CN103505728A

CN103505728A - 用于治疗外伤性脑损伤、脊髓损伤及相关病症的补体旁路抑制

Info

Publication number: CN103505728A
Application number: CN201310388759.7A
Authority: CN
Inventors: V·M·霍勒斯; J·M·瑟曼; S·汤姆林森; P·F·斯塔赫尔
Original assignee: South Carolina Medical University Research And Development Foundation; University of Colorado
Current assignee: South Carolina Medical University Research And Development Foundation; MUSC Foundation for Research Development; University of Colorado
Priority date: 2005-05-26
Filing date: 2006-05-26
Publication date: 2014-01-15
Also published as: AU2006249835A1; CN101227924A; EP1885398B1; EP1885398A4; JP2012162543A; EP1885398A1; JP2008542298A; ES2548700T3; CA2610340C; WO2006128006A1; US20060292141A1; BRPI0618160A2; CA2610340A1; AU2006249835B2; US8911733B2; JP5707024B2

Abstract

本发明所公开的是使用选择性抑制补体旁路的试剂和组合物来抑制或治疗由外伤性脑损伤（TBI）、脊髓损伤（SCI）或相关病症导致的生理损害。优选的用于抑制由TBI或SCI导致的损害的试剂包括那些抑制因子B的试剂，抗因子B抗体代表了一种特别优选的试剂。

Description

用于治疗外伤性脑损伤、脊髓损伤及相关病症的补体旁路抑制

本申请是申请日为2006年5月26日，申请号为200680026992.9，发明名称为“用于治疗外伤性脑损伤、脊髓损伤及相关病症的补体旁路抑制”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明主要涉及通过选择性抑制补体旁路——在一个具体的实施方案中通过抑制因子B——来治疗由外伤性脑损伤、脊髓损伤或相关病症导致的生理损害。

背景技术

补体激活主要通过三种途径发生：所谓的经典途径、凝集素途径和旁路途径。旁路激活所涉及的关键蛋白为因子B（fB）和因子D（fD）。这些蛋白共同作用来启动和/或放大C3的激活，然后这会导致许多炎性事件的启动。第三种蛋白即备解素会稳定C3和因子B的复合物但是并不一定是旁路途径起作用时所需的。因子B也有助于溶解免疫复合物，已有报道称因子B可以作为B细胞生长因子起作用并且能激活单核细胞（Takahashi,1980;Hall,1982;Peters,1988）。已经生成了因子B缺陷型小鼠（fB-/-小鼠），并且在这些小鼠体内响应于T细胞依赖性抗原的IgG1抗体和对内毒素性休克的敏感性似乎都是正常的（Matsumoto，1997）。

补体旁路通常是由细菌、寄生虫、病毒或真菌启动，但是已有报道称IgA Ab和某些Ig L链会激活这一途径。当循环的因子B与激活的C3（C3b或C3H2O）结合时，旁路途径的激活就会被启动。然后该复合物会被循环的因子D切割产生具有酶活性的片段C3bBb。C3bBb会切割C3生成C3b，这会导致炎症并且也会进一步放大所述的激活过程，形成正反馈环。需要全部两种组分（因子B和因子D）来使得所述旁路途径能够被激活。

最近的研究已经证明所述补体旁路在几种动物疾病模型的发病机理中起到重要作用。例如，在缺血再灌注损伤（I/R）后的肾脏中，补体激活几乎仅由旁路途径介导（Thurman et al.,2003,J Immunol170:1517-1523），并且所述旁路途径在炎性关节炎的发展中起到重要作用。可能最令人吃惊的是，已经证明旁路途径有缺陷的小鼠在狼疮肾炎的MRL/lpr模型中不会患肾炎（Watanabe et al.,2000,J Immunol164:786-794），并且不会引起抗磷脂介导的流产（Girardi et al.,2003,JClin Invest112:1644-1654），所述模型传统上被认为是由经典补体途径介导的。此外，Nataf等人已经证明，在C3（-/-）和因子B（-/-）两种小鼠的实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE）模型中，与它们的野生型同窝小鼠相比，几乎没有巨噬细胞和T细胞的实质浸润，并且诱导了EAE的C3（-/-）和因子B（-/-）小鼠的中枢神经系统（CNS）不会有脱髓鞘作用（Nataf et al.,2000,J.Immunol.165:5867-5873）。对EAE模型的C4（-/-）小鼠的自身免疫病理的后续研究表明，与具有完全完整补体系统的对照相比，C4基因的缺失不会明显地改变发作的时间或髓磷脂少突胶质细胞诱导的EAE的严重程度和进展速度，说明鼠补体对脱髓鞘病发病作用是通过旁路途径实现的（Boos et al.,2005,Glia49:158-160）。

外伤性脑损伤（本文也称为TBI）是一种对个体健康非常有害的目前尚没有有效疗法的病症。已经证明TBI后的脑损害的发展涉及补体激活（Bellander et al.,2001,J.Neurotrauma18:1295-1311;Kaczorowski et al.,1995,J.Cereb.Blood Flow Metab.15:860-864;Keeling et al.,2000,J.Neuroimmunol.105:20-30;Schmidt et al.,2004,Eur.J.Trauma30:135-149;Nataf et al.,1999,Trends Neurosci22:397-402;Stahel et al.,1998,Brain Res.Rev.27:243-256;Stahel et al.,2001,J.Neurotrauma18:773-781;Van Beek et al.,2003,Ann NY AcadSci992:56-71;Rancan et al.,2003,J.Cereb.Blood Flow&Metab.23:1070-1074）。但是，这些研究都集中于补体级联作用的某一点，此时激活补体的全部三种途径都集中在这一点，例如在C3（例如，参见Rancan et al.,2003,ibid.）。因此，在本发明之前，还没有报道显示补体途径中是否有一种会由于TBI而被优先地或排他地激活，或者为发展TBI所需。

在对头部损伤患者的治疗中，近期目标是通过快速矫正低血压、低氧血、高碳酸血和低血糖症来防止继发性脑损害。在对头部创伤患者的早期治疗中，重点是维持足够的脑灌注压（CPP），它应该在70-80mmHg以上。不同的治疗方法的目标都在于降低颅内压（ICP）以保持足够的CPP。治疗方式有：通过手术清除颅内血肿来减少大面积损伤、用渗透性药物（例如甘露醇）减轻脑肿胀和通过脑室内导管来治疗性排出脑脊液（CSF）。在最初时患有严重TBI的患者被转移到重症监护病房（ICU）中并且按标准方案进行治疗。ICU治疗的目标包括：实现并维持足够的气体交换和循环稳定性、预防低氧血和高碳酸血、定期重复进行计算机控制断层摄影术（CT）扫描以检测延缓的继发性颅内病理状态、深度镇静和镇痛以避免应激和疼痛、实现并维持最适的CPP（>70mmHg）和脑氧平衡、避免体温过高（<38℃）、预防高血糖症和低钠血症、无常规进行的头部抬高（head elevation）、预防应激性溃疡并维持肠粘膜完整性，以及预防并发因素（例如肺炎或脑膜炎）。若ICP升高（>15mmHg，>5分钟），可以通过如下方式来对患者进行治疗：（1）加深镇静、镇痛和肌肉松弛的程度；（2）通过脑室内导管来排出CSF；（3）适度增加通气（在某些情况下）；（4）渗透疗法；（5）适度降温（±34℃）和（6）巴比妥酸盐昏迷。

脊髓损伤（本文也称为SCI）也是一种对个体健康非常有害的目前尚没有有效疗法的中枢神经系统病症。已经证明SCI后损害的发展涉及补体激活（Anderson et al.,2004,J Neurotrauma21(12):1831-46;Reynolds et al.,2004,Ann N Y Acad Sci.1035:165-78;Rebhun et al.,1991,Ann Allergy66(4):335-8）。但是与TBI一样，这些研究都集中于补体级联作用的某一点，此时激活补体的全部三种途径都集中在这一点；或是提出所有的补体途径在SCI后有作用。因此，在本发明之前，还没有报道显示补体途径中是否有一种会由于SCI而被优先地或排他地激活，或者为发展SCI所需。

SCI通常被定义为会导致功能（例如运动和感觉）丧失的脊髓损害。损害的常见原因是外伤（例如交通事故、枪击、跌倒等）或疾病（脊髓灰质炎、脊柱裂、弗里德赖希(氏)共济失调（Friedreich's Ataxia）等）。不必切断脊髓也可出现功能丧失。事实上，在大多数患有SCI的个体中，脊髓是完整的，但是对其的损害会导致功能丧失。除了感觉丧失或运动功能丧失，患有SCI的个体也可能会经历肠和膀胱功能障碍、性功能障碍和生育功能障碍、不能有效调节血压，体温控制减弱、不能在损伤位置以下出汗以及慢性疼痛。较高位的损伤（C-1、C-2）会导致包括呼吸能力在内的许多非自主功能的丧失，被迫使用呼吸辅助装置，例如机械呼吸机或膈肌起搏器。

目前尚无法治愈SCI。在对SCI患者的治疗中，近期目标集中于在损伤发生后尽可能快的降低损害。类固醇类药物例如甲泼尼龙会减轻肿胀，肿胀是损伤时继发性损害的主要诱因。对于脊髓损伤有几种短期治疗方法。首先，将受损脊髓区的脊柱固定以防止对脊髓的进一步伤害（例如，使用头环、石膏、支具和固定带）。为了减轻由损伤导致的脊髓肿胀，通常在损伤后的最初24个小时内进行类固醇药物疗法，但是更典型的方式是对那些有神经功能缺损的患者进行类固醇药物疗法，并且启动治疗的时间窗是在创伤后不到8小时内（Bracken,2001,Spine26(24S):S47-S54）。根据可能产生的并发症，通常需要其他的药物疗法。由于对脊髓的外伤性损伤通常包括对脊柱的骨和韧带的损伤，所以可以进行外科手术。一些手术的目的是移开压在脊髓上或压入脊髓的骨（减压），或者是当椎骨或韧带受到损害时，稳定或复位脊髓损伤区域的脊柱。可以将金属杆或支架或螺钉与正常的椎骨连接起来以防止骨折的椎骨移动，并使用骨移植物或通过类似方法使椎骨“融合”起来。使用负重和滑轮（即牵引）也可以帮助脊柱复位。

尽管有用于治疗TBI患者的方案，但是TBI治疗的潜在并发症可能包括：脑血管痉挛或心血管抑制、肝毒性、免疫抑制，和肺部感染的发病率升高。此外，尽管用于SCI的疗法可以适当降低生理损害，但是许多方案主要是用于帮助减少进一步损害的可能性并稳定患者。没有一种方案被证明能完全令人满意地抑制由TBI或SCI导致的生理损害的发展。因此，本领域中仍旧需要具有更小的毒性并且对由TBI或SCI导致的损害的深层原因更加特异的治疗方法和试剂。

发明内容

本发明的一个实施方案涉及一种用于在动物体内减少或预防由外伤性脑损伤（TBI）导致的生理损害的至少一种症状或用于加强动物从TBI恢复的方法。所述方法包括选择性抑制遭受TBI的动物体内的补体旁路。一方面，所述症状选自脑血管痉挛、心血管抑制、肝毒性、免疫抑制和/或肺部感染。另一方面，所述症状选自低血压、低氧血症、高碳酸血症和/或低血糖症。

本发明的另一个实施方案涉及一种用于在动物体内减少或预防由脊髓损伤（SCI）导致的生理损害的至少一种症状或用于加强动物从SCI恢复的方法。所述方法包括选择性抑制遭受SCI的动物体内的补体旁路。一方面，所述症状为脊髓肿胀。

本发明的又一个实施方案涉及一种选择性抑制补体旁路的试剂用于治疗外伤性脑损伤（TBI）的药物组合物中的用途。

本发明的另一个实施方案涉及一种选择性抑制补体旁路的试剂用于治疗脊髓损伤（SCI）的药物组合物中的用途。

在上述任一种方法或用途中，所述抑制步骤可包括给予所述动物一种选择性抑制补体旁路中蛋白质表达或蛋白质活性的试剂。所述补体旁路中的蛋白质选自因子B、因子D和/或备解素。这类试剂包括但不限于所述补体旁路中蛋白质表达的抑制剂、所述补体旁路中蛋白质生物活性的抑制剂和/或所述补体旁路中蛋白质的拮抗剂。

一方面，在上述任一种方法或用途中所用的试剂为抗体、抗体的抗原结合片段、或抗原结合多肽，它们选择性结合并抑制所述补体旁路中的所述蛋白质。一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域，其中所述抗体阻止了C3bBb复合物的形成。一方面，所述抗体或其抗原结合片段结合因子B并阻止或抑制因子D切割因子B。一方面，所述抗体或抗原结合片段结合人因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域。另一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B的第三SCR结构域的表位，所述表位选自：（a）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Tyr139位至约Ser185位或其在非人因子B序列中的等效位置；（b）包括至少一部分的人因子B（SEQID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Tyr139位至约Ser141位或其在非人因子B序列中的等效位置；（c）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Glu182位至约Ser185位或其在非人因子B序列中的等效位置；和/或（d）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括任何一个或多个下列位置或它们在非人因子B序列中的等效位置：Tyr139、Cys140、Ser141、Glu182、Gly184或Ser185。一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B（SEQ ID NO:2）的第三SCR结构域的表位，所述表位包括一个或多个下列氨基酸位置或它们在非人因子B序列中的等效位置：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。另一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B（SEQ ID NO:2）的第三SCR结构域的表位，所述表位包括或由下列氨基酸位置或它们在非人因子B序列中的等效位置组成：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。又一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B第三SCR结构域的一部分的三维结构内的非线性表位，其中所述部分由至少SEQ ID NO:2的Ala137-Ser192的氨基酸位置或非人因子B序列中的等效位置所限定。又一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合来自多个哺乳动物物种的因子B并阻止C3bBb复合物的形成。一方面，所述抗体或其抗原结合片段选择性结合来自人和动物的因子B，所述动物选自非人灵长类、小鼠、大鼠、猪、马和兔。对于任一种上述抗体来说，所述抗体包括但不限于非补体激活的同种型或亚类的抗体、单克隆抗体、人源化抗体、双特异性抗体和/或单价抗体。一方面，所述抗原结合片段为Fab片段。在本发明一个优选的方面中，所述抗体为单克隆抗体1379（由ATCC保藏号PTA-6230的菌株产生）或其抗原结合片段。

在涉及TBI的方法和用途中，在一个优选的实施方案中，所述试剂为静脉内给药或被给予到动物的脑。在涉及SCI的方法和用途中，在一个优选的实施方案中，所述试剂为静脉内给药或被给予到动物的脊髓或脊髓的硬膜外隙。优选地，所述试剂被以某一个量给予到动物，与未给予所述试剂的情况相比，所述量能有效在动物体内显著减少由TBI或SCI导致的生理损害的至少一种症状。对TBI来说，一方面，所述试剂以有效维持70-80mmHg以上的脑灌注压（CPP）的量给予，或以有效降低颅内压（ICP）的量给予。对SCI来说，一方面，所述试剂以有效量给予以减轻脊髓内肿胀。一方面，所述试剂是在可药用载体中给予的，所述可药用载体包括但不限于能够穿过血脑屏障的化合物或组合物和/或可注射的赋形剂。

在涉及TBI的上述任一种方法或用途的一个方面中，进一步给予所述动物另一种用于治疗TBI的症状的化合物，所述症状选自体格缺陷(physical impairment)、认知障碍和心理社会-行为-情绪障碍。这类化合物包括但不限于渗透性药物、镇静药、镇痛药、肌肉松弛药和/或巴比妥酸盐。

在涉及SCI的上述任一种方法或用途的一个方面中，进一步给予所述动物一种类固醇。

在涉及TBI的上述任一种方法或用途的一个方面中，所述方法进一步包括通过一种方案来治疗动物的TBI，所述方案选自：通过手术清除颅内血肿来减少大面积损伤；用渗透性药物减轻脑肿胀；通过脑室内导管来治疗性地排出脑脊液（CSF）；计算机控制断层摄影术（CT）扫描；镇静；镇痛；肌肉松弛；适度增加通气；适度降温和/或巴比妥酸盐昏迷。

在涉及SCI的上述任一种方法或用途的一个方面中，所述方法进一步包括通过一种方案来治疗动物的SCI，所述方案选自：给予类固醇、脊柱固定、减压手术、手术稳定椎骨、手术复位椎骨和/或牵引。

在上述任一种方法和用途中，所述动物优选为哺乳动物，包括但不限于人。

本发明的进一步的实施方案涉及（1）一种用于在遭受外伤性脑损伤（TBI）的动物体内减少或预防由TBI导致的生理损害的至少一种症状的方法，或（2）一种用于在遭受脊髓损伤（SCI）的动物体内减少或预防由SCI导致的生理损害的至少一种症状的方法，每种方法均包括给予所述动物一种试剂，所述试剂通过结合或阻断因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域来抑制因子B。在这些实施方案的一个优选的方面中，所述试剂为选择性结合因子B的抗体或其抗原结合片段。

本发明的另一个实施方案涉及一种组合物，包括：（a）一种选自分离的抗体、其抗原结合片段、和/或抗原结合多肽的第一试剂，其中所述第一试剂选择性地抑制补体旁路中蛋白质的表达或生物活性；和（b）一种用于治疗外伤性脑损伤（TBI）的症状的第二试剂。一方面，所述第二试剂为一种用于治疗TBI的症状的化合物，所述TBI的症状选自：体格缺陷、认知障碍和/或心理社会-行为-情绪障碍。另一方面，所述第二试剂选自渗透性药物、镇静药、镇痛药、肌肉松弛药和巴比妥酸盐。

本发明的又一个实施方案涉及一种组合物，包括：（a）一种选自分离的抗体、其抗原结合片段、和/或抗原结合多肽的第一试剂，其中所述第一试剂选择性地抑制补体旁路中蛋白质的表达或生物活性；和（b）一种用于治疗脊髓损伤（SCI）的症状的第二试剂。一方面，所述第二试剂为类固醇。

在上述两种组合物的任一种中，所述第一试剂可以包括但不限于抑制选自因子B、因子D和/或备解素的蛋白质的表达或生物活性的试剂。一方面，所述第一试剂结合因子B中的第三短同源重复序列（SCR）结构域，并抑制或阻止C3bBb复合物的形成。另一方面，所述第一试剂为抗体或其抗原结合片段。在一个优选的方面中，所述抗体为单克隆抗体1379。用于本发明的方法或用途的上述任一种试剂可用于本发明的组合物中。

附图说明

图1为示出了构建因子B-Ig融合蛋白的示意图。

图2A为线形图，示出了当向含10μl血清的反应体系中加入3μg抗因子B时，用酵母聚糖测定法测得抗因子B完全抑制了补体旁路。

图2B为线形图，示出了当向10μl人血清加入6μg抗体时，用兔红细胞裂解测定法测得抗因子B完全抑制了补体旁路。

图3为示出了给予小鼠抗因子B来抑制补体旁路的线形图。

图4为示出了人因子B表面上mAb1379的表位定位模型的示意图。

图5为示出了结合了因子B的mAB1379（一个Fab片段）的模式化复合物的示意图，所述Fab的抗原结合侧已经被建模为覆盖整个定位表位区。

图6为示出了TBI后Crry-Ig抑制神经障碍的线形图。

图7为示出了TBI后Crry-Ig抑制体重减轻的线形图。

图8为示出了给予抗因子B（mAb1379）来减轻TBI相关脑损害的柱状图。

图9为示出了给予抗因子B（mAb1379）促进脊髓损伤恢复的线形图。

图10为柱状图，示出了脑损伤的C57BL/6（fB+/+）小鼠血清中C5a水平是升高的，而在缺少功能性补体旁路的因子B基因缺陷（fB-/-）型小鼠体内C5a水平却显著降低。

图11为由蛋白质印迹分析测定得的蛋白质印迹的数码照片，示出了外伤性脑损伤（TBI）后，fB-/-型小鼠的血清和脑内抗凋亡介质Bcl-2上调。

图12为数码照片，示出了闭合性头部外伤后4小时，因子B基因缺陷型小鼠的受伤半球中神经元细胞死亡减轻情况。

图13为数码照片，示出了闭合性头部外伤后24小时，因子B基因缺陷型小鼠的受伤半球中神经元细胞死亡减轻情况。

图14为数码照片，示出了闭合性头部外伤后7天，因子B基因缺陷型小鼠的受伤半球中神经元细胞死亡减轻情况。

具体实施方式

本发明主要涉及发明人的发现，所述发现是指通过旁路途径激活补体级联是外伤性脑损伤（TBI）诱导生理损害所必需的，以及对补体旁路的抑制足以减轻由TBI或脊髓损伤（SCI）导致的损害（或促进恢复）。更具体地说，本发明的发明人在本说明书中公开了以下发现：在TBI的实验模型中，抑制补体旁路会抑制生理损害（例如脑损害）；并且在SCI的实验模型中，抑制补体旁路也会抑制损害（通过增强的恢复程度来测定）。因此，本发明涉及化合物、组合物，以及这些化合物或组合物在通过选择性抑制补体旁路来预防和/或治疗TBI、SCI或其他神经元损害或脑损害的方法中的用途。

首先，本发明的发明人首次证明了补体激活的旁路途径在促成总体程度的创伤后补体激活和脑损伤后的继发性神经元细胞死亡中具有主要作用。此外，发明人已经证明通过抑制因子B来特异性抑制补体旁路，以及通过使用C3补体转化酶抑制剂Crry-Ig对C3的抑制作用来总体抑制补体途径，均能抑制TBI相关的损害。现认为本发明首次公开了TBI相关的生理损害和效应能够通过特异性和选择性地抑制补体旁路系统来抑制。

其次，本发明的发明人已经证明了通过抑制因子B来抑制补体旁路可抑制SCI相关的损害。现认为本发明首次公开了SCI相关的生理损害和效应能够通过特异性和选择性地抑制补体旁路系统来抑制。

将补体旁路中的因子B和其他蛋白质（例如因子D或备解素）确定为特异性治疗靶标，这提供了可用于通过选择性抑制补体旁路来抑制由TBI或SCI导致的生理损害或效应的合理策略和先导化合物。

已经开发了几种抑制剂来在激活的各个阶段抑制补体系统（Holers,V.M.2003,Clin Immunol107:140-151），但是补体旁路的特异性抑制剂还未被广泛报道。与已有的补体级联抑制剂相比，特异性抑制旁路途径具有几种优势。首先，由于本发明的发明人已经发现由TBI或SCI导致的生理损害主要是由补体激活的旁路途径介导的，所以该途径的特异性抑制剂与广谱补体抑制剂（pan-complementinhibitor）一样有效，并且应该几乎没有免疫抑制副作用。此外，C4-/-小鼠（缺少经典补体途径、旁路途径和凝集素补体途径中通用的C4补体组分的小鼠）而非fB-/-（因子B缺陷）小鼠，似乎对全身的实验性细菌感染更加敏感，这表明通过保持经典途径的完整性，旁路途径的抑制剂使得严重感染的风险更小。虽然仅报导过一名患有因子B先天缺陷症的人类患者（Densen et al.,1996,Mol Immunol33:68(Abstract270)），但是针对基因打靶的因子B缺陷型小鼠（fB-/-）的研究尚没有证明该因子具有免疫调节作用（Densen et al.,supra;Matsumoto et al.,1997,Proc Natl Acad Sci U S A94:8720-8725）。相比而言，经典途径组分先天缺陷的患者感染的风险似乎会增加（最常见的葡萄球菌（Staphylococcus）和链球菌（Streptococcus））。经典途径组分或C3（所有补体途径所共有的）的抑制也可能与自身免疫相关（Figueroa and Densen,1991,Clin Microbiol Rev4:359-395），这可能解释了为什么因子B缺陷能使得MRL/lpr小鼠不会患肾小球肾炎，而C3缺陷却无此作用（Watanabe et al,supra）。选择性抑制旁路途径会防止生成C3a受体以及补体受体1-4和C5a的C3来源配体。事实上，由于尚不能很好地对激活过程中产生的因子B的Ba或Bb激活产物的受体进行表征，阻断旁路途径的效果可能更加直接。因此，旁路途径的抑制有望会比经典补体途径抑制更耐受且更有效。

考虑到用于本发明的治疗TBI和SCI及相关病症的方法中的补体旁路特异性抑制剂具有极大的潜在疗效，本发明的发明人已经开发了几种抗因子B的抑制性单克隆抗体并且已经在TBI实验模型和SCI实验模型中对它们中的一种进行了测试。这些抗体在2005年11月24日公开的公开号为2005-0260198-A1的美国专利申请和2005年8月25日公开的公开号为WO2005/077417的PCT申请中有详细的描述，上述专利申请全文以引用的方式纳入本说明书。

简言之，为产生抗体，给基因打靶的因子B缺陷型小鼠（fB-/-）注射一种融合蛋白，所述融合蛋白由与小鼠IgG1同种型的铰链、CH2和CH3结构域连接的因子B的第二和第三短同源重复序列（SCR）结构域构成（参见图1）。选择这些SCR结构域是因为它们是fB-/-型小鼠的因子B基因缺失区段的一部分。筛选出对因子B有免疫应答的小鼠（例如使用ELISA），并且将一只注射后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。一种所得的杂交瘤（命名为1379）会产生能抑制体外（图2A和2B）和体内（图3）补体旁路激活的IgG1抗体。具体地说，在两种旁路途径活性的体外测定中测试了这种抗体（图2A和2B），并且显示出所述抗体能够完全抑制人血清造成的红细胞裂解，因此确证了该试剂具有完全阻断补体旁路激活的能力。在单次注射抑制性抗体后的各个时间测试小鼠的旁路途径抑制情况时，1mg抗体会导致在IV注射后的1小时内以及IP注射后的2小时内的完全抑制（图3）。IP注射了1mg注射液的小鼠在24小时时，旁路途径保持完全抑制，注射了2mg注射液的小鼠在注射后直至48小时时保持完全抑制。每隔一天本发明的发明人会重复i.p.注射2mg所述1379抗体，持续14天，结果显示最后一次注射后，补体旁路的完全抑制维持至少48小时。此外，由该抗体制备的Fab片段也会导致旁路途径的完全抑制，其摩尔水平与完整的1379抗体大致相等。

1379抗体抑制下列动物血清中的旁路途径激活：小鼠、大鼠、人、狒狒、恒河猴、猕猴（cyno monkey）、猪、兔和马（表1）。

表1

表2中示出了本发明人生产的抗因子B抗体的列表。如上所述，本发明的发明人已经证明了所述mAb1379能结合并抑制小鼠和人的因子B。相比而言，命名为624的mAb能够结合小鼠和人的因子B，但不抑制人的旁路途径。如竞争试验中所示，抗体624、691和1231不会阻断1379的结合。因此，这些抗体一定是在不同的位点与蛋白结合的，这解释了为什么它们能在体外结合因子B而不抑制其功能。但是，抗体395、1322和1060是1379的竞争性抑制剂。

表2

使用表位定位来证明该抗体结合因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域，且该抗体阻止C3bBb复合物的形成。此外，针对mAb1379抗体的表位定位实验表明因子B上的表位或抗体结合位点是非线性的。实验证明向人因子B的SCR2和SCR3而非SCR1中引入某些丙氨酸置换会导致1379抗体结合因子B的能力的丧失或基本丧失，这包括进行了以下置换的突变体：用His-Cys-Pro置换139-Tyr-140-Cys-141-Ser（所述位置与SEQ ID NO：2所代表的成熟的人因子B相关）；用Gly-Asn-Gly-Val置换182-Glu-183-Gly-184-Gly-185-Ser。

对能被mAb1379识别的人因子B的推定保守性结合表面或表位进行建模。简言之，人因子B的三级结构是基于所解析出的CR2-SCR1-2（蛋白质数据库（PDB）编号：1GHQ）的三维结构建立的。图4示出了因子B结构的模型，注明了对应于mAb1379表位（相对于SEQ IDNO：2）的氨基酸位置。被认为能构成针对mAb1379抗体的构象表位的残基为：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192，但是所述表位可以仅含有一些图4中所示的残基、基本上含有全部的图4中所示的残基或者所含残基比图4中所示的残基多。图5为示出结合了因子B的mAB1379（一个Fab片段）的模式化复合物的示意图，所述Fab的抗原结合侧已经被建模为覆盖整个定位表位区，如上述图4中所示。

上述本发明的发明人所制备的抗体（在公开号为2005-0260198-A1的美国专利申请和公开号为WO2005/077417的PCT申请中有更详细的描述）能识别因子B上的、人和许多其他动物物种所共有的位点，对此已进行了临床前的原理求证实验，因此，使得能够容易地将人疾病模型中的发现转变为人类疗法。这些抗体被认为是第一批显示出能在多个物种中抑制因子B的抗因子B抗体。因此，已经在因子B上鉴定了一个独特位点，针对该位点可以开发出新的抑制剂。

在本发明中，本发明的发明人发现了并在本文中首次报道了抑制旁路途径会抑制外伤性脑损伤（TBI）中的生理损害，并且也会抑制脊髓损伤（SCI）中的生理损害，现在这一信息可以被用于设计、分离和/或鉴定用于治疗TBI和SCI的新型治疗剂。此外，先前本发明人所制备和描述的抗体是用于本发明的方法的优良试剂。

本发明的一个实施方案涉及一种用于在动物体内减少或预防由外伤性脑损伤（TBI）导致（与之相关）的至少一种症状或病症（残疾、缺损、生理损害）、或用于加强（促进）从TBI导致的损害中恢复的方法，包括选择性抑制遭受TBI的动物体内的补体旁路。本发明的另一个实施方案涉及一种用于在动物体内减少或预防由脊髓损伤（SCI）导致（与之相关）的至少一种症状或病症（残疾、功能缺损、生理损害）、或用于加强（促进）从SCI导致的损害中恢复的方法，包括选择性抑制遭受SCI的动物体内的补体旁路。在一个优选的实施方案中，所述方法包括给予所述动物一种抑制补体旁路的试剂，特别是一种抑制因子B的试剂。在一个特别优选的实施方案中，所述试剂为抗因子B抗体或其抗原结合片段。

因此，本发明的方法包括选择性抑制动物体内的补体旁路的步骤，所述动物具有分别由TBI或SCI导致的生理损害，或有产生分别由TBI或SCI导致的生理损害的风险。根据本发明，抑制动物体内的补体旁路是指抑制至少一种下述蛋白或编码这类蛋白的核酸分子的表达和/或生物活性，所述蛋白为补体旁路的一部分。这类蛋白包括但不限于因子B、因子D或备解素。“选择性”抑制补体旁路是指本发明的方法优先地或排他地抑制补体旁路，但不抑制或至少基本不抑制补体激活的其他途径，包括经典补体途径或凝集素途径。例如，本发明的新型因子B抗体及其抗原结合片段就是选择性抑制补体旁路的试剂的一个实例。“选择性”抑制特定的蛋白是指本发明的方法优先地或排他地抑制该特定蛋白质的表达和/或生物活性，但不抑制或至少基本上不抑制其它蛋白质的表达和/或生物活性（除非这种生物活性是与所述特定蛋白共有的，如下游事件）。

