CN105331564A - 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法 - Google Patents

固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105331564A
CN105331564A CN201510922171.4A CN201510922171A CN105331564A CN 105331564 A CN105331564 A CN 105331564A CN 201510922171 A CN201510922171 A CN 201510922171A CN 105331564 A CN105331564 A CN 105331564A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial agent
sweet sorghum
straw
temperature
fermentation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510922171.4A
Other languages
English (en)
Inventor
王治业
周剑平
杜军国
季彬
祝英
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Biology of Gansu Academy of Sciences
Original Assignee
Institute of Biology of Gansu Academy of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Biology of Gansu Academy of Sciences filed Critical Institute of Biology of Gansu Academy of Sciences
Priority to CN201510922171.4A priority Critical patent/CN105331564A/zh
Publication of CN105331564A publication Critical patent/CN105331564A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

本发明公开了一种固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法，该固定化复合菌剂由嗜酸乳杆菌<i>(Lactobacillus？acidophilus)</i>？GSICC？31221和产朊假丝酵母(<i>Candida？utilis</i>)GSICC？51902复配而成。中新鲜甜高粱茎秆中接入固定化混合菌剂，室温覆膜堆放发酵20d后即为成熟的发酵饲料。该方法利用秸秆粉高吸附和缓释放特性，将其与复合微生物混合菌剂相互耦合、吸附形成固定化菌剂从而用于秸秆直接发酵生产秸秆饲料，可使甜高粱秸秆的发酵在20d内完成，秸秆饲料中的粗蛋白含量提高了62%，与市售微生物菌剂相比发酵时间缩短了50%。具有循环利用、环保、高效等特点，并且对环境不造成任何破坏。

Description

固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法
技术领域
本发明属于生物领域，具体涉及一种固定化复合菌剂及用其制作饲料的方法。
背景技术
近年来，随着我国农业经济连续多年的高速发展，农区秸秆资源弃置浪费与草食家畜饲料短缺的结构矛盾日益突出，制约着我国经济社会的可持续发展，而秸秆饲料化是解决这一问题的有效途径。我国的秸秆饲料化技术研究始于上世纪五六十年代，虽然取得了大量成果，但截至目前国内依旧停留在应用推广阶段，且推广速度缓慢。究其原因，一是秸秆饲料化用菌剂的核心技术：微生物菌种的选育及菌剂的复配工艺，研发成本大，致使菌剂售价过高，制约了其产业化推广。二是现有菌剂产品的地域适应性不强。占我国养殖业多数的西北地区，冬季气候高寒，秸秆饲料化须用专有的青贮窑才能保证菌剂发酵的正常启动和维持，基于投入和产出效益分析，小微养殖户和散养农户尚无力于此。三是现有的秸秆发酵菌剂对作用物料的适用性不广。
甜高粱茎秆因其含糖量高，使用现有的菌剂一方面成熟饲料酸度过低，提高饲口性的同时会使牲畜酸中毒，另一方面是产酸在抑制杂菌的同时也抑制了益生微生物生长，蛋白增量有限。因此研究开发一种适宜于甜高粱秸秆饲料化用菌剂便显得尤为重要。
目前，我国专属于甜高粱茎秆的饲料化用菌剂还未见报道。已商用化的菌剂其研发思路多是基于能快速增酸以保证营养成分不降低为目的而研制的，其作用底物多为含糖量低的麦秸、玉米秸、苜蓿等，研发过程是通过“单菌种试验+组合菌种发酵+验证”实验的方式来实现的，这种方法工作量大，还不能完全反映成熟饲料所需的微生物构成。
由于甜高粱茎秆富含五碳糖、六糖糖，而纤维素酶类等均为诱导酶，故现有李氏木霉和黑曲霉菌产酶菌剂作用于甜高粱茎秆降纤维效果有限。将现有乳链球菌作用于含糖量高的甜高粱茎秆时会迅速降低饲料pH值，致使产酶菌来不及作用代谢已被抑制。
传统的菌剂研发和生产过程耗时耗力，在菌剂的配制过程中也因重复的接种、扩培操作使得产品成本昂贵，这制约了其推广应用。
现有发酵秸秆制备饲料的方法采用固体发酵的方式，操作工序繁杂，成本高昂，而且其降解甜高粱秸秆纤维效果也不显现。
发明内容
本发明的目的是提供一种固定化复合菌剂，以解决目前饲料化过程中发酵菌群不易控制的问题。
本发明另一个目的是提供一种用固定化复合菌剂直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法。
本发明技术方案如下：一种固定化复合菌剂，它由嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)GSICC31221和产朊假丝酵母(Candidautilis)GSICC51902复配而成，这两株均由甘肃省工业微生物菌种保藏中心购得。嗜酸乳杆菌发酵终了时的pH值为4.5，菌液中的菌数达5.0×1011个/mL。
优选的，上述的固定化复合菌剂，复配过程如下：以嗜酸乳杆菌作为出发菌，经扩培制成乳酸菌悬液与聚乙烯醇凝胶以2:8的体积比混合，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻共固定化，解冻后切成块状，以10-20%的比例接入灭过菌的甜高粱茎秆汁液中反复培养，待菌群结构趋于稳定后得固定化乳酸菌悬液，与产朊假丝酵母菌液复配后即得液体菌剂，固定化乳酸菌悬液的体积含量为50-70%，产朊假丝酵母菌液的体积含量为30-50%。
优选的，将嗜酸乳杆菌制成乳酸菌悬液的步骤如下，
A、乳酸菌株的选育：
a．MRS培养基的制备：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸膏5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，三水醋酸钠晶体3g，葡萄糖20g，吐温80为1ml，七水硫酸镁0.25g，四水硫酸锰0.05g，碳酸钙20g，琼脂16-18g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后，倒入灭过菌的平皿中凝固待用；
b．筛选乳酸菌株：从自然青贮的甜高粱秸秆饲料中取样5g，置于灭过菌的25mL生理盐水中静置30min，经梯度稀释后涂布于上述制备的MRS培养基平板上，36℃温度下厌氧培养72h，选取乳酸菌的菌落，接种于斜面培养基中保存备用，斜面培养基配方为：脱脂奶粉200g，琼脂16-18g，水1000mL；
c．取新鲜榨取的甜高粱汁液，加入质量含量为0.2%的硫酸铵，装瓶20mL/100mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后冷却，接入前述筛选的乳酸菌株，36℃温度下厌氧静置培养，每隔2h取样测pH值和菌数，得嗜酸乳杆菌株发酵菌株；
d.将嗜酸乳杆菌株发酵菌株接入发酵培养基中厌氧条件、36℃温度下静置培养24h，即为乳酸菌悬液，发酵培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖10g，酵母膏5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g，七水硫酸镁0.58g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min。
优选的，上述产朊假丝酵母菌液的制备步骤如下：将产朊假丝酵母经试管培养基培养，培养温度为25-30℃，培养时间为48h；再经摇瓶培养基培养，温度为25-28℃，摇床转速为150-200rpm，培养时间为12-24h；再由种子罐在通气搅拌条件下，25-28℃温度下培养12-24h后，按10％接种量接入发酵罐中，通气，搅拌培养12-24小时，得产朊假丝酵母菌液；其中试管培养基配方：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，琼脂16-18g，水1000mL，摇瓶培养基配方为：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g,水1000mL，种子罐和发酵罐中培养基配方：蛋白胨8g，牛肉膏5g，酵母粉3g，葡萄糖10g，七水硫酸镁0.5g，水1000mL。
用上述固定化复合菌剂直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法，包括如下步骤，
1）固定化复合菌剂的制备：将去汁后的甜高粱秸秆，经pH值为4.5-9.5的溶液处理30min-2h，然后中和干燥，粉碎后合以6-10：2的比例和麸皮混合，加入相对于干料总量0.2%的硫酸铵，经饱和蒸汽蒸煮处理2h，冷却至25℃备用；然后分次接入干料总量15%的液体菌剂，搅拌均匀后覆膜堆置24h，该基质与纤维素酶粉以15：1-2的质量比例混合；即为固定化复合菌剂；
2）秸秆饲料制备：将新鲜甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，以0.2%的比例接入固定化混合菌剂，水分控制在50%-60%。室温覆膜堆放发酵20d后即为成熟的发酵饲料。
本发明一方面针对甜高粱茎秆的大量废弃，另一方面是畜牧业对蛋白饲料的巨量缺口，以降低菌剂生产成本、优化饲料生产工艺、缩短饲料发酵时间为出发点，以共固定化混合菌剂生产技术为核心，充分利用甜高粱茎秆中的优质糖源和纤维素源，开发出一种适合于我国西北地区甜高粱秸秆饲料化的微生物菌剂产品，制成的菌剂较好的保留了乳酸菌和产朊假丝酵母的活性，该菌剂生产成本较同类相关产品低20%以上，发酵时间缩短50%。将其应用于甜高粱秸秆饲料化生产中，作用于物料时具有降酸适宜、菌数高产、发酵时间短、蛋白增量明显等优点，此法可最大限度降低菌剂的研发和生产成本。增蛋白效果明显，实现了废弃秸秆资源的高效利用，有效的提升了甜高粱作为秸秆饲料的营养价值。该饲料富含单细胞蛋白、植物蛋白，所含有的纤维素类物质经纤维素酶部分水解，更易被牛羊等反刍动物消化吸收，发酵过程中生成的各类代谢产物如氨基酸、维生素、有机酸等能够提高甜高粱秸杆的营养价值，改善饲料的适口性，增加动物的抗病能力。
本发明特点如下：
1、适宜甜高粱茎秆发酵的乳酸菌株的选育是秸秆饲料化菌剂制备的关键。目前我国的菌剂生产企业多通过菌库调用、分离筛选等方式，所选用的乳酸菌多以能在短时间内快速增酸为目的，所生产菌剂适宜于含糖量低的玉米、小麦等秸秆饲料化生产。甜高粱茎秆因其含糖量较高，用现有菌剂生产的饲料，往往因酸度过高而在饲喂时须与干黄秸秆混合使用以免牛羊等酸中毒。本发明通过从甜高粱秸秆分离筛选出一株降酸适宜(pH值为4.5)、菌数高产（5.0×1011）的乳酸菌株，将其作用于甜高粱秸秆时，利用产朊假丝酵母作用剩余的糖分即可启动无氧发酵，产酸适宜、菌数高产，牛羊进食后可维持肠道菌群结构平衡。
2、本发明中液体菌剂复配方法，利用聚乙烯醇凝胶共固定化细胞在其重复利用的过程中，适宜底物发酵的菌群结构会趋于稳定的特性，将经高密度培养的嗜酸乳杆菌作为出发菌，等体积比混合后与聚乙烯醇凝胶共固定化，解冻后在甜高粱茎秆汁液中反复培养直至菌群结构稳定，经复配为菌悬液省去了菌种的重复扩配等步骤，而且因其具有较好的发酵稳定性和可重复性，节省了大量的培养时间，使得研发和生产效率大为提高。将其接入甜高粱秸秆汁液中恒化连续培养，在培养过程中，适宜甜高粱秸秆发酵的菌群结构会趋于稳定，分析其结构构成，可在短时间内确定甜高粱秸秆发酵的菌群配比，可降低菌剂研发和生产成本。
3、本发明所采用的产朊假丝酵母(Candidautilis)(GSICC51902，杂食性强，几乎不需要外源营养成分即可在甜高粱茎秆表面定殖，蛋白含量高，能利用秸秆间隙的微量氧气大量增殖，可在乳酸菌发酵产酸前消耗掉大部分的游离糖分，并将其转化为牛羊皆可食用的单细胞蛋白。
4、乳酸菌是厌氧微生物，在发酵过程中随着氧气的耗尽迅速占据生长优势，同时产酸抑制其他菌群，这势必导致成熟饲料中乳酸含量有余而蛋白增量不足。利用秸秆粉高吸附、缓释放特性，将酵母菌和乳酸菌比例复配后吸附到甜高粱秸秆粉和麸皮的混合基质上，饲料化过程中，利用秸秆间隙微量氧气损耗和基质对活性细胞的缓释特性，可使得酵母菌和乳酸菌分期占据生长优势，基于受控发酵，成熟的秸秆饲料酸香适宜，蛋白增量明显。
5、西北地区冬季气候高寒，秸秆饲料化过程须有专有的青贮窑才能保证菌剂正常发酵所需的温度，而占该区域养殖业多数的小微养殖户和散养农户，基于投入成本和产出效益考虑，不会选择用饲料化的方式来提高秸秆利用率。通过优化菌剂菌群结构，以室温覆膜堆放发酵的方式，充分利用天气变冷前的自然温度发酵，可明显缩短饲料成熟时间，有效的提升秸秆饲料化利用率。
6、地域适应广，可操作性强。本菌剂采用新的菌群结构配比，利用天气变冷前的自然温度覆膜堆放发酵，且发酵时间短，饲料成熟快，蛋白增量明显。
7、本发明专属于甜高粱秸秆发酵，具有循环利用、环保、高效等特点，并且对环境不造成任何破坏，可适用于大面积的甜高粱直接发酵生产秸秆饲料。
具体实施方式
下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例中使用纤维素酶粉为市售产品，其酶活力为200000U/g。聚乙烯醇凝胶为现有产品。
一、下述实施例中嗜酸乳杆菌的乳酸菌悬液制备步骤如下，
A、乳酸菌株的选育：
a．MRS培养基的制备：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸膏（干粉）5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，三水醋酸钠晶体3g，葡萄糖20g，吐温80为1ml，七水硫酸镁0.25g，四水硫酸锰0.05g，碳酸钙20g，琼脂16-18g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后，倒入灭过菌的平皿中凝固待用；
b．筛选乳酸菌株：从自然青贮的甜高粱秸秆饲料中取样5g，置于灭过菌的25mL生理盐水中静置30min，经梯度稀释后涂布于上述制备的MRS培养基平板上，36℃温度下厌氧培养72h，选取乳酸菌的菌落，接种于斜面培养基中保存备用，斜面培养基配方为：脱脂奶粉200g，琼脂16-18g，水1000mL；
c．取新鲜榨取的甜高粱汁液，加入质量含量为0.2%的硫酸铵，装瓶20mL/100mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后冷却，接入前述筛选的乳酸菌株，36℃温度下厌氧静置培养，每隔2h取样测pH值和菌数，得嗜酸乳杆菌株发酵菌株；
d.将嗜酸乳杆菌株发酵菌株接入发酵培养基中厌氧条件、36℃温度下静置培养24h，即为乳酸菌悬液，发酵培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖10g，酵母膏5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g，七水硫酸镁0.58g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min。
二、下述实施例中产朊假丝酵母菌液的制备步骤如下：将产朊假丝酵母经试管培养基培养，培养温度为25-30℃，培养时间为48h；再经摇瓶培养基培养，温度为25-28℃，摇床转速为150-200rpm，培养时间为12-24h；再由种子罐在通气搅拌条件下，25-28℃温度下培养12-24h后，按10％接种量接入发酵罐中，通气，搅拌培养12-24小时，得产朊假丝酵母菌液；其中试管培养基配方：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，琼脂16-18g，水1000mL，摇瓶培养基配方为：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g,水1000mL，种子罐和发酵罐中培养基配方：蛋白胨8g，牛肉膏5g，酵母粉3g，葡萄糖10g，七水硫酸镁0.5g，水1000mL。
实施例1：
液体菌剂的复配过程如下，以嗜酸乳杆菌作为出发菌，经扩培制成乳酸菌悬液与聚乙烯醇凝胶以2:8的体积比混合，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻共固定化，解冻后切成块状，以10-20%的比例接入灭过菌的甜高粱茎秆汁液中反复培养，待菌群结构趋于稳定后得固定化乳酸菌悬液，与产朊假丝酵母菌液复配后即得液体菌剂，嗜酸乳杆菌固定化乳酸菌悬液的体积含量为66%，产朊假丝酵母菌液的体积含量为34%。嗜酸乳杆菌菌数为5.0×1011个/mL，产朊假丝酵母菌数为4.8×108个/mL。
1）固定化复合菌剂的制备：将去汁后甜高粱秸秆经pH=4.5的酸溶液处理30min后中和干燥，粉碎过15目筛，然后以3:1的比例与麸皮混匀，加入相对于总量0.2%的硫酸铵，经饱和蒸汽蒸煮处理2h，冷却至25℃备用；然后分次接入干料总量15%的液体菌剂，搅拌均匀后覆膜堆置24h，以15：1的比例与市售纤维素酶粉混合后即为固定化复合菌剂，水分控制在50%-60%。此时基质活细胞数含量等见表1所示。
2）秸秆饲料制备：将新鲜收获的甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，以0.2%的比例接入固定化复合菌剂，室温覆膜堆放发酵20d，成熟饲料当中的乳酸菌数及粗蛋白增量、粗纤维下降量等见附表1，其粗蛋白含量为7.9%，粗纤维下降量为37.32%。
实施例2：重复实施例1，有以下不同点：液体菌剂以嗜酸乳杆菌固定化乳酸菌悬液：产朊假丝酵母菌液=60%：40%配比组成，将去汁后甜高粱秸秆经pH=5.5的稀酸溶液处理45min后中和干燥，粉碎后与麸皮以7:2的比例混匀，接入菌剂后覆膜堆置后，以15:2的比例与市售纤维素酶粉混合，发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
实施例3：重复实施例1，有以下不同点：液体菌剂以嗜酸乳杆菌固定化乳酸菌悬液：产朊假丝酵母菌液=70%：30%配比组成，将去汁后甜高粱秸秆经pH=8.5的稀碱液处理理60min后中和干燥，粉碎后与麸皮以4:1的比例混匀，接入菌剂后覆膜堆置后，以15:1的比例与市售纤维素酶粉混合，发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
实施例4：重复实施例1，有以下不同点：液体菌剂以嗜酸乳杆菌固定化乳酸菌悬液：产朊假丝酵母菌液=50%：50%配比组成，将去汁后甜高粱秸秆经pH=9.5的稀碱液处理120min中和干燥，粉碎后与麸皮以5:1的比例混匀，接入菌剂后覆膜堆置后，以15:2的比例与市售纤维素酶粉混合，，发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
对比例1：将新鲜收获的甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，室温覆膜堆放发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
对比例2：将新鲜收获的甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，以0.2%的比例接入活力九九生酵剂（宜春强微生物科技），室温覆膜堆放发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
对比例3：将新鲜收获的甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，以0.2%的比例接入百奥美青贮体（美国科·汉森公司），室温覆膜堆放发酵20d时与实施例1同等条件下测定相关参数，结果见附表1。
通过本发明实施例与对比例的比较结果表明：一、固定化复合菌剂作用于甜高粱秸秆时其降纤维、增蛋白效果明显优于对照菌剂，发酵成熟饲料含有的乳酸菌数约为市售菌剂制备饲料的4.8-11倍；二、由固定化复合菌剂发酵制备甜高粱秸秆饲料，成熟饲料平均pH值为4.5，较空白对照组制备的饲料pH为低，却又高于市售菌剂制备的成熟饲料pH值。

Claims (5)

1.一种固定化复合菌剂，其特征在于：它由嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)GSICC31221和产朊假丝酵母(Candidautilis)(GSICC51902复配而成，嗜酸乳杆菌发酵终了时的pH值为4.5，菌液中的菌数达5.0×1011个/mL。
2.根据权利要求1所述的固定化复合菌剂，其特征在于：复配过程如下,
以嗜酸乳杆菌作为出发菌，经扩培制成乳酸菌悬液与聚乙烯醇凝胶以2:8的体积比混合，搅拌均匀后置于冰箱中冷冻共固定化，解冻后切成块状，以10-20%的比例接入灭过菌的甜高粱茎秆汁液中反复培养，待菌群结构趋于稳定后得固定化乳酸菌悬液，与产朊假丝酵母菌液复配后即得液体菌剂，固定化乳酸菌悬液的体积含量为50-70%，产朊假丝酵母菌液的体积含量为30-50%。
3.根据权利要求2所述的固定化复合菌剂，其特征在于：将嗜酸乳杆菌制成乳酸菌悬液的步骤如下，
A、乳酸菌株的选育：
a．MRS培养基的制备：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸膏5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，三水醋酸钠晶体3g，葡萄糖20g，吐温80为1ml，七水硫酸镁0.25g，四水硫酸锰0.05g，碳酸钙20g，琼脂16-18g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后，倒入灭过菌的平皿中凝固待用；
b．筛选乳酸菌株：从自然青贮的甜高粱秸秆饲料中取样5g，置于灭过菌的25mL生理盐水中静置30min，经梯度稀释后涂布于上述制备的MRS培养基平板上，36℃温度下厌氧培养72h，选取乳酸菌的菌落，接种于斜面培养基中保存备用，斜面培养基配方为：脱脂奶粉200g，琼脂16-18g，水1000mL；
c．取新鲜榨取的甜高粱汁液，加入质量含量为0.2%的硫酸铵，装瓶20mL/100mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min后冷却，接入前述筛选的乳酸菌株，36℃温度下厌氧静置培养，每隔2h取样测pH值和菌数，得嗜酸乳杆菌株发酵菌株；
d.将嗜酸乳杆菌株发酵菌株接入发酵培养基中厌氧条件、36℃温度下静置培养24h，即为乳酸菌悬液，发酵培养基配方为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖10g，酵母膏5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g，七水硫酸镁0.58g，蒸馏水1000mL，经121℃温度下，高压蒸汽灭菌20min。
4.根据权利要求2所述的固定化复合菌剂，其特征在于：产朊假丝酵母菌液的制备步骤如下：将产朊假丝酵母经试管培养基培养，培养温度为25-30℃，培养时间为48h；再经摇瓶培养基培养，温度为25-28℃，摇床转速为150-200rpm，培养时间为12-24h；再由种子罐在通气搅拌条件下，25-28℃温度下培养12-24h后，按10％接种量接入发酵罐中，通气，搅拌培养12-24小时，得产朊假丝酵母菌液；其中试管培养基配方：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，琼脂16-18g，水1000mL，摇瓶培养基配方为：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g,水1000mL，种子罐和发酵罐中培养基配方：蛋白胨8g，牛肉膏5g，酵母粉3g，葡萄糖10g，七水硫酸镁0.5g，水1000mL。
5.一种用权利要求2所述固定化复合菌剂直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法，其特征在于：包括如下步骤，
1）固定化复合菌剂的制备：将去汁后的甜高粱秸秆，经pH值为4.5-9.5的溶液处理30min-2h，然后中和干燥，粉碎后合以6-10：2的比例和麸皮混合，加入相对于干料总量0.2%的硫酸铵，经饱和蒸汽蒸煮处理2h，冷却至25℃备用；然后分次接入干料总量15%的液体菌剂，搅拌均匀后覆膜堆置24h，该基质与纤维素酶粉以15：1-2的质量比例混合；即为固定化复合菌剂；
2）秸秆饲料制备：将新鲜甜高粱茎秆，去穗后细碎至1-3cm长，以0.2%的比例接入固定化混合菌剂，室温覆膜堆放发酵20d后即为成熟的发酵饲料。
CN201510922171.4A 2015-12-14 2015-12-14 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法 Pending CN105331564A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510922171.4A CN105331564A (zh) 2015-12-14 2015-12-14 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510922171.4A CN105331564A (zh) 2015-12-14 2015-12-14 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105331564A true CN105331564A (zh) 2016-02-17

Family

ID=55282332

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510922171.4A Pending CN105331564A (zh) 2015-12-14 2015-12-14 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105331564A (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107058194A (zh) * 2017-06-15 2017-08-18 内蒙古农业大学 一种青贮用包埋菌剂及其生产方法
CN107384810A (zh) * 2017-09-07 2017-11-24 芜湖皖江知识产权运营中心有限公司 一种秸秆发酵用微生物组合菌剂及其制备方法
CN108094678A (zh) * 2017-12-08 2018-06-01 重庆昇顺科技有限公司 一种麸皮蛋白固化发酵饲料制备方法
CN108813152A (zh) * 2018-06-29 2018-11-16 内蒙古农业大学 一种柠条基固态发酵饲料及其制备方法
CN108856283A (zh) * 2018-06-07 2018-11-23 广西壮族自治区环境保护科学研究院 一种含重金属废渣堆存场地的微生物修复方法
CN109258930A (zh) * 2018-11-01 2019-01-25 青岛农业大学 一种豆粕的一步发酵法、该方法制备的发酵豆粕及应用
WO2022012101A1 (zh) * 2020-07-15 2022-01-20 同济大学 一种厌氧固定化菌剂、制备方法及其应用
CN114766599A (zh) * 2022-05-18 2022-07-22 甘肃省农业科学院经济作物与啤酒原料研究所（甘肃省农业科学院中药材研究所） 废弃秸秆资源化的方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1648237A (zh) * 2004-12-15 2005-08-03 江南大学 一种高活性粉末复合青贮接种剂及其载体吸附的制备方法
CN101946853A (zh) * 2010-08-25 2011-01-19 天津农学院 一种利用复合微生物发酵秸秆生产青储饲料的方法
CN102048025A (zh) * 2010-11-10 2011-05-11 天津科建科技发展有限公司 木聚糖酶联合多菌种的复合发酵剂及发酵秸秆饲料的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1648237A (zh) * 2004-12-15 2005-08-03 江南大学 一种高活性粉末复合青贮接种剂及其载体吸附的制备方法
CN101946853A (zh) * 2010-08-25 2011-01-19 天津农学院 一种利用复合微生物发酵秸秆生产青储饲料的方法
CN102048025A (zh) * 2010-11-10 2011-05-11 天津科建科技发展有限公司 木聚糖酶联合多菌种的复合发酵剂及发酵秸秆饲料的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李振等: "混菌发酵菌糠生产饲料的初步研究", 《添加剂世界》 *
王治业: "高产蛋白菌株重离子诱变选育及发酵条件的优化和应用研究", 《中国优秀硕士论文全文数据库》 *
魏甲乾等: "共固定化细胞在生物饲料发酵生产中的应用", 《饲料工业》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107058194A (zh) * 2017-06-15 2017-08-18 内蒙古农业大学 一种青贮用包埋菌剂及其生产方法
CN107058194B (zh) * 2017-06-15 2019-12-06 内蒙古农业大学 一种青贮用包埋菌剂及其生产方法
CN107384810A (zh) * 2017-09-07 2017-11-24 芜湖皖江知识产权运营中心有限公司 一种秸秆发酵用微生物组合菌剂及其制备方法
CN108094678A (zh) * 2017-12-08 2018-06-01 重庆昇顺科技有限公司 一种麸皮蛋白固化发酵饲料制备方法
CN108856283A (zh) * 2018-06-07 2018-11-23 广西壮族自治区环境保护科学研究院 一种含重金属废渣堆存场地的微生物修复方法
CN108813152A (zh) * 2018-06-29 2018-11-16 内蒙古农业大学 一种柠条基固态发酵饲料及其制备方法
CN109258930A (zh) * 2018-11-01 2019-01-25 青岛农业大学 一种豆粕的一步发酵法、该方法制备的发酵豆粕及应用
WO2022012101A1 (zh) * 2020-07-15 2022-01-20 同济大学 一种厌氧固定化菌剂、制备方法及其应用
CN114766599A (zh) * 2022-05-18 2022-07-22 甘肃省农业科学院经济作物与啤酒原料研究所（甘肃省农业科学院中药材研究所） 废弃秸秆资源化的方法及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105331564A (zh) 固定化复合菌剂及用其直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法
CN1313017C (zh) 植物秸秆饲料发酵菌剂及其制备方法
CN108208335B (zh) 一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺
CN103478413A (zh) 一种混菌固态发酵银杏叶渣生产蛋白饲料的方法
CN102250807B (zh) 用于芒草类青贮饲料的微生物菌剂及其制备方法和应用
CN102613388A (zh) 一种将微生物和酶制剂混合发酵食用菌渣成为饲料技术
CN105002116A (zh) 一种微生物秸秆饲料菌剂及其制备方法
CN109527200A (zh) 一种杏鲍菇菌糠生物发酵饲料及制备方法
CN104012787A (zh) 一种利用微生物有益活菌制备玉米秸秆粗饲料的方法
CN103504123A (zh) 一种具复合酶功能的发酵豆粕及其制备方法
CN107259101A (zh) 一种油茶籽粕发酵制作饲料的方法
CN105961850B (zh) 一种利用风干甘蔗渣制备饲料的发酵促进剂
CN102406068B (zh) 一种能够保护猪肠道健康的微生物发酵饲料的制备方法
CN102488087A (zh) 一种茶籽饼粕的生物脱毒方法
CN104855674A (zh) 组合菌种联合转化的微生物发酵全价饲料生产方法
CN101280272A (zh) 微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途
CN103652328B (zh) 混菌种固态发酵米渣和木薯渣生产优质高蛋白饲料的方法
CN103315143B (zh) 一种新型低温干燥发酵豆粕的制备方法
CN110353087A (zh) 油菜秸秆发酵饲料的制备方法及发酵饲料
CN103074228A (zh) 用于处理畜禽废物的复合发酵菌剂及其制备方法和应用
CN102643747A (zh) 一种处理秸秆的益生菌混合制剂制备方法
CN103642695B (zh) 一株米曲霉及其在微生物发酵制备饲料添加剂中的应用
CN106387505A (zh) 一种利用牛粪发酵鱼饲料配方及其制备方法
CN103875935A (zh) 一种含有益生菌的乳仔猪专用复合酶及其制备方法
CN103740675A (zh) 一种纤维素酶的生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination