CN113786418A - 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法 - Google Patents

一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113786418A
CN113786418A CN202111097933.3A CN202111097933A CN113786418A CN 113786418 A CN113786418 A CN 113786418A CN 202111097933 A CN202111097933 A CN 202111097933A CN 113786418 A CN113786418 A CN 113786418A
Authority
CN
China
Prior art keywords
deep sea
bacteria
culture medium
culturing
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111097933.3A
Other languages
English (en)
Inventor
程翠林
徐宁
王振宇
辛超
鞠婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Harbin Institute of Technology
Original Assignee
Harbin Institute of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Harbin Institute of Technology filed Critical Harbin Institute of Technology
Priority to CN202111097933.3A priority Critical patent/CN113786418A/zh
Publication of CN113786418A publication Critical patent/CN113786418A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，属于抑菌液制备技术领域，所述方法为：(1)将深海菌用LB培养基于28℃进行活化；(2)将步骤(1)培养获得的活性菌细胞进行生物驯化与诱导；(3)将步骤(2)培养取得的活化过的活性菌在LB培养基中传代；(4)在28℃温度和pH＝7.5的培养条件下，培养72小时得种子发酵液；(5)在28℃温度下，用ISP1培养基平板发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时；(6)合并提取液，37℃减压旋蒸，加水过滤制得深海菌代谢物抑菌液。本发明利用深海菌代谢产生能抑杀金黄色葡萄球菌等治病菌的抑菌液，以及高效环保的生物机制，从而获得安全有效的有益于人体健康的抑菌液。

Description

一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法
技术领域
本发明属于抑菌液制备技术领域，具体涉及一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法。
背景技术
放线菌的代谢产物种类丰富，骨架结构新颖多样，生物学活性显著，是发现药物先导化合物的重要来源。从自然资源中发掘新型的潜在药用化合物，推动了药物的发现和发展。然而，不恰当和不合理地使用抗生素已导致对抗菌素耐药性的发展与增加，出现全球性威胁。近年来世界各地出现多种“超级细菌”，它们对大多数抗生素都产生耐药性，给临床上病原菌感染等疾病的治疗带来巨大的挑战，因此，需要寻找新的放线菌资源或者从已知放线菌中分离新型化合物，是解决日益增长的耐药性问题的有效方法。通常，土壤是获得放线菌的主要资源。然而，由于对有限的土壤资源的过度开发，发现新化合物的时间变得更长且更加困难。幸运的是，海洋放线菌作为新的次生代谢产物的来源仍处于起步阶段。因此，从海洋放线菌中分离出新的次生代谢物具有巨大的潜力。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有细菌耐药性变强、土壤中放线菌相关的化合物开发困难等问题，提供一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将深海菌在LB培养基中进行活化；
(2)将步骤(1)培养获得的活性菌细胞进行生物驯化与诱导；
(3)将步骤(2)培养取得的活性菌细胞在弱碱性环境下进行培养；
(4)在28℃温度和pH＝7.5的物理条件，在LB培养基培养72h制得种子发酵液；
(5)在28℃温度下，用ISP1培养基平板发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时；
(6)合并提取液，37℃减压旋蒸，加水过滤制得深海菌代谢物抑菌液。
本发明相比于现有技术的有益效果是：解决当前各种超级细菌对于现有抗生素的耐药性。运用深海菌代谢产生的代谢产物的生物特性，从而获得安全高效的抑菌剂，达到抑制致病菌生长(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等有害菌)的目的。本发明利用深海菌代谢产物具有能抑杀有害菌的特性，以及高效环保的生物机制，从而获得安全有效的有益于人体健康的抑菌液。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
具体实施方式一：本实施方式记载的是一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将深海菌在LB培养基中进行活化；
(2)将步骤(1)培养获得的活性菌细胞进行生物驯化与诱导；
(3)将步骤(2)培养取得的活性菌细胞在弱碱性环境下进行培养；
(4)在28℃温度和pH＝7.5的物理条件，在LB培养基培养72h制得种子发酵液；
(5)在28℃温度下，用ISP1培养基平板发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时；
(6)合并提取液，37℃减压旋蒸，加水过滤制得深海菌代谢物抑菌液。
具体实施方式二：具体实施方式一所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(1)具体为：将深海菌种入已放入LB培养基的培养器皿，28℃，进行单株培养72小时。
具体实施方式三：具体实施方式一或二所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)培养获得的活性菌细胞在弱碱环境下进行训化与诱导，培养中加入的碱是药品级的0.1mol/L的NaOH，调节pH为7.5～9，优选为8。
具体实施方式四：具体实施方式一所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(3)具体为：活性菌细胞在弱碱性环境的培养基培养，接种入器皿在28℃环境下培养7天。更具体地，制得深海菌株培养基，并均滴入NaOH使之具备弱碱性环境，接种入器皿进行72小时在28℃环境下培养，继续发酵至7天。
具体实施方式五：具体实施方式一所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(4)具体为：配制LB培养基放入发酵瓶，控温28℃，将步骤(3)培养得到的活性菌放入发酵瓶，并调节pH至7.5，发酵72小时，开种子瓶取得种子发酵液。
具体实施方式六：具体实施方式一所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(5)具体为：配制ISP1培养基至已灭过菌的平板，将温度调至28℃，放入已经制得的种子发酵液，发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时。
具体实施方式七：具体实施方式一所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，所述步骤(6)具体为：所述抑菌液由以下重量百分比的组分组成：制得的发酵液40％、浓度为1％的NaOH诱导剂、其他为水。
本发明是解决当前各种超级细菌对于现有抗生素的耐药性。运用深海菌代谢产生的代谢产物的生物特性，从而获得安全高效的抑菌剂，达到抑制致病菌生长(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等有害菌)的目的。本发明利用深海菌代谢产物具有能抑杀有害菌的特性，以及高效环保的生物机制，从而获得安全有效的有益于人体健康的抑菌液。
本发明利用有益微生物代谢产生能抑杀有害菌的代谢产物，以及高效环保的生物机制，从而获得安全有效的有益于人体健康的抑菌液。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (7)