根据本发明，外伤性脑损伤（TBI）被定义为由任何类型的头部创伤例如对头部的撞击或震荡等导致的任何损伤、创伤或损害。更具体地说，TBI是由外部物理作用力造成的获得性脑损伤，导致全部或部分的功能丧失或心理社会障碍，或两者都会导致。该术语用于会导致一个或多个方面功能缺损的开放性和闭合性头部损伤，所述一个或多个方面为例如认知，语言，记忆，注意力，推理，抽象思维，判断，问题求解，感觉、知觉和运动能力，心理社会行为，躯体功能，信息处理和言语。该术语通常不用于先天性或退行性脑损伤或者产伤导致的脑损伤，但是后一种类型的创伤也可以用本发明的方法来治疗。TBI可导致各种生理和心理症状、病症或功能缺损，包括体格缺陷（例如言语、视力、听力和其它感觉障碍；头痛；缺乏精细运动协调；肌肉痉挛；一侧或两侧轻瘫或麻痹及癫痫发作；平衡障碍和其它的步态障碍）、认知障碍（例如短期和长期记忆丧失、注意力不集中、思维迟钝和注意力广度受限，以及知觉障碍、交流技能障碍、阅读技能障碍和书写技能障碍、计划障碍、排序障碍和判断障碍）和心理社会-行为-情绪障碍（例如疲劳、心态不稳、否认、自我中心、焦虑、抑郁、自尊下降、性功能障碍、不安、缺乏动力、无法自我监控、情绪控制困难、无法应付、激动、过度的大笑或大哭和其它相关困难）。TBI诊断的详细讨论如上所述。

本领域中诊断TBI的方法已很成熟。通常，TBI是通过创伤历史、临床状况和成像研究（例如x射线和计算机控制断层摄影术（CT）扫描）来诊断的。特别重要的是使用复苏后格拉斯哥（Glasgow）昏迷（GCS）评分（Teasdale and Jennett,1974,Lancet2(7872):81-84），因为这一参数是治疗结果的重要预测指标。当评估GCS时，用最好的反应来计算评分。患有轻度头部损伤（GCS14或15）的患者占急诊科所收纳的所有头部创伤患者的约80%。中度头部损伤对应的GCS评分在9至13之间，并且与颅内病症相对于轻度头部损伤患者风险上升相关。8分或更少的GCS评分对应于昏迷的患者，所述昏迷的患者被定义为不能睁开眼睛、不能服从命令和无语言反应。因此，严重的头部损伤被定义为GCS评分在3至8之间。当对患者进行评估时，除GCS和意识水平评估外，神经检查通常包括对瞳孔大小和反应性的评估和对外周运动能力的简单评价。进一步的临床检查包括对头皮撕裂的检查，对颅骨陷入性骨折（impression facture）的触诊和对颅底骨折间接体征的检查，所述间接体征包括眼眶周围瘀斑（“黑眼圈”）、耳后瘀斑（“巴特尔征”）、CSF漏导致的鼻漏/耳漏，以及第VII神经麻痹。在某些情况下，会进行CT扫描。其他昏迷或意识状态改变的原因也会在分析中加以研究，例如通过筛选：药物、代谢功能障碍、内出血或外出血源、原有的非外伤性脑损害（例如缺血性或出血性脑损伤）、癫痫、基底动脉血栓形成、细菌性脑膜炎、脑脓肿或肿瘤。闭合性头部损伤的形态学分类是基于根据Marshall和其同事的指导（Marshall et al.,J.Neurosurg.1991,75:S14-S20）进行的CT扫描的结果来进行的。颅内损伤可以是局灶的（硬膜下出血、硬膜外出血、脑内出血；“清除的”与“未清除的”）或弥散的（I-IV级）。例如，在Voset al.,2002,Eur.J.Neurol.9:207-219和Gaetz,2004,Clin.Neurophysiol.115:4-18中记载了对用于评估TBI的参数所进行的详细讨论。

根据本发明，脊髓损伤（SCI）被定义为任何导致功能（如运动或感觉）丧失的脊髓损伤、创伤或损害。损伤的常见原因是外伤（例如交通事故、枪击、跌倒等）或疾病（脊髓灰质炎、脊柱裂、弗里德赖希(氏)共济失调等）。不必切断脊髓也可出现功能丧失。在大多数患有SCI的个体中，脊髓是完整的，但是对其的损害会导致功能丧失。除了感觉丧失或运动功能丧失，患有SCI的个体也可能会经历包括肠和膀胱功能障碍、性功能障碍和生育功能障碍、不能有效调节血压、体温控制减弱、在损伤位置以下不能出汗和慢性疼痛在内的症状、病症或功能缺损。患有SCI的患者可能具有任何水平的SCI，这通常由受损位置来定义（例如在颈椎8或胸椎12处或其下任何位置）。较高位的损伤（C-1、C-2）会导致包括呼吸能力在内的许多非自主功能的丧失，被迫使用呼吸辅助装置，例如机械呼吸机或膈肌起搏器。

本领域中诊断脊髓损伤的方法已很成熟。在急诊室中，医生能够通过仔细检查受损伤的患者、测试感觉功能和运动情况以及询问意外事故情况来排除脊髓损伤。如果受损伤的患者抱怨颈痛、不完全清醒或有明显虚弱或神经损伤体征，就需要进行急诊测试。这类测试包括X射线、计算机控制断层摄影术（CT）扫描、磁共振成像（MRI）或脊髓造影术。也会进行各种神经学检查。SCI的影响取决于损伤的类型和损伤的位置。SCI通常可被分为两类损伤——完全损伤和不完全损伤。完全损伤是指在损伤位置以下无功能（即无感觉和无法随意运动）。身体两侧都受到同样的影响。不完全损伤是指在主要的损伤位置以下仍有某些功能。不完全损伤的患者可能不仅能够移动一肢，可能能够感觉到部分无法移动的身体或可能身体一侧的功能比另一侧要多。随着在SCI紧急治疗方面的进展，不完全损伤将变得越来越常见。

损伤的位置非常有助于预测在SCI中身体的哪部分可能会受到麻痹和功能丧失的影响。颈部（颈）损伤通常会导致四肢瘫痪。C-4节段以上的损伤会导致患者需要呼吸机来呼吸。C-5损伤通常会导致可控制肩和二头肌，却无法控制腕或手。C-6损伤通常会导致可控制腕，却无法控制手功能。C-7和T-1受损的个体可以伸直他们的手臂，但是手和手指仍有灵活性问题。胸位及以下位置的损伤会导致截瘫而手不受影响。T-1至T-8处受损时常常可以控制手，但是由于无法控制腹肌而几乎不能控制躯干。较低的T-损伤（T-9至T-12）能够很好的控制躯干和腹肌。坐姿平衡很好。腰和骶骨损伤会使得对臀屈肌和腿的控制减弱。四肢瘫痪的患者的脊髓的8段颈椎之一受到了损伤；截瘫的患者在脊髓的胸、腰或骶骨段受到了损伤。

本发明涉及抑制生理损害和与这类损害相关的症状或病症（残疾、功能缺损），它们通常是由上文所详述的TBI或SCI导致的。因此，并不要求完全预防或逆转该生理损害或该病症的所有影响，但是本发明的方法的作用可能对患者有明显的疗效。因此，疗效不必完全预防或治愈TBI或SCI所导致的特定病症或生理损害，但是可以包括以下结果：减轻或预防TBI或SCI所导致的症状或生理损害，减少或防止这类症状或损害的发生（定量地或定性地），减轻这类症状或生理影响的严重程度和/或加强遭受TBI或SCI后的患者的恢复。特别是，本发明的组合物在被给至患者时优选地预防与脑损伤或脊髓损伤相关的损害，和/或减轻或缓解与所述损害相关（导致）的症状或病症、所述损害的体征甚至所述损害的原因，以及加强所述损害的恢复。因此，保护患者免受TBI或SCI（或相关病症）导致的生理影响或症状包括预防或减少损害作用的发生和/或严重程度并且治疗损害作用已经在其体内发生或开始发生的患者。本领域普通技术人员和/或正在治疗患者的受训过的临床医师可以容易地评估疗效。例如，上述用于诊断TBI或SCI的许多方法可以被用于评估使用本发明方法治疗前后的患者，以评估治疗是否成功。优选地，与未用本发明治疗的患者相比，至少有一种用于评估用本发明治疗的患者的临床或生物学评分、数值或量度显示出在严重程度或发病率方面有积极的或有益的差异。

为抑制由TBI或SCI导致生理损害和与这类损害相关的症状或病症（残疾、功能缺损），根据本发明进行的补体旁路抑制可通过直接影响补体旁路中蛋白质的表达（转录或翻译）或生物学活性来实现，或者通过直接影响某一蛋白质结合补体旁路中蛋白质的能力或直接影响某一蛋白质通过旁路途径以其它方式帮助激活补体的能力来实现。更具体地说，在一个实施方案中，蛋白质表达是指蛋白质的转录或蛋白质的翻译。因此，本发明的方法可以抑制动物体内的一种蛋白质的转录和/或翻译（例如通过给予一种抑制所述蛋白表达的试剂，以及对动物进行遗传改造以使蛋白表达下降），所述动物天然地表达该蛋白。在另一个实施方案中，补体旁路的抑制在本文中被定义为通路活性的任何可测量（可检测）的下降（即下降、下调、抑制），例如被定义为补体旁路中蛋白质的表达和/或生物活性的任何可测量的下降，并且可以包括阻断或抑制蛋白或分子在补体旁路中起作用的能力。

抑制蛋白质表达的方法包括但不限于给予一种（直接地或间接地）抑制所述蛋白表达的试剂，以及对动物进行遗传改造以使蛋白表达下降（例如本文所用的、标注为fB-/-的小鼠）。优选地，蛋白质表达可通过给予所述动物一种直接抑制蛋白质表达的试剂来抑制。这类试剂包括但不限于：特异性针对编码所述蛋白质的RNA的核酶或RNAi、与编码所述蛋白质的基因或RNA结合并抑制该蛋白质表达的DNA结合蛋白或药物、结合所述蛋白质的适体、在细胞内与所述蛋白质结合并防止表达所述蛋白的细胞分泌所述蛋白的蛋白质或药物、以及通过在高严格条件下与动物细胞内编码所述蛋白的基因杂交来减少所述蛋白表达的分离的核酸分子（例如反义核酸分子）。这类选择性抑制蛋白质表达的化合物可以用本领域技术人员已知的技术来生产。

因此，本发明的方法包括使用各种试剂（即调节性化合物），所述试剂通过直接作用于补体旁路中的蛋白质来选择性抑制补体旁路中一种或多种蛋白质的表达和/或生物活性，从而减轻动物体内TBI或SCI相关的生理损害。本发明所用的试剂包括例如蛋白质、核酸分子、抗体和作为推理性药物设计产物的化合物（即药物）。本文中这类试剂通常是指抑制剂。

根据本发明，抑制剂是任何能通过直接抑制或竞争性抑制作用来抑制蛋白质（例如补体旁路中的蛋白质）的表达和/或生物活性的试剂，并包括作用于因子B、因子D或备解素的试剂。在本发明的一个实施方案中，补体旁路抑制或补体旁路中蛋白质的抑制在本文中被定义为补体旁路中蛋白质生物活性的任何可测量（可检测）的下降（即减小、下调、抑制）。蛋白质的生物活性或生物作用是指由体内（即在蛋白质的天然的生理环境中）或体外（即在实验室的条件下）所测量或观察到的蛋白质的天然存在形式所呈现的或所执行的任何功能。例如，因子B的生物活性可以包括但不限于，结合激活的C3、溶解免疫复合物、B细胞生长因子活性和单核细胞激活。因子D的生物活性可以包括但不限于，催化切割与C3形成复合物时的因子B、催化Ba和Bb的形成。备解素的生物活性可以包括但不限于，结合并稳定与C3bBb结合的细胞或免疫复合物以及稳定C3/C5转化酶。

根据本发明，所述的蛋白质生物活性可以通过直接阻碍或抑制（减少、降低）蛋白质结合和/或激活另一种蛋白质（例如C3）的能力，从而抑制这类结合导致的下游事件来抑制。优选地，补体旁路的生物活性可通过给予一种抑制该途径中的至少一种蛋白质的试剂来抑制，这类试剂包括但不限于，与该途径中的蛋白质结合或通过抑制或阻止该途径中的蛋白质结合和/或激活另一种蛋白质的能力的方式来与所述途径中的蛋白质竞争的试剂。

抑制补体旁路中蛋白质的试剂可包括但不限于，作为推理性药物设计产物的化合物、天然产物和具有部分确定调节性质的化合物。包括所给定的蛋白质的拮抗剂在内的调节剂可以是基于蛋白质的化合物、基于碳水化合物的化合物、基于脂质的化合物、基于核酸的化合物、天然有机化合物、合成来源的有机化合物或药物、抗体（包括其抗原结合片段）或其片段。本发明中所用的一类具体试剂为补体旁路的拮抗剂，包括该途径中的蛋白质的拮抗剂。根据本发明，“拮抗剂”是指任何抑制（例如拮抗、减小、降低、阻断、逆转或改变）给定蛋白质作用的化合物。更具体地说，拮抗剂能够以与所给定蛋白质活性相关的方式起作用，从而以拮抗（例如对抗、逆转、对立于）给定蛋白质的天然作用的方式来降低或阻断给定蛋白质的生物活性。拮抗剂可以包括但不限于抗体或其抗原结合片段、蛋白质、肽、核酸（包括核酶和反义核酸）或能提供拮抗作用的药物/化合物/肽设计或选择的产物。例如，本发明包括天然蛋白质、因子B、因子D或备解素的任何拮抗剂，包括抗体拮抗剂、蛋白质/肽拮抗剂、核酸拮抗剂或小分子拮抗剂（例如小分子抑制剂）。

在一个实施方案中，本发明的调节试剂包括药物，包括能调节一种或多种补体旁路蛋白的产生和/或功能的肽、寡核苷酸、碳水化合物和/或合成有机分子。例如，这类试剂可以通过分子多样性策略（能够快速构建大的化学多样性分子文库的相关策略的组合）、自天然或合成化合物文库、特别是化学或组合文库（即序列和大小不同但具有相同结构单元的化合物的文库）或通过推理性药物设计来获得。例如，参见Maulik et al.,1997,Molecular Biotechnology:TherapeuticApplications and Strategies,Wiley-Liss,Inc.，其全文以引用的方式纳入本说明书。

在分子多样性策略中，使用生物学、酶学和/或化学方法由例如肽、寡核苷酸、碳水化合物和/或合成的有机分子合成了大的化合物文库。开发分子多样性策略的关键参数包括亚单元多样性、分子大小和文库多样性。筛选这类文库的主要目标是连续利用组合选择来获得针对预期靶标的高亲和性配体，然后通过随机或定向设计策略来优化先导分子。分子多样性的方法在上文的Maulik,et al.中有详细描述。

在推理性药物设计过程中，调节性化合物的三维结构可通过例如核磁共振（NMR）或X射线晶体学来分析。然后可以使用这一三维结构来预测潜在化合物的结构，如通过计算机建模来预测潜在的调节剂。所预测的化合物结构可被用来优化例如通过分子多样性方法产生的先导化合物。此外，所预测的化合物结构可通过例如化学合成、重组DNA技术或通过从天然来源（例如植物、动物、细菌和真菌）分离模拟表位（mimetope）来制备。

上文的Maulik,et al.,1997中公开了各种其他的基于结构的药物设计方法。Maulik等人公开了例如定向设计方法（其中用户指导自经恰当地选择的片段的片段文库来构造新型分子的过程）、随机设计（其中用户使用遗传算法或其他算法随机地突变片段及其组合，同时利用一种选择标准来评估候选配体的适合度）以及基于网格的方法（其中用户计算三维受体结构与小片段探针之间的相互作用能，然后将有利的探针位点连接起来）。

