CN103555598A - 一种食用酵素复合菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种食用酵素复合菌剂及其制备方法。复合菌剂包括下列各菌及其数量比例：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10；制备方法包括：制备培养基及菌液，各菌依次接种、培养，分离干燥等步骤。本发明方法制备的酵素复合菌剂，通过菌体培养后，酵素复合菌剂的活菌数达到95%，在利用蔬菜水果为原料的酵素生产过程中加入本发明酵素复合菌剂，能很好的完成自然发酵，在酵素发酵应用中，提高酵素产品质量和稳定性，缩短发酵周期。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵技术领域，尤其属于一种生产酵素的发酵菌种制剂及其在酵素发酵工艺制作中的应用，特别涉及一种活性干粉制剂及其制备方法。
背景技术
酵素是一种由氨基酸组成的具有特殊生物活性的物质，它存在于所有活的动植物体内，是维持机体正常功能，消化食物，修复组织等生命活动的一种必需物质。包括：思考问题、运动、睡眠、呼吸、愤怒、哭泣或者分泌荷尔蒙等都是以酵素为中心的活动结果。与人类生命息息相关，酵素具有增强免疫功能，促进细胞再生，净化血液，清除自由基，预防疾病。很多时候将它称为“活着的物质”、“撑握所有生命活动的物质”。
酵素中含有大量的脂肪酶，它可将脂肪催化水解为甘油、脂肪酸。同时也能催化酯合成和酯交换反应；另外真菌α-淀粉酶可以迅速水解淀粉分子链中的α-1.4葡萄糖苷键，消化淀粉，提供身体活动必需的能量。这些酶均具有反应高效、条件温和、无毒副作用的特点。
酵素能促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，防止细胞退化；促进胃液及胰液的产生；参与消除肾及膀胱功能的损耗；参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能；有转变某些氨基酸达到平衡的功能。
在食用酵素中，下列有益菌群是已知重要的可食用酵素：
酵母菌：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）或卡氏酵母（Saccharomyces carlsbergensis）。
乳酸菌：发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentium）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）或保加利亚乳杆菌（Lactobacillusbulgaricus）。
嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）。
双歧杆菌：青春双歧杆菌（Bifidobacterium adolescentis）或动物双歧杆菌（Bifidobacterium animalis）。
醋酸菌（Acetobacter）。
现代的酵素主要是水果，蔬菜及食用菌为原料的通过自然发酵的方式生产出来的，在生产中发酵时间比较长，发酵控制粗放，其他杂菌的污染也时常发生，品质的稳定性不是很好，产品的产出率也不高，常常由于杂菌污染而加大原料成本和时间成本。
发明内容
本发明根据现有技术的不足公开了一种食用酵素复合菌剂及其制备方法。本发明要解决的第一个问题是提供一种稳定、品质一致的酵素复合菌剂，本发明要解决的第二个问题是提供一种酵素复合菌剂的制备方法，通过本发明方法制备的酵素复合菌剂，能保证每次发酵的菌群结构和数量，工艺上操作更加简单，使产品质量稳定，大大缩短了自然发酵的周期，提高了产品的产出率。
本发明提供的酵素复合菌剂组成如下：
食用酵素复合菌剂，包括酵母菌、乳酸菌、醋酸菌、双歧杆菌和嗜热链球菌有益菌群。
所述各菌的数量比例为：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。
进一步所述各菌的数量比例为：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=20︰40︰20︰20︰10。
上述各菌的数量比例是指各菌在总菌落中所占的细菌数量比例。
上述食用酵素复合菌剂中各菌类分别包括：
酵母菌是：酿酒酵母或卡氏酵母；
乳酸菌是：发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌或保加利亚乳杆菌；
双歧杆菌是：青春双歧杆菌或动物双歧杆菌。
上述食用酵素复合菌剂的制备方法包括以下步骤：
（1）制备培养基及菌液：
制备酵母培养基：按重量比例配制：酵母膏1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，水1000毫升；向酵母培养基中加入大小在2cm×2cm大小的脱脂棉，作为固定吸纳菌体，然后121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种酿酒酵母或卡氏酵母的一种或两种，在室温下培养3-5天；
制备培养乳酸菌的培养基：按重量比例制备：牛肉膏1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖2%、柠檬酸铵0.2%、硫酸镁0.02克、水1000毫升；然后于121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种发酵乳杆菌或嗜酸乳杆菌或保加利亚乳杆菌的一种或几种纯菌体，在温度28-30℃下培养2-3天，得到A液备用；
制备醋酸菌培养基：按重量比例制备：葡萄糖1%，酵母膏1%，水1000毫升，然后于121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种醋酸菌，在温度28-30℃下培养48-60小时，得到B液备用；
制备嗜热链球菌培养基：按重量比例制备：蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖1%、磷酸二氢钾0.2%，水1000毫升，然后于121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种嗜热链球菌，然后在37℃下培养24小时，得到C液备用；
（2）在培养好的酵母培养基中加入原体积10-15%已灭菌冷却后的乳酸菌营养液，同时接入原体积20%-30%培养好的乳酸菌液A液，然后在28-30℃的温度下一起共发酵培养2-3天，使脱脂棉球变大；
（3）培养3天后，在步骤（2）得到的原液中加入原液体积10-15%已灭菌冷却后的醋酸菌营养液，同时接入原液体积20%-30%培养好的醋酸菌菌液B液，然后在28-30℃的温度下一起螯合培养48-60小时，使脱脂棉周围的菌系变大；
（4）步骤（3）螯合48-60小时后，在得到的原液中加入原液体积10-15%已灭菌冷却后的嗜热链球菌营养液，同时接入原液体积20%-30%培养好的嗜热链球菌菌液C液，然后在28-30℃的温度下螯合培养24-48小时，使脱脂棉周围的菌系进一步增大；
（5）在步骤（4）得到的脱脂棉中接入原体积2—5%的青春双歧杆菌或动物双歧杆菌的一种或两种菌体，再次培养48-60小时；
（6）将步骤（5）得到的脱脂棉菌球体取出，通过分离、流化床快速干燥，得到有活性的酵素复合干菌体；
（7）步骤6得到的酵素复合干菌体的数量比例组成是：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。
本发明有益性，经实验检测，本发明方法制备的酵素复合菌剂，通过菌体培养后，酵素复合菌剂的活菌数达到95%，酵母菌、乳酸菌、醋酸菌、双歧杆菌和嗜热链球菌有益菌群的结构数量比例组成是18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。在利用蔬菜水果为原料的酵素生产过程中加入本酵素复合菌剂，能很好的完成自然发酵，在酵素发酵应用中，提高酵素产品质量和稳定性，缩短发酵周期。作为家庭、工厂制备水果蔬菜食用菌等酵素原液提供了良好的发酵菌剂。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，本实施例只用于对本发明进行进一步的说明，但不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据上述本发明的内容作出的一些非本质的改进和调整也属于本发明保护的范围。
