CN102870818A - 一种用于水产养殖的消毒剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于水产养殖的消毒剂及其制备方法，为生物消毒剂，消毒剂中含有蛭弧菌，含量为10⁹-10¹³CFU/mL。制备方法包括以下步骤：A.制备蛭弧菌宿主菌的液体培养基；B.将A步骤制备的培养基放入发酵罐中，并放入蛭弧菌的宿主菌；C.将蛭弧菌种接种于装有步骤B制备的发酵罐中，35℃-37℃通气培养24-48小时，菌落总数检测保证发酵罐中蛭弧菌含量为10⁹-10¹³CFU/mL。本发明利用生物防治的方法，得到一种高效、环保、对水产养殖动物不会产生有害物质残留的消毒剂，制备方法简单，成本较低，适合大规模应用。

Description

一种用于水产养殖的消毒剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于水产养殖的消毒剂，尤其还涉及其制备方法，具体地说，是将生物制剂制备成消毒剂用于水产养殖环境的消毒灭菌。

背景技术

蛭弧菌是寄生于其他细菌并能导致其裂解的一类细菌，它虽然比通常的细菌小，能通过细菌滤器，有类似噬菌体的作用，但它不是病毒，确确实实是一类能″吃掉″细菌的细菌。1962年首次发现于菜豆叶烧病假单胞菌体中，随后从土壤、污水中都分离到了这种细菌。根据其基本特性，命名为Bdellovibrio bacteriovorus。其中，“Bdello”一词来自希腊字，是“水蛭”的意思，“vibrio”意为“弧菌”，而种名“bacteriovorus”是“食细菌”的意思。由于它们具有特殊的捕食生活方式以及有可能充当决定自然界中微生物种群变动的角色，因而引起了许多科学工作者的兴趣。

蛭弧菌分布非常广泛，普遍存在于各种水域以及土壤之中，能寄生和裂解大多数水产动物致病菌，是一类攻击、侵染、裂解宿主菌的寄生菌，有类似噬菌体的作用，蛭弧菌的宿主范围极为广泛，对多种肠道革兰氏阴性菌有噬菌、裂解作用。它作为有效的生物防治病害的生物制剂，受到动物病害防治及环境改善行业人士青睐。

目前，蛭弧菌的工业生产利用主要是固体制剂类，一般是利用冷冻干燥的方法制备，成本较高，且目前很少有针对水产养殖环境的消毒灭菌产品。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于水产养殖的消毒剂及其制备方法，利用蛭弧菌的作为寄生菌的特性，防治水体中的有害菌。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种用于水产养殖的消毒剂，为液体形态，包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数均为1％-5％，其余为蒸馏水，其特征在于消毒剂中含有寄生型蛭弧菌，含量为10⁹-10¹³CFU/mL。

消毒剂中还包含一种或多种以下物质：甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠，它们的质量百分数为1％-10％，该物质或其组合可以保持消毒剂中蛭弧菌的活性，并均匀分布在消毒剂中。

一种制备上述消毒剂的方法，包括以下步骤：

A.制备蛭弧菌的宿主菌的液体培养基，培养基由以下成分组成：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数为1％-5％，5％-10％的蛋白胨，1％-5％的酵母粉，1％-5％的牛肉膏，通过控制培养基中磷酸盐的含量使培养基的pH保持在7.0-8.0，培养基在121℃灭菌20min；

B.将A步骤制备的培养基放入发酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，35℃-37℃通气培养24-48小时，菌落总数检测保证宿主菌菌数大于1×10⁹CFU/mL；

C.将1％-3％的蛭弧菌种(菌数为1×10⁶CFU/mL)接种于装有步骤B制备的发酵罐中，35℃-37℃通气培养24-48小时，菌落总数检测保证发酵罐中蛭弧菌含量为10⁹-10¹³CFU/mL，发酵完成后，发酵液中加入甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠中的一种或几种，它们的质量百分数为1％-10％，既得本发明的消毒剂。

蛭弧菌的宿主菌为下列菌的一种或几种：大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌，优选为大肠杆菌，菌数大于1×10⁹CFU/mL。

使用时将消毒液体按照适当的比例稀释，放入水产养殖水体中即可。消毒剂可以低温保存也可常温保存，低温可以保存一年以上，常温可以保存3到4个月。

蛭弧菌种可通过购买目前商业销售的蛭弧菌制剂获得，蛭弧菌的宿主菌为常见菌种，获得比较方便。

本发明的有益效果是：利用生物防治的方法，得到一种高效、环保、对水产养殖动物不会产生有害物质残留的消毒剂，制备方法简单，成本较低，适合大规模应用。

具体实施方式

实施例1

该消毒剂通过下列步骤得到：

A.制备蛭弧菌的宿主菌的液体培养基，培养基由以下成分组成：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数为5％，5％的蛋白胨，5％的酵母粉，5％的牛肉膏，培养基的pH为7.0，培养基在121℃灭菌20min；

B.将A步骤制备的培养基放入发酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，37℃通气培养24小时，菌落总数检测保证宿主菌菌数大于1×10⁹CFU/mL；

C.取3g蛭弧菌制剂，用无菌水制备3％的蛭弧菌种，将蛭弧菌种接种于装有步骤B制备的发酵罐中，37℃通气培养48小时，菌落总数检测保证发酵罐中蛭弧菌含量为10¹³CFU/mL。

蛭弧菌的宿主菌为下列菌的一种或几种：大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌，优选为大肠杆菌，菌数大于1×10⁹CFU/mL。

获得的发酵液即为本发明的消毒剂，发酵完成后，加入甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠等物质的一种或几种，使它们的质量百分数为1％。

按照上述方法获得的一种用于水产养殖的消毒剂，为液体形态，包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数都为5％，其余为蒸馏水，消毒剂中含有蛭弧菌，含量为10¹³CFU/mL。

消毒剂中还包含一种或多种以下物质：甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠，它们的质量百分数为1％。

实施例2

该消毒剂通过下列步骤得到：

A.利用无菌水制备蛭弧菌液体培养基，培养基由以下成分组成：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数为1％，5％的蛋白胨，1％的酵母粉，1％的牛肉膏，并用磷酸盐缓冲液使培养基的p为8.0，培养基在121℃灭菌20min；

B.将A步骤制备的培养基放入发酵罐中，并放入大肠杆菌，菌数大于1×10⁹CFU/mL，35℃通气培养24小时，菌落总数检测保证宿主菌菌数大于1×10⁹CFU/mL

C.取1g蛭弧菌制剂，用无菌水制备1％的蛭弧菌种，接种于装有步骤B制备的发酵罐中，35℃通气培养24小时，菌落总数检测保证发酵罐中蛭弧菌含量为10⁹CFU/mL，

获得的发酵液即为本发明的消毒剂，发酵完成后，加入甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠等物质的一种或几种，使它们的质量百分数为10％。

按照上述方法获得的一种用于水产养殖的消毒剂，为液体形态，包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数都为1％，其余为蒸馏水，消毒剂中含有蛭弧菌，含量为10⁹CFU/mL。

消毒剂中还包含一种或多种以下物质：甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠，它们的质量百分数为10％。

实施例3

将本发明制备的消毒剂应用于九孔鲍的养殖试验，检测其对具体养殖动物的影响。

利用实施例1中的消毒剂，并设空白对照，观察不同养殖条件下九孔鲍的生长状况及水体中主要微生物的数量。

本试验采用添加蛭弧菌制剂并结合周期换水的方式研究蛭弧菌在九孔鲍养殖中的应用潜能，以目前进行生产的养殖池作为对照A组，实验组水体中添加不同含量的消毒剂，使养殖池中蛭弧菌的浓度分别为10²CFU/mL、10⁴CFU/mL和10⁶CFU/mL，分别为B组、C组和D组，其余养殖条件完全相同。同时实验采用20d的换水周期。

实验采用增重率、重量日平均增长量、壳长增长率、壳长日平均增长量和存活率为判据，确定蛭弧菌对九孔鲍生长的影响。此外，在整个实验周期中的换水前分别对各组中养殖水体中所含的弧菌数进行检测，试验结果表明，实验组九孔鲍的生长指标和存活率均显著高于对照组(P＜0.05)，随着蛭弧菌在水体中浓度的升高，九孔鲍的生长和存活率也相应提高，蛭弧菌在水体中的浓度为10⁶CFU/mL时，九孔鲍的增重率、壳长增长率和存活率分别为125.3％、170.2％和96.5％，弧菌检测结果表明，蛭弧菌可有效控制和消除养殖水体中的弧菌数。

Claims (5)

1.一种用于水产养殖的消毒剂，其特征在于：其溶剂为蒸馏水，其中包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分含量均为1％-5％，还含有寄生型蛭弧菌，含量为10⁹-10¹³CFU/mL。

2.根据权利要求1所述的消毒剂，其特征在于：其还包含一种或多种下列物质：甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠，其重量百分含量均为1％-10％。

3.一种制备权利要求1所述的消毒剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.制备蛭弧菌的宿主菌的液体培养基，溶剂为蒸馏水，培养基由以下成分组成：氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾，重量百分数为1％-5％，5％-10％的蛋白胨，1％-5％的酵母粉，1％-5％的牛肉膏，通过控制培养基中磷酸盐的含量使培养基的pH保持在7.0-8.0，培养基在121℃灭菌20min；

B.将A步骤制备的培养基放入发酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，35℃-37℃通气培养24-48小时，菌落总数检测保证宿主菌菌数大于1×10⁹CFU/mL；

C.将1％-3％的蛭弧菌种接种于装有步骤B制备的发酵罐中，35℃-37℃通气培养24-48小时，菌落总数检测保证发酵罐中蛭弧菌含量为10⁹-10¹³CFU/mL，发酵完成后，发酵液中加入甘油、椰子油脂和羧甲基纤维素钠中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的制备消毒剂的方法，其特征在于，蛭弧菌的宿主菌为大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和副溶血弧菌中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的制备消毒剂的方法，其特征在于，所述蛭弧菌的宿主菌为大肠杆菌。