用作抑制补体旁路中蛋白质（或其表达）的试剂的分离的核酸分子为反义核酸分子、核酶、siRNA或适体。本文所用的反义核酸分子被定义为能通过在高严格条件下与编码一种蛋白的基因杂交来减少所述蛋白表达的分离的核酸分子。这类核酸分子与编码所述蛋白质的基因足够相似，以至于它能够在高严格条件下与编码所述天然蛋白的基因或RNA的编码链或互补链杂交。RNA干扰（RNAi）是一种利用双链RNA和小干扰RNA（siRNA）（在哺乳动物系统中）来抑制或沉默互补基因的表达的方法。在靶细胞中，siRNA解旋并与RNA诱导的沉默复合物（RISC）连接，然后被引导到与siRNA互补的mRNA序列处，由此RISC可切割mRNA。核酶是一段通过与靶RNA部分结合来起作用并通过在特定剪切位点切割磷酸二酯骨架来使其失活的RNA区段。适体是根据它们是否具有以高亲和性和特异性与预定的特定靶分子结合的能力来从随机组合核酸文库中选出的合成的核酸短链（通常是RNA，但也可以是DNA）。适体具有特定的三维结构，并能够区分在结构上有细微差别的化合物。

基因包括能调控由该基因编码的蛋白质的产生的调节区（例如但不限于转录、翻译或翻译后调控区）以及所述编码区本身。所述编码各种补体旁路蛋白质（包括因子B、因子D或备解素）的基因已经被鉴定，并且是本领域已知的。分离的核酸分子是已经从其天然环境中被移出的核酸分子（即已经受过人为处理），可以包括DNA、RNA或者DNA或RNA的衍生物。因此，“分离的”不能反映所述核酸分子被纯化的程度。本发明的分离的核酸分子可以是从其天然来源分离的或者是利用重组DNA技术（例如聚合酶链式反应（PCR）扩增、克隆）或化学合成产生的。

本文所用的杂交条件是指可使用核酸分子来鉴定相似核酸分子的标准杂交条件。例如，Sambrook et al.,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Labs Press,1989中公开了这类标准条件。上述Sambrook et al.的全文以引用的方式纳入本说明书（具体请参见9.31-9.62页）。此外，例如，Meinkoth et al.,1984,Anal.Biochem.138,267-284中公开了用于计算实现不同程度核苷酸错配的杂交的合适的杂交和洗涤条件的公式；上述Meinkoth et al.的全文以引用的方式纳入本说明书。

在本发明的一个优选实施方案中，为抑制由TBI或SCI导致的生理损害（及这类损害相关的症状或病症（残疾、功能缺损））而用于抑制补体旁路的蛋白的试剂为抗体或其抗原结合片段。类似地，本发明也特别优选地使用抗原结合多肽。一方面，所述抗体选择性结合所述补体旁路的蛋白质，从而抑制或阻止了所述蛋白质结合另一种通常（在天然或生理条件下）会与它相互作用的蛋白质。另一方面，所述抗体选择性结合所述蛋白质，从而抑制或阻止了所述蛋白质激活另一种通常会与它相互作用的蛋白质，虽然所述蛋白可能至少部分地与另一种蛋白质结合。为抑制由TBI或SCI导致的生理损害而在选择性抑制旁路途径中所使用的特别优选的抗体及其抗原结合片段会在下文中加以详述（例如本文所述的因子B抗体，特别是本文所详述的mAb1379抗体）。

优选地，本发明所用的抗体或其抗原结合片段与选自因子B、因子D或备解素的蛋白质结合。最优选地，本发明包括与因子B结合的抗体或其抗原结合片段，以及它用于抑制由TBI或SCI导致的生理损害的用途。本说明书详细描述并举例说明了根据本发明的选择性结合因子B并抑制补体旁路的抗体（和其抗原结合片段）。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段与这样一种蛋白质（例如因子B）的保守性结合表面或表位结合，所述蛋白质在动物物种特别是哺乳动物物种中是保守的（即所述抗体可与两种或多种不同的哺乳动物物种的蛋白质交叉反应）。具体地，本发明包括能与至少两种且优选多种不同的哺乳动物物种（包括但不限于人、非人灵长类、小鼠、大鼠、猪、马和兔）的因子B结合的抗体。优选地，本发明包括能与人和至少另一种动物物种、优选至少另一种哺乳动物物种（包括但不限于非人灵长类、小鼠、大鼠、猪、马和兔）的因子B结合的抗体。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与因子B的第三短同源重复序列（SCR）结合。在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与阻止因子D切割因子B的因子B的一个区结合。在一个实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一个实施方案中，所述抗体为本文中被称为1379的抗体（即所述抗体是由相同编号的杂交瘤细胞系产生的，ATCC保藏号为PTA-6230）或其抗原结合片段。

按照国际承认的用于专利程序的微生物保藏的布达佩斯条约的规定，本文中称为1379的杂交瘤（或mAb1379）于2004年9月21日保藏于美国典型菌种保藏中心（ATCC，位于弗吉尼亚20110-2209马纳萨斯大学大道10801），ATCC保藏号为PTA-6230。

根据本发明，蛋白质、蛋白质的一部分（例如片段、部分、结构域等）或者蛋白质的区域或表位的最小的尺寸是足够作为用来生成抗体的表位或保守性结合表面或作为体外测定法的靶标的尺寸。在一个实施方案中，本发明的蛋白质的长度为至少约4、5、6、7或8个氨基酸（例如，适于抗体表位或适于作为测定中可检测的肽），或长度为至少约25个氨基酸、或长度为至少约50个氨基酸、或长度为至少约100个氨基酸、或长度为至少约150个氨基酸等等，长度为4个氨基酸起直至蛋白质或其一部分的全部长度或更长范围内的任何长度，包括所有整数形式的长度（例如8、9、10…25、26…500、501…）。

编码人因子B和其它补体蛋白质的基因和编码区的核苷酸序列以及这类蛋白质的氨基酸序列在本领域中是众所周知的。例如编码人因子B和其它补体蛋白的基因在NCBI数据库中的登录号为NG_000013。因子B的编码序列在NCBI数据库中的登录号为NM_001710，因子B前蛋白原的氨基酸序列在NCBI数据库中的登录号为NP_001701或P00751。在NCBI数据库中的登录号为P00751的氨基酸序列在本文中被表示为SEQ ID NO:1，它是人因子B前蛋白原序列。其它动物物种的序列在本领域中也是已知的。通过比较发现，在小鼠因子B序列（例如参见NCBI数据库登录号P04186，在本文中被表示为SEQ ID NO:6）中，第三SCR结构域位于该761个氨基酸的前蛋白的160-217位，且成熟的鼠类因子B蛋白涵盖SEQ ID NO:6的23-761位。人因子D的编码序列在NCBI数据库中的登录号为NM_001928.2，人因子D前蛋白原的氨基酸序列在NCBI数据库中的登录号为NP_001919（在本文中被表示为SEQ ID NO:7）。人备解素的编码序列在NCBI数据库中的登录号为NM_002621.1，人备解素的氨基酸序列在NCBI数据库中的登录号为NP_002612（在本文中被表示为SEQ ID NO:8）。

由SEQ ID NO:1所代表的人因子B前蛋白为764个氨基酸的蛋白质，信号肽涵盖1-25位的氨基酸。因子B的成熟链对应于SEQ ID NO:1的26-764位，在本文中被表示为SEQ ID NO:2。人因子B的三个SCR区域在本文中被表示为SEQ ID NO:3（SCR1，也称为Sushi1，涵盖了SEQ ID NO:1的约35-约100位或SEQ ID NO:2的约5-约75位），SEQ ID NO:4（SCR2，也称为Sushi2，涵盖了SEQ ID NO:1的约101-约160位或SEQ ID NO:2的约76-约135位）和SEQ ID NO:5（SCR3，也称为Sushi3，涵盖了SEQ ID NO:1的约163-约220位或SEQ ID NO:2的约138-约195位）。

基于使用Hourcade,1995,J.Biol.Chem所述的片段的因子B的表位定位，在一个优选的实施方案中，本发明所用的抗因子B抗体优选地结合所述第三SCR结构域的一部分中的或含有所述第三SCR结构域的一部分的表位或保守性结合表面，更优选地，结合至少包括含有成熟因子B蛋白（SEQ ID NO:2）的约Tyr139位至约Ser185位的序列部分的人因子B的表位，结合至少包括含有成熟因子B蛋白（SEQID NO:2）的约Tyr139位至约Ser141位的序列部分的人因子B的表位，结合至少包括含有成熟因子B蛋白（SEQ ID NO:2）的约Glu182位至约Ser185位的序列部分的人因子B的表位，结合至少包括人因子B（SEQ ID NO:2）的一部分的因子B的表位，所述部分包括下列位置，或它们在非人因子B序列中的等效位置：Tyr139、Cys140、Ser141、Glu182、Gly184或Ser185；或结合至少包括非人动物物种中等效位置的一部分的因子B的表位。本领域技术人员可以容易地将人因子B序列与另一种动物物种的因子B序列进行比对，并确定SCR区域的位置和对应于上述氨基酸位置的第三SCR区域的具体部分。例如可以使用Tatusova and Madden,（1999）,"Blast2sequences-a new tool forcomparing protein and nucleotide sequences",FEMS Microbiol Lett.174:247-250中所述的BLAST2序列比对法对两条具体的序列进行比对，所述文献的全文以引用的方式纳入本说明书。

基于对本发明中所用的示例抗体的其他表位建模和表位定位，在另一个优选的实施方案中，本发明中所用的抗因子B抗体优选地结合因子B第三SCR结构域的部分或一部分中或含有因子B第三SCR结构域的部分或一部分的表位（保守性结合表面），所述部分或一部分包括SEQ ID NO:2的一个或多个下列氨基酸位置或它们在非人因子B序列中的等效位置：A137、Y139、S141、E182、S185、T189、E190和S192。在本发明的一个方面中，所述表位在因子B第三SCR结构域的部分或一部分中或包含因子B第三SCR结构域的部分或一部分，所述部分或一部分包括全部或基本上全部（至少5、6或7个）下列的SEQ ID NO:2的氨基酸位置或者它们在非人因子B序列中的等效位置：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。又一方面，由本发明中所用的抗因子B抗体识别的表位在因子B第三SCR结构域的部分或一部分中或包含因子B第三SCR结构域的部分或一部分，所述部分或一部分由下列的SEQ ID NO:2的氨基酸位置或者它们在非人因子B序列中的等效位置组成：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。

在一个实施方案中，由本发明中所用的因子B抗体识别的表位也可以被更具体地定义为位于因子B第三SCR结构域的一部分的三维结构中的非线性表位。包含所述表位的部分为由SEQ ID NO:2的Ala137-Ser192基本上全部（例如，至少约90%）氨基酸位置或非人因子B序列中的等效位置限定的因子B的三维结构，条件是这些序列是按照它们在天然全长因子B序列中的构象排列的。例如，图4和图5示出了因子B的三维结构模型，该模型示出了针对mAb1379的表位。本文所用的蛋白质“三维结构”或“三级结构”是指蛋白质组成的三维排列。该术语是本领域技术人员公知的。本文所用的术语“模型”是指蛋白质、多肽或肽的三维结构在有形介质中的表现形式。例如，模型可以是三维结构在电子文件中、电脑屏幕上或纸上（即在二维介质上）的表现形式和/或为球棍图。

根据本发明，在提及抗体时，给定蛋白质或肽或其他分子的“表位”通常被定义为将与抗体或其抗原结合片段结合并且将用来产生抗体的较大分子的一部分或其上的某一位点。术语“表位”可以与术语给定蛋白质或抗原的“抗原决定簇”、“抗体结合位点”或“保守性结合表面”互换使用。更具体地说，表位可以由参与抗体结合的氨基酸残基定义，也可以由它们的三维空间构象（例如构象表位或保守性结合表面）来定义。表位可以包含于约4-6个氨基酸残基的小肽中，或者可以包含于蛋白质的较大区段中，并且当提及表位（特别是提及抗体结合表位）的三维结构时，所述表位不必包含连续的氨基酸残基。抗体结合表位通常是构象表位而不是序列表位（即线性表位），换言之，是由在抗体所结合的蛋白质或多肽表面上按三维排列的氨基酸残基所限定的表位。如上所述，所述构象表位不含连续的氨基酸残基序列，相反，所述残基在一级蛋白质序列中还可能是被远远隔开的，并且这些残基通过蛋白质在三维空间按天然构象折叠被汇集在一起以形成结合表面。由mAb1379识别的表位为构象表位而不是线性表位。

本领域技术人员可以使用已知技术来鉴定和/或装配构象表位和/或序列表位，所述已知技术包括突变分析（例如定点诱变），预防蛋白水解性降解（蛋白质足迹法），使用例如合成肽和肽扫描、BIACORE或ELISA进行的模拟表位分析，抗体竞争性定位，组合肽文库筛选，基质辅助激光解吸/电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱或三维建模（例如使用任何适合的软件程序，包括但不限于MOLSCRIPT2.0(AvatarSoftware AB,Heleneborgsgatan21C,SE-11731Stockholm,Sweden),图像显示程序O(Jones et.al.,Acta Crystallography,vol.A47,p.110,1991),图像显示程序GRASP或图像显示程序INSIGHT）。例如，技术人员可以使用分子置换或其他技术和相关蛋白质的已知三维结构来对因子B的三维结构建模并且预测会结合该结构的抗体的构象表位。事实上，技术人员可以使用这些技术中的一种或任何组合来定义抗体结合表位。图4和图5示出了使用三维建模以及模拟表位分析和突变分析的信息来鉴定本发明中所用的因子B抗体的表位。

本文所用的术语“选择性结合”是指一种蛋白质与另一种蛋白质（例如抗体、其片段或抗原结合配偶体）的特异性结合，其中按任何标准测定法（免疫测定法）所测定的结合水平在统计学上明显高于该测定法的背景对照。例如，当进行免疫测定时，对照通常包括仅含有抗体或抗原结合片段（即无抗原）的反应孔/管，其中在无抗原的情况下抗体或其抗原结合片段的反应活性（例如与反应孔非特异性的结合）的量被认为是背景。结合可以使用本领域中的各种标准方法来测量，包括但不限于：蛋白质印迹、免疫印迹、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）、免疫沉淀、表面等离子体共振、化学发光、荧光偏振、磷光、免疫组织化学分析、基质辅助激光解吸/电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱、微细胞计量术、微阵列、显微术、荧光激活细胞分类术（FACS）和流式细胞术。

本发明的一个实施方案包括使用抗体或其抗原结合片段来抑制TBI或SCI相关的生理损害或作用，所述抗体或其抗原结合片段为因子B与抗因子B抗体（例如单克隆抗体1379）结合的竞争性抑制剂。根据本发明，因子B与本发明的抗因子B抗体结合的竞争性抑制剂为这样一种抑制剂（例如另一种抗体或其抗原结合片段或多肽）：它与本发明的已知的抗因子B抗体（例如mAb1379）在相同或相似的表位与因子B结合，从而使得所述已知的抗因子B抗体与因子B的结合被抑制。竞争性抑制剂可以与所述靶标（例如因子B）结合，与所述靶标的亲和性要高于抗因子B抗体。可以以与本文所述的抗因子B抗体1379相似的方式（例如抑制补体旁路、抑制由TBI或SCI导致的生理损害或影响）来使用竞争性抑制剂。例如，本发明的一个实施方案涉及使用特异性结合因子B的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段竞争性抑制mAb1379与因子B的特异性结合，并且其中当所述抗体或其片段与因子B结合时，补体旁路受到抑制或者mAb1379抑制补体旁路的能力受到抑制。另一个实施方案涉及使用特异性结合因子B的分离的抗体或其片段，其中所述分离的抗体或其片段竞争性抑制另一种特异性结合因子B的抗体或其片段，并且其中所述另一种抗体或其片段结合因子B的第三SCR结构域。

