CN103347395B - 用于改进益生菌及其食物产品的稳定性并延长保质期的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

包括益生菌的一种组合物，该组合物包括：(a)包含益生菌以及稳定剂的一种核心组合物，其中该混合物中的益生菌的总量按重量计是该核心组合物的从约10%至约90%；(b)一个最内包衣层，在所述核心组合物上成层，包括具有低于60℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸；(c)一个中间包衣层，在所述最内包衣层上成层，当在25℃测量时，当其以溶液重量的0.1%重量/重量的量存在于水溶液中时，具有低于60mN/m的表面张力；以及(d)一个外部包衣层，在所述中间包衣层上成层；其中该组合物处于微粒的形式；包含该组合物的食物产品及其制备方法。

Description

用于改进益生菌及其食物产品的稳定性并延长保质期的组合 物和方法

发明人：Adel Penhasi（爱迪尔彭海思）

发明领域

本发明总体上涉及益生菌以及包含它们的食物产品并且具体但并非排外地，涉及具有改进的稳定性和延长的保质期的、包含稳定益生菌的组合物。

发明背景

益生菌是活的微生物食物补充剂，它们通过以下方式有益地影响了宿主：通过支持自然发生的肠道菌群、通过在胃肠道内竞争有害的微生物、通过辅助有用的代谢过程、以及通过增强宿主有机体对有毒物质的抵抗。益生菌可以诱导的有益影响众多。一些非限制性实例包括乳糖不耐受减少、致病菌和寄生虫抑制、腹泻减少、抗幽门螺杆菌活性、结肠癌预防、便秘改善或预防、维生素原位生产、血脂调整、以及宿主免疫功能调整。在驯化与水生动物中，它们还可以改进生长、存活以及与疾病和不利的培养条件有关的抗逆性。因此，对将益生菌包括在人类食品以及动物饲料内存在相当大的兴趣。

益生菌有机体体优选地是活的并且直到摄入且包括摄入过程具有活性，从而有效。益生菌有机体通常被结合到乳制品（例如酸奶）中，这些产品提供一些固有稳定性并且不需要加热用于加工。然而，很难将这些有益微生物结合到其他食品类型中，例如奶油、注心饼干（biscuits fill-in）、巧克力、调味汁、蛋黄酱等中，尤其是在其制备的至少一个阶段任选地经历热处理的那些。已知热处理降低益生菌有机体的活力并且，如果足够高或应用持续足够长时期的话，将杀死这些有机体。

益生菌的活性和长期稳定性可以受多个环境因素影响；例如，温度、pH、水/湿气以及氧或氧化剂或还原剂的存在。熟知地是，在环境温度（AT）下，在储藏期间，益生菌在水相中即刻失去它们的活性。通常，在与其他食品成分混合之前或之中，将益生菌干燥。由于干燥加工诱导的机械、化学、以及渗透压力，干燥加工通常可以导致显著的活力丧失。在多个不同阶段都可以发生活力丧失，包括在初始制造期间的干燥、食物制备（一旦暴露于高温、高湿、氧和高压）、运输及长期储存（温度、氧以及湿气暴露）、以及消费之后与通过胃肠（GI）道（暴露于低pH、蛋白水解酶以及胆盐）。用活细胞有机体或益生菌制造食物或食品特别具有挑战性，因为这些益生菌对氧、温度以及湿度非常敏感，它们典型地全部存在于食品本身和/或它的制造中。

许多益生菌主要在它们活着时展示它们的有益影响。因此，在食物制造过程以及保质期中，需要它们存活。同样地，一旦消耗食物，在到达肠内对于定植而言适合的位置之前，它们应当在不利的胃肠道条件（例如胃中存在的极低pH值）下存活。虽然存在可供动物和人类消耗的多种商用益生菌产品，但是它们中的大部分在制造加工、运输、储存期间以及动物/人类GI道中丧失其活性。

为了补偿此类损失，在该产品中包括过量益生菌，预期一部分将存活且到达它们的目标。除了这些产品的可疑保质期活力外，此类实践当然是没有成本效益的。此外，此类实践还可以致使实际上到达它们对于定植而言的预期目的地的益生菌的高可变剂量，这也是不希望的。

为了保护细菌，已经设计了不同配制品，通常合并保护剂，例如蛋白、某些聚合物、脱脂乳、甘油、多糖类、低聚糖以及二糖、以及类似物。然而，这些配制品中没有一个能适当地保护其对抗氧和湿度，它们也不能提供合适保护以对抗加工许多食品所必需的高温。

例如，通过肠溶包衣技术可以对这些益生菌微生物进行封装，该技术涉及施加一种成膜物质，通常通过喷雾含有肠溶聚合物的液体以及通用的其他添加剂（例如糖或蛋白）到这些干燥益生菌上（Ko（科）以及Ping（平）WO02/058735）。然而，在微封装方法中包覆益生菌的肠溶聚合物膜通常不能作为湿度保护屏障发挥功能并且通常必需添加若干层以避免水进入这些微胶囊。此外，基于此类聚合物的非常差的氧闭塞特性，此类聚合物也不能提供适当保护以对抗氧。

Giffard（吉法尔）以及Kendall（肯德尔）（US2005/0079244）披露了一种处于干型或半湿型即食磨成粗粒的食物或粉末混合物形式的食品，该食品含有益生菌、益生元（prebiotic）以及初乳包衣的一个组合。混合到食品中之前，使用标准封装技术将益生菌包覆或封装到多糖、脂肪、淀粉、蛋白或糖基质中。类似于以上披露，封装聚合物以及核心和包衣层两者中使用的添加剂都不具有低水蒸气及氧传递性，并且因此不能避免水（湿气）和氧的负效果。

因此，已经提出通过在一个非常薄的层中进行泡沫形成来干燥基于糖的益生菌系统（Bronshtein（布鲁斯汀）WO2005117962），或提出使用糖与多聚体凝胶剂（例如藻酸盐、壳聚糖、羧甲基纤维素或羧乙基纤维素）的组合。Cavadini（卡瓦蒂尼）（EP0862863）等人提供了包括凝胶化淀粉基质的谷物产品，该基质包括包衣或填料。益生菌包括在包衣中。根据此方法，将喷雾干燥的益生菌与可以是水、脂肪或蛋白消化物的载体物质一起混合。然后将该混合物喷雾到谷物产品上并且再次干燥整个产品。已经干燥的细菌的再吸水和额外的包衣/干燥加工昂贵且损伤细菌。

US2005/0019417A1描述了一种制备含有湿气敏感的活微生物（包括益生菌）的产品的方法，包括至少以下这样的步骤：通过这些步骤，益生菌与一种糖聚合物在可与水混溶的溶剂中的悬浮液被喷雾到一种水溶性的、形成凝胶的固体微粒上。通过这些手段，由水溶性的形成凝胶的固体微粒构成的核心可以吸收溶剂残余物，并且为置于所述核心上的益生菌提供保护。

Kenneth（肯尼斯）以及Liegh（莱恩）（美国专利号6,900,173）描述了用于促进人的合成代谢状态的多维生素蛋白以及益生菌棒的制造。将该干型益生菌共混到糖浆以及若干其他组分中，并且然后将所得混合物挤出并切成棒。然而，文件未披露将改进这些营养棒中的益生菌的活力或长期稳定性的任何方法或组合物，并且未指出该细菌甚至在该方法中存活。

US2004/0175389（Porubcan（波特布侃））披露了一种用于在穿过胃的过程中保护益生菌，同时允许在肠内的它们释放的配制品。该配制品还具有低水活度以及相应的长保质期。该胶囊包括益生菌与单价藻酸盐的一种无水混合物，以及一种肠溶衣（例如，明胶或纤维素封装）。一旦与酸性环境相接触，该胶囊的外壳变成凝胶，提供抵抗质子流入该胶囊核心的一个保护性屏障。然而，这种组合物仅对于经受非常低的水活度储存条件且进一步要求储存在充氮或真空密封容器中的片剂和胶囊有用。

WO03/088755（Farber and Farber（法勃和法勃））描述了用于功能成分均匀分散在基质中的口服递送系统。该基质组分包括糖、碳水化物、水状胶质、多元醇以及单-或二价阳离子源。该递送系统被挤出成或模制成具有按重量计15%与30%之间的含湿量的一个最终形状。这种类型的基质对益生菌提供非常低的保护；所提供的低保护要求制冷条件，这不适合多种食品或不是所希望的。没有提供益生菌在制造或室温下延长储存过程中如何稳定的描述或指导。

McGrath（麦格拉斯）和Mchale（麦克海尔）（EP1382241）描述了向动物递送微生物的一种方法。将这种微生物悬浮于交联的藻酸盐和冷冻保护剂（海藻糖或乳糖，或两者的组合）的基质中。然后将该基质冷冻或真空干燥以形成包含活益生菌的干燥珠子，这些珠子具有长达6个月保质期稳定性但是仅是在制冷条件下。在此同样地，没有提供关于益生菌在制造或室温及湿度条件下延长储存过程中如何稳定的描述或指导。

Ubbink（尤斌科）等人（US2005/0153018）披露了湿型食品中乳酸菌的保存。将该喷雾干燥的细菌添加到包括脂肪、发酵乳粉和糖化物的组合物中。然后将该组合物用作糖果产品的填料。该文件中描述的主题避免了将这些益生菌包埋到脂肪或富含油的基质中引起的水的有害效应。然而，单独基于脂肪的包衣和防腐材料不能抵抗氧以及长期暴露于湿性条件。

上述组合物中的任一个都未提供在干燥过程以及环境温度及不同湿度下长期储存两者中可以有效保护益生菌的混合物。此外，上述组合物中的任一个都未提供可以有效保护益生菌抵抗氧的混合物，氧是导致长期储存条件中低稳定性的一个主要原因，致使保质期非常有限。

发明概述

许多益生菌可能是温度、水和/或氧敏感性的并且因此遭受延长的保质期的缺乏。因此，需要在加工、运输以及储存连同递送至胃肠道过程中保护它们维持活力。

因此，对于在制造，环境温度、湿度以及氧下储存以及胃肠道过程中可以有效保护益生菌的组合物存在迫切需求。还存在对划算且能够使益生菌陷入整个操作过程结束时具有最低限度活力损失的保护性混合物中且在其中稳定的制备方法的需求。存在对在胃中提供保护同时允许益生菌沿着肠道释放的保护性混合物的需求。还存在对仅含有一般被认为安全的（GRAS）批准成分，并且比现在使用的那些花费更少的保护性混合物的需求。

在至少一些实施例中，通过为在加工过程以及长期在环境温度以及不同湿度下稳定的益生菌提供组合物和用于生产组合物的方法，本发明克服了背景技术中的缺点并且提供了这些需求的解决方案。

在至少一些实施例中，本发明提供了食物产品（食品）中的一种快速且划算的制备方法和保护。如在此所述的，术语“食物”以及“食品”可以被理解为涵盖适合哺乳动物（包括但不局限于人类）的任何类型的营养产品。

在至少一些实施例中，本发明提供了包括益生菌的一种组合物，该组合物是热、氧以及湿度抗性的且适合食物产品，其中该组合物处于微粒的形式，该组合物包括：(a)包含益生菌以及稳定剂的核心组合物，其中该混合物中的益生菌的总量按重量计是该核心组合物的从约10%至约90%；(b)一个最内包衣层，在所述核心组合物上成层，包括具有低于60℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸；(c)一个中间包衣层，在所述最内包衣层上成层，当在25℃测量时，当其以溶液重量的0.1%重量/重量的量存在于水溶液中时，具有低于60mN/m的表面张力；以及(d)一个外部包衣层，在所述中间包衣层上成层。

该稳定剂可任选地包括任何类型的氧清除剂，包括但不局限于含有L-半胱氨酸基或盐酸盐的那些，在此列出该稳定剂的其他实例。

核心组合物还可任选地包括至少一种糖化合物，包括但不局限于麦芽糊精、海藻糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、果糖以及类似物，在此提供该组合物的其他实例。二糖，如蔗糖以及海藻糖，作为该核心内的保护剂引人注意，因为它们实际上帮助植物以及微生物细胞在干旱时期保持在滞生状态。海藻糖已经示出为在环境空气-干燥以及冻干两者中，用于多种生物材料的有效的保护剂。

该核心组合物还可任选地包括一种或多种其他食品级成分，包括但不局限于充填剂、表面活性剂以及粘合剂，在此提供该组合物的不同的非限制性实例。

该最内包衣层可任选地包括具有低于50℃且优选高于25℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸。该熔点任选优选低于45℃且高于30℃，并且任选且最优选低于40℃且高于35℃。该最内包衣层可任选地形成一种稳定的疏水基质，该基质将核心组合物包埋其中和/或在该益生菌核心组合物的周围形成一个膜。

当在25℃测量时，当其以溶液重量的0.1%重量/重量的量存在于水溶液中时，该中间包衣层任选地具有低于50mN/m并且优选低于45mN/m的表面张力。

该外部包衣层任选地包括一种聚合物，当在标准试验条件（可以是例如73°F（23℃）以及0%RH）下测量时，该聚合物具有小于1000cc/m²/24hr，优选小于500cc/m²/24hr并且最优选小于100cc/m²/24hr的氧传递速率。该聚合物还任选地具有小于400g/m²/天，优选小于350g/m²/天并且最优选小于300g/m²/天的水蒸气传递速率。

该组合物可任选地进一步包括一个额外的湿气屏障包衣层，在该外部包衣层上成层，用于进一步防止湿气渗透。该组合物可任选地进一步包括一种肠溶聚合物，在该湿气屏障包衣层上成层，其可以进一步提供对抗胃肠道的此类破坏性特征（如低pH值以及蛋白水解酶）的保护。

所得组合物处于固体形式，可任选地是如在此描述的任何固体微粒形式，包括但不局限于颗粒、粉末以及类似物。该稳定的组合物适合混合/添加到食物产品中，包括但不局限于巧克力、乳酪、奶油、调味汁、蛋黄酱以及注心饼干。在该保护性组合物中的稳定的益生菌在涉及暴露于高温、湿度以及氧的制造或制备方法中维持它们的活力。甚至是在将它们添加到食物产品中之后，稳定的细菌在环境温度下，在湿气氧合的环境中的储存条件下维持它们的活力。要抵抗的高温的实例是巧克力制备过程中，或混入奶油组合物的回火步骤。

在至少一些实施例中，本发明涉及一种用于制备包含稳定的组合物的食物产品的方法，其中该制备方法可任选地包括一个加热步骤，该产品含有活性益生菌，该方法包括i)如在此所述制备稳定的益生菌组合物微粒；ii)将所述稳定的益生菌微粒混合至一种半成品中；iii)将所述益生菌微粒与半成品的混合物在一个预先确定的温度加热一个预先确定的时段；并且iv)通过将所述混合物冷却来完成所述包含所述稳定的益生菌微粒的半成品，由此获得所述含有稳定的活性益生菌的最终产品，该最终产品在储存和保质期中示出了高稳定性。术语“半成品”描述了如本领域中已知的食物产品制备中的一个阶段，其中所述食物产品尚未含有所有组分或尚未通过所有制备步骤，并且因此尚未准备好用于消费。

在至少一些实施例中，本发明提供了用于混合到食物产品中的、抗环境温度、湿度和氧的、稳定的益生菌微粒，它们可以根据多种方法制备，包括但不局限于热熔法、湿法制粒或干法制粒。如果包括在该核心组合物中的益生菌以及其他赋形剂的初始粒度足以使能够包衣该第一包衣层，则无需制粒过程。

根据本发明不同实施例的食物产品可以是任选地具有作为非限制性实例的悬浮液、乳液或糊剂的形式的产品。根据本发明不同实施例的此类食物产品的非限制性实例包括但不局限于奶油、奶油饼干、注心饼干、巧克力、调味汁、乳酪、蛋黄酱等等，其中该产品是包括如上所述稳定以用于长期储存及保质期的益生菌的保健食物产品。

在至少一些实施例中，本发明涉及有益地影响了消费者的肠道微生物平衡的保健食物，其中所述热抵抗和可热加工性是通过用多个层来包衣益生菌核心而确保的，这些层限制热、氧和湿气传递到该益生菌并且因此在制备方法和储存中增加了它们的抵抗性并且因此延长了保质期。“消费者”意思是消费该产品的任何哺乳动物，包括但不局限于人类。

附图简要说明

本发明的以上和其他特征和优点通过以下实例、并且参考以下附图将变得更加明显，其中：

图1示出了根据本发明的一个实施例的多层胶囊的示意图；

图2示出了根据本发明的一个实施例的多层胶囊的示意图。

图3示出了当液体未完全在基底（通常是一种固体）上展开时形成的一个接触角（θ）的示意图。

优选实施方式的详细描述

现在已经发现，通过具有独特安排顺序的多个包衣层的一个独特组合，益生菌令人惊讶地可以有效稳定地用于食物制备方法中。将该细菌配制成用多个包衣层包覆的一个核心，由此获得甚至在环境温度高湿度下延长的储存时间之后提供有活力的益生菌有机体的益生菌组合物，该组合物在含有根据本发明的受保护的益生菌的食品的储存和保质期中进一步稳定并且在口服给予后能够向胃肠道给予有活力的细菌。

在至少一些实施例中，本发明提供了处于微粒形式的一种益生菌组合物，以用作保健食品添加剂。本发明具体针对用于制备为结合到食品（例如奶油、奶油饼干、注心饼干、巧克力、调味汁、乳酪、蛋黄酱等）中的、抗氧以及湿气（水蒸气）的、受保护的益生菌的方法。

在本发明的一个优选实施例中，所述益生菌包括至少一种动物乳酸双歧杆菌。根据本发明的稳定的益生菌核心颗粒或核心混合物是一种经包衣的颗粒，包括至少三个分层相，例如一个核心和三层包衣、或一个核心和三层或更多层包衣。通常，这些包衣中的一层是主要起在外层包衣过程中或在后面的阶段中防止水或湿气渗透到该核心中的疏水固体脂肪。至少一层其他包衣是负责在储存和保质期过程中防止湿气和氧传递到核心中一个外层，此时中间包衣层存在于这两个包衣层之间并且负责提供前述包衣彼此的粘合及附着，其中所述中间包衣可以进一步对该核心提供氧和/或湿气抗性。这样一层中间包衣还可任选地包括显著地贡献了氧抗性的一层，并且还任选地提供了抵抗水或湿气渗透到该核心中的一个屏障；然而，本发明的稳定的益生菌颗粒可以包括贡献这些细菌稳定性加工的、连同在储存所述食品过程中以及在将这些细菌安全递送至肠的过程中贡献它们的稳定性的更多层。

根据本发明的至少一些实施例的组合物的示意性描述

图1示出根据本发明的一个非限制性、示例性实施例的一个多层胶囊，用于（例如）通过食物提供；该封装被设计为在制造方法或制备方法连同储存过程中通过提供对抗氧及湿气的保护，在环境温度下的储存和保质期期间为益生菌提供最大稳定性。如所示，数字标记指示该组合物的组分。标记“1”指示核心，其包括益生菌以及一种基底（例如稳定剂）以及任选地还有糖以及在此指出的一种或多种其他成分。标记“2”指示邻近该核心的第一层，它是包括一种疏水材料（例如像固体脂肪）的内部第一密封层。标记“3”指示邻近所述内部层、粘合外部层到该内部层上的中间层。标记“4”指示邻近所述中间层的外部层，提供对抗氧及湿气（水蒸气）的保护，并且因此还支持环境温度下更长的储存稳定性以及保质期。

图2示出了根据本发明的另一个实施例的一个多层胶囊的示意图。如所示的，数字标记指示该组合物的组分。标记“1”指示多个核心，其特征为可以被包括在此处所述核心中的益生菌以及其他可能的赋形剂。标记“2”指示一个第一脂肪包衣层，它是包括具有低于60°C且优选地高于25°C熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸的最内包衣层，形成了益生菌核心包埋于其中的一种稳定的疏水基质。标记“3”指示一个中间层，对于其0.1%的水溶液具有低于60mN/m的表面张力。标记“4”指示一个外部层，包括具有小于1000cc/m2/24hr的氧传递速率的一种聚合物。

图3示出了当液体未完全在基底（通常是一种固体）上展开时形成的一个接触角（θ）的示意图。这是发生在参与相之间的相互作用的直接测量。通过在液体和固体相交的地方在接触处画一条切线来确定接触角。接触角的几何定义为在液体、气体和固体相交处、或不混溶的液体与固体相交处穿过三相交界线所作切线的液体侧上的角。

包含益生菌的微粒

根据本发明的一个优选实施例，将所述内核心中的益生菌与一种稳定剂，任选且优选地与至少一种糖和/或至少一种低聚糖或多糖（作为细菌的补充剂），以及任选地其他食品级添加剂（例如充填剂、粘合剂、表面活性剂等）混合。