食用酵素复合菌剂的制备
1、制备培养基及菌液：
制备酵母培养基：按如下重量比例配制：酵母膏1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，水1000毫升。向酵母培养基中加入大小在2cm×2cm大小的脱脂棉，作为固定吸纳菌体，然后121℃灭菌30分钟后冷却。无菌下接种酿酒酵母或卡氏酵母的一种或两种，在室温下培养3-5天。
制备培养乳酸菌的培养基，按如下重量比例制备：牛肉膏1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖2%、柠檬酸铵0.2%、硫酸镁0.02克、水1000毫升。然后于121℃灭菌30分钟后冷却。无菌下接种发酵乳杆菌或嗜酸乳杆菌或保加利亚乳杆菌的一种或多种纯菌体，在温度28-30℃下培养2-3天，得到A液备用。
制备醋酸菌培养基，按如下重量比例制备：葡萄糖1%，酵母膏1%，水1000毫升，然后于121℃灭菌30分钟后冷却。然后接入醋酸菌，在温度28-30℃下培养48-60小时，得到B液备用。
制备嗜热链球菌培养基，按如下重量比例制备：蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖1%、磷酸二氢钾0.2%，水1000毫升。然后于121℃灭菌30分钟后冷却。无菌下接种嗜热链球菌，然后在37℃下培养24小时，得到C液备用。
2、在培养好的酵母培养基中加入原体积10-15%已灭菌冷却后的乳酸菌营养液，同时接入原体积20%-30%培养好的乳酸菌液A液，然后在28-30℃的温度下一起共发酵培养2-3天，使脱脂棉球变大。
3、培养3天后，在原液中加入原液体积10-15%已灭菌冷却后的醋酸菌营养液：同时接入原液体积20%-30%培养好的醋酸菌菌液B液，然后在28-30℃的温度下一起螯合培养48-60小时，使脱脂棉周围的菌系变大。
4、螯合48-60小时后，在原液中接入原液体积10-15%已灭菌冷却后的嗜热链球菌营养液：同时接入原液体积20%-30%培养好的嗜热链球菌菌液C液，然后在28-30℃的温度下螯合培养24-48小时，使脱脂棉周围的菌系变得更大。
5、在上述发酵得到的脱脂棉中接入原体积2—5%的青春双歧杆菌或动物双歧杆菌的一种或两种菌体，再次培养48-60小时。
6、将所得的脱脂棉菌球体取出，通过分离、流化床快速干燥，得到有活性的酵素复合干菌体。
7、将冷冻干燥好的菌体保存在4℃的环境中，得到酵素复合菌体物。
上述方法制备的酵素复合菌剂，通过菌体培养后，经实验检测：酵素复合菌剂的活菌数达到95%，酵母菌、乳酸菌、醋酸菌、双歧杆菌和嗜热链球菌有益菌群的结构数量比例组成是18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。在利用蔬菜水果为原料的酵素生产过程中加入本酵素复合菌剂，能很好的完成自然发酵，在酵素发酵应用中，提高酵素产品质量和稳定性，缩短发酵周期。作为家庭、工厂制备水果蔬菜食用菌等酵素原液提供了良好的发酵菌剂。
本发明酵素复合菌剂制备酵素对比实验：
标准：酵素是一组生物发酵多组分、多体系较复杂的发酵组成液，在发酵标准的判定中难以把握。由于酵素是发酵底物完全分解后形成游离的小分子有机物和各种消化酶，因此，可以测定游离的氨基酸含量、多肽、蛋白酶、脂肪酶及SOD酶的多少来相对定性判断酵素发酵的终点。
采取同样的水果蔬菜作为酵素的发酵原料，平均分成4个批次；其中一个批次为空白对照，无添加菌种；其余三个分别加入相对于发酵原料10-15%重量份的本发明酵素复合菌剂；然后密封放于自然室温下保存，从第二个月起，每隔一天抽取四个批次的的发酵产物，测定发酵终点。结果如下表：
| 指标 | 批次1 | 批次2 | 批次3 | 空白对照 |
| 发酵周期 | 122 | 130天 | 134天 | 184天 |
| 氨基酸含量（%） | 0.823 | 0.812 | 0.785 | 0.794 |
| 蛋白酶（U/ml） | 425 | 479 | 454 | 396 |
| 脂肪酶（U/ml） | 353 | 328 | 385 | 305 |
| SOD酶（U/ml） | 1170 | 1203 | 1184 | 748 |
