多缺点：批间差异较大、需要大量验证工作、使用不方便、成分不明确、有抑制生长的成分、尤其不利于疫苗和单克隆抗体等目的产物的分离纯化、容易被病毒和支原体感染；血清昂贵可能发生供应紧张，血清的来源不稳定等问题。
近年来，国内开始针对CHO细胞无血清培养开发了许多无血清培养基产品，但是大多数均为了保证细胞的活性，在已有DMEM，DMEM/F12，IMDM等基础培养基的基础上添加了不同来源的蛋白质等添加剂，由于成分复杂，蛋白质及其水解产物会在细胞培养过程中带来污染，影响下游分离纯化，目的产物表达量降低。
国外商品化的CHO细胞无血清培养基存在如下现状：大多以液体的形式提供，不适合大规模生产、价格昂贵、培养基成分配方不确定，Sigma、In-vitrogen、Hyclone和Lonza等国际知名培养基，每升价格高达上千元，在一定程度上限制了它的实际应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法，通过加入化学成分明确的多种氨基酸、维生素、无机盐、微量元素及生物碱、脂肪酸及激素等补充因子，使该培养基能使CHO细胞在悬浮培养条件下无需适应即可快速生长，细胞密度和细胞活性都可以与有血清培养基相当，既能满足CHO细胞培养需求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素，降低生产成本，可完全取代有血清培养基进行CHO细胞的大规模培养和生产。另外，通过采用粉末状保存的方式，可以有效规避产品运输风险，降低运输成本，满足对CHO细胞进行规模化培养生产的需求。
本发明的技术方案为：
一种CHO细胞无血清培养基，其中，包括下列重量份的组分：
氨基酸组合物  1300-2000；
维生素组合物  12-25；
无机盐组合物  10-15；
微量元素组合物  0.005-0.006；
无菌水  900-1100。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述氨基酸组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
丙氨酸7.35-31.5、精氨酸152.13-211.5、天冬酰胺40.26-250.48、半胱氨酸38.26-45.12、谷氨酸8.14-32.51、甘氨酸8.14-30.45、组氨酸30.48-105.98、异亮氨酸53.41-131.25、亮氨酸58.94-167.23、赖氨酸91.25-193.26、甲硫氨酸15.26-61.42、苯丙氨酸34.12-83.56、脯氨酸17.34-35.41、丝氨酸27.31-95.15、苏氨酸54.16-97.24、色氨酸8.27-52.41、酪氨酸57.21-145.13、缬氨酸53.25-118.31和谷氨酰胺583.41-1248.93；
其中所述氨基酸均为L-氨基酸。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述维生素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
维生素B6 0.01-0.2、维生素B12 0.02-0.42、维生素C9-10、维生素E0.30-0.31、生物素0.4-1.21、氯化胆碱0.064-0.072、D-泛酸钙0.004-0.005、叶酸0.062-0.081、肌醇0.83-1.43、烟酰胺0.17-0.20、吡哆醇盐酸盐0.0015-0.0017、核黄素0.06-0.29、腐胺二酸盐0.00501-0.00503、氢化可的松0.0015-0.0018和吡哆醛.HCL1.01-9.48。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述无机盐组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
碳酸氢钠2440-2451、氯化钠6995.50-7031.20、氯化钾312.81-313.90、氯化镁29.65-30.42、硫酸镁48.85-49.21、一水磷酸二氢钠62.51-62.53、磷酸氢二钠71.03-72.15、硫酸锌0.431-0.445、氯化钙116.60-117.32、五水硫酸铜0.0014-0.0016和七水硫酸铁0.062-0.071。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述微量元素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
硝酸银0.0001-0.0005、硫酸锰0.00008-0.0008、硅酸钠0.003-0.012、钼酸铵0.0019-0.018、钒酸铵0.00007-0.0007、氯化镍0.00003-0.00031、氯化锡0.00002-0.00023、亚硒酸钠0.00005-0.0005、六水氯化铝0.00001-0.0001、硫酸钡0.00001-0.0001、氯化铝0.00001-0.0001、硫代甘油0.00001-0.0001、四水氯化钛0.00001-0.0001和八水氯化氧锆0.00001-0.0001。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述培养基还包括1000-8000重量份的补充因子组合物，所述补充因子组合物由下列重量份的组分组成：