益生菌的实例包括但不局限于：凝结芽孢杆菌GBI-30、6086、枯草杆菌变种natt、双歧杆菌B94、双歧杆菌属LAFTI B94、两岐双岐杆菌、两歧双歧杆菌rosell-71、短双歧杆菌、短双歧杆菌Rosell-70、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌、长双歧杆菌Rosell-175、动物双歧杆菌、动物双歧杆菌乳酸亚种BB-12、动物双歧杆菌乳酸亚种HN019、动物双歧杆菌35624、大肠埃希氏菌M-17、尼氏大肠杆菌（Escherichia coli Nissle1917）、嗜酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌L10、嗜酸乳杆菌LAFTI L10、干酪乳杆菌L26、干酪乳杆菌LAFTI L26、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）、拟干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌ATTC 55730（罗伊氏乳杆菌SD2112）、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳球菌、乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球菌Rosell-1058、拟干酪乳杆菌St11（或NCC2461]、强壮乳杆菌（Lactobacillus fortis）Nestlé、约氏乳杆菌La1（=LC1乳杆菌、约氏乳杆菌NCC533）Nestlé、鼠李糖乳杆菌Rosell-11、嗜酸乳杆菌Rosell-52、嗜热链球菌、双醋酸乳（Diacetylactis）、酿酒酵母、及其混合物。

糖：根据本发明的一个优选实施例，将在该核心组合物中的益生菌与一种糖混合。该糖优选地包括至少一种材料，该材料还是一种针对益生菌的补充剂。应当指出，任选地该糖本身即是补充剂。如在此使用，补充剂是指，例如，具有营养和/或保护作用的试剂。

该糖可任选地包括以下任意一种或多种：单糖，例如丙糖，包括酮丙糖（二羟基丙酮）以及丙醛糖（甘油醛），丁糖，例如酮丁糖（赤藓酮糖）、丁醛糖（赤藓糖、苏糖）以及戊酮糖（核酮糖、木酮糖），戊糖，例如戊醛糖（核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖）、脱氧糖（脱氧核糖）以及已酮糖（阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖），己糖，例如己醛糖（阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖）、脱氧糖（岩藻糖、墨角藻糖、鼠李糖），以及庚糖，例如（景天庚糖），以及辛糖和壬糖（神经氨酸）。该基质可以包括多种糖，例如1)二糖，例如蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、松二糖、以及纤维二糖，2)三糖，例如棉子糖、松三糖以及麦芽三糖，3)四糖，例如阿卡波糖和水苏糖，4)其他低聚糖，例如低聚果糖（FOS）、低聚半乳糖（GOS）以及甘露低聚糖（MOS），5)多糖例如基于葡萄糖的多糖/葡聚糖，包括糖原淀粉（直链淀粉、支链淀粉）、纤维素、糊精、右旋糖酐、β-葡聚糖（酵母聚糖、香茹多糖、西佐糖）、以及麦芽糖糊精，基于果糖的多糖/果聚糖，包括菊糖、果聚糖β2-6，基于甘露糖的多糖（甘露聚糖），基于半乳糖的多糖（半乳聚糖），以及基于N-乙酰葡糖胺的多糖，包括几丁质。可以包括其他多糖，包括但不局限于树胶，例如阿拉伯树胶（阿拉伯胶）。

稳定剂以及抗氧化剂（氧清除剂）：根据本发明的一个优选实施例，将所述内核心中的益生菌与一种稳定剂混合，该稳定剂选自下组，该组由以下各项组成：乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钙二钠、乙二胺四乙酸、富马酸、苹果酸、麦芽酚、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸三钠。根据本发明的优选实施例，该核心进一步包含一种抗氧化剂。优选地，该氧化剂选自下组，该组由以下各项组成：L-盐酸半胱氨酸、L-半胱氨酸碱、4,4(2,3二甲基四亚甲基二邻苯二酚)、富含生育酚的提取物（天然维生素E）、α-生育酚（合成的维生素E）、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、butylhydroxinon、丁基羟基茴香醚（BHA）、丁基羟基甲苯（BHT）、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二酯、叔丁基氢醌（TBHQ）、富马酸、苹果酸、抗坏血酸（维生素C）、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、抗坏血酸钾、抗坏血酸棕榈酸酯、以及抗血酸硬脂酸酯。根据本发明的一些实施例，该核心进一步包含一种稳定剂和抗氧化剂两者。不希望被一个单一的假设或理论限制，稳定剂和抗氧化剂可任选地是已区分的。根据一个优选实施例，该抗氧化剂是：L-盐酸半胱氨酸或L-半胱氨酸碱。

充填剂以及粘合剂：根据本发明的一些实施例，该核心进一步包括充填剂和粘合剂。充填剂的实例包括但不局限于，例如，微晶纤维素，一种糖，例如乳糖、葡萄糖、半乳糖、果糖、或蔗糖；磷酸氢二钙；糖醇，例如山梨糖醇、manitol、mantitol、乳糖醇、木糖醇、异麦芽糖醇、赤藓糖醇、以及氢化的淀粉水解物；玉米淀粉；以及马铃薯淀粉；和/或其一种混合物。更优选地，该充填剂是乳糖。粘合剂的实例包括聚维酮（PVP：聚乙烯吡咯烷酮）、共聚维酮（乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯的共聚物）、聚乙烯醇、低分子量HPC（羟丙基纤维素）、低分子量HPMC（羟丙基甲基纤维素）、低分子量羧甲基纤维素（MC）、低分子量羧甲基纤维素钠、低分子量羟乙基纤维素、低分子量羟甲基纤维素、乙酸纤维素、明胶、水解的明胶、聚氧化乙烯、阿拉伯树胶、糊精、淀粉、以及水溶性聚丙烯酸酯以及聚甲基丙烯酸酯、低分子量乙基纤维素或其一种混合物。更优选地，该粘合剂是低分子量HPMC。当使用热熔融物用于造粒时，具有低于60°C的熔点的以下项的一个或多个可以被用作一种粘合剂：固体脂肪、脂肪酸、蜡或聚乙二醇（PEG）。出于此目的，首先将该粘合剂熔融，并且然后喷雾到处于远低于粘合剂熔点的温度下的粉末的干燥混合物上。

表面活性剂：根据本发明的一些实施例，该核心进一步包括一种益生菌友好型的表面活性剂，例如非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂的实例包括但不局限于，例如，吐温80（聚山梨醇酯80、聚氧乙烯（20）脱水山梨糖醇单油酸酯）、吐温20（聚山梨醇酯20、聚氧乙烯（20）脱水山梨糖醇单月桂酸酯）、吐温85（聚氧乙烯脱水山梨醇三油酸酯）、甘油聚醚-2-椰油酸酯（C-421）、甘油聚醚-6-椰油酸酯（F-200）、甘油聚醚-7-椰油酸酯（C-301）、甘油聚醚-17-椰油酸酯（C-201）或其一种混合物。

第一包衣层：根据本发明的一个优选实施例，将所述核心混合物的微粒用包括具有低于50°C熔点的疏水固体脂肪或脂肪酸或蜡的一个内部包衣层进行包衣，形成包埋该益生菌的一种稳定疏水膜或基质，从而在另外的包衣过程中防止或减少水或湿气渗透到所述核心中。如在此使用，术语脂肪由广泛的组的通常可溶于有机溶剂并且大部分不溶于水的疏水化合物组成。化学上，脂肪通常是甘油和脂肪酸的三酯。脂肪在室温下可以是固体或液体的，取决于它们的结构和组成。尽管词语“油（oil）”、“脂肪（fat）”以及“脂类（lipid）”都用来指脂肪，但是“油”通常用来指在正常室温下为液体的脂肪，而“脂肪”通常用来指在正常室温下为固体的脂肪。“脂类”用来指液体与固体脂肪两者，以及其他相关物质。词语“油”用于不与水混合的任何物质并且具有一种油腻的感觉，例如石油（或原油）以及取暖用油，不论它的化学结构。根据本发明的脂肪的实例包括但不局限于具有低于50°C且高于25°C，优选低于45°C且高于30°C并且最优选低于40°C且高于35°C熔点的如上所述脂肪，脂肪酸，脂肪酸酯，脂肪酸三酯，脂肪酸盐（例如铝、钠、钾以及镁盐），脂肪醇，磷脂，固体脂类，蜡，及其组合，以形成包埋该益生菌或形成围绕这些益生菌核心颗粒的膜的一种稳定的疏水膜或基质。该固体脂肪任选且优选地是月桂酸、氢化的椰子油、可可脂中及其组合的至少一个。

根据本发明的另一个优选实施例，所述核心混合物的微粒使用热熔造粒法通过所述疏水固体脂肪或脂肪酸进行造粒。在这种情况下，所述疏水固体脂肪或脂肪酸的熔融物被用于所述核心微粒的造粒，因此所述疏水固体脂肪或脂肪酸构成所述核心微粒包埋于其中的一种基质，由此所述疏水固体脂肪或脂肪酸功能为用于造粒的粘合剂以及所述核心微粒的第一包衣层两者。换言之，所述疏水固体脂肪或脂肪酸的热熔融物可以通过热熔造粒法同时构成核心粘合剂连同第一内部包衣层两者。

中间包衣层：根据本发明的一个优选实施例，将包衣有所述内部包衣层的所述核心混合物的微粒用一种中间包衣层进行包衣，该中间包衣层的0.1%水溶液在25℃下测量具有低于60mN/m，优选地低于50mN/m并且最优选地低于45mN/m的表面张力，用于调节表面张力以用于进一步用外部包衣层进行包衣。

表面张力（ST）是液体表面允许其抵抗外力的一种特性。换言之，表面张力是气体/液体界面处存在的内聚性的（多余的）能量的度量。液体分子彼此吸引。一种液体的大部分中分子的相互作用通过各个方向上相等的吸引力来平衡。液体表面上的分子经历以下指出的力的不平衡。这种情况的净效应是在该表面存在自由能。多余能量被称作表面自由能并且能定量为能量/面积的度量。还可能将这种情况描述为具有线张力或表面张力，其可被定量为力/长度的度量。用于表面张力的通用单位是达因/cm或mN/m。这些单位是等价的。

极性液体，例如水，具有强分子内相互作用并且因此具有高表面张力。减少这种相互作用强度的任何因素将降低表面张力。因此该系统温度的增加将降低表面张力。任何污染，尤其是表面活性剂，将降低表面张力并且降低表面自由能。常见液体和溶剂的一些表面张力值示出于下表，表1中。

表1-表面张力值

物质	γ（mN/m）	γp（mN/m）	γd（mN/m）
				水	72.8	51.0	21.8

甘油	64	30	34
				乙二醇	48	19	29
二甲亚砜	44	8	36
				苯甲醇	39	11.4	28.6
甲苯	28.4	2.3	26.10
				己烷	18.4	-	18.4
丙酮	23.7	-	23.7
				氯仿	27.15	-	27.15
二碘甲烷	50.8	-	50.8

膜的附着和均匀性还受处于溶液形式的包衣配制品与膜包衣的表面的核心表面之间作用力的影响。因此，针对某个核心表面的包衣配制品可以经由润湿行为的确定进行优化，它的测量是接触或润湿角。这是液滴与施加到其上的固体表面之间形成的一个角。

当液体未完全在基底（通常是固体）上展开时，形成接触角（θ），其几何定义为在液体、气体和固体相交处、或不混溶的液体与固体相交处穿过三相交界线所作切线的液体侧上的角。

这是发生在参与相之间的相互作用的直接测量。通过在液体和固体相交的地方在接触处画一条切线来确定接触角。

当该核心表面通过小滴展开均匀润湿时，接触角是小的。如果该液滴形成一个限定的角，则该接触角的大小由杨-杜普雷方程描述；

γ_SG-γ_SL=γ_LG.cosθ

θ=接触角

γ_SG=固体的表面张力

γ_LG=液体的表面张力

γ_SL=液体与固体之间的界面张力（不能直接测量）。

借助于这个方程，通过测量相关的接触角可能评估固体的表面张力。如果用不同表面张力的液体测量它们，并且根据这些液体表面张力对它们的余弦绘图，结果是一条直线。具有cosθ=1的该直线交点的横坐标值称作润湿γ_C的临界表面张力。具有小于γ_C的表面张力的液体润湿所讨论的固体。

润湿或接触角可以简单地借助套迭测角仪（例如，AB.Lorentzen&Wettre公司,S-10028斯德哥尔摩49的LuW可湿性检测器）来测量。在许多情况下，量γ_C不足以表征聚合物表面，因为在其他因素中它取决于试验液体的极性特征。然而，这种方法可以通过将γ分为非极性部分γ^d（由分散力引起）和极性部分γ^p（由双极相互作用和氢键引起）进行改进。

γ_L=γ_L ^p+γ_L ^d

γ_S=γ_S ^p+γ_S ^d

γ_L=试验液体的表面张力

γ_S=固体的表面张力

γ_S ^p和γ_S ^d可以借助以下方程来确定：

1+(cosθ/2)(γ_L/√γ_L ^d)=√γ_S ^d+√γ_S ^p.√(γ_L-γ_L ^d)/γ_L ^d

如果1+(cosθ/2)(γ_L/√γ_L ^d)相对√(γ_L-γ_L ^d)/γ_L ^d绘图，获得直线，由它的斜率和纵坐标截距可以确定γ_S ^p以及γ_S ^d，由此计算γS。

γ_C与γ_S近似但并非严格相同。因为该测量还受聚合物表面不规则性的影响，所以不能获得真实的接触角（θ），而是量θ'。两个量通过以下关系联系：

粗糙度因子r=cosθ'/cosθ

包衣配制品的表面张力相对核心表面的表面张力越低，这些小滴将越好地在该平面上展开。如果使用具有非常好地润湿该表面的有机溶剂的配制品，该接触角将接近零。然后此类配制品的表面张力约20至30mN/m。一些聚合物（像EUDRAGIT L30D型）的水包衣分散体示出了在40至45mN/m范围内的低表面张力。

根据本发明至少一些实施例，接触角测量可任选地提供对选择包衣材料有用的以下信息（不希望被一个封闭的清单限制）：

1.更小的接触角给出更光滑的膜包衣

2.接触角随着孔隙率和成膜物浓度的下降变小。

3.具有高沸点和高介电常数的溶剂减小接触角。

4.核心的临界表面张力越高，膜越好附着到该核心上。

5.接触角越小，膜越好附着到该核心上。

包衣有疏水固体脂肪的所述核心或颗粒的临界表面张力基本上非常低。因此为了提供更好的展开并且由此外部包衣层膜更好地附着到该核心上，根据至少一些实施例，希望在该脂肪包衣的核心/颗粒的表面与该外部包衣层聚合物溶液之间的界面处减小表面自由能。

根据本发明的一个优选实施例，将包衣有所述疏水固体脂肪（内部包衣层）的所述核心混合物的微粒用一种中间包衣层进行包衣，该中间包衣层的0.1%水溶液在25℃下测量具有低于60mN/m，优选低于50mN/m且最优选低于45mN/m的表面张力，用于在该脂肪包衣的核心/颗粒的表面与该外部包衣层聚合物溶液之间的界面处减小表面自由能。

例如，以下表，表2，示出了一些水溶性聚合物溶液的表面张力。在25oC、聚合物的0.1%水溶液下测量表面张力。

表2-所选聚合物的表面张力值

聚合物	表面张力mN/m
		羧甲基纤维素钠（Na-CMC）	71.0

羟乙基纤维素（HEC）	66.8
		羟丙基纤维素（HPC）	43.6
羟丙基甲基纤维素（HPMC）	46-51
		羟甲基纤维素（HMC）	50-55

可以用作中间包衣层的聚合物的非限制性实例包括羟丙基甲基纤维素（HPMC），羟丙基乙基纤维素（HPEC），羟丙基纤维素（HPC），羟丙基甲基纤维素（HPEC），羟甲基丙基纤维素（HMPC），乙基羟乙基纤维素（EHEC）（羟乙基纤维素乙基醚），羟乙基甲基纤维素（HEMC），羟基甲基乙基纤维素（HMEC），丙基羟乙基纤维素（PHEC），甲基羟乙基纤维素（MHEC），疏水改性的羟乙基纤维素（NEXTON），羧甲基羟乙基纤维素（CMHEC），甲基纤维素，乙基纤维素，水溶性的乙酸乙烯酯共聚物，树胶，多糖如藻酸以及藻酸盐如藻酸铵、藻酸钠、藻酸钾，pH-敏感聚合物例如肠溶聚合物包括邻苯二甲酸酯衍生物如碳水化合物的邻苯二甲酸、直链淀粉邻苯二甲酸乙酸酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素（CAP）、其他邻苯二甲酸的纤维酯、邻苯二甲酸的纤维醚、邻苯二甲酸羟丙纤维素（HPCP）、邻苯二甲酸羟丙基乙基纤维素（HPECP）、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素（HPMCP）、羟丙基甲基纤维素琥珀酸乙酸酯（HPMCAS）、邻苯二甲酸甲基纤维素（MCP）、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯（PVAcP）、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸氢、CAP钠、淀粉酸邻苯二甲酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素（CAT）、苯乙烯-马来酸二丁基邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯-马来酸/聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯与马来酸共聚物，聚丙烯酸衍生物如丙烯酸以及丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸及其酯、聚丙烯酸与甲基丙烯酸共聚物、虫胶（shellac）以及乙酸乙烯酯和巴豆酸共聚物。优选的pH-敏感聚合物包括虫胶，邻苯二甲酸衍生物，CAT，HPMCAS，聚丙烯酸衍生物，特别是包括丙烯酸和丙烯酸酯，EudragitTM S（聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:2）；Eudragit L100TM（聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:1）；Eudragit L30DTM，（聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1）；以及（Eudragit L100-55）（聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1）（EudragitTML是合成自甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯的一种阴离子聚合物）中至少一者的共聚物，与丙烯酸和丙烯酸酯共聚物共混的聚甲基丙烯酸甲酯，藻酸以及藻酸盐如藻酸铵、藻酸钠、藻酸钾、藻酸镁或藻酸钙，乙酸乙烯酯共聚物，聚乙酸乙烯酯30D（30%水中分散体），可得自Rohm Pharma（罗姆制药公司）（Degusa）“EudragitE^TM名下的中性甲基丙烯酸酯聚(丙烯酸二甲氨基乙酯)，具有小部分三甲基胺基乙基甲基丙烯酸氯酯（Eudragit RL，Eudragit RS）的甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸乙酯的共聚物，甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸乙酯（Eudragit NE30D）、玉米素、虫胶、树胶、多糖的共聚物，和或其一个组合。

外部层

根据本发明的至少一些实施例，该组合物进一步包括一个外部层，该外部层包括具有在标准试验条件（即，73°F（23℃）以及0%RH）下测量的小于1000cc/m²/24hr、优选地小于500cc/m²/24hr且最优选地小于100cc/m²/24hr的氧传递速率，以及小于400g/m²/天、优选地小于350g/m²/天且最优选地小于300g/m²/天的水蒸气传递速率的一种聚合物，其包衣具有经调节表面的所述水密封包衣的微粒，用于减小或防止氧和湿气传递到该核心中，由此获得含有证明对抗湿气连同氧两者的改进稳定性的益生菌的多层微粒。以下描述了此类聚合物的不同合适实例。

膜的水蒸气渗透性（WVP）

水蒸气渗透性是所述外层包衣膜的最重要特性之一，主要因为水在变质反应中的作用的重要性。

水充当溶剂或载体并且引起质地退化、化学和酶促反应，并且由此破坏益生菌。食物的水活度也是与食物和含益生菌食物的保质期相关的一个重要参数。在低湿型食物和益生菌中，必须维持低水平的水活度以最小化变质的化学和酶促反应并且防止质地退化。成膜材料（亲水和疏水特征）的组合物、环境的温度和相对湿度影响这些膜的水蒸气渗透性。

当考虑到含益生菌食物中的一个合适屏障时，这些膜的屏障特性是重要参数。

多糖膜以及包衣通常是对抗氧和二氧化碳的良好屏障并且具有良好的机械特性，但是它们对抗水蒸气的屏障特性由于它们的亲水特征而较差。

为了添加另外的疏水组分（例如，脂类（蜡、脂肪酸））到该膜中并且产生一种复合膜是达到更好的水蒸气屏障的一种方式。在此该脂类组分用作对水蒸气的屏障。通过添加脂类，该膜的疏水性增加，且这种情况的结果是该膜的水蒸气屏障特性增加。

膜的水蒸气渗透性是应当独立于水蒸气传递驱动力的一个常量。当膜在不同水蒸气压力梯度（在相同温度下）时，水蒸气通过该膜的流动不同，但是它们的计算的渗透性应当是相同的。亲水膜不发生这种行为，其中水分子与膜结构中的极性基团相互作用引起增塑作用或溶胀。

渗透性计算的另一个固有假定是它独立于膜厚度。这种假设对于亲水膜是不真实的。由于大多数膜的实验确定的水蒸气渗透性仅应用在试验中使用的特定水蒸气梯度且针对试样的特定厚度，已经提出术语“有效渗透性”或“表观渗透性”的使用。

通过一种复合物的湿气传送机制取决于材料和环境条件。在复合物的情况下，渗透性具有两个不同特征。首先；在非-多孔膜中，渗透可以通过溶解和扩散发生；并且其他的；在多孔膜中可能同时存在通过开孔的渗透。

存在测量渗透性的不同方法。重量损失测量对确定渗透性特征而言是重要的。水蒸气渗透性通常通过直接称重确定，尽管它的固有问题，主要涉及水的特性，例如高溶解度以及聚合物内成簇以及增塑该聚合物基质的倾向，这是简便且相对可靠的方法。这种方法的主要缺点存在于当需要这样一种响应时，它无力提供用于动力学特性的信息。

另一种测量方法基于ASTM E96–80（对水蒸气渗透性的标准试验方法程序）中描述的标准。根据这种方法，重力法地确定水蒸气渗透性且通常，所应用的这些程序在与此目的相关的许多研究论文中是近乎相同的。在这个程序中首先，将该试验膜密封到含有无水氯化钙（CaCl2）、或硅胶（相对蒸气压；RVP=0）的玻璃渗透小室中，并且然后将该小室置于用硝酸镁或乙酸钾维持在特定相对湿度和温度（通常是300C，22%RH）下的干燥器中。对渗透小室进行连续称重并记录，通过测量重量增加来确定通过该膜转移且由干燥剂吸收的水蒸气。根据时间绘制该小室的重量变化。当重量增加（Δw）与时间（Δt）之间的关系是线性时，使用该绘图的斜率来计算水蒸气传递速率（WVTR）以及水蒸气渗透性（WVP）。通过线性回归和相关系数（r2>>0.99）来计算斜率。

从直线的斜率（Δw/Δt）除以试验面积（A），（g s-1m-2）来计算WVTR；

WVTR=Δw/(Δt.A)(g.m-2.s-1)

其中Δw/Δt=转移速率，每时间单位水分损失的量（g.s-1）；

A=暴露于水分转移的面积（m2）

如下计算WVP（kg Pa-1s-1m-1）；

WVP=[WVTR/S(R1-R2)].d

其中S=在试验温度下水的饱和汽压（Pa），R1=干燥器中的RVP（相对蒸气压），R2=渗透小室中的RVP，并且d=膜厚度（m）。对于WVP每个膜应当试验至少三个重复，并且在渗透性确定之前所有的膜应当与特定RH平衡。

还可以从如下WVTR计算水蒸气渗透性；

P=WVTR.L/Δp(g/m^2.s.Pa)

L=膜厚度（m）；Δp=该膜两侧的水蒸气压梯度（Pa）；P=膜渗透性（g.m-2.s-1Pa-1）。

渗透率通常由渗透性（P）而不是由该膜中渗透剂的扩散系数（D）与溶解度（S）表示。当水蒸气与膜之间没有相互作用时，这些法则适合均质材料。那么，渗透率遵循如下溶解-扩散模型；

P=D.S

其中D是扩散系数并且S是吸着等温线的斜率且针对线性吸着等温线是恒定的。扩散系数描述了通过聚合物的渗透分子的运动，并且由此表示聚合物-渗透系统的动力特性。

作为多糖膜亲水特征的结果，膜的水蒸气渗透性与它们的厚度有关。渗透性值随着膜厚度的增加而增加。

膜厚度和成膜聚合物的分子量（MW）还可以影响这些膜的水蒸气渗透性（WVP）与氧渗透性（OP）两者。

氧传递确定（OTR）

氧传递速率是在温度和相对湿度的规定条件下氧气渗透通过膜的稳态速率。值以美国标准单位cc/100in2/24hr以及公制（或SI）单位cc/m2/24hr表示。

为了评估包衣对核心的保护功能，测量它的气体渗透性。根据本发明的至少一些实施例，用于益生菌的改进的稳定性的最关键气体是氧。熟知的是益生菌是厌气微生物，其中在暴露于氧时它们的活力会显著下降。因此为了提供长期稳定性并接受用于益生菌的延长的保质期，该外部层优选提供了一个重要的氧屏障。

气体渗透性，q，（ml/m^2.天.atm）（DIN53380）被定义为转换到0°C和760托（torr）的、在特定温度和压力梯度下在一天内渗透1m^2的要试验的膜的气体体积。因此根据以下公式进行计算；

q={T_o.P_u/[P_o.T.A(P_b-P_u)]}.24.Q.(Δx/Δt).10^4

P_o=常压（atm）

T_o=常温（K）

T=实验温度（K）

A=样品面积（m^2）

T=两次测量之间的时间间隔（hrs）

P_b=大气压（atm）

P_u=样品与水银螺纹之间的试验室内压力

Q=毛细管截面（cm）

Δx/Δt=水银螺纹的下沉率（cm/hr）

例如，以下表，表3，示出了一些水溶性聚合物的OTR和WVTR。

表3-OTR和WVTR值

合适外层包衣聚合物的非限制性实例包括溶于水的亲水聚合物，例如像聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯酮（PVP：聚乙烯吡咯烷酮）、共聚维酮（乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物）、Kollicoat Protect（BASF）（它是Kollicoat IR（一种聚乙烯醇（PVA）-聚乙二醇（PEG）接枝共聚物）与聚乙烯醇（PVA）的混合物）、Opadry AMB（Colorcon）（它是基于PVA的混合物）、Aquarius MG（它是一种基于纤维素的含有天然蜡、卵磷脂、黄原胶以及滑石的聚合物）、低分子量HPC（羟丙基纤维素）、低分子量HEC（羟乙基纤维素）、低分子量羧基甲基纤维素如7LF或7L2P、或其一种混合物。在一些情况下，水溶性聚合物与不溶性试剂（例如蜡、脂肪、脂肪酸、等）的混合物可以是有益的。

更优选地，该外部包衣聚合物是羧甲基纤维素（例如7LF或7L2P）、低分子量羟乙基纤维素（HEC）以及低分子量HPC（羟丙基纤维素）。

表面包衣层

根据本发明的至少一些实施例，该组合物包括一个表面包衣层，该层包括具有小于400g/m²/天，优选小于300g/m²/天且最优选小于200g/m²/天的水蒸气传递速率的一种聚合物，其包衣所述氧和湿气密封的经包衣的微粒以用于进一步降低或防止湿气传递进入该核心中，由此获得含有证明同样对抗湿气的改进稳定性的益生菌的多层微粒。

适合表面包衣层的非限制性实例包括溶于水的亲水聚合物，例如像聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯酮（PVP：聚乙烯吡咯烷酮）、共聚维酮（乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物）、Kollicoat Protect（BASF）（它是Kollicoat IR（一种聚乙烯醇（PVA）-聚乙二醇（PEG）接枝共聚物）与聚乙烯醇（PVA）的混合物）、Opadry AMB（Colorcon）（它是基于PVA的混合物）、Aquarius MG（它是一种基于纤维素的含有天然蜡、卵磷脂、黄原胶以及滑石的聚合物）、低分子量HPC（羟丙基纤维素）、低分子量羧基甲基纤维素如7LF或7L2P、或其一种混合物。在一些情况下，水溶性聚合物与不溶性试剂（例如蜡、脂肪、脂肪酸、等）的混合物可以是有益的。

更优选地，该表面包衣聚合物是聚乙烯醇、Kollicoat Protect（BASF）（它是Kollicoat IR（一种聚乙烯醇（PVA）-聚乙二醇（PEG）接枝共聚物）与聚乙烯醇（PVA）的混合物）、Opadry AMB（Colorcon）（它是基于PVA的混合物）、低分子量HPC（羟丙基纤维素）以及Aquarius MG（它是一种基于纤维素的含有天然蜡的聚合物）。这些聚合物提供了优秀的屏障特性，抵抗水蒸气/湿气渗透到该核心材料中。

肠溶包衣层

根据本发明的优选实施例，这些核心微粒进一步任选地由可以进一步提供对抗例如存在于胃肠道中的破坏性条件的保护的肠溶聚合物进行包衣。

合适肠溶聚合物的非限制性实例包括pH-敏感的聚合物、碳水化合物的邻苯二甲酸、直链淀粉邻苯二甲酸乙酸酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素（CAP）、其他邻苯二甲酸的纤维酯、邻苯二甲酸的纤维醚、邻苯二甲酸羟丙纤维素（HPCP）、邻苯二甲酸羟丙基乙基纤维素（HPECP）、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素（HPMCP）、羟丙基甲基纤维素琥珀酸乙酸酯（HPMCAS）、邻苯二甲酸甲基纤维素（MCP）、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯（PVAcP）、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸氢、CAP钠、淀粉酸邻苯二甲酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素（CAT）、苯乙烯和马来酸共聚物、苯乙烯-马来酸二丁基邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯-马来酸/聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯共聚物，聚丙烯酸衍生物如丙烯酸以及丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸及其酯、聚丙烯酸与甲基丙烯酸共聚物，聚丙烯酸衍生物特别是包括丙烯酸和丙烯酸酯，Eudragit STM（聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:2）；Eudragit LTM（合成自甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯的一种阴离子聚合物）、Eudragit L100TM（聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:1）；Eudragit L30DTM，（聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1）；以及Eudragit L100-55TM（聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1）中至少一者的共聚物，与丙烯酸和丙烯酸酯共聚物共混的聚甲基丙烯酸甲酯，藻酸以及藻酸盐如藻酸铵、藻酸钠、藻酸钾、藻酸镁或藻酸钙。

根据本发明的至少一些实施例，用于制备稳定益生菌组合物的方法

本发明提供了用于制备食物产品的、抵抗热、氧以及湿气的益生菌的方法。在本发明的一个实施例中，将所述稳定的益生菌微粒添加到食物产品（例如奶油、烤制食品、奶油饼干或注心饼干、巧克力、调味汁、乳酪、蛋黄酱等）中。

在一个优选实施例中，本发明的优选方法包括处于固体微粒物质形式的、含有益生菌的核心组合物的制备，随后将不同包衣层在该微粒核心组合物上成层。该核心组合物可任选地通过用于制备微粒物质的任何合适方法来制备，包括但不局限于干制混合物、湿制颗粒、干法制粒或热熔融（任选处于造粒法的形式）。

根据上述方法之一制备的核心组合物包含至少一种益生菌以及稳定剂，其中该混合物中的益生菌的总量按该核心组合物的重量计从约10%至约90%。

该稳定剂可任选地包括任何类型的氧清除剂，包括但不局限于含有L-半胱氨酸基或盐酸盐的那些，在此列出该稳定剂的其他实例。

核心组合物还可任选地包括至少一种糖化合物，包括但不局限于麦芽糊精、海藻糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、果糖以及类似物，在此提供该组合物的其他实例。二糖，如蔗糖以及海藻糖，作为该核心内的保护剂引人注意，因为它们实际上帮助植物以及微生物细胞在干旱时期保持在滞生状态。海藻糖已经示出为在环境空气-干燥以及冻干两者中，用于多种生物材料的有效的保护剂。

该核心组合物还可任选地包括一种或多种其他食品级成分，包括但不局限于充填剂、表面活性剂以及粘合剂，在此提供该组合物的不同的非限制性实例。

可以可任选地在该核心制备方法中顺序地添加这些不同的成分或可替代地可以可任选地以任何合适组合一起添加。

一旦已经形成该核心组合物，用最内包衣层进行包衣，在所述核心组合物上成层，包括具有低于60℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸。

该最内包衣层可任选地包括具有低于50℃且优选高于25℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸。该熔点任选优选低于45℃且高于30℃，并且任选且最优选低于40℃且高于35℃。该最内包衣层可任选地形成一种稳定的疏水基质，该基质将核心组合物包埋其中和/或在该益生菌核心组合物的周围形成一个膜。

接着，将该中间包衣层在该最内包衣层上成层。如前述所，关于该中间包衣层，当在25℃测量时，当其以溶液重量的0.1%重量/重量的量存在于水溶液中时，该包衣层材料具有低于60mN/m的表面张力。当在25℃测量时，当其以溶液重量的0.1%重量/重量的量存在于水溶液中时，该中间包衣层任选地具有低于50mN/m并且优选低于45mN/m的表面张力。该中间包衣层任选地包括至少一种选自下组的增塑剂，该组由以下各项组成：聚乙二醇（PEG）、柠檬酸三乙酯以及三乙酸甘油酯。

接着，将该外部包衣层在该中间包衣层上成层。该外部包衣层任选地包括一种聚合物，当在标准试验条件（可以是例如73°F（23℃）以及0%RH）下测量时，该聚合物具有小于1000cc/m²/24hr，优选小于500cc/m²/24hr并且最优选小于100cc/m²/24hr的氧传递速率。该聚合物还任选地具有小于400g/m²/天，优选小于350g/m²/天并且最优选小于300g/m²/天的水蒸气传递速率。该中间包衣层充当一种粘合剂或“胶水（glue）”以将该外部包衣层粘合到该最内包衣层上。

该组合物可任选地进一步包括一个额外的湿气屏障包衣层，在该外部包衣层上成层，用于进一步防止湿气渗透。如果存在的话，将另外的湿气屏障包衣层在该外部包衣层上成层。

该组合物可任选地进一步包括一种肠溶聚合物，在该湿气屏障包衣层上成层，其可以进一步提供对抗胃肠道的此类破坏性特征（如低pH值以及蛋白水解酶）的保护。该肠溶聚合物任选地包括至少一种选自下组的增塑剂，该组由以下各项组成：聚乙二醇（PEG）、柠檬酸三乙酯以及三乙酸甘油酯。

应当指出，“成层”意思是用于将包衣层添加到组合物上的任何合适方法，包括但不局限于喷雾、浸渍、喷洒等。一旦将这些层添加到该核心组合物上，形成具有三个、四个或更多个包衣层的微粒。

可以任选地可以将以下成分的组合用作非限制性实例：该至少一种糖可以包括，乳糖、半乳糖或其一种混合物，所述至少一种低聚糖或多糖可以包括，半乳聚糖、麦芽糊精、以及海藻糖，所述稳定剂包括L-半胱氨酸基，所述表面活性剂包括吐温80（聚山梨醇酯80、聚氧乙烯（20）脱水山梨糖醇单油酸酯），所述充填剂包括乳糖DC和/或微晶纤维素，所述粘合剂包括羟丙基甲基纤维素，所述疏水固体脂肪或脂肪酸包括月桂酸和/或可可脂所述内部包衣层可以包括月桂酸和/或可可脂，所述中间包衣层聚合物可以包括藻酸或藻酸钠，所述外部包衣层包括羧甲基纤维素（CMC）7LFPH和/或羧甲基纤维素（CMC）7L2P，所述增塑剂是聚乙二醇（PEG）400和/或三乙酸甘油酯并且所述表面包衣层包括羟丙基纤维素。

根据本发明的另一个非限制性实施例，提供了制造如以下稳定组合物中的益生菌的另一种方法。首先，将核心材料与益生菌、稳定剂、至少一种糖以及至少一种低聚糖，以及任选地其他食物级添加剂（例如充填剂、表面活性剂、粘合剂、抗氧化剂等等）与益生菌制备为一种混合物，由此获得一种核心混合物。

然后使用净化水中的粘合剂溶液或净化水在空气亦或氮环境下将该核心混合物进行湿法造粒；可替代地，使用热熔融制粒法通过使用具有低于50℃熔点的疏水固体脂肪或脂肪酸的熔融物制备该核心混合物。在任何情况下，该制粒法产生颗粒的核心微粒。

用包括疏水固体脂肪或脂肪酸的一种内部包衣层对所述核心组合物的微粒进行包衣，以防止或降低水或湿气渗透到所述核心，由此获得水密封的经包衣的微粒。

将该水密封的核心微粒用一种中间包衣层进行包衣用于调节表面张力，由此获得具有经调节的表面张力的、水密封的、经包衣的微粒。

将具有经调节的表面张力的、水密封的、经包衣的微粒用一个外部包衣层进行包衣，用于减少传递到该核心中的氧和湿气，获得氧和湿气密封的、经包衣的微粒。

将该氧和湿气密封的、经包衣的微粒用一个表面包衣层进行包衣，用于减少传递到该核心中的湿气，由此获得含有示出对抗氧和湿气的优秀稳定性的益生菌的多层微粒。

在此描述的造粒可任选地用流化床技术，例如Glatt或Glatt turbo jet、或一台Innojet包衣机/颗粒机、或Huttlin包衣机/颗粒机、或Granulex来进行。

在任何情况下，根据以上方法得到的益生菌组合物可任选地被导入一种食物产品中，该产品在其制备方法中还可能经历一个加热步骤。可替代地，上述得到的益生菌组合物可任选地被添加到一种食物产品中，该产品在其制备方法中可以不经历一个加热步骤。

实例1-示例性配制品的制备和试验

在此如在配方I中所述的、示例性、示意性配制品的制备如下述进行。对配方I的进行的试验也如下述进行。

对于配方I的制备，将海藻糖二水合物160g、麦芽糊精DE15314g、L-半胱氨酸-HCl一水合物6g以及细菌BB12（双歧杆菌-BB12）120g装入Innojet ventilus机器以接收干共混物。将月桂酸270g在50℃下使用加热板同时搅拌进行熔融。然后在惰性气氛下使用氮将月桂酸的热熔融物喷雾到上述干共混物上。泵头、液体以及喷雾压力的温度设置在60℃。因此基于热熔融造粒法形成核心微粒。

接着，将这些不同的层如以下包衣在这些核心微粒上。对于第一（最内）层，将月桂酸315g在50℃下使用加热板同时搅拌进行熔融。然后在惰性气氛下使用氮将月桂酸的热熔融物喷雾到上述颗粒上，并且获得膜包衣的此类喷雾参数如第一密封层。然后将Na-藻酸盐（25.2g）溶液（2%w/w在净化水中）喷雾到上述获得的颗粒（400g）上从而获得Na-藻酸盐包衣的颗粒。将320g的上述所得Na-藻酸盐包衣的重新颗粒装入到Innojet ventilus机器中，并且喷雾额外部分的Na-藻酸盐（58.97g）溶液（2%w/w在净化水中）以最终获得该配制品中16.4%W/W的Na-藻酸盐。然后将290g的上述所得Na-藻酸盐包衣的颗粒重新装入到Innojetventilus机器中，并且将Na-羧甲基纤维素（Na-CMC）（72.92g）和19.98g聚乙二醇（PEG400）（PEG400/Na-CMC，20%w/w）的水溶液（5%w/w）喷雾到上述所得Na-藻酸盐包衣的颗粒上，以获得Na-CMC包衣的颗粒。然后将250g的上述所得Na-CMC包衣的颗粒重新装入到Innojetventilus机器中，并且喷雾额外部分的Na-CMC（61.70g）和15.4g PEG400（PEG400/Na-CMC，20%w/w）的水溶液（5%w/w），以最终获得该最终产品中29.32%W/W的Na-CMC+PEG400。

将该最终产品，配方I的微粒，进行干燥并且在制冷下与适当的干燥剂保持在双重密封的聚乙烯袋中。应当指出，从制备的上述阶段取样并且如下所述进行试验。

用于配方I中封装的双歧杆菌-BB12的集落形成单位总计数试验方法

以下试验方法用于如上所述配方I中制备的、封装的双歧杆菌-BB12的集落形成单位-总计数（CFU）的确定。该方法基于封装的益生菌的这些包衣层的溶解，以在进行CFU试验之前释放这些益生菌。

在这个程序中，水合以及溶解方法两者都用于这些包衣的微粒，模拟胃肠道并且因此模拟摄取这些包衣的微粒的效果。其结果是，释放游离的细菌细胞。结合不同选择剂的介质用于帮助特定种类的恢复，并且缺氧条件中的孵育用于有机体的增加的恢复。这个方法使用MRS琼脂，其中添加的盐酸半胱氨酸作为氧清除剂。

将这些样品一式两份地置于板上并且报告平均计数（CFU/g）。

该设备包括一种无菌的取样装置；0.45微米过滤单位；菌落计数器；无菌皮氏培养皿；无菌移液管；孵育器37+/-2℃；水浴45+/-2℃用于介质回火；Gaspak缺氧系统：罐，或塑料室，缺氧包，以及缺氧指示剂；高压灭菌器；研钵及研棒；细菌分离器；分析天平；以及载玻片。

介质：

使用了以下介质和试剂：MRS肉汤，Difco#288130（500g）；MRS琼脂，细菌培养用琼脂#21401（484g）；L-盐酸半胱氨酸，J.T.烘箱#G121-05；吐温-85（聚氧乙烯脱水山梨醇三油酸酯），西格马#P4634（500mL）；巴特菲尔德氏缓冲磷酸盐稀释剂（Butterfield’s BufferedPhosphate Diluent）（BUT）MB101。

如以下制备MRS肉汤（55g/L）。在一个1000ml烧瓶中，放置以下成分并混合：500ml去离子水；27.5克的脱了水的MRS肉汤；1ml吐温-80（聚山梨醇酯80，聚氧乙烯（20）脱水山梨糖醇单油酸酯）（灭菌之前）。将该肉汤在25℃调节至6.5+/-0.2的pH

如以下制备MRS琼脂（70g/L）。在一个1000ml烧瓶中，放置以下成分并混合：500ml去离子水；35克的脱了水的MRS肉汤；随后在25℃调节至6.5+/-0.2的pH。在该琼脂灭菌之后，添加经过滤灭菌的L-半胱氨酸。

MRS：MRS琼脂的构成（从Difco288210购买即用型的或等效物）：

如以下制备盐酸半胱氨酸（10%溶液）。将10克的L-半胱氨酸添加到一个干净的200ml烧瓶中，用去离子水添加至达到100ml体积。溶解L-半胱氨酸并使用0.45微米过滤单元进行过滤灭菌。

使用以下程序来试验配方I的组合物的保护效应，从而在储存期间保护细菌且模拟在胃肠道中释放，并且递送活的、有活力的细菌到肠内集群位点。如下文使用，术语“样品”是指配方I的组合物。

将约20g的样品用研钵和研棒压碎约120秒，直到该样品被匀质且精细地压碎。

将10克的该制备的压碎的益生菌样品置于无菌细菌分离器袋中。将99mL的温磷酸盐缓冲液添加到该袋中，在48℃水浴加温。

均匀地溶解该粉末并且然后于孵育器（37℃）中放置15min（水合作用时间）。接着，添加2mL的在水合混合物中的吐温85（聚氧乙烯脱水山梨醇三油酸酯）。将该袋在水浴中保持2分钟，随后应用该细菌分离器在250RPM持续2min并且于水浴中再孵育1min。再次应用该细菌分离器在250RPM持续1min。连续稀释所得溶液。

将来自多个适当稀释的1ml置于适当标记的无菌皮氏板上，随后在约48℃的温度下倒入MRS琼脂。对于每一个100ml的MRS琼脂，在倒入之前添加0.5mL的过滤灭菌的10%L-盐酸半胱氨酸。一式两份地制备板。

将这些板在37℃缺氧孵育48-72小时，随后进行集落计数。

在集落计数后进行以下定量程序。

针对具有25-400个集落的那些板进行选择之后，在MRS-半胱氨酸板上进行集落计数，并且将数量记录为每克的益生菌活细胞数（CFU/g），平板计数的稀释因子考虑在内。在给定的稀释度针对每克的总活力计数（即，CFU/g）平均来自每个板的计数。

结果

来自用于制备配方I的组合物的方法的不同阶段的试验结果示出为下表，表4中的CFU/g。

表4-制备的不同阶段之后的益生菌活力

样品	CFU/g
		BB12的热熔融颗粒	1.42X10exp13
BB12的Na-藻酸盐包衣的颗粒	2.19X10exp13
		BB12的CMC包衣的颗粒	5.42X10exp12-1.29X10exp13

如可以从这些结果中看出，尽管这些结果中具有一些差异性，但是完全包衣的微粒为细菌提供了最佳保护。

应理解本发明的某些特性出于清楚的目的在上下文中分离的实施例中描述，其还可以通过单个实施例的组合来提供。相反地，也可以单独地或者以任何合适子组合的方式来提供为了简洁起见而在单个实施例的上下文中描述的本发明的各个特征。

尽管本发明已经结合其具体的实施例进行说明，但很明显很多替代方案、修改、和变体对本领域的普通技术人员将是清楚的。因此，此处旨在涵盖落于所附权利要求的精神和广义范围内的所有这些替代方案、修改、及变化。在该说明书中提供的所有公开、专利和专利申请在此处通过引用结合到本说明书中，这达到如同每个单独的公布、专利、或专利申请具体地或单独地指明要通过引用结合在此的相同的程度。此外，在该申请中的任何参考文件的引用或认定不应被解释为承认该参考文件是本发明的现有技术。

Claims (69)

1.包括益生菌的一种组合物，该组合物包括：(a)包含益生菌以及稳定剂的一种核心组合物，其中该混合物中的益生菌的总量按重量计是该核心组合物的从10％至90％；(b)一个最内包衣层，在所述核心组合物上成层，包括具有低于60℃熔点的至少一种疏水固体脂肪、脂肪酸或一种蜡；(c)一个中间包衣层，在所述最内包衣层上成层，当在25℃测量时，当以溶液重量的0.1％重量/重量的量存在于水溶液中时，具有低于60mN/m的表面张力；以及(d)一个外部包衣层，该外部包衣层包括具有在标准试验条件下测量的、小于1000cc/m²/24hr的氧传递速率的一种聚合物，该外部包衣层在所述中间包衣层上成层；其中该组合物处于微粒的形式。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述稳定剂包括一种氧清除剂。

3.如权利要求2所述的组合物，其中所述氧清除剂包括以下一种或多种：L-盐酸半胱氨酸、L-半胱氨酸碱、4,4’-(2,3-二甲基四亚甲基)二邻苯二酚、富含生育酚的提取物、α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二酯、叔丁基氢醌(TBHQ)、富马酸、苹果酸、抗坏血酸(维生素C)、抗坏血酸钠、抗坏血酸钙、抗坏血酸钾、抗坏血酸棕榈酸酯、或抗血酸硬脂酸酯。

4.如权利要求2所述的组合物，其中所述稳定剂包括一种材料，该材料选自下组，该组由以下各项组成：乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸钙二钠、乙二胺四乙酸、富马酸、苹果酸、麦芽酚、乙二胺四乙酸钠、以及乙二胺四乙酸三钠。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述核心组合物进一步包括至少一种糖化合物。

6.如权利要求5所述的组合物，其中所述至少一种糖化合物包括以下一种或多种：一种单糖、一种二糖、一种三糖、一种四糖、一种更高的低聚糖、或一种多糖。

7.如权利要求6所述的组合物，其中所述单糖包括以下一种或多种：一种丙糖、一种丁糖、一种戊糖、一种己糖、一种庚糖、一种辛糖、或一种壬糖；或其任何脱氧形式。

8.如权利要求7所述的组合物，其中所述单糖包括以下一种或多种：酮丙糖(二羟基丙酮)、醛丙醣(二羟基丙醛)、酮丁糖(赤藓酮糖)、赤藓糖、苏糖、核酮糖、木酮糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、脱氧核糖、伪果糖、果糖、山梨糖、塔格糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、太洛糖、海藻糖、墨角藻糖、鼠李糖、景天庚酮糖、或神经氨酸。

9.如权利要求6所述的组合物，其中所述二糖包括以下一种或多种：蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、松二糖、或纤维二糖。

10.如权利要求6所述的组合物，其中所述三糖包括以下一种或多种：棉子糖、松三糖、或麦芽三糖。

11.如权利要求6所述的组合物，其中所述四糖包括以下一种或多种：阿卡波糖、或水苏糖。

12.如权利要求6所述的组合物，其中所述更高的低聚糖包括以下一种或多种：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、或甘露聚糖-低聚糖(MOS)。

13.如权利要求6所述的组合物，其中所述多糖包括以下一种或多种：基于葡萄糖的多糖，基于果糖的多糖，基于甘露糖的多糖、基于半乳糖的多糖、基于N-乙酰葡糖胺的多糖、或树胶。

14.如权利要求13所述的组合物，其中所述基于葡萄糖的多糖选自葡聚糖纤维素、糊精、右旋糖酐、β-葡聚糖或麦芽糖糊精，所述基于果糖的多糖选自果聚糖。

15.如权利要求14所述的组合物，其中所述果聚糖为果聚糖β2-6。

16.如权利要求13所述的组合物，其中所述多糖包括以下一种或多种：直链淀粉、支链淀粉、酵母聚糖、香菇多糖、西佐糖、菊糖、甘露聚糖、半乳聚糖、壳多糖、阿拉伯树胶(arabicgum)、或金合欢胶(gum acacia)。

17.如权利要求1所述的组合物，其中所述核心进一步包括以下一种或多种：一种充填剂、一种表面活性剂或粘合剂。

18.如权利要求17所述的组合物，其中所述充填剂包括以下一种或多种：微晶纤维素，一种糖；磷酸二钙；糖醇，氢化的淀粉水解产物；玉米淀粉；以及马铃薯淀粉。

19.如权利要求18所述的组合物，其中所述充填剂包括以下一种或多种：乳糖、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖醇、木糖醇、异麦芽糖醇、或赤藓糖醇。

20.如权利要求19所述的组合物，其中所述充填剂是乳糖。

21.如权利要求17所述的组合物，其中所述粘合剂包括以下一种或多种：聚维酮(PVP：聚乙烯吡咯烷酮)、共聚维酮(乙烯基吡咯烷酮与醋酸乙烯酯的共聚物)、聚乙烯醇、低分子量羟丙基纤维素、低分子量羟丙基甲基纤维素、低分子量羧甲基纤维素、低分子量羧甲基纤维素钠、低分子量羟乙基纤维素、低分子量羟甲基纤维素、乙酸纤维素、明胶、水解的明胶、聚氧化乙烯、阿拉伯树胶、糊精、淀粉、水溶性聚丙烯酸酯和/或聚甲基丙烯酸酯、低分子量乙基纤维素、具有低于60℃熔点的疏水固体脂肪或脂肪酸或一种蜡或一种聚乙二醇。

22.如权利要求21所述的组合物，其中所述粘合剂是低分子量羟丙基甲基纤维素。

23.如权利要求17所述的组合物，其中所述表面活性剂包括：吐温80(聚山梨醇酯80、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯)、吐温20(聚山梨醇酯20、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、吐温85(聚氧乙烯脱水山梨醇三油酸酯)、甘油聚醚-2-椰油酸酯、甘油聚醚-6-椰油酸酯、甘油聚醚-7-椰油酸酯或甘油聚醚-17-椰油酸酯。

24.如权利要求1所述的组合物，其中所述益生菌包括以下一种或多种：凝结芽孢杆菌GBI-30、纳豆枯草杆菌变种、双歧杆菌属LAFTI B94、两岐双岐杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌、大肠埃希氏菌M-17、尼氏大肠杆菌(Escherichia coli Nissle 1917)、嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、拟干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌ATCC55730、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳球菌、强壮乳杆菌(Lactobacillus fortis)Nestlé、约氏乳杆菌La1Nestlé、嗜热链球菌、酿酒酵母。

25.如权利要求24所述的组合物，其中所述长双歧杆菌是长双歧杆菌Rosell-175；所述动物双歧杆菌选自动物双歧杆菌乳酸亚种BB-12、动物双歧杆菌乳酸亚种HN019和动物双歧杆菌35624；所述嗜酸乳杆菌选自嗜酸乳杆菌和嗜酸乳杆菌Rosell-52；所述干酪乳杆菌是干酪乳杆菌所述乳酸乳球菌选自乳酸乳球菌乳酸亚种和乳酸乳球菌Rosell-1058；所述拟干酪乳杆菌是拟干酪乳杆菌St11；所述鼠李糖乳杆菌是鼠李糖乳杆菌Rosell-11。

26.如权利要求24所述的组合物，其中所述两岐双岐杆菌为两歧双歧杆菌rosell-71，所述短双歧杆菌为短双歧杆菌Rosell-70。

27.如权利要求1所述的组合物，其中所述最内包衣层包括具有低于50℃熔点的至少一种疏水固体脂肪或脂肪酸。

28.如权利要求27所述的组合物，其中所述熔点高于25℃。

29.如权利要求28所述的组合物，其中所述熔点低于45℃且高于30℃。

30.如权利要求29所述的组合物，其中所述熔点低于40℃且高于35℃。

31.如权利要求27所述的组合物，其中所述最内包衣层包括：脂肪酸、脂肪酸酯；脂肪酸的铝盐、钠盐、钾盐以及镁盐；脂肪醇、磷脂、固体脂肪、蜡、及其一个组合。

32.如权利要求31所述的组合物，其中该最内包衣层包括一种固体脂肪，该固体脂肪包括月桂酸、氢化的椰子油、可可脂中的一种或多种。

33.如权利要求1所述的组合物，其中所述最内包衣层形成一种稳定的疏水基质，该基质将核心组合物包埋其中和/或在该益生菌核心组合物的周围形成一个膜。

34.如权利要求33所述的组合物，其中所述核心包括多个核心且所述多个核心被包埋在所述稳定的疏水基质中。

35.如权利要求1所述的组合物，其中当在25℃测量时，当以溶液重量的0.1％重量/重量的量存在于水溶液中时，所述中间包衣层具有低于50mN/m的表面张力。

36.如权利要求35所述的组合物，其中所述表面张力低于45mN/m。

37.如权利要求35所述的组合物，其中所述中间包衣层包括一种聚合物，该聚合物包括以下一种或多种：羟丙基甲基纤维素(HPMC)，羟丙基乙基纤维素(HPEC)，羟丙基纤维素(HPC)，羟甲基丙基纤维素(HMPC)，乙基羟乙基纤维素(EHEC)(羟乙基纤维素乙基醚)，羟乙基甲基纤维素(HEMC)，羟基甲基乙基纤维素(HMEC)，丙基羟乙基纤维素(PHEC)，甲基羟乙基纤维素(MHEC)，疏水改性的羟乙基纤维素(NEXTON)，羧甲基羟乙基纤维素(CMHEC)，甲基纤维素，乙基纤维素，水溶性的乙酸乙烯酯共聚物，多糖，碳水化合物的邻苯二甲酸、直链淀粉邻苯二甲酸乙酸酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、邻苯二甲酸的纤维酯、邻苯二甲酸的纤维醚、邻苯二甲酸羟丙纤维素(HPCP)、邻苯二甲酸羟丙基乙基纤维素(HPECP)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、羟丙基甲基纤维素琥珀酸乙酸酯(HPMCAS)、邻苯二甲酸甲基纤维素(MCP)、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯(PVAcP)、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸氢、CAP钠、淀粉酸邻苯二甲酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、苯乙烯-马来酸二丁基邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯-马来酸/聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯与马来酸共聚物、丙烯酸以及丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸及其酯、聚丙烯酸与甲基丙烯酸共聚物、以及虫胶。

38.如权利要求37所述的组合物，其中所述多糖选自树胶和藻酸盐，且所述水溶性的乙酸乙烯酯共聚物为乙酸乙烯酯和巴豆酸共聚物。

39.如权利要求37所述的组合物，其中所述多糖为藻酸。

40.如权利要求38所述的组合物，其中所述藻酸盐选自藻酸铵、藻酸钠或藻酸钾。

41.如权利要求37所述的组合物，其中所述聚合物包括以下一种或多种：虫胶，CAT，HPMCAS，包括丙烯酸和至少一种丙烯酸酯的共聚物，EudragitTM S(聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:2)；Eudragit L100TM(聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:1)；EudragitL30DTM，(聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1)；以及(Eudragit L100-55)(聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1)(EudragitTM L是合成自甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯的一种阴离子聚合物)，与丙烯酸和丙烯酸酯共聚物共混的聚甲基丙烯酸甲酯，藻酸，藻酸铵，藻酸钠，藻酸钾，藻酸镁或藻酸钙，乙酸乙烯酯共聚物，聚乙酸乙烯酯30D(30％的水中分散体)，中性甲基丙烯酸酯包括聚(丙烯酸二甲氨基乙酯)(“Eudragit E^TM)，甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸乙酯与三甲基胺基乙基甲基丙烯酸氯酯的共聚物，甲基丙烯酸甲酯和丙烯酸乙酯、玉米素、虫胶、或多糖的共聚物。

42.如权利要求41所述的组合物，其中所述多糖为树胶。

43.如权利要求1所述的组合物，其中所述外部包衣层包括羧甲基纤维素(CMC)7LFPH和/或羧甲基纤维素(CMC)7L2P。

44.如权利要求1所述的组合物，其中所述聚合物具有小于500cc/m²/24hr的一个氧传递速率。

45.如权利要求44所述的组合物，其中所述氧传递速率小于100cc/m²/24hr。

46.如权利要求1所述的组合物，其中所述外部包衣层的所述聚合物具有小于400g/m²/天的一个水蒸气传递速率。

47.如权利要求46所述的组合物，其中所述水蒸气传递速率小于350g/m²/天。

48.如权利要求47所述的组合物，其中所述水蒸气传递速率小于300g/m²/天。

49.如权利要求1所述的组合物，其中所述外部包衣层的所述聚合物包括以下一种或多种：聚乙烯醇(PVA)；聚乙烯吡咯酮(PVP：聚乙烯吡咯烷酮)；共聚维酮(乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物)；Kollicoat Protect(BASF)，它是Kollicoat IR(一种聚乙烯醇(PVA)-聚乙二醇(PEG)接枝共聚物)与聚乙烯醇(PVA)的混合物；Opadry AMB(Colorcon)，它是基于PVA的混合物；Aquarius MG，它是一种基于纤维素的含有天然蜡、卵磷脂、黄原胶以及滑石的聚合物；低分子量羟丙基纤维素、低分子量羟乙基纤维素、低分子量羧基甲基纤维素。

50.如权利要求49所述的组合物，其中所述外部包衣层进一步包括以下一种或多种：蜡、脂肪、或脂肪酸。

51.如权利要求1所述的组合物，进一步包括一个额外的湿气屏障包衣层，在该外部包衣层上成层，用于进一步防止湿气渗透。

52.如权利要求51所述的组合物，其中所述额外的湿气屏障进一步包括一种聚合物，所述聚合物包含以下一种或多种：聚乙烯醇(PVA)；聚乙烯吡咯酮(PVP：聚乙烯吡咯烷酮)；共聚维酮(乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物)；Kollicoat Protect(BASF)，它是Kollicoat IR(一种聚乙烯醇(PVA)-聚乙二醇(PEG)接枝共聚物)与聚乙烯醇(PVA)的混合物；Opadry AMB(Colorcon)，它是基于PVA的混合物；Aquarius MG，它是一种基于纤维素的含有天然蜡、卵磷脂、黄原胶以及滑石的聚合物；低分子量羟丙基纤维素、低分子量羟乙基纤维素、低分子量羧基甲基纤维素。

53.如权利要求51所述的组合物，其中所述额外的湿气屏障进一步包括以下一种或多种：蜡、脂肪、或脂肪酸。

54.如权利要求51所述的组合物，进一步包括一种肠溶聚合物，在该湿气屏障包衣层上成层。

55.如权利要求54所述的组合物，其中所述肠溶聚合物包括以下一种或多种：碳水化合物的邻苯二甲酸、直链淀粉邻苯二甲酸乙酸酯、乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、邻苯二甲酸的纤维酯、邻苯二甲酸的纤维醚、邻苯二甲酸羟丙纤维素(HPCP)、邻苯二甲酸羟丙基乙基纤维素(HPECP)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、羟丙基甲基纤维素琥珀酸乙酸酯(HPMCAS)、邻苯二甲酸甲基纤维素(MCP)、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯(PVAcP)、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸氢、CAP钠、淀粉酸邻苯二甲酸酯、乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、苯乙烯与马来酸共聚物、苯乙烯-马来酸二丁基邻苯二甲酸酯共聚物、苯乙烯-马来酸/聚乙烯乙酸酯邻苯二甲酸酯共聚物、丙烯酸以及丙烯酸酯共聚物、聚甲基丙烯酸及其酯、聚丙烯酸与甲基丙烯酸共聚物；藻酸、藻酸铵、藻酸钠、藻酸钾、藻酸镁或藻酸钙。

56.如权利要求55所述的组合物，其中所述肠溶包衣层包括以下一种或多种：包括丙烯酸和至少一种丙烯酸酯的共聚物，Eudragit STM(聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:2)；Eudragit LTM(合成自甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯的一种阴离子聚合物)、EudragitL100TM(聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)1:1)；Eudragit L30DTM，(聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1)；以及Eudragit L100-55TM(聚(甲基丙烯酸，丙烯酸乙酯)1:1)，或与丙烯酸和丙烯酸酯共聚物共混的聚甲基丙烯酸甲酯。

57.如权利要求1所述的组合物，适于抵抗热、氧以及湿气。

58.如权利要求1所述的组合物，其中这些组分适合食物产品。

59.如权利要求1所述的组合物，处于包括颗粒或粉末的一种固体微粒形式。

60.根据权利要求1所述的组合物，还包括一种糖化合物，所述糖化合物包括乳糖、半乳糖，以及还有半乳聚糖、麦芽糊精、和海藻糖中的一种或多种；稳定剂，所述稳定剂包括L-半胱氨酸；表面活性剂，所述表面活性剂包括吐温80(聚山梨醇酯80、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯)；充填剂，所述填充剂包括乳糖DC和/或微晶纤维素；粘合剂，所述粘合剂包括羟丙基甲基纤维素；所述最内包衣层包括月桂酸和/或可可脂；所述中间包衣层聚合物包括藻酸或藻酸钠；所述外部包衣层包括羧甲基纤维素(CMC)7LFPH和/或羧甲基纤维素(CMC)7L2P；增塑剂，所述增塑剂包括聚乙二醇(PEG)400和/或三乙酸甘油酯。

61.一种食物产品，包括以上权利要求中任一项所述的组合物以及一种可食用的物质。

62.如权利要求61所述的食物产品，其中所述可食用的物质选自下组，该组由以下各项组成：奶油、烤制食品、奶油饼干或注心饼干、巧克力、调味汁、乳酪、或蛋黄酱。

63.一种用于制备根据权利要求61或62所述的食物产品的方法，包括制备权利要求1-60中任一项所述的组合物；将该组合物添加到一个可食用物质前体中以形成一种组合从而形成该食物产品。

64.如权利要求63所述的方法，包括制备处于固体微粒物质形式的、含有益生菌的一种核心组合物，并且将包衣层在该微粒核心组合物上成层。

65.如权利要求64所述的方法，其中所述制备所述核心组合物包括根据干混、湿法制粒、干法制粒、热熔融或热熔融制粒法中的至少一个制备所述核心组合物。

66.如权利要求64所述的方法，其中所述核心组合物的组分在该核心制备期间顺序地组合。

67.如权利要求64所述的方法，其中所述核心组合物的组分在该核心制备期间以组合形式添加。

68.如权利要求64所述的方法，其中根据浸渍、喷洒以及干压成型中的一种或多种将所述包衣层添加到该组合物上。

69.如权利要求68所述的方法，其中所述喷洒为喷雾。