从酵素发酵对比的实验可以相对得出，采用了复合酵素菌剂的三批酵素较空白实验的发酵周期缩短了近1/3的时间，大大减少了生产周期，在酵素的营养成分上，基本没有多大的变化，但是SOD酶的活性要远远高于空白对照组。因此，该复合酵素发酵菌剂在生产酵素上可缩短发酵周期，提高产品品质有重要作用。
Claims (6)
1.一种食用酵素复合菌剂，其特征在于：该食用酵素复合菌剂包括酵母菌、乳酸菌、醋酸菌、双歧杆菌和嗜热链球菌有益菌群。
2.根据权利要求1所述的食用酵素复合菌剂，其特征在于：所述各菌的数量比例为：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。
3.根据权利要求2所述的食用酵素复合菌剂，其特征在于：所述各菌的数量比例为：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=20︰40︰20︰20︰10。
4.根据权利要求1或2或3所述的食用酵素复合菌剂，其特征在于：
所述酵母菌是：酿酒酵母或卡氏酵母；
所述乳酸菌是：发酵乳杆菌、嗜酸乳杆菌或保加利亚乳杆菌；
所述双歧杆菌是：青春双歧杆菌或动物双歧杆菌。
5.一种食用酵素复合菌剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)制备培养基及菌液：
制备酵母培养基：按重量比例配制：酵母膏1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%，水1000毫升；向酵母培养基中加入大小在2cm×2cm大小的脱脂棉，作为固定吸纳菌体，然后121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种酿酒酵母或卡氏酵母的一种或两种，在室温下培养3-5天；
制备培养乳酸菌的培养基：按重量比例制备：牛肉膏1%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖2%、柠檬酸铵0.2%、硫酸镁0.02克、水1000毫升；然后于121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种发酵乳杆菌或嗜酸乳杆菌或保加利亚乳杆菌的一种或几种纯菌体，在温度28-30℃下培养2-3天，得到A液备用；
制备醋酸菌培养基：按重量比例制备：葡萄糖1%，酵母膏1%，水1000毫升，然后于121℃灭菌30分钟后冷却；然后接入醋酸菌，在温度28-30℃下培养48-60小时，得到B液备用；
制备嗜热链球菌培养基：按重量比例制备：蛋白胨1%、酵母膏0.5%、葡萄糖1%、磷酸二氢钾0.2%，水1000毫升，然后于121℃灭菌30分钟后冷却；无菌下接种嗜热链球菌，然后在37℃下培养24小时，得到C液备用；
（2）在培养好的酵母培养基中加入原体积10-15%已灭菌冷却后的乳酸菌营养液，同时接入原体积20%-30%培养好的乳酸菌液A液，然后在28-30℃的温度下一起共发酵培养2-3天，使脱脂棉球变大；
（3）培养3天后，在步骤（2）得到的原液中加入原体积10-15%已灭菌冷却后的醋酸菌营养液，同时接入原体积20%-30%培养好的醋酸菌菌液B液，然后在28-30℃的温度下一起螯合培养48-60小时，使脱脂棉周围的菌系变大；
（4）步骤（3）螯合48-60小时后，在得到的原液中加入原体积10-15%已灭菌冷却后的嗜热链球菌营养液，同时接入原体积20%-30%培养好的嗜热链球菌菌液C液，然后在28-30℃的温度下螯合培养24-48小时，使脱脂棉周围的菌系进一步增大；
（5）在步骤（4）得到的脱脂棉中接入原体积2—5%的青春双歧杆菌或动物双歧杆菌的一种或两种菌体，再次培养48-60小时；
（6）将步骤（5）得到的脱脂棉菌球体取出，通过分离、流化床快速干燥，得到有活性的酵素复合干菌体；
（7）步骤6得到的酵素复合干菌体的数量组成比例是：酵母菌︰乳酸菌︰醋酸菌︰双歧杆菌︰嗜热链球菌=18～25︰35～45︰15～22︰18～25︰8～10。
6.一种食用酵素复合菌剂的应用，其特征在于：权利要求5制备的复合菌剂在制备水果蔬菜食用菌中的应用。
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