CN101280272A - 微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途 - Google Patents

微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途 Download PDF

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微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途,它涉及一种菌剂的制备方法及其用途。本发明解决了现有生态养猪法中的有机垫料发酵时间长,发酵过程操作繁琐菌数不易控制,菌群不易确定,易感染杂菌的问题。本发明微生物菌剂主要由乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合制成。本发明方法如下:将乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合,其中乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌均经过一级斜面培养、二级液体种子培养和三级液体发酵培养。本发明的微生物菌剂7~10天就可完成降解过程,该过程中最高温度可达60~65℃,而且本发明菌数固定,方法简单,无环境污染。

Description

微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途
技术领域
本发明涉及一种微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途。
背景技术
生态养猪法是采集自然环境中的微生物,将其与一定量的秸杆、木屑、辅助材料等混合形成有机垫料,有机垫料中的微生物可降解猪粪便。目前,生态养猪法采用的是自然菌群发酵法,即从自然环境中采集微生物,通过传统手段将微生物富集到垫料中,但这种方法的缺点是制作方法不规范,有机垫料发酵时间长,发酵过程需要从自然界中采集菌种,再扩培培养,使操作过程繁琐,并且菌数不易控制,菌群不易确定,易感染杂菌,发酵时间约2周时间,不适合大规模推广。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有生态养猪法中的有机垫料发酵时间长,发酵过程操作繁琐菌数不易控制,菌群不易确定,易感染杂菌的问题,提供了一种微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途。
本发明微生物菌剂主要由乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌制成;微生物菌剂中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
本发明微生物菌剂的制备方法如下:将纯化培养的乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合,其中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
本发明中的乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌都分别经过一级斜面培养、二级液体种子培养和三级液体发酵培养。经过三级液体发酵培养后乳酸菌培养液中乳酸菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,酵母菌培养液中酵母菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,光合细菌培养液中光合细菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,放线菌培养液中放线菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,丝状真菌培养液中丝状真菌的菌数为1.0×108~9.0×108cfu/ml。乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合后,加入混合菌液总体积2%的保护剂,保护剂为脱脂乳粉或甘油,在真空度为1Pa、温度为-50~-80℃的条件下干燥8~12h。
本发明的微生物菌剂作为有机垫料发酵剂。
本发明的微生物菌剂用于生态法养猪。
本发明中所用的乳酸菌可以调节猪肠道的菌群平衡,增强猪的消化吸收力,有效控制腹泻等常见肠道疾病的发生,同时改善猪粪便的臭味;所用的酵母菌作为优质蛋白质增加饲料效价,同时能发酵有机垫料产生酒糟味及特有香味,增加猪的食欲;所用的光合细菌能以有机物或有害气体为基质,合成氨基酸、核酸等含氮化合物等多种生理活性物质,这些代谢产物,可以作为其他微生物生长繁殖的基质;所用的放线菌,能摄取光合细菌产生的氨基酸等生理活性物质产生抗生物质,有效抑制病原菌,大大减少猪患病的机率;所用的丝状真菌,在发酵代谢的过程中能产生热量,为猪生长提供温暖舒适的环境,同时具有分解恶臭物质的作用。
本发明中的微生物菌剂中的常温菌、中温菌和高温菌(最高温度可达60~65℃)组成的的菌群协同递进、功能互补和酶系互补的作用充分发挥各益生菌菌株的优势,提高了降解效率,缩短了对猪粪便的降解周期,7~10天就可完成降解过程,该过程中最高温度可达60~65℃,杀灭猪粪中的有害微生物和病原菌,降低了猪患病的机率。本发明的微生物菌剂充分的利用了微生物的转化和代谢的发热作用,将除臭和发酵两种功能有机地结合在一起,实现了对猪粪便臭味的去除,同时将其转化为优质的有机饲料,可节省饲料20~30%,降低养猪的生产成本,本发明菌数固定,方法简单,无环境污染。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式中的微生物菌剂主要由乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌制成;微生物菌剂中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
具体实施方式二:本实施方式中微生物菌剂的制备方法如下:将纯化培养的乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合,其中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式二不同的是乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌都分别经过一级斜面培养、二级液体种子培养和三级液体发酵培养。其它与具体实施方式二相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式二不同的是经过三级液体发酵培养后乳酸菌培养液中乳酸菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,酵母菌培养液中酵母菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,光合细菌培养液中光合细菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,放线菌培养液中放线菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,丝状真菌培养液中丝状真菌的菌数为1.0×108~9.0×108cfu/ml。其它与具体实施方式二相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式二不同的是乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合后,加入混合菌液总体积2%的保护剂,保护剂为脱脂乳粉或甘油,在真空度为1Pa、温度为-50~-80℃的条件下干燥8~12h,制得固体微生物菌剂。其它与具体实施方式二相同。
具体实施方式六:本实施方式中微生物菌剂作为有机垫料发酵剂。
具体实施方式七:本实施方式中微生物菌剂用于生态法养猪。
具体实施方式八:本实施方式中乳酸菌菌株的培养过程如下:在37℃的条件下将乳酸菌在MRS培养基上作一级斜面培养48h后,将经过一级斜面培养的乳酸菌接种到三角瓶中,在37℃的条件下作二级液体静止培养18h,然后将乳酸菌接种到发酵罐中,使乳酸菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的2%,然后在37℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~5.0×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中酵母菌菌株的培养过程如下:在30℃的条件下将酵母菌在麦芽汁培养基上作一级斜面培养48h后,将经过一级斜面培养的酵母菌接种到三角瓶中,在30℃的条件下作二级液体振荡培养14h,然后将酵母菌接种到发酵罐中,使酵母菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的5%,然后在30℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~2.5×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中光合细菌菌株的培养过程如下:在30℃光照条件下将光合细菌在营养琼脂培养基上作一级斜面培养5天后,将经过一级斜面培养的光合细菌接种到三角瓶中,在30℃光照条件下作二级液体静止培养3天,然后将经过二级液体静止培养的光合细菌接种到发酵罐中,使光合细菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的20%,然后在30℃的光照条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~5.0×108cfu/mL液体发酵液。
本实施方式中放线菌菌株的培养过程如下:在28℃的条件下将放线菌在高氏培养基上作一级斜面培养7天后,将经过一级斜面培养的放线菌接种到三角瓶中,然后在28℃的条件下作二级液体静止培养5天,然后将经过二级液体静止培养的放线菌接种到发酵罐中,使放线菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的10%,然后在28℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~2.5×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中丝状真菌菌株的培养过程如下:在30℃的条件下将丝状真菌在麦芽汁培养基上作一级斜面培养72h后,将经过一级斜面培养的丝状真菌接种到三角瓶中,在30℃的条件下作二级液体振荡培养12h,然后将经过二级液体振荡培养的丝状真菌接种到发酵罐中,使丝状真菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的5%,在30℃的条件下作三级培养得到菌数为1.0×108~9.0×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中微生物菌剂的制备方法如下:将乳酸菌菌液、酵母菌菌液、光合细菌菌液、放线菌菌液和丝状真菌菌液,使每毫升微生物菌剂中乳酸菌与酵母菌的菌数比为2∶1、酵母菌与光合细菌的菌数比为1∶2、光合细菌与放线菌的菌数比为2∶1、放线菌与丝状真菌的菌数比为1∶4的比例混合。
然后在室温下以200mL/平方米的接种量向有机垫料中加入得到的微生物菌剂,有机垫料在常温下即可发酵。
具体实施方式九:本实施方式中乳酸菌菌株的培养过程如下:在37℃的条件下将乳酸菌在MRS培养基上作一级斜面培养48h后,将经过一级斜面培养的乳酸菌接种到三角瓶中,在37℃的条件下作二级液体静止培养18h,然后将乳酸菌接种到发酵罐中,使乳酸菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的5%,然后在37℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~5.0×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中酵母菌菌株的培养过程如下:在30℃的条件下将酵母菌在麦芽汁培养基上作一级斜面培养48h后,将经过一级斜面培养的酵母菌接种到三角瓶中,在30℃的条件下作二级液体振荡培养14h,然后将酵母菌接种到发酵罐中,使酵母菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的5%,然后在30℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~2.5×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中光合细菌菌株的培养过程如下:在30℃光照条件下将光合细菌在营养琼脂培养基上作一级斜面培养5天后,将经过一级斜面培养的光合细菌接种到三角瓶中,在30℃光照条件下作二级液体静止培养3天,然后将经过二级液体静止培养的光合细菌接种到发酵罐中,使光合细菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的20%,然后在30℃的光照条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~5.0×108cfu/mL液体发酵液。
本实施方式中放线菌菌株的培养过程如下:在28℃的条件下将放线菌在高氏培养基上作一级斜面培养7天后,将经过一级斜面培养的放线菌接种到三角瓶中,然后在28℃的条件下作二级液体静止培养5天,然后将经过二级液体静止培养的放线菌接种到发酵罐中,使放线菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的10%,然后在28℃的条件下作三级培养后得到菌数为1.0×108~2.5×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中丝状真菌菌株的培养过程如下:在30℃的条件下将丝状真菌在麦芽汁培养基上作一级斜面培养72h后,将经过一级斜面培养的丝状真菌接种到三角瓶中,在30℃的条件下作二级液体振荡培养12h,然后将经过二级液体振荡培养的丝状真菌接种到发酵罐中,使丝状真菌的接种量为发酵罐内发酵液体积的5%,在30℃的条件下作三级培养得到菌数为1.0×108~9.0×108cfu/mL的液体发酵液。
本实施方式中微生物菌剂的制备方法如下:一、将乳酸菌发酵液、酵母菌发酵液、光合细菌发酵液、放线菌发酵液和丝状真菌发酵液离心后得到的菌泥分别与保护剂混合,然后将菌泥与保护剂的混合物在真空度为1Pa、温度为-50~-80℃的条件下干燥8~12h,分别得到冻干后的菌体;二、将乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌按照乳酸菌与酵母菌的菌数比为2∶1、酵母菌与光合细菌的菌数比为1∶2、光合细菌与放线菌的菌数比为2∶1、放线菌与丝状真菌的菌数比为1∶4的比例混合,得到固体微生物菌剂,其中步骤一中保护剂的质量与菌液的体积比为2g∶100ml,步骤一中的保护剂为甘油或脱脂乳粉。
取1kg固体微生物菌剂与10L水混合,然后在室温下以200mL/平方米的接种量向有机垫料,有机垫料在常温下即可发酵。
具体实施方式十:本实施方式与具体实施方式八和九不同的是乳酸菌三级培养基按20g葡萄糖、10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母膏、5g柠檬酸钠、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、0.58g MgSO4·7H2O、0.25gMnSO4·4H2O、80mL吐温、0.5%山梨酸钾、20g琼脂和1000mL的水的比例制备,并用醋酸调节培养基pH值为6.0~6.5。其它与具体实施方式八和九相同。
具体实施方式十一:本实施方式与具体实施方式八和九不同的是酵母菌三级培养基按1000mL的6°Bx麦芽汁和20g琼脂的比例制备,并用盐酸调节培养基pH值为6.0。其它与具体实施方式八和九相同。
具体实施方式十二:本实施方式与具体实施方式八和九不同的是光合细菌三级培养基按10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钠、20g琼脂和1000mL的比例制备,并用1mol/L的NaOH溶液调节培养基的pH值为7.4。其它与具体实施方式八和九相同。
具体实施方式十三:本实施方式与具体实施方式八和九不同的是放线菌三级培养基按1g葡萄糖、10g蛋白胨、5g氯化钠、20g琼脂和1000mL水的比例制备。其它与具体实施方式八和九相同。

Claims (7)

1、微生物菌剂,其特征在于微生物菌剂主要由乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌制成;微生物菌剂中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
2、如权利要求1所述的微生物菌剂的制备方法,其特征在于微生物菌剂的制备方法如下:将纯化培养的乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合,其中乳酸菌与酵母菌的菌数比为16~22∶8~13,酵母菌与光合细菌的菌数比为8~13∶17~24,光合细菌与放线菌的菌数比为17~24∶7~12,放线菌与丝状真菌的菌数比为7~12∶38~42。
3、根据权利要求2所述的微生物菌剂的制备方法,其特征在于乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌都分别经过一级斜面培养、二级液体种子培养和三级液体发酵培养。
4、根据权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法,其特征在于经过三级液体发酵培养后乳酸菌培养液中乳酸菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,酵母菌培养液中酵母菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,光合细菌培养液中光合细菌的菌数为1.0×108~5.0×108cfu/ml,放线菌培养液中放线菌的菌数为1.0×108~2.5×108cfu/ml,丝状真菌培养液中丝状真菌的菌数为1.0×108~9.0×108cfu/ml。
5、根据权利要求2所述的微生物菌剂的制备方法,其特征在于乳酸菌、酵母菌、光合细菌、放线菌和丝状真菌混合后,加入混合菌液总体积2%的保护剂,保护剂为脱脂乳粉或甘油,在真空度为1Pa、温度为-50~-80℃的条件下干燥8~12h。
6、权利要求1所述微生物菌剂的用途,其特征在于微生物菌剂作为有机垫料发酵剂。
7、权利要求1所述微生物菌剂的用途,其特征在于微生物菌剂用于生态法养猪。
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