竞争测定法可以使用本领域的标准技术来进行（例如竞争性ELISA或其他结合测定法）。例如，竞争性抑制剂可以根据它们抑制因子B与已知的标记过的抗因子B抗体（例如mAb1379）结合的能力来检测和量化。上文公开号为2005-0260198-A1的美国专利申请和公开号为WO2005/077417的PCT申请中描述了存在人因子B的情况下的抗体-抗体竞争测定。上文公开号为2005-0260198-A1的美国专利申请和公开号为WO2005/077417的PCT申请中也描述了因子B与抗因子B1379结合的竞争性抑制剂。

根据本发明，抗体的特征在于它们包含免疫球蛋白结构域，因而它们是蛋白质的免疫球蛋白超家族的成员。一般来讲，抗体分子包括两类链。一类链是指重链即H链，另一类链是指轻链即L链。这两种链以等摩尔比存在，每个抗体分子通常具有两条H链和两条L链。所述两条H链是由二硫键连接起来的，且每条H链通过二硫键与一条L链连接。L链只有两种类型，lambda（λ）链和kappa（κ）链。相比而言，H链有五类主要的同种型。这五个类型包括免疫球蛋白M（IgM或μ）、免疫球蛋白D（IgD或δ）、免疫球蛋白G（IgG或λ）、免疫球蛋白A（IgA或α）和免疫球蛋白E（IgE或ε）。这些同种型之间的区别特征根据免疫球蛋白的恒定域来界定，这在下文中有详细讨论。人免疫球蛋白分子包括九类同种型：IgM、IgD、IgE、IgG的四个亚类（包括IgG1(γ1)、IgG2(γ2)、IgG3(γ3)和IgG4(γ4)）以及IgA的两个亚类（包括IgA1(α1)和IgA2(α2)）。在人体内，IgG3亚类和IgM是最有效的补体激活剂（经典补体系统），而IgG1亚类是经典补体系统的中度或低度激活剂，其次是IgG2亚类。IgG4亚类不会激活所述补体系统（经典或旁路途径）。已知能激活补体旁路系统的唯一的人免疫球蛋白同种型是IgA。在小鼠体内，IgG亚类为IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。鼠类IgG1不会激活补体，而IgG2a、IgG2b和IgG3是补体激活剂。

免疫球蛋白分子的每条H或L链包括两个区，称为L链可变域（V_L域）和L链恒定域（C_L域）以及H链可变域（V_H域）和H链恒定域（C_H域）。完整的C_H域包括三个亚域（CH1、CH2、CH3）和一个铰链区。一条H链和一条L链能够一起形成具有免疫球蛋白可变区的免疫球蛋白分子的一条臂。完整的免疫球蛋白分子包括两条相连接（例如二硫键连接）的臂。因此，整个免疫球蛋白的每条臂均包括一个V_H+L区和一个C_H+L区。本文所用的术语“可变区”或“V区”是指V_H+L区（也称为Fv片段）、V_L区或V_H区。本文中所用的术语“恒定区”或“C区”是指C_H+L区、C_L区或C_H区。

用蛋白酶限制性消化免疫球蛋白可以产生两个片段。抗原结合片段被称为Fab、Fab’或F(ab’)₂片段。缺乏抗原结合能力的片段被称为Fc片段。Fab片段包括免疫球蛋白分子的一条臂，包括与V_H区和部分C_H区（CH1域）配对的L链（V_L+C_L域）。Fab’片段相当于具有与CH1域相连的铰链区的一部分的Fab片段。F(ab’)₂片段相当于两个通常在铰链区通过二硫键彼此共价相连的Fab’片段。

C_H域定义了免疫球蛋白的同种型并赋予了各同种型不同的功能特征。例如，μ恒定区能使IgM分子形成五聚体，α恒定区能使IgA形成二聚体。

免疫球蛋白分子的抗原特异性是由可变区即V区的氨基酸序列赋予的。因此，根据其抗原特异性，不同免疫球蛋白分子的V区可以明显不同。V区的某些部分比其他部分更加保守，被称为框架区（FW区）。相比而言，V区的某些部分高度可变，被称为超变区。当V_L域和V_H域在免疫球蛋白分子中配对时，每个结构域的超变区连接起来形成超变环，所述超变环形成抗原结合位点。因此，超变环决定了免疫球蛋白的特异性，并且因为其表面与抗原互补而被称为互补决定区（CDR）。

V区的更进一步的可变性是由编码免疫球蛋白V区的基因区段的组合可变性赋予的。免疫球蛋白基因包括多个胚系基因区段，所述胚系基因区段发生体细胞性重排以形成编码免疫球蛋白分子的重排的免疫球蛋白基因。V_L区是由L链V基因区段和J基因区段（连接区段）编码的。V_H区是由H链V基因区段、D基因区段（多样性区段）和J基因区段（连接区段）编码的。

L链和H链的V基因区段都含有基本的氨基酸序列可变性的三个区域。这类区域被分别称为L链CDR1、CDR2和CDR3，以及H链CDR1、CDR2和CDR3。不同V_L区之间的L链CDR1的长度会发生显著变化。例如，CDR1的长度可以在约7个氨基酸至约17个氨基酸之间变化。相比之下，不同V_L区之间的L链CDR2和CDR3的长度通常是不变的。不同V_H区之间的H链CDR3的长度会发生显著变化。例如，CDR3的长度可以在约1个氨基酸至约20个氨基酸之间变化。每个H和L链CDR区的侧翼均为FW区。

免疫球蛋白分子的其他功能方面包括免疫球蛋白分子的效价、免疫球蛋白分子的亲和力和免疫球蛋白分子的亲合力。本文所用的亲和力是指在免疫球蛋白分子上的单个位点处免疫球蛋白分子与抗原结合（即单价Fab片段与单价抗原结合）的强度。亲和力不同于亲合力，亲合力是指免疫球蛋白与抗原结合强度的总和。免疫球蛋白结合的亲和力可以用本领域的标准技术来测量，例如竞争性结合技术、平衡透析或BIAcore法。本文所用的效价是指每个免疫球蛋白分子的不同的抗原结合位点的数目（即每个抗体分子的抗原结合片段的抗原结合位点的数目）。例如，单价免疫球蛋白分子一次仅结合一个抗原，而二价免疫球蛋白分子一次能够结合两个或多个抗原，以此类推。本文包括选择性结合补体旁路中的蛋白的单价和二价抗体。

在一个实施方案中，所述抗体是双特异或多特异抗体。双特异性（或多特异性）抗体能够结合两个（或多个）抗原，如同二价（或多价）抗体一样，但是此时所述抗原是不同的抗原（即所述抗体具有双特异性或更多重的特异性）。例如，根据本发明的、选择性结合补体旁路中的蛋白的抗体（例如本文所述的抗因子B抗体）可以被构建为双特异抗体，其中第二抗原结合特异性是针对预期靶标的。因此本发明所包含的双特异抗体包括具有以下部分的抗体：（a）与补体旁路中的蛋白（例如因子B）结合的第一部分（例如第一个抗原结合部分）；和（b）与细胞表达的细胞表面分子结合的第二部分。在该实施方案中，所述第二部分可以与任何细胞表面分子结合。一种优选的细胞表面分子为受体或配体，这样所述抗体可以靶向特定类型的细胞或组织和/或靶向给予了该抗体的动物体内的特定位点。在一个实施方案中，所述第二抗原结合特异性是针对补体受体的。特别优选的补体受体包括但不限于2型补体受体（CR2）。例如美国专利6,820,011描述了选择性结合CR2并因此被用于本发明的该实施方案的抗体。

在一个实施方案中，本发明的抗体包括人源化抗体。人源化抗体是具有来自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，所述分子的其余免疫球蛋白来源部分来自人免疫球蛋白。所述抗原结合位点可以包括融合到人恒定域上的完整的可变区，或仅包括移植到人可变域中的适当的人框架区上的互补决定区（CDR）。人源化抗体可以通过例如下述的方法来制备：将所述抗体可变域建模，并且利用基因工程技术（例如，如下所述的CDR移植）来制备所述抗体。关于各种用于人源化抗体生产的技术的说明请查阅例如Morrison et al.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-55;Whittle et al.(1987)Prot.Eng.1:499-505;Co et al.(1990)J.Immunol.148:1149-1154;Co et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:2869-2873;Carter et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.89:4285-4289;Routledge et al.(1991)Eur.J.Immunol.21:2717-2725和公开号为WO91/09967、WO91/09968和WO92/113831的PCT申请。

本发明的分离的抗体可包括含这类抗体的血清或已经纯化到各种程度的抗体。本发明的全部抗体都可以是多克隆或单克隆的。或者，本发明也可以采用全部抗体的功能等价物，例如截短或缺失了一个或多个抗体结构域的抗原结合片段（例如Fv、Fab、Fab’或F(ab)2片段）；以及遗传工程抗体或其抗原结合片段，包括单链抗体、人源化抗体（如上所述）、与不只一个表位结合的抗体（例如双特异抗体）或与一个或多个不同抗原结合的抗体（例如双特异或多特异抗体）。

本发明的遗传工程抗体包括那些通过标准的重组DNA技术制备抗体，所述重组DNA技术包括对编码抗体可变区和/或恒定区的DNA的操作和重表达。具体的实例包括嵌合抗体和CDR移植抗体（及其抗原结合片段），在嵌合抗体中，与抗体的其余部分相比，所述抗体的V_H和/或V_L域来自于不同来源，在CDR移植抗体中，至少一个CDR序列和任选地至少一个可变区框架氨基酸来自一个来源，而可变区和恒定区（视情况而定）的其余部分来自一个不同的来源。例如，欧洲专利申请：EP-A0194276、EP-A0239400、EP-A0451216和EP-A0460617中描述了嵌合抗体和CDR移植抗体的构建。

在一个实施方案中，根据本发明制备的嵌合抗体包括与补体旁路的蛋白质（例如因子B）结合的抗体可变域以及与这些结构域融合、作为第二靶向部分的蛋白质。例如，所述靶向部分可以包括与所要靶向的细胞或组织相关或与动物体内的特定系统相关的蛋白质。例如，所述靶向部分可以是选择素或补体受体的一部分。本发明这一方面所用的优选的补体受体包括2型补体受体（CR2）。美国专利No.6,820,011详细描述了CR2及其部分在融合蛋白或嵌合蛋白中的用途（例如，作为送递系统）。

通常，在抗体制备中，将适合的实验动物（例如但不限于兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、小鼠、大鼠或鸡）暴露于所需抗体所针对的抗原。通常，用注射到动物体内的有效量的抗原来免疫动物。有效量的抗原是指用于诱导所述动物生成抗体所需的量。然后在一段预定的时间内，允许所述动物的免疫系统进行应答。重复免疫接种过程直至发现所述免疫系统产生针对所述抗原的抗体。为获得抗原特异性多克隆抗体，从含有所需抗体的动物身上采集血清（或者如果是鸡，可以从卵采集抗体）。这类血清可被用作试剂。例如，可以通过用硫酸铵处理所述血清来从血清（或卵）中进一步纯化多克隆抗体。

单克隆抗体可以按照Kohler and Milstein(Nature256:495-497,1975)的方法来制备。例如，从免疫过的动物的脾（或任何适合的组织）回收B淋巴细胞，然后将其与骨髓瘤细胞融合以获得能够在适合的培养基中持续生长的杂交瘤细胞群。产生所需抗体的杂交瘤可通过测试由杂交瘤产生的抗体与所需抗原结合的能力来选择。

制备本发明的抗体的优选方法包括：（a）给予动物有效量的蛋白质或肽（例如因子B蛋白或包括其结构域的肽）以产生抗体，和（b）回收抗体。在另一种方法中，本发明的抗体是通过重组生产的。例如，一旦获得表达本发明的抗体的细胞系（例如杂交瘤），就可能从中克隆cDNA并鉴定编码所需抗体的可变区基因，包括编码CDR的序列。由此，可通过制备一种或多种复制表达载体并且转化/转染适合的宿主细胞来制备本发明的抗体和抗原结合片段，在所述宿主细胞中将会进行抗体生产，所述复制表达载体至少包含编码抗体重链或轻链可变域的DNA序列和任选的其它编码所需重链或轻链的其余部分的DNA序列。适合的表达宿主包括细菌（例如大肠埃希氏（E.coli）菌株）、真菌（特别是酵母，例如毕赤酵母（Pichia）、酵母（Saccharomyces）或克鲁维酵母（Kluyveromyces）属的成员）和哺乳动物细胞系（例如非生产型骨髓瘤细胞系，如小鼠NSO系或CHO细胞）。为了获得有效的转录和翻译，每个载体中的DNA序列都应该包括适当的调节序列，特别是可操作地连接所述可变域序列的前导序列和启动子。以这种方式产生抗体的具体的方法通常是众所周知的并且是被常规使用的。例如，Maniatis et al.(Molecular Cloning,Cold Spring Harbor Laboratory,New York,1989)描述了基本的分子生物学方法；按照Sanger et al.(PNAS74,5463,(1977))和Amersham国际plc测序手册中所述内容进行DNA测序；按照Kramer et al.(Nucl.Acids Res.12,9441,(1984))和Anglian Biotechnology Ltd.的手册中的方法进行定向诱变。此外，有许多包括专利说明书在内的出版物，它们详细描述了适合通过操作DNA、构建表达载体和转化合适的细胞来制备抗体的技术，例如，如Mountain A和Adair,J R在Biotechnology and Genetic EngineeringReviews(ed.Tombs,M P,10,Chapter1,1992,Intercept,Andover,UK)中以及前述欧洲专利申请中所综述的那样。

采用例如噬菌体展示技术（参见例如US5969108、US5565332、US5871907、US5858657）的替代方法或US5627052所选择的淋巴细胞抗体法也可被用于生产本发明的抗体和/或抗原片段，这些对于本领域技术人员来说是极其显而易见的。

本发明也涉及非抗体多肽的用途，所述非抗体多肽有时被称为抗原结合配偶体或抗原结合多肽，它被设计来选择性结合本发明的蛋白质并且中和或抑制该蛋白。Beste et al.(Proc.Natl.Acad.Sci.96:1898-1903,1999)中给出了具有规定的配体特异性的这类多肽设计的实例，其全文以引用的方式纳入本说明书。

本发明也包括用于减轻TBI或SCI相关的生理损害的制剂或组合物。所述制剂包括：（a）任何一种或多种本文所述的补体旁路的抑制剂（例如本文所述的抗因子B抗体）；和（b）至少一种可药用的载体。

在一个实施方案中，所述制剂或化合物可以包括一种或多种附加试剂，例如另一种适合于治疗至少一种TBI的症状或TBI相关生理损害的试剂（例如渗透性药物、镇静药、镇痛药、肌肉松弛药、巴比妥酸盐等）。此外，可以将所述制剂与另一种用于治疗或改善TBI相关损害的疗法或方案共同给予患者。这类疗法或方案包括但不限于：通过手术清除颅内血肿来减少大面积损伤，用渗透性药物（例如甘露醇）减轻脑肿胀，通过脑室内导管来治疗性地排出脑脊液（CSF），实现并维持足够的气体交换和循环稳定性，预防低氧血和高碳酸血，重复进行CT扫描以检测延缓的继发性颅内病理状态，深度镇静和镇痛以避免应激和疼痛，实现并维持最适的CPP（>70mmHg）和脑氧平衡，避免体温过高（<38℃），预防高血糖症和低钠血症，防止常规进行的头部抬高，预防应激性溃疡并维持肠粘膜完整性，预防并发因素（例如肺炎或脑膜炎），颅内压（ICP）靶向疗法（例如深度镇静、深度镇痛、深度肌肉放松，通过脑室内导管来排出CSF，在某些情况下适度增加通气，渗透疗法，适度降温（±34℃）和/或巴比妥酸盐昏迷）和/或用气体（CO）进行的神经炎症弱化。各种用于TBI的疗法是本领域公知的并且例如在Royo et al.,2003,Current Opin.Pharmacol.3:27-32;Dutton and McCunn,2003,Current Opin.Crit.Care9:503-509;Elf et al.,2003,Eur.J.Trauma29:74-80;Ghajar et al.,2000,Lancet356:923-929中有所描述。

在另一个实施方案中，所述制剂或组合物可以包括一种或多种附加试剂，例如另一种适合于治疗至少一种SCI的症状或SCI相关生理损害的试剂（例如类固醇，如甲泼尼龙）。此外，可以将所述制剂与另一种用于治疗或改善SCI相关损害的疗法或方案共同给予患者。这类疗法或方案包括但不限于：脊柱固定、减压手术、手术稳定椎骨、手术复位椎骨、牵引。各种用于SCI的疗法是本领域公知的并且在例如Ramer et al.,2005,Spinal Cord43(3):134-61中有所描述。

根据本发明，“可药用载体”包括可药用的赋形剂和/或可药用的送递载体，它们适用于将制剂或组合物给予到适合的体内位点。适合的体内位点优选地是其中的补体旁路可被抑制的任何位点，但是在一个优选的实施方案中，所述适合的体内位点在患者的脑组织中，所述患者具有TBI或SCI相关生理损害，或有发展出TBI或SCI相关生理损害的风险。优选的可药用载体能将本发明的制剂中所用的试剂维持于这样一种形式，即当所述试剂到达患者体内的靶位点时，所述试剂能够作用于其靶标上（例如作为补体旁路组成部分的蛋白质），优选地对所述患者产生疗效。

本发明的适合的赋形剂包括将运输或帮助运输组合物到细胞或组织处，但不是特异性靶向到该细胞或组织处的赋形剂或配方（本文中也称为非靶向载体）。可药用赋形剂的实例包括但不限于水、磷酸盐缓冲盐水、Ringer’s溶液、葡萄糖溶液、含血清的溶液、Hank’s溶液、其他水性生理平衡溶液、油类、酯类和二醇类。水性载体可以包含例如通过增强化学稳定性和等渗性来接近接受者的生理状况所需的适合的辅助物质。适合辅助物质包括，例如乙酸钠、氯化钠、乳酸钠、氯化钾、氯化钙和其它用于产生磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液和碳酸氢盐缓冲液的物质。辅助物质也可以包括防腐剂例如硫柳汞、间甲酚或邻甲酚、甲醛和苯甲醇（benzol alcohol）。本发明的制剂可以通过常规方法来灭菌并且/或者可以进行冷冻干燥。

一类可药用载体包括一种能将本发明的组合物缓慢释放到动物体内的控释制剂。本文所用的控释制剂包括置于控释载体中的本发明的试剂。适合控释载体包括但不限于生物相容性聚合物、其他的聚合基质、胶囊、微胶囊、微粒、推注制品（bolus preparation）、渗透泵、扩散装置、脂质体、脂质球（liposphere）和透皮给药系统。其它适合的载体包括能结合或掺有延长所要送递的试剂的半衰期的试剂的任何载体。这类载体可以包括任何适合的蛋白质载体或甚至是当送递到体内时能延长蛋白质半衰期的融合蛋白区段。适合的送递载体在上文中已经描述过，包括但不限于脂质体、病毒载体或其它送递载体，包括核酶。天然含脂质的送递载体包括细胞和细胞膜。人工的含脂质的送递载体包括脂质体和微团。可以对本发明的送递载体进行修饰以使其靶向患者体内特定的位点，从而使抑制剂靶向该位点并在该位点利用抑制剂。适合的修饰包括对所述送递载体的脂质部分的化学分子进行操作和/或在所述载体中引入能特异性地将送递载体靶向优选位点（例如优选的细胞类型）的靶向试剂。其他适合的送递载体包括金颗粒、聚-L-赖氨酸/DNA-分子缀合物和人工染色体。

能够打靶的可药用载体被称为“靶向送递载体”。本发明的靶向送递载体能够将制剂（包括抑制剂）送递到患者体内的靶位点。“靶位点”是指患者体内的所要送递治疗制剂的位点。例如，靶位点可以是通过直接注射或使用脂质体、病毒载体或其它送递载体（包括核酶）送递所靶向的任何细胞或组织。可以对本发明的送递载体进行修饰以使其靶向动物体内特定的位点，从而使核酸分子靶向该位点并在该位点利用核酸分子。适合的修饰包括对所述送递载体的脂质部分的化学分子进行操作和/或在所述载体中引入能特异性地使送递载体靶向优选位点例如优选的细胞或组织类型（例如靶向脑或中枢神经系统）的化合物。具体地，靶向是指通过载体中的化合物与细胞表面分子之间的相互作用使所述送递载体与特定的细胞结合。适合的靶向性化合物包括能够在特定位点选择性（即特异性）地结合另一种分子的配体。这类配体的实例包括抗体、抗原、受体和受体配体。特别有用的实例包括任何与补体途径相关的配体（例如CR2、C3、C3d、C3dg、iC3b、C3b）或任何与所要治疗的动物的体内细胞类型、组织类型或位点相关的配体（例如选择素）。

对所述送递载体的脂质部分的化学分子进行操作可以调整所述送递载体的胞外或胞内靶向性。例如，可以向脂质体的脂质配方中加入能改变该脂质体脂双层电荷的化学物质，使得所述脂质体能与具有特定电荷特征的特定细胞融合。在一个实施方案中，靶向送递载体可以是使得化合物可以穿过血脑屏障的制剂。

一种可用于各种给药途径和试剂的送递载体为脂质体。脂质体能够在动物体内维持稳定达足够长的时间，以将本发明所述的核酸分子送递到动物体内的优选位点。本发明的脂质体含有能将核酸分子或其他化合物送递到动物体内特定或选定位点的脂质组合物。根据本发明的脂质体包括能够与靶细胞的质膜融合以将核酸分子送递到细胞中的脂质组合物。本发明使用的适合的脂质体包括任何脂质体。本发明优选的脂质体包括那些通常用于例如本领域技术人员已知的基因送递方法的脂质体。更优选的脂质体包括含有聚阳离子脂质组合物的脂质体和/或具有与聚乙二醇缀合的胆固醇骨架的脂质体。可以利用本领域的标准方法将脂质体与本发明的核酸分子或抑制剂混合。

另一种送递载体包括病毒载体。病毒载体含有本发明的方法中所用的分离的核酸分子，其中所述核酸分子被包裹于能使DNA进入细胞的病毒外壳中。可以使用许多病毒载体，包括但不限于基于甲病毒、痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、慢病毒、腺伴随病毒和反转录病毒的病毒载体。

本发明的试剂和制剂可以被给予到任何动物或患者，且优选给予到人。根据本发明，试剂或制剂的给药可用来抑制TBI或SCI相关生理损害的任何症状，或者类似的或相关的病症。适合于本发明方法的候选患者包括但不限于具有由于损伤（包括外伤性损伤）或疾病导致的对脑或脊髓的生理损害及与该损害相关的病症的患者，或者有发展出（例如可能发展出或预计会发展出）这类损害或病症风险的患者。

根据本发明，本领域技术人员可以确定给予试剂或含所述试剂的组合物的可接受的方案，包括给药途径和所要给予动物的试剂的有效量。本发明的试剂或组合物可以在体内或活体外给药。适合的体内给药途径包括但不限于口、鼻、吸入、局部、气管内、透皮、直肠、脑（例如颅内）、脊柱（例如脊柱内或脊髓的硬膜外隙）和肠胃外途径。优选的肠胃外途径可以包括但不限于皮下、真皮内、静脉内、肌内和腹膜内途径。优选的局部途径包括经气雾剂（即喷雾）吸入或局部表面给予到动物皮肤上。优选地，试剂是通过全身途径（例如腹膜内、静脉内）给予的，特别优选静脉内给药，或者是通过脑、脊髓或脊髓硬膜外隙给予的。对于外伤性脑损伤，优选通过静脉内给药给予或给予到脑。对于脊髓损伤，优选通过静脉内给药、脊髓给药给予或者给予到脊髓的硬膜外隙。活体外是指部分给药步骤是在患者体外进行的。

将试剂和组合物给予到脑和中枢神经系统的技术包括但不限于静脉内给药、腹膜内给药、通过开放血脑屏障的动脉内送递、利用对流增强型送递方法将药物持续注入脑中、植入、鞘内输注、脑室内给药、间质给药和脊柱内给药。静脉内、腹膜内、肌内和脊柱内给药可利用本领域中的标准方法来进行。气雾剂（吸入）送递可利用本领域中的标准方法来进行（例如，参见Stribling et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA189:11277-11281,1992，其全文以引用的方式纳入本说明书）。适用于气雾剂送递的载体如上所述。用于送递雾化制剂的装置包括但不限于压力计量吸入器（MDI）、干粉吸入器（DPI）和计量溶液装置（MSI），并且包括喷雾器和吸入器在内的装置。可通过将本发明的治疗组合物与能够经受住动物消化道内消化酶降解的载体混合来进行口服给药。这类载体的实例包括塑料胶囊或片剂，例如本领域已知的那些载体。直接注射技术特别适用于将重组核酸分子给予到可通过外科手术达到的细胞或组织，特别是在身体表面或接近身体表面。在靶细胞区域的附近给予组合物是指将所述组合物注射到距靶细胞或组织几厘米（优选几毫米）处。

本发明所公开的各种给药方法和送递载体已经被证明在将核酸分子送递到靶细胞或组织时是有效的，藉此所述核酸分子可转染所述细胞并且被表达。在许多研究中，异源基因的成功送递和表达是通过在优选的细胞类型中和/或使用本发明的优选的送递载体和给药途径来实现的。可以通过给予编码核酸序列的病毒载体来将很多核酸序列送递到各种靶组织中。（例如，参见各种反转录病毒的实例；Blaese et al.,1995,Science270:475-480;Bordignon et al.,1995,Science270:470-475）、鼻内给药（CFTR-腺伴随病毒载体）、冠状动脉内给药（参见上文的腺病毒载体和日本血凝病毒）、静脉内给药（腺伴随病毒载体；Koeberl et al.,1997,Proc Natl Acad Sci USA94:1426-1431）。Millecamps等人报道了利用位于转基因的启动子（磷酸甘油酸启动子）上游的神经元限制性增强子元件来将腺病毒载体靶向到神经元。可分别通过肌内和脑内给药将这类载体给予小鼠和大鼠，由此实现成功的神经元特异性转染和转基因的体内表达（Millecamps et al.,1999,Nat.Biotechnol.17:865-869）。Bennett等人报导了使用腺伴随病毒载体通过视网膜下注射将基因送递到神经视网膜并在体内表达超过一年（Bennett,1999，同上文）。

给予动物的抑制剂的合适单次剂量是当在适合的时间段内进行一次或多次给药时，能够在动物体内减轻或预防由TBI或SCI导致的生理损害的至少一种症状的剂量。优选的试剂（包括本文所述的方法中使用的蛋白质、小分子和抗体）单次剂量包括约0.01微克至约10毫克/千克动物体重。更优选的试剂单次剂量包括约1微克至约10毫克/千克动物体重。甚至更优选的试剂单次剂量包括约5微克至约7毫克/千克动物体重。甚至更优选的试剂单次剂量包括约10微克至约5毫克/千克动物体重。如果试剂是以气雾剂形式送递的，则特别优选的试剂单次剂量包括约0.1毫克至约5毫克/千克动物体重。如果所述试剂是肠胃外送递的，则另一个特别优选的试剂单次剂量包括约0.1微克至约10微克/千克动物体重。

在一个实施方案中，本发明的核酸:脂质体复合物的合适的单次剂量为每千克所要给予所述复合物的患者体重约0.1μg至约100μg。在另一个实施方案中，合适的单次剂量为每千克体重约1μg至约10μg。在另一个实施方案中，核酸:脂质体复合物的合适的单次剂量为至少约0.1μg核酸、更优选至少约1μg核酸、甚至更优选至少约10μg核酸、甚至更优选至少约50μg核酸、甚至更优选至少约100μg核酸。

优选的抗体单次剂量包括约1ng至约不到1mg/千克动物体重。更优选的抗体单次剂量包括约20ng至约600μg/千克动物体重。甚至更优选的抗体单次剂量（特别是当所述抗体制剂是通过喷雾法送递时）包括约20ng至约600μg/千克动物体重，更优选约20ng至约500μg/千克动物体重、更优选约20ng至约400μg/千克动物体重、更优选约20ng至约300μg/千克动物体重、更优选约20ng至约200μg/千克动物体重、更优选约20ng至约100μg/千克动物体重、更优选约20ng至约50μg/千克动物体重。

另一个优选的抗体单次剂量（特别是当所述抗体制剂是通过喷雾法送递时）包括约200ng至约600μg/千克动物体，更优选约200ng至约500μg/千克动物体重、更优选约200ng至约400μg/千克动物体重、更优选约200ng至约300μg/千克动物体重、更优选约200ng至约200μg/千克动物体重、更优选约200ng至约100μg/千克动物体重、更优选约200ng至约50μg/千克动物体重。

另一个优选的抗体单次剂量（特别是当所述抗体制剂是通过吸入器直接吸入时）包括约2ng至约100μg/千克动物体重，更优选约2ng至约50μg/千克动物体重、更优选约2ng至约10μg/千克动物体重、更优选约2ng至约5μg/千克动物体重、更优选约2ng至约1μg/千克动物体重、更优选约2ng至约0.5μg/千克动物体重、更优选约2ng至约0.25μg/千克动物体重、更优选约2ng至约0.1μg/千克动物体重。

在另一个实施方案中，所述抗体的给药剂量为每毫升制剂少于约500μg抗体、优选每毫升制剂少于约250μg抗体、更优选每毫升制剂少于约100μg抗体、更优选每毫升制剂少于约50μg抗体、更优选每毫升制剂少于约40μg抗体、更优选每毫升制剂少于约30μg抗体、更优选每毫升制剂少于约20μg抗体、更优选每毫升制剂少于约10μg抗体、甚至更优选每毫升制剂约5μg抗体至约10μg抗体。

根据本发明的方法，给予动物的抑制TBI或SCI所导致的生理损害的试剂的有效量为这样一个量，该量能够减少由TBI或SCI导致的生理损害的至少一个症状或指征，或者能够加强TBI或SCI恢复，且不会对动物有毒性。对动物有毒性的量包括任何会对动物的结构或功能造成损害的量（即有毒的）。

在本发明的一个实施方案中，在遭受TBI或SCI的动物体内，给予动物的试剂的有效量是指与给予所述试剂之前相比或与不给予所述试剂相比，在动物体内显著减少由TBI或SCI导致的生理损害的至少一种症状或指征的量。在另一个实施方案中，给予动物的试剂的有效量是指与一群遭受基本类似的TBI或SCI而没有给予所述试剂的动物的症状水平相比，在动物体内显著减少由TBI或SCI导致的损害的至少一种症状或指征的量。优选地，甚至在损害的生理症状发作之后给予所述试剂，该试剂也能够在动物体内减少由TBI（例如脑损害）或SCI（例如脊髓损害）导致的生理损害的至少一种症状或指征。最优选地，试剂的有效量是指在患者体内能将TBI或SCI导致的损害的一种或多种症状或指征减少到不再被检测到的程度的量。在一个实施方案中，所述试剂的有效量是指促进患者从TBI或SCI中恢复的量，这可以通过生理损害的症状或指征的停止或逆转来测定，或者通过患者体内神经或相关功能的可测量或可检测生物评分、数值或量度的改善来测定。

在一个优选的实施方案中，本发明的试剂的适合剂量是指与不给予所述试剂的情况相比，能有效抑制如本文所述的补体旁路中的至少一种蛋白质（例如因子B、因子D或备解素）的表达或生物活性的剂量。测定蛋白质表达或生物活性的方法如上文所述。在另一个实施方案中，本发明的试剂的适合剂量是指显著抑制本发明的补体旁路的剂量。补体的激活和对其的抑制可以使用本领域公知的技术/测定法来测量。例如，技术人员可以如在实施例中所述的那样在酵母聚糖A颗粒上进行C3沉积的体外分析。技术人员也可以测试所述试剂抑制人血清裂解未致敏红细胞的能力。基于这些测定法由体外结果外推出体内剂量是在本领域技术人员能力范围之内的。

本领域技术人员应能够根据TBI或SCI的程度、与该损伤相关的预期或实测生理损害以及个体患者对治疗的反应来确定所要给予动物的试剂的剂量数。用于诊断TBI和SCI（包括所述病症的严重程度）的方法如上文所述并且在本领域中是已知的。此外，临床医生应能够确定为在动物体内有效地减少TBI或SCI导致的或相关的一种或多种症状而进行所述试剂送递的适当时机。优选地，所述试剂在48小时之内送递，更优选36小时、更优选24小时、更优选在12小时内、更优选在6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时内，或者甚至是在导致TBI或SCI的事件发生后的数分钟内。在一个实施方案中，患者、临床医生或其他人一旦意识到该患者已遭受TBI或SCI就（即立即）给予所述试剂。在另一个实施方案中，当首次出现可能与TBI或SCI相关的脑或神经损害的症状的体征时就给予所述试剂，优选在一种或多种症状出现至少2小时内，更优选在至少1小时内、更优选在至少30分钟内、更优选在至少10分钟内、更优选在一种或多种症状出现至少5分钟内。TBI或SCI相关生理损害的症状以及用于测量或检测这类症状的方法在上文中已有详细描述。优选地，一直进行这种给药直至出现生理损害减轻或生理损害的潜在症状减少的体征，然后根据需要给药至症状消失或停止。

本发明的方法可以被用于任何动物，特别是任何脊椎动物哺乳纲（即哺乳动物）的动物，包括但不限于灵长类、啮齿类、家畜和驯养的宠物。使用本发明的方法治疗的优选的哺乳动物为人。

提供以下实施例是出于说明的目的而并非意在限制本发明的范围。

实施例

实施例1

下列实施例描述了在外伤性脑损伤（TBI）后，给予的补体抑制剂Crry-Ig对生理功能的疗效。

Crry-Ig是补体受体相关蛋白-y（Crry）与免疫球蛋白Fc分子的融合蛋白。Crry是人衰变加速因子（CD55）和膜辅因子蛋白（CD46）的功能同源物，并且会抑制C3补体转换酶。因此，Crry是经典补体途径和补体旁路的抑制剂。

在小鼠的闭合性头部外伤的标准化模型（Chen et al.,J.Neurotrauma1996）中，与仅注射载体的对照小鼠相比，损伤后全身给予1mg Crry-Ig会使得TBI后24小时内神经恢复明显改善（图6），该损伤后Crry-Ig的全身给药对应于该模型系统中创伤后1-24小时内由于血脑屏障受损所出现的治疗“有效时间窗”。在这一实验中，创伤后神经功能缺损的程度是由两名独立的研究者按盲法通过标准的10分制神经功能损伤程度评分（Neurological Severity Score，NSS）来评估的。此外，与注射载体的对照相比，创伤后1小时通过i.p.注射1mgCrry-Ig的头部损伤的小鼠表现出明显的体重下降（图7），这说明Crry-Ig导致的补体抑制使小鼠避免了炎症诱导的创伤后异化状态。

这些结果证明在C3补体转化酶水平上抑制所述补体途径会抑制TBI相关的生理损害。

实施例2

下述实施例说明了因子B单克隆抗体能减轻外伤性脑损伤（TBI）相关的脑损害。

初步滴定研究表明在体内，在重25-35g的C57BL/6小鼠体内通过腹膜内（i.p.）注射2mg mAb1379（因子B单克隆抗体即抗fB）会使得补体旁路活性完全受到抑制，抑制作用持续48小时。采用如下两个实验组在C57BL/6小鼠内（Chen et al.,J.Neurotrauma1996）进行实验性闭合头部外伤后的抗fB抑制研究：一组接受2mg mAb1379，在t=1h、24h或72h时i.p.注射；第二组只接受载体介质，在相同的时间点注射。结果表明，基于创伤后24小时内明显下降的10分制神经功能损伤程度评分（NSS），与注射载体的对照动物相比，在抗fB（mAb1379）组中补体旁路的抑制有明显的神经保护作用（表3；图8）。这一结果证明对补体旁路的选择性抑制作用能减轻由TBI导致的生理损害。

表3

实施例3

下述实施例表明因子B单克隆抗体能减轻脊髓损伤（SCI）相关的脑损害。

本研究使用6-8周龄、重16-20g（针对所有小鼠）的野生型雌性C57BL/6小鼠（Charles River,MD）和雌性fB-/-小鼠。不限量地给动物提供水和食物并将其关在通气的树脂玻璃（Plexiglas）笼子里（四只小鼠/每个笼子），用无病原屏障设备制造12/12小时的光-暗周期循环并按照美国卫生与公共服务部的实验动物管理和使用NIH（美国国立卫生研究院，Bethesda,MD）指南进行饲养。小鼠在实验前至少适应一周。

动物手术和术后操作由南卡罗莱纳医科大学的动物研究委员会批准。手术操作是在无菌条件下进行的。使用用于诱导脊髓损伤（SCI）的重物坠击装置来在小鼠体内制造脊髓挫伤（Pannu et al.(2005)J.Neuroscience Research79:340-350）。简言之，通过腹膜内（i.p.）注射氯胺酮（75mg/kg）和赛拉嗪（16mg/kg）对小鼠进行麻醉。对小鼠背部背侧进行刮毛并用碘化溶液擦洗。在手术过程中通过在动物身体下放置37℃的加热毯来维持体温。在T9至T13节段之间的皮肤中线进行切口。在T12节段处进行椎板切除术，保持硬膜完整。用立体定位装置固定脊柱并通过从3cm高处向暴露出的硬膜上坠落5g的重物（15g-cm力）来诱导损伤。假手术动物仅进行椎板切除术。损伤后，闭合肌肉层并缝合切口。将小鼠置于加热垫上。术前或术后均没有使用预防性抗生素或镇痛药，目的是防止它们与SCI的实验性疗法之间可能的相互作用。每天手动挤压膀胱两次直至恢复足够的自发性排泄。

所有的动物都被包括在功能恢复研究中。每周由不知情的观察者采用后肢运动功能评分来评估实验小鼠的后肢功能（Shuhei K J.ofNeuropathology and Experimental Neurology(2004)64-72）。评分范围从0至5，分数如下：0：无后肢运动；1：任何后肢关节（髋、膝盖或踝）几乎没有可察觉的运动；2：一只或两只后肢中一个或多个后肢关节（髋、膝盖或踝）敏捷地运动，但不协调；3：后肢交替迈步和推进性（propulsive）运动，但无法负重；4：可以负重行走，但有缺陷；5：正常行走。

图9示出了研究给予因子B单克隆抗体对脊髓损伤功能恢复的作用的研究结果。在上述SCI鼠类模型中，C57BL/6小鼠在损伤后1小时和12小时时静脉内注射了1mg/10g抗因子B（mAb1379）（各组数目，n=8）。如上所述，创伤后的21天内每天评估一次功能恢复情况。在该时间段内也对假手术处理小鼠、具有实验性SCI的未治疗小鼠和具有实验性SCI的因子B（-/-）小鼠进行评估。如图9所示，与具有实验性脊髓损伤的未治疗小鼠相比，因子B（-/-）小鼠和接受了抗因子B的小鼠在所述21天内的每一天的时间点都有显著（p<0.01）改善的功能恢复评分。这些结果证明在SCI模型中，对补体旁路的选择性抑制作用足以提供显著的疗效。

实施例4

下述实施例证明补体激活的旁路途径在TBI病理生理学中起重要作用。

材料与方法

因子B-/-小鼠。所述因子B缺陷型（fB-/-）基因敲除小鼠之前已经被表征过，并且被证明完全丧失功能性补体旁路[58]。它们最初是使用Sv129胚胎干细胞生成的，并且在F1群体繁殖前与C57BL/6小鼠杂交。然后将它们与纯种C57BL/6回交10代以上，发现它们与C57BL/6小鼠基本上无差别[34]。敲除小鼠和野生型同窝出生小鼠（fB+/+）在实验前适应数周，并且在整个研究过程中保持实验动物不受外部影响。让它们在如下条件下饲养：选择性无病原（SPF）环境、标准温度条件（21℃）、标准湿度条件（60%）、标准光暗周期循环（12：12小时）、不限量提供食物和水。这一研究中仅使用雄性小鼠，目的是避免与补体活性水平相关的[59]和对脑损伤的敏感性相关的性别倾向，所述敏感性似乎明显受雌性生殖激素影响[60,61]。所有的实验都是按照欧洲实验动物科学学会联合会（FELASA）的标准进行的，并且得到动物管理委员会的批准（Landesamt für Arbeitsschutz,Gesundheitsschutz und technische Sicherheit,Berlin,Germany,No.G0099/03and No.G0308/04）。

脑损伤模型。如先前所描述的[13、38、62-64]，使用标准的重物坠击装置，对C57BL/6品系的敲除（fB-/-）小鼠和野生型同窝出生小鼠（fB+/+）进行实验性闭合头部损伤（每组和每个时间点均为n=6）。简言之，在异氟烷麻醉诱导后，通过中线纵向头皮切口暴露出颅骨。从2cm高处向固定的颅骨上坠落333g的重物，对左半球造成局灶性钝器损伤。创伤后，用100%的氧气对所述小鼠进行氧合支持直至完全苏醒，然后将其放回笼中。在既定的时间点（t=4小时、24小时和7天）将小鼠无痛致死并取出脑半球进行免疫组织化学、TUNEL组织化学和SDS-PAGE/蛋白质印迹分析。此外，收集血清样品以便通过ELISA和Bcl-2蛋白质印迹测定补体过敏毒素C5a的水平（参加下文）。

将假手术小鼠置于与创伤组同样的条件下并且进行相同的操作（麻醉和头皮切口），但不进行头部损伤。

用于小鼠C5a的ELISA。为了测定头部损伤的和正常的C57BL/6对照小鼠的血清样品中的补体过敏毒素C5a的水平，使用了Dr.P.A.Ward实验室（Ann Arbor,MI,USA）开发的一种ELISA。简言之，将ELISA板（Immulon4HBX,Thermo Labsystems,Milford,MA,USA）用纯化的单克隆抗小鼠C5a IgG（5μg/ml,BD Pharmingen,San Diego,CA,USA）包被。在用1%的溶于含0.05%TWEEN20（Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA）的PBS（Gibco-Invitrogen,Carlsbad,CA,USA）的牛奶（Roth,Karlsruhe,Germany）封闭非特异性结合位点后，将所述板用100ml1:20稀释（用0.1%的溶于含0.05%TWEEN的PBS的牛奶稀释）的血清和用于建立标准曲线的确定浓度的鼠重组小鼠C5a包被。在孵育及随后的洗涤步骤后，加入500ng/ml的生物素化的单克隆抗小鼠C5a抗体（BD Pharmingen），然后进行洗涤，并用400ng/ml的链亲和素－过氧化物酶（Sigma）孵育。为进行比色反应，加入底物（同时溶于0.05M磷酸盐柠檬酸盐缓冲液的0.4mg/ml OPD和0.4mg/ml脲过氧化氢;Sigma），并且用3M硫酸终止该显色反应。在490nm处读取吸光度（“SpectraMax190”读数器,Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA）。所有的样品都在两个孔中进行分析并且根据两次样品分析的平均值计算结果。标准曲线从50ng/ml至0.1ng/ml是线性的，0.1ng/ml代表了该测定法检测的下限。

蛋白质印迹。通过蛋白质印迹分析对所有本研究中所用的小鼠的血清中作为内部质量控制的因子B的存在情况进行筛选。在fB-/-和fB+/+小鼠体内头部损伤或假手术操作后第4小时、第24小时和第7天，测定匀浆的小鼠脑和相应时间点的血清样品中线粒体抗凋亡介质Bcl-2和凋亡前Fas受体的蛋白质水平。蛋白质印迹技术先前已有描述[32]。简言之，在麻醉下取出小鼠的脑，并分离为左半球和右半球，立即用Ultra Turrax

(IKA Werke,Staufen,Germany)在裂解缓冲液（Sigma）中匀浆，所述裂解缓冲液含有溶于去离子水的100mM TRIS-HCl(pH7.5)、150mM NaCl、0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5%Nonidet P-40、10mg/ml抑肽酶、10mg/ml亮抑酶肽、5mg/ml胃蛋白酶抑制剂、1mM苯甲磺酰氟。以13,000x g离心15分钟后，用市售的比色蛋白质测定试剂（“BCA Protein Assay”,Pierce/Perbio Science,Bonn,Germany）测定上清中的蛋白质含量。在上样缓冲液中使60μg的总蛋白样品变性并且在还原条件下，在12%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行分离，同时使用宽范围的预染SDS-PAGE蛋白质标准（Bio-Rad,Munich,Germany）。然后通过电转移印迹（Bio-Rad）将蛋白质转移到Protran BA83硝酸纤维素膜上（Schleicher&Schuell,Dassel,Germany）。将所述印迹物封闭过夜，然后用1:500稀释的单克隆抗小鼠Bcl-2（Santa Cruz Biotechnology,Heidelberg,Germany）、1:200稀释的多克隆兔抗小鼠Fas（A-20克隆,Santa Cruz）或1:8,000稀释的多克隆鸡抗小鼠抗因子B（由Dr.ScottR.Barnum惠赠，University of Alabama at Birmingham,AL,USA）作为一抗进行孵育，用1:10,000稀释的单克隆抗β-肌动蛋白抗体（AC-15克隆,Sigma）作为确定电泳条带等量上样的内部对照。在用1:5,000稀释的过氧化物酶标记的二抗（Dako,Hamburg,Germany,and SantaCruz Biotechnology,Heidelberg,Germany）孵育后，使用市售的

蛋白质印迹试剂盒（Amersham Pharmacia Biotech,Freiburg,Germany）通过非放射性化学发光技术进行抗体结合显影。通过丽春红染色剂（Sigma）来确认蛋白质等量转移到了印迹膜上。

免疫组织化学。为评估神经元的形态、完整性和凋亡，将取出的小鼠脑在液氮中速冻，在OCT化合物（Sakura Finetek,Torrance,CA）中包埋并储存于-80℃下直至用于分析。在-20℃下用恒冷切片机进行6-8微米厚的冠状位组织切片。为了进行免疫组织化学分析，用丙酮固定切片，然后用DAB-四盐酸盐作为色原（Vector,Burlingame,CA）通过标准的生物素/亲和素/过氧化物酶技术进行分析，如之前的文献所述[13,32]。下述一抗被用作细胞标记：滴定稀释度为1:2,000的单克隆抗NeuN（Chemicon,Hampshire,UK），用于神经元；1:100稀释的多克隆兔抗GFAP（Shandon Immunon,Pittsburgh,PA,USA），用于星形胶质细胞；1:100稀释的单克隆大鼠抗CD11b（Accurate Chemical,Westbury,NY,USA），用于小胶质细胞；1:200稀释的多克隆山羊抗CD144（Santa Cruz），用于内皮细胞。使用与所省略的特异性抗体等稀释度的未免疫IgG（载体）作为阴性对照。

为确定脑内神经元细胞死亡的程度，如在先的文献所述[38]，按照制造商的说明书使用“荧光素原位细胞死亡检测试剂盒”（RocheDiagnostics GmbH,Mannheim,Germany）进行TUNEL组织化学分析。简言之，将切片干燥30分钟，然后在室温下用10%福尔马林溶液固定。用PBS洗涤（三次，每次洗涤3分钟）后，在-20℃下用冰冷的乙醇-乙酸（2:1）溶液孵育切片5分钟。之后用PBS洗涤，在室温下用含有溶于PBS的3%Triton X-100的透化溶液孵育60min，然后在37℃下用溶于含荧光素-dUTP的反应缓冲液的TdT酶孵育90分钟。阴性对照仅使用不含TdT酶的反应缓冲液进行分析。阳性对照是通过在室温下用DNA酶I级溶液（500U/ml;Roche）消化等量的脑切片20分钟来进行分析，之后要一直远离其它的样品。标记后，用PBS再次洗涤所述切片，为了将未染色（TUNEL阴性）细胞显影，将所述切片用用于DAPI（载体）荧光的

封固剂覆盖。在染色后立即用Axioskop40荧光显微镜（Zeiss,Germany）（对于DAPI荧光用460nm，而对于TUNEL荧光用520nm）评估所有样品，并且用Alphadigi doc1201软件（Alpha Innotech,San Leandro,CA,USA）进行分析。

统计分析使用市售的软件（SPSS9.0for

）进行统计分析。通过非配对的Student’t检验来确定fB-/-和fB+/+小鼠血清中补体C5a水平的差异。P值<0.05被认为具有统计学显著性。

结果

补体激活在脑损伤的fB-/-小鼠体内被减弱。

对本研究中所用的所有fB-/-小鼠和野生型同窝出生小鼠（fB+/+）的血清进行的筛选表明，仅在fB+/+动物的血清中可检测到因子B，而fB-/-小鼠中没有因子B。进行这些对照实验以确定所述敲除小鼠的血清中完全不含因子B（数据未出示）。

参照图10，通过小鼠C5a特异的ELISA分析来C57BL/6品系的脑损伤fB+/+和fB-/-小鼠（每组和每个时间点均有n=6）和正常C57BL/6小鼠（对照；n=4）的血清样品（数据在图10中被示出为平均水平±SD；*P<0.05，fB+/+小鼠与对照小鼠比较且fB+/+小鼠与fB-/-小鼠比较。TBI，外伤性脑损伤）。野生型C57BL/6小鼠的实验性闭合头部损伤会导致补体级联的全身激活，这可以通过4小时-7天所评估的全部时间点的补体激活产物C5a的显著升高的血清水平来确定（与正常小鼠血清相比p<0.05，非配对的Student’t检验；图10）。相比之下，头部创伤后在所有对应的时间点，fB-/-小鼠体内过敏毒素C5a的血清水平都明显降低，下降到正常小鼠的基线水平（与脑损伤fB+/+小鼠相比p<0.05，非配对的Student’t检验；图10）。这些数据意味着旁路途径是脑损伤后补体激活的发起者，这一观点之前仅被CNS外部的疾病例如类风湿性关节炎、自身免疫性肾炎和缺血/再灌注损伤[33,37]所证实。

头部损伤后因子B的缺乏会导致神经元细胞死亡减少

如之前的文献所述，在闭合头部损伤后的野生型C57BL/6小鼠的受损脑内观察到神经元细胞死亡，最长可以持续7天[38]。参照图12-14，通过使用神经元标记物NeuN（每张图中的A、B、F、G）的特异性抗体的免疫组织化学或通过相邻切片的TUNEL组织化学（每张图中的D、E、I、J）来分析野生型（fB+/+，每张图中的图A-E）和因子B敲除小鼠（fB-/-，每张图中的图F-J）左（损伤）半球的冠状位冷冻切片。利用DAPI核染显示TUNEL切片的整个细胞形态（每张图中的C、H）。每张图中的图B、E、G、J分别代表每张图中图A、D、F、I的4倍放大图（原始放大倍率：100x（A、C、D、F、H、I），400x（B、E、G、J））。创伤后4-24小时内在fB+/+小鼠的损伤半球中检测到TUNEL阳性细胞的增加（分别见图12和13），最长可持续7天（图14）。4’,6’-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI；图12-14的图C和图H）的细胞核染色示出了由TUNEL组织化学评估的相邻切片中的细胞形态。通过使用特异性细胞标记物NeuN对相邻切片的免疫组织化学染色（图12-14的图A、B、F和G）将神经元确定为主要的TUNEL阳性细胞类型。相比之下，对星形胶质细胞（抗GFAP）、小胶质细胞（抗CD11b）和内皮细胞（抗CD144）的染色显示在本发明的头部损伤模型中这些脑中固有细胞没有呈现出相关的TUNEL染色（数据未出示）。此外，根据神经元典型的细胞大小和形态（与损伤皮质中TUNEL阳性细胞的典型神经元层以及神经胶质细胞相反）将其确认为主要的TUNEL阳性细胞类型。这些研究结果确证了之前公开的当前和其它实验性TBI模型中以及头部损伤患者体内的神经元凋亡数据[38-42]。与脑损伤fB+/+小鼠体内神经元细胞死亡程度相比，创伤后4小时-7天，fB-/-小鼠的损伤脑中TUNEL阳性神经元明显减少（图12-14的图D、E、I和J）。这些研究结果支持了最近确立的神经元凋亡的补体依赖性调节的观点[7、10、15、43]，并且提升了补体激活的旁路（因子B依赖性）途径在调节TBI后继发性神经变性方面的体内重要性。

就本发明发明人所知，本研究首次专门研究了旁路途径对脑损伤后神经病理的作用。先前已经证明在多发性硬化动物模型中fB-/-小鼠不会有实验性脱髓鞘作用[44]。Nataf及其同事的研究支持了本发明的发明人的研究结果，即在自身免疫和创伤性CNS损伤模型中，因子B的遗传缺陷导致功能性补体旁路激活的完全丧失，这对于神经保护具有重要作用。

在损伤的fB-/-脑中Bcl-2上调和Fas下调

已经证明Fas介导的外源途径和凋亡内源途径的线粒体抗凋亡介质Bcl-2的抑制会促进创伤后的神经元凋亡[45-51]。参照图11，将匀浆好的假手术和头部损伤的fB+/+和fB-/-小鼠的损伤半球脑组织样品在SDS-PAGE上电泳，转移到硝酸纤维素膜上，用Bcl-2的特异性单克隆抗体分析并且用化学发光测定法（

system,Amersham）检测。与头部损伤的野生型同窝出生小鼠相比，在24小时处的敲除小鼠体内，所显影的对应于小鼠Bcl-2的26kD的条带得到了增强。此外，与fB+/+小鼠相比，在所评估的所有时间点的脑损伤敲除小鼠体内，都有明显的Fas受体染色强度的下调（数据未出示）。示例的印迹是代表了三个单独实验。

更具体地说，通过蛋白质印迹分析，本发明的发明人发现，与fB+/+同窝出生小鼠相比，创伤后24小时的头部损伤fB-/-小鼠脑匀浆物中，起保护作用的Bcl-2蛋白质的水平明显上调（图11）。在TBI后的其他时间点，未见到敲除小鼠和野生型小鼠的Bcl-2表达有明显差异（图11）。对于凋亡的外源途径，与fB+/+动物相比，在TBI后4小时至7天的fB-/-小鼠体内可见到Fas受体表达的明显下调（图11）。尽管这些数据不是量化的，但是在上述时间点时，脑损伤的敲除小鼠体内的26kDa条带（Bcl-2；图11）和48kDa条带（Fas；数据未出示）染色强度的差异似乎比对应的野生型同窝出生小鼠体内的差异更强烈。这些研究结果表明补体激活的旁路途径通过在损伤脑中抑制Bcl-2并诱导Fas表达来参与TBI后的神经元凋亡调节。如之前其他研究者在不同的模型系统中所确定那样[45-47]，这两方面在损伤后神经元凋亡的调节中都很关键。对受控的皮层撞击脑损伤模型的实验研究证明，与野生型同窝出生小鼠相比，在创伤后的7天中，过表达Bcl-2基因的转基因小鼠的皮质损伤体积明显减小[52]。因此，Bcl-2在TBI后的凋亡的线粒体（内源）途径的调节中起重要作用[4、50、52、53]。

本发明的发明人之前已经证明，通过Crry-Ig（一种鼠重组嵌合融合分子）在C3转化酶水平药理性地“全”抑制补体激活，会导致增强脑内Bcl-2基因和蛋白质的表达并增加脑损伤小鼠海马内的神经元存活率[32]。在鼠自身免疫脑炎模型中，通过Crry-Ig阻断补体激活会导致神经元凋亡的显著下降[15]。

本研究的数据支持了补体激活的旁路途径对TBI神经病理后遗症的生物学重要性，并且为未来的选择性旁路途径抑制剂（例如因子B拮抗剂）的药理学研究提供了基础[33,54]。

总之，本发明的数据首次提供了补体激活的旁路途径对创伤后补体激活（生成C5a）的总体程度和对脑损伤后继发的神经元细胞死亡（TUNEL、Bcl-2和Fas数据）的重要作用的证据。这是一项新的和具有挑战性的发现，因为所有之前公开的对TBI模型中实验性补体抑制的研究都着眼于在C3转化酶的“共同接点”水平[26、28-32]或级联的更下游水平干扰补体级联，例如通过过敏毒素C5a或其受体的特异性阻断[30]。补体旁路在脑损伤神经病理中的病理生理作用一直受到低估，这可能部分是由于很久以前就确立了经典途径在各种神经疾病中的突出作用[55,56]。但是，本研究的结果表明这些见解未必反映了补体旁路在复杂的多因子神经炎性疾病中“真正的”体内重要性，例如在TBI的情况下[57]。在严重头部损伤患者的鞘内区室中因子B水平升高[36]这一事实进一步支持了本发明的权利要求，即因子B的药理靶向是合理的和可预测的。

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本申请中所引用的每篇参考文献的全文以引用的方式纳入。

由于本发明的各种实施方案已经得到了详细的描述，所以对所述实施方案的修改和变动对本领域技术人员来说将是显而易见的。但是，应当清楚理解的是这些修改和改编，如下述权利要求所阐明地在本发明的范围之内。

Claims

1.一种抗体或其抗原结合片段在制备在遭受外伤性脑损伤（TBI）的动物体内减少或预防由补体激活导致的神经损伤或用于加强动物从TBI恢复的药物中的用途，所述抗体或其抗原结合片段选择性抑制所述动物体内因子B的活性。

2.一种抗体或其抗原结合片段在制备在遭受脊髓损伤（SCI）的动物体内减少或预防由补体激活导致的神经损伤或用于加强动物从SCI恢复的药物中的用途，所述抗体或其抗原结合片段选择性抑制所述动物体内因子B的活性。

3.根据权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域，其中所述抗体阻止C3bBb复合物的形成。

4.根据权利要求1或2的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段结合因子B并阻止或抑制因子D切割因子B。

5.根据权利要求1或2的用途，其中所述抗体或抗原结合片段结合人因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域。

6.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B的第三SCR结构域的表位，所述表位选自：

a）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Tyr139位至约Ser185位或其在非人因子B序列中的等效位置；

b）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Tyr139位至约Ser141位或其在非人因子B序列中的等效位置；

c）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括从约Glu182位至约Ser185位或其在非人因子B序列中的等效位置；和

d）包括至少一部分的人因子B（SEQ ID NO:2）的因子B的表位，所述部分包括任何一个或多个下列位置或它们在非人因子B序列中的等效位置：Tyr139、Cys140、Ser141、Glu182、Gly184或Ser185。

7.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B（SEQ ID NO:2）的第三SCR结构域的表位，所述表位包括一个或多个下列氨基酸位置：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。

8.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B（SEQ ID NO:2）的第三SCR结构域的表位，所述表位包括下列氨基酸位置：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。

9.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B（SEQ ID NO:2）的第三SCR结构域的表位，所述表位由下列氨基酸位置组成：Ala137、Tyr139、Ser141、Glu182、Ser185、Thr189、Glu190和Ser192。

10.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B第三SCR结构域的一部分的三维结构内的非线性表位，其中所述部分由至少SEQ ID NO:2的Ala137-Ser192的氨基酸位置所限定。

11.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合来自多个哺乳动物物种的因子B并阻止C3bBb复合物的形成。

12.根据权利要求5的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合来自至少人和动物的因子B，所述动物选自非人灵长类、小鼠、大鼠、猪、马和兔。

13.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为非补体激活的同种型或亚类。

14.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为单克隆抗体。

15.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗原结合片段为Fab片段。

16.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为人源化抗体。

17.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为双特异性抗体。

18.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为单价抗体。

19.根据权利要求1-12任一项的用途，其中所述抗体为单克隆抗体1379（由ATCC保藏号PTA-6230的菌株产生）。

20.根据权利要求1的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段为静脉内给药或被给予到所述动物的脑的。

21.根据权利要求2的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段为静脉内给药或被给予到所述动物的脊髓或脊髓的硬膜外隙的。

22.根据权利要求1-21任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段是被以一份量给予到所述遭受TBI或SCI的动物，与未给予所述抗体或其抗原结合片段的情况相比，所述量能有效在动物体内显著减少由补体激活导致的神经损伤。

23.根据权利要求1的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段是以有效维持70-80mmHg以上的脑灌注压（CPP）的量给予的。

24.根据权利要求1的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段是以有效降低颅内压（ICP）的量给予的。

25.根据权利要求2的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段是以有效减轻脊髓内肿胀的量给予的。

26.根据权利要求1-25任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段是在可药用载体中给予的。

27.根据权利要求26的用途，其中所述可药用载体为能够穿过血脑屏障的化合物或组合物。

28.根据权利要求26的用途，其中所述可药用载体为可注射的赋形剂。

29.根据权利要求1的用途，其中所述药物还包括另一种用于治疗TBI的症状的化合物，所述症状选自体格缺陷、认知障碍和心理社会-行为-情绪障碍。

30.根据权利要求29的用途，其中所述化合物选自渗透性药物、镇静药、镇痛药、肌肉松弛药和巴比妥酸盐。

31.根据权利要求2的用途，其中所述药物还包括一种类固醇。

32.根据权利要求1-31任一项的用途，其中所述动物为哺乳动物。

33.根据权利要求1-31任一项的用途，其中所述动物为人。

34.一种抗体或其抗原结合片段在制备在遭受TBI的动物体内减少或预防由补体激活导致的神经损伤的药物中的用途，所述抗体或其抗原结合片段通过结合或阻断因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域来抑制因子B。

35.一种抗体或其抗原结合片段在制备在遭受SCI动物的体内减少或预防由补体激活导致的神经损伤的药物中的用途，所述抗体或其抗原结合片段通过结合或阻断因子B的第三短同源重复序列（SCR）结构域来抑制因子B。

36.根据权利要求34或35的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段选择性结合因子B。

37.一种组合物，包括：

a）一种选择性地抑制因子B的生物活性的分离的抗体或其抗原结合片段；和

b）一种用于治疗外伤性脑损伤（TBI）的症状的试剂。

38.一种组合物，包括：

b）一种用于治疗脊髓损伤（SCI）的症状的试剂。

39.根据权利要求37或38的组合物，其中所述抗体或其抗原结合片段结合因子B中的第三短同源重复序列（SCR）结构域，并抑制或阻止C3bBb复合物的形成。

40.根据权利要求37-39任一项的组合物，其中所述抗体为单克隆抗体1379。

41.根据权利要求37的组合物，其中所述试剂为一种用于治疗TBI的症状的化合物，所述TBI症状选自：体格缺陷、认知障碍和心理社会-行为-情绪障碍。

42.根据权利要求37的组合物，其中所述试剂选自渗透性药物、镇静药、镇痛药、肌肉松弛药和巴比妥酸盐。

43.根据权利要求38的组合物，其中所述试剂为类固醇。

44.一种选择性结合因子B的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗外伤性脑损伤（TBI）的药物组合物中的用途。

45.一种选择性结合因子B的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗脊髓损伤（SCI）的药物组合物中的用途。

46.根据权利要求37-43任一项的组合物，其中所述症状包括神经损伤。