葡萄糖  1000-7300；
生物碱类物质组合物  17-50；
大分子糖类物质组合物  1-21；
激素类物质组合物  0.084-0.49；
脂肪酸类物质组合物  0.14-1.16。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述补充因子组合物中的生物碱类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：腺嘌呤2.43-9.89、次黄嘌呤2.13-8.56、鸟嘌呤3.85-8.16、尿嘌呤4.37-10.00、胸腺嘌呤0.21-2.37、胞嘧啶4.85-10.00、乙醇胺1.24-12.34和腐胺0.080-0.832。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，
所述补充因子组合物中的大分子糖类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：核糖0.92-9.57和脱氧核糖0.10-10.32；
所述补充因子组合物中的脂肪酸类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：硫辛酸0.10-1.10和亚油酸0.042-0.053；
此外所述补充因子组合物中还包括0.32-2.12重量份的B-硫基乙醇。
优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述补充因子组合物中的激素类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：丙酮酸钠220.00-230.00、氢化可的松0.037-0.39、地塞米松0.039-0.0393、孕酮0.006-0.032和雌二醇0.0028-0.028。
一种CHO细胞无血清培养基的制备方法，其中，所述CHO细胞无血清培养基也可制为粉末状培养基，包括以下步骤：
步骤一、按配方量称取所述CHO细胞无血清培养基中的各组分并混合；
步骤二、研磨；
步骤三、高温灭菌；
步骤四、无菌分装。
本发明具有以下有益效果：通过加入化学成分明确的多种氨基酸、维生素、无机盐、微量元素及生物碱、脂肪酸及激素等补充因子，使该培养基能使CHO细胞在悬浮培养条件下无需适应即可快速生长，通过对比试验检验，细胞密度和细胞活性都可以与有血清培养基相当，并优于国外商品化的CHO细胞无血清培养基，本发明既能满足CHO细胞培养需求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素，降低生产成本，可完全取代有血清培养基进行CHO细胞的大规模培养和生产。另外，通过采用粉末状保存的方式，可以有效规避产品运输风险，降低运输成本，满足对CHO细胞进行规模化培养生产的需求。
附图说明
图1为所述的CHO细胞无血清培养基制备工艺流程图；
图2为CHO细胞在本发明所述的CHO细胞无血清培养基和Gibco公司的CD-CHO培养基中生长曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做详细说明，以令本领域普通技术人员参阅本说明书后能够据以实施。
如图1所示，一种CHO细胞无血清培养基，由下列重量份组分制备而成：
氨基酸组合物  1300-2000；
维生素组合物  12-25；
无机盐组合物  10-15；
微量元素组合物  0.005-0.006；
无菌水  900-1100。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述氨基酸组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
丙氨酸7.35-31.5、精氨酸152.13-211.5、天冬酰胺40.26-250.48、半胱氨酸38.26-45.12、谷氨酸8.14-32.51、甘氨酸8.14-30.45、组氨酸30.48-105.98、异亮氨酸53.41-131.25、亮氨酸58.94-167.23、赖氨酸91.25-193.26、甲硫氨酸15.26-61.42、苯丙氨酸34.12-83.56、脯氨酸17.34-35.41、丝氨酸27.31-95.15、苏氨酸54.16-97.24、色氨酸8.27-52.41、酪氨酸57.21-145.13、缬氨酸53.25-118.31和谷氨酰胺583.41-1248.93；
其中所述氨基酸均为L-氨基酸。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述维生素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
维生素B6 0.01-0.2、维生素B12 0.02-0.42、维生素C9-10、维生素E0.30-0.31、生物素0.4-1.21、氯化胆碱0.064-0.072、D-泛酸钙0.004-0.005、叶酸0.062-0.081、肌醇0.83-1.43、烟酰胺0.17-0.20、吡哆醇盐酸盐0.0015-0.0017、核黄素0.06-0.29、腐胺二酸盐0.00501-0.00503、氢化可的松0.0015-0.0018和吡哆醛.HCL1.01-9.48。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述无机盐组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
碳酸氢钠2440-2451、氯化钠6995.50-7031.20、氯化钾312.81-313.90、氯化镁29.65-30.42、硫酸镁48.85-49.21、一水磷酸二氢钠62.51-62.53、磷酸氢二钠71.03-72.15、硫酸锌0.431-0.445、氯化钙116.60-117.32、五水硫酸铜0.0014-0.0016和七水硫酸铁0.062-0.071。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述微量元素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
硝酸银0.0001-0.0005、硫酸锰0.00008-0.0008、硅酸钠0.003-0.012、钼酸铵0.0019-0.018、钒酸铵0.00007-0.0007、氯化镍0.00003-0.00031、氯化锡0.00002-0.00023、亚硒酸钠0.00005-0.0005、六水氯化铝0.00001-0.0001、硫酸钡0.00001-0.0001、氯化铝0.00001-0.0001、硫代甘油0.00001-0.0001、四水氯化钛0.00001-0.0001和八水氯化氧锆0.00001-0.0001。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述培养基还包括1000-8000重量份的补充因子组合物，所述补充因子组合物由下列重量份的组分组成：
葡萄糖  1000-7300；
生物碱类物质组合物  17-50；
大分子糖类物质组合物  1-21；
激素类物质组合物  0.084-0.49；
脂肪酸类物质组合物  0.14-1.16。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述补充因子组合物中的生物碱类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：腺嘌呤2.43-9.89、次黄嘌呤2.13-8.56、鸟嘌呤3.85-8.16、尿嘌呤4.37-10.00、胸腺嘌呤0.21-2.37、胞嘧啶4.85-10.00、乙醇胺1.24-12.34和腐胺0.080-0.832。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述补充因子组合物中的大分子糖类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：核糖0.92-9.57和脱氧核糖0.10-10.32；所述补充因子组合物中的脂肪酸类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：硫辛酸0.10-1.10和亚油酸0.042-0.053；此外所述补充因子组合物中还包括0.32-2.12重量份的B-硫基乙醇。
所述的CHO细胞无血清培养基中，所述补充因子组合物中的激素类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：丙酮酸钠220.00-230.00、氢化可的松0.037-0.39、地塞米松0.039-0.0393、孕酮0.006-0.032和雌二醇0.0028-0.028。
按配方量称取所述CHO细胞无血清培养基中的各组分，与95-105ml无菌水混合溶解，调节pH值为7.0-8.0后定容至1000ml，用孔径为0.3-0.5μm的微孔滤膜过滤除菌即可。
一种CHO细胞无血清培养基的制备方法，其中，所述CHO细胞无血清培养基也可制为粉末状培养基，包括以下步骤：
步骤一、按配方量称取所述CHO细胞无血清培养基中的各组分并混合均匀；
步骤二、进行充分的研磨，研磨至100-200目筛；
步骤三、高温灭菌，本发明采用高压蒸汽湿热灭菌方法，灭菌温度126-132℃，蒸汽压力0.044-0.049MPa，灭菌时间3-7min。
步骤四、无菌分装，采用无菌操作进行一定剂量的分装并密封。
使用时仅需按照配方量将粉末状的CHO细胞无血清培养基溶解于无热源无菌水即可制备而成。
所述CHO细胞全称为中国仓鼠卵巢细胞，所述CHO细胞无血清培养基是在参考现有的文献基础上经过大量实验验证而设计出的培养基配方，通过选择适当的微量元素和氨基酸代替血清蛋白成分，应用Plackett-Burman实验设计，对培养基添加成分进行了评价，采用响应面分析法优化各个组分的最佳使用剂量得到所述的CHO细胞无血清培养基，其中所述的主要成分的作用分别为：
(1)氨基酸为蛋白合成的前体和合成其他生物大分子的中间体，是细胞提供的必要营养成分；
(2)维生素是细胞组成成分，细胞的代谢活动，离开维生素都无法进行，因此它是必须的；
(3)无机盐起到调节渗透压的作用；
(4)微量元素主要起调节、传递和控制的作用。
本发明可用于CHO细胞传代培养和高密度连续灌注悬浮培养，具有以下优点：
(1)无任何含血清添加物，化学成分确定，便于配置、储存；
(2)无需适应即可支持CHO细胞生长、维持活力时间长，在产物表达方面与血清培养基接近或相当；
(3)支持细胞长期传代培养；
(4)所有化学结构已知，有利于产物的分离纯化，提高产品的品质；
(5)成分均为小分子物质，成本低，适合大规模工业化生产。
实施例1
按照下列配方称取个组分，本发明所有原料采购Sigma细胞培养级的原料，并按照相关要求储存。
L-氨基酸的组分和用量：
组分 用量(单位：mg/kg)
丙氨酸 10.26
精氨酸 155.82
天冬酰胺 247.32
半胱氨酸 38.26
谷氨酸 8.16
甘氨酸 8.16
组氨酸 32.50
异亮氨酸 131.25
亮氨酸 165.23
赖氨酸 190.26
甲硫氨酸 60.42
苯丙氨酸 83.56
脯氨酸 35.35
丝氨酸 92.15
苏氨酸 95.24
色氨酸 51.41
酪氨酸 142.13
缬氨酸 112.31
谷氨酰胺 1248.93
维生素的组分和用量：
组分 用量(单位：mg/kg)
维生素B6 0.2
维生素B12 0.42
维生素C 10
维生素E 0.31
生物素 1.21
氯化胆碱 0.072
D-泛酸钙 0.005
叶酸 0.080
肌醇 1.41
烟酰胺 0.20
吡哆醇盐酸盐 0.0016
核黄素 0.08
腐胺二酸盐 0.00503
氢化可的松 0.0017
吡哆醛.HCL 9.45
无机盐的组分和用量：
组分 用量(单位：mg/kg)
碳酸氢钠 2451
氯化钠 6731.20
氯化钾 313.90
氯化镁 30.42
硫酸镁 49.20
一水磷酸二氢钠 62.52
磷酸氢二钠 72.15
硫酸锌 0.445
氯化钙 117.30
五水硫酸铜 0.0016
七水硫酸铁 0.071
微量元素的组分和用量：
组分 用量(单位：mg/kg)
硝酸银 0.0004
硫酸锰 0.0008
硅酸钠 0.012
钼酸铵 0.018
钒酸铵 0.0006
氯化镍 0.00005
氯化锡 0.00004
亚硒酸钠 0.00004
六水氯化铝 0.00004
硫酸钡 0.00001
氯化铝 0.00001
硫代甘油 0.00001
四水氯化钛 0.00001
八水氯化氧锆 0.00001
补充因子的组分和用量：
组分 用量(单位：mg/kg)
葡萄糖 7000
腺嘌呤 9.89
次黄嘌呤 8.52
鸟嘌呤 8.10
尿嘌呤 10.00
胸腺嘌呤 2.37
胞嘧啶 10.00
核糖 9.50
脱氧核糖 10.30
硫辛酸 1.10
亚油酸 0.052
腐胺 0.832
丙酮酸钠 230.00
氢化可的松 0.039
地塞米松 0.039
孕酮 0.010
雌二醇 0.02
乙醇胺 12.34
B-硫基乙醇 2.10
将以上组分加入100ml无菌水溶解并混匀，用HCl或NaOH调节pH达到7.5定容1000ml，用0.32μm微孔滤膜过滤除菌，无菌保存。
采用本发明所述CHO细胞无血清培养基通过以下方法进行CHO细胞培养并计数：
将已构建的一株Anti-EGFR-CHO细胞按常规方法无血清悬浮复苏细胞到T25方瓶，细胞长成致密单层后离心、重悬无血清基础培养基传代培养，传代至少3代以上，待细胞至对数生长期后逐级扩增至250mL三角瓶，当细胞密度达到4×106cells/ml，体积40ml时，取相同数量细胞，按照细胞密度1×106cells/ml，体积40ml，离心、重悬接种250ml三角瓶，将所有三角瓶置于含6％的CO2的摇床中37℃、转速为120rpm振荡培养，每天取样计数，按规定流加，待细胞活率低于80％，收获细胞液。一次性接种细胞至培养基，培养数天，每天取样计数，并用台盼蓝染色计算细胞活率。
与国外公司的培养基新型细胞培养比较：
按照上述的方法驯化Anti-EGFR-CHO到Gibco CD-CHO培养基中，取各自驯化好的细胞株，将Anti-EGFR-CHO细胞每毫升的密度接种至含有150ml的250ml三角瓶中；将所有三角瓶置于含6％的CO2的摇床中37℃、转速为120rpm振荡培养，每天取样计数细胞，并用台盼蓝染色计算细胞活率。
如图2所示，上、下两条曲线分别为本发明所述CHO细胞无血清培养基培养的CHO细胞的生长曲线，处于下方的曲线为Gibco公司的CD-CHO培养基培养中的CHO细胞的生长曲线，处于上方的曲线为本发明的CHO细胞无血清培养基中的CHO细胞的生长曲线，整个培养过程持续9天，培养第4天，本发明的CHO细胞无血清培养基与Gibco公司的CD-CHO培养基中活细胞密度分别达到4.32×106cells/ml和3.1×106cells/ml，Anti-EGFR-CHO在本发明所述的CHO细胞无血清培养基中生长情况优于在国外进口培养基中的生长情况。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (10)

1.一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，包括下列重量份的组分：
氨基酸组合物  1300-2000；
维生素组合物  12-25；
无机盐组合物  10-15；
微量元素组合物  0.005-0.006；
无菌水  900-1100。
2.如权利要求1所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述氨基酸组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
丙氨酸7.35-31.5、精氨酸152.13-211.5、天冬酰胺40.26-250.48、半胱氨酸38.26-45.12、谷氨酸8.14-32.51、甘氨酸8.14-30.45、组氨酸30.48-105.98、异亮氨酸53.41-131.25、亮氨酸58.94-167.23、赖氨酸91.25-193.26、甲硫氨酸15.26-61.42、苯丙氨酸34.12-83.56、脯氨酸17.34-35.41、丝氨酸27.31-95.15、苏氨酸54.16-97.24、色氨酸8.27-52.41、酪氨酸57.21-145.13、缬氨酸53.25-118.31和谷氨酰胺583.41-1248.93；
其中所述氨基酸均为L-氨基酸。
3.如权利要求2所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述维生素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
维生素B6 0.01-0.2、维生素B12 0.02-0.42、维生素C9-10、维生素E0.30-0.31、生物素0.4-1.21、氯化胆碱0.064-0.072、D-泛酸钙0.004-0.005、叶酸0.062-0.081、肌醇0.83-1.43、烟酰胺0.17-0.20、吡哆醇盐酸盐0.0015-0.0017、核黄素0.06-0.29、腐胺二酸盐0.00501-0.00503、氢化可的松0.0015-0.0018和吡哆醛.HCL1.01-9.48。
4.如权利要求3所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述无机盐组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
碳酸氢钠2440-2451、氯化钠6995.50-7031.20、氯化钾312.81-313.90、氯化镁29.65-30.42、硫酸镁48.85-49.21、一水磷酸二氢钠62.51-62.53、磷酸氢二钠71.03-72.15、硫酸锌0.431-0.445、氯化钙116.60-117.32、五水硫酸铜0.0014-0.0016和七水硫酸铁0.062-0.071。
5.如权利要求4所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述微量元素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：
硝酸银0.0001-0.0005、硫酸锰0.00008-0.0008、硅酸钠0.003-0.012、钼酸铵0.0019-0.018、钒酸铵0.00007-0.0007、氯化镍0.00003-0.00031、氯化锡0.00002-0.00023、亚硒酸钠0.00005-0.0005、六水氯化铝0.00001-0.0001、硫酸钡0.00001-0.0001、氯化铝0.00001-0.0001、硫代甘油0.00001-0.0001、四水氯化钛0.00001-0.0001和八水氯化氧锆0.00001-0.0001。
6.如权利要求5所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述培养基还包括1000-8000重量份的补充因子组合物，所述补充因子组合物由下列重量份的组分组成：
葡萄糖  1000-7300；
生物碱类物质组合物  17-50；
大分子糖类物质组合物  1-21；
激素类物质组合物  0.084-0.49；
脂肪酸类物质组合物  0.14-1.16。
7.如权利要求6所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述补充因子组合物中的生物碱类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：腺嘌呤2.43-9.89、次黄嘌呤2.13-8.56、鸟嘌呤3.85-8.16、尿嘌呤4.37-10.00、胸腺嘌呤0.21-2.37、胞嘧啶4.85-10.00、乙醇胺1.24-12.34和腐胺0.080-0.832。
8.如权利要求7所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，
所述补充因子组合物中的大分子糖类物质组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：核糖0.92-9.57和脱氧核糖0.10-10.32；
所述补充因子组合物中的脂肪酸类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：硫辛酸0.10-1.10和亚油酸0.042-0.053；
此外所述补充因子组合物中还包括0.32-2.12重量份的B-硫基乙醇。
9.如权利要求8所述的CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述补充因子组合物中的激素类物质包括下列重量份的组分中的一种或几种：丙酮酸钠220.00-230.00、氢化可的松0.037-0.39、地塞米松0.039-0.0393、孕酮0.006-0.032和雌二醇0.0028-0.028。
10.一种CHO细胞无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述CHO细胞无血清培养基也可制为粉末状培养基，包括以下步骤：
步骤一、按配方量称取所述CHO细胞无血清培养基中的各组分并混合；
步骤二、研磨；
步骤三、高温灭菌；
步骤四、无菌分装。
CN201410321893.XA 2014-07-08 2014-07-08 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法 Pending CN104073464A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410321893.XA CN104073464A (zh) 2014-07-08 2014-07-08 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410321893.XA CN104073464A (zh) 2014-07-08 2014-07-08 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104073464A true CN104073464A (zh) 2014-10-01

Family

ID=51595071

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410321893.XA Pending CN104073464A (zh) 2014-07-08 2014-07-08 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104073464A (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106032526A (zh) * 2015-03-12 2016-10-19 北京天信和生物科技有限公司 一种动物细胞培养基及其制备方法和应用
CN106222127A (zh) * 2016-08-04 2016-12-14 天信和(苏州)生物科技有限公司 粉末型细胞培养基的针磨生产工艺
CN108624550A (zh) * 2018-02-14 2018-10-09 世贸天阶制药（江苏）有限责任公司 一种cho细胞无血清培养基的添加物及制得的培养基
CN108699529A (zh) * 2016-02-17 2018-10-23 普乐思尔活性生物科学有限公司 用于培养含癌症干细胞(csc)的细胞群的化学成分确定的培养基
CN113846051A (zh) * 2021-09-28 2021-12-28 无锡多宁生物科技有限公司 一种通用型化学成分限定cho细胞传代培养基及其应用
CN113913368A (zh) * 2021-10-12 2022-01-11 浙江省立同德医院 适合cho细胞大规模悬浮扩增培养的无血清培养基及其制备和应用
CN116790483A (zh) * 2023-08-22 2023-09-22 苏州依科赛生物科技股份有限公司 一种cho细胞无血清培养基及其应用
US11958894B2 (en) 2019-12-06 2024-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-VEGF protein compositions and methods for producing the same

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101033458A (zh) * 2006-03-07 2007-09-12 上海旭太生物工程有限公司 无血清动物细胞培养基及其制备方法
CN101195817A (zh) * 2007-12-28 2008-06-11 天津百若克医药生物技术有限责任公司 一种杂交瘤细胞扩增培养基及其用途
CN101724600A (zh) * 2009-11-30 2010-06-09 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 一种支持cho细胞大规模高密度悬浮培养的无血清培养基
CN102876626A (zh) * 2011-07-14 2013-01-16 宁波安柯普顿生物技术有限公司 支持cho高密度悬浮生长的无血清无蛋白全化学成分界定的培养基

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101033458A (zh) * 2006-03-07 2007-09-12 上海旭太生物工程有限公司 无血清动物细胞培养基及其制备方法
CN101195817A (zh) * 2007-12-28 2008-06-11 天津百若克医药生物技术有限责任公司 一种杂交瘤细胞扩增培养基及其用途
CN101724600A (zh) * 2009-11-30 2010-06-09 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 一种支持cho细胞大规模高密度悬浮培养的无血清培养基
CN102876626A (zh) * 2011-07-14 2013-01-16 宁波安柯普顿生物技术有限公司 支持cho高密度悬浮生长的无血清无蛋白全化学成分界定的培养基

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106032526A (zh) * 2015-03-12 2016-10-19 北京天信和生物科技有限公司 一种动物细胞培养基及其制备方法和应用
CN108699529A (zh) * 2016-02-17 2018-10-23 普乐思尔活性生物科学有限公司 用于培养含癌症干细胞(csc)的细胞群的化学成分确定的培养基
CN108699529B (zh) * 2016-02-17 2022-05-24 普乐思尔有限公司 用于培养含癌症干细胞(csc)的细胞群的化学成分确定的培养基
CN106222127A (zh) * 2016-08-04 2016-12-14 天信和(苏州)生物科技有限公司 粉末型细胞培养基的针磨生产工艺
CN108624550A (zh) * 2018-02-14 2018-10-09 世贸天阶制药（江苏）有限责任公司 一种cho细胞无血清培养基的添加物及制得的培养基
US11958894B2 (en) 2019-12-06 2024-04-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-VEGF protein compositions and methods for producing the same
CN113846051A (zh) * 2021-09-28 2021-12-28 无锡多宁生物科技有限公司 一种通用型化学成分限定cho细胞传代培养基及其应用
CN113846051B (zh) * 2021-09-28 2023-12-01 无锡多宁生物科技有限公司 一种通用型化学成分限定cho细胞传代培养基及其应用
CN113913368A (zh) * 2021-10-12 2022-01-11 浙江省立同德医院 适合cho细胞大规模悬浮扩增培养的无血清培养基及其制备和应用
CN116790483A (zh) * 2023-08-22 2023-09-22 苏州依科赛生物科技股份有限公司 一种cho细胞无血清培养基及其应用
CN116790483B (zh) * 2023-08-22 2023-10-20 苏州依科赛生物科技股份有限公司 一种cho细胞无血清培养基及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104073464A (zh) 一种cho细胞无血清培养基及其制备方法
CN103555659B (zh) 一种mdck细胞全悬浮培养的无血清培养基
CN105861422B (zh) 一种适应无血清全悬浮培养的mdck细胞系的制备方法及通过该制备方法获得的mdck细胞系
CN104593316B (zh) 昆虫细胞无血清培养基及其应用
CN102827804B (zh) 适用于Vero细胞微载体悬浮放大培养的培养基及方法
JP6177260B2 (ja) 連続細胞培養で対象となるポリペプチドまたはウイルスを生成する方法
CN102858953B (zh) 改进的细胞培养基
CN106119186B (zh) 一种用于全悬浮培养mdck细胞的无血清培养基及其制备方法
CN100362098C (zh) 适用于多种动物细胞大规模培养的无血清培养基
CN103045533B (zh) 适于大规模生产流感疫苗的无血清培养基
CN104073463B (zh) 一种支持cho高密度悬浮培养的无血清无蛋白培养基
CN102268403A (zh) 适于幼仓鼠肾细胞大规模单细胞悬浮培养的无血清培养基
CN105543163A (zh) 一种用于全悬浮培养mdck细胞的无血清培养基
CN102443565B (zh) 一种适于培养cho细胞的培养基及其培养工艺
CN105462916B (zh) 一种培养Marc‑145细胞用的无血清培养基及其制备方法
CN103160458A (zh) 一种适合Vero细胞生长的低血清培养基
CN102994442B (zh) 一种利用激流式生物反应器悬浮培养动物细胞的工艺过程及控制方法
CN109609444A (zh) 一种bhk21细胞无血清培养基
CN105985926A (zh) 一种用于cho细胞培养的无血清培养基
CN105567628A (zh) 一种全悬浮培养mdck细胞的低血清培养基
CN105779375A (zh) 一种新型无血清培养基
CN102327609B (zh) 一种乙型脑炎疫苗的生产方法
CN111849863B (zh) 支持cho细胞高效生产单克隆抗体的培养基添加剂及其制备方法和应用
CN104164465A (zh) 一种表达重组蛋白的发酵工艺
CN104212768A (zh) 用于培养微囊化重组中国仓鼠卵巢细胞的无蛋白培养基及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20141001