1.一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
(1)将深海菌在LB培养基中进行活化；
(2)将步骤(1)培养获得的活性菌细胞进行生物驯化与诱导；
(3)将步骤(2)培养取得的活性菌细胞在弱碱性环境下进行培养；
(4)在28℃温度和pH＝7.5的物理条件，在LB培养基培养72h制得种子发酵液；
(5)在28℃温度下，用ISP1培养基平板发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时；
(6)合并提取液，37℃减压旋蒸，加水过滤制得深海菌代谢物抑菌液。
2.根据权利要求1所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为：将深海菌种入已放入LB培养基的培养器皿，28℃，进行单株培养72小时。
3.根据权利要求1或2所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为：将步骤(1)培养获得的活性菌细胞在弱碱环境下进行训化与诱导，培养中加入的碱是0.1mol/L的NaOH，调节pH为7.5～9。
4.根据权利要求1所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)具体为：活性菌细胞在弱碱性环境的培养基培养，接种入器皿在28℃环境下培养7天。
5.根据权利要求1所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)具体为：配制LB培养基放入发酵瓶，控温28℃，将步骤(3)培养得到的活性菌放入发酵瓶，并调节pH至7.5，发酵72小时，开种子瓶取得种子发酵液。
6.根据权利要求1所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)具体为：配制ISP1培养基至已灭过菌的平板，将温度调至28℃，放入已经制得的种子发酵液，发酵7天，乙酸乙酯浸提3次，每次24小时。
7.根据权利要求1所述的一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)具体为：所述抑菌液由以下重量百分比的组分组成：制得的发酵液40％、浓度为1％的NaOH诱导剂、其他为水。
CN202111097933.3A 2021-09-18 2021-09-18 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法 Pending CN113786418A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111097933.3A CN113786418A (zh) 2021-09-18 2021-09-18 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111097933.3A CN113786418A (zh) 2021-09-18 2021-09-18 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113786418A true CN113786418A (zh) 2021-12-14

Family

ID=79183976

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111097933.3A Pending CN113786418A (zh) 2021-09-18 2021-09-18 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113786418A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101280272A (zh) * 2008-05-23 2008-10-08 孙波 微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途
WO2011051741A1 (en) * 2009-10-29 2011-05-05 Pannonpharma Gyógyszergyártó Kft. Process for producing primycin, primycin component(s), precursors and metabolites thereof via fementation by the use of bacterial species saccharomonospora azurea
CN105168260A (zh) * 2015-08-27 2015-12-23 浙江工业大学 拟无枝酸菌wp1在制备革兰氏菌活性抑制剂中的应用
CN105567769A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 湖北工业大学 一种可发酵产抗菌肽的枯草芽孢杆菌用增效剂及其使用方法
CN107789372A (zh) * 2017-11-30 2018-03-13 合肥海昭生物科技有限公司 一种微生物代谢有机酸抑菌液的制备方法
CN110656131A (zh) * 2019-03-05 2020-01-07 西藏农牧学院 一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101280272A (zh) * 2008-05-23 2008-10-08 孙波 微生物菌剂和微生物菌剂的制备方法及其用途
WO2011051741A1 (en) * 2009-10-29 2011-05-05 Pannonpharma Gyógyszergyártó Kft. Process for producing primycin, primycin component(s), precursors and metabolites thereof via fementation by the use of bacterial species saccharomonospora azurea
CN105168260A (zh) * 2015-08-27 2015-12-23 浙江工业大学 拟无枝酸菌wp1在制备革兰氏菌活性抑制剂中的应用
CN105567769A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 湖北工业大学 一种可发酵产抗菌肽的枯草芽孢杆菌用增效剂及其使用方法
CN107789372A (zh) * 2017-11-30 2018-03-13 合肥海昭生物科技有限公司 一种微生物代谢有机酸抑菌液的制备方法
CN110656131A (zh) * 2019-03-05 2020-01-07 西藏农牧学院 一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙晓磊;闫培生;王凯;王文威;李梦瀛;: "深海细菌及其活性物质防控植物病原真菌的研究进展" *
王文威: "抑制黄曲霉毒素的深海细菌发酵及活性物质特性研究" *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102660461A (zh) 一种缩短烟叶发酵周期的微生物制剂及其应用
CN107828702B (zh) 一种春雷霉素发酵培养基及发酵方法
CN102626516A (zh) 一种水貂绿脓杆菌蜂胶灭活疫苗及制备工艺
CN105779362A (zh) 一种低血清培养猪肺炎支原体培养基及其制备方法和应用
CN105483059A (zh) 一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法
CN108795817A (zh) 一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用方法
CN102634553B (zh) 一种海南霉素的发酵方法
CN107287246A (zh) 海洋真菌提取物、制备方法及应用
CN113786418A (zh) 一种深海菌代谢产物抑菌液的制备方法
CN104388501A (zh) 一种应用生物酶的红霉素制备方法
CN104263689B (zh) 一种用于生产甘油酸的热带醋杆菌的驯化方法
CN103436472B (zh) 一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂
CN109554420A (zh) B型产气荚膜梭菌外毒素及其制备方法、产毒培养基和应用
CN109706083B (zh) 一种经代谢调控后抗菌活性显著增加的杜仲内生真菌
CN109400444A (zh) 抑制植物病源真菌的倍半萜类化合物及其制备方法
CN102870818A (zh) 一种用于水产养殖的消毒剂及其制备方法
CN104404103B (zh) 一种提高马齿苋多糖的方法及该方法制备的发酵液
JP6670007B2 (ja) パエニバシラス属菌の発酵によるα−グルコシダーゼ阻害剤を生産する培養液組成
CN111733202A (zh) 一种泰乐菌素混种发酵方法
CN105176887A (zh) 一种大肠杆菌的培养方法
CN109805032A (zh) 一种抑制细菌性病害的微生物生防剂及其制备方法
CN109182374A (zh) 一种利用发根农杆菌诱导蒲公英产生毛状根的方法
CN103444784A (zh) 一种用于生猪辅助防疫的复合微生态制剂
CN103710398A (zh) 一种增强2-酮基-l-古龙酸发酵菌种活力的方法
CN111328836B (zh) 一种防治葡萄根癌病的芽孢杆菌涂抹剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination