CN111134332A - 一种通过流化床喷雾造粒法制备益生菌微胶囊的方法及其产品 - Google Patents
一种通过流化床喷雾造粒法制备益生菌微胶囊的方法及其产品 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种通过流化床喷雾造粒法制备益生菌微胶囊的方法以及由该方法制备的益生菌微胶囊。所述制备方法包括以下步骤：(1)通过流化床喷雾造粒法进行第一层微胶囊的包被；(2)任选的第二层微胶囊的包被；(3)任选将步骤(2)得到的微胶囊继续于流化床中进行第三次或更多次包衣。
Description
对相关申请的引用
本申请要求了2018年11月6日提交的中国专利申请号201811314765.7的优先权，将申请的全部内容并入本文作为说明书的一部分。
技术领域
本发明属于食品生物技术领域。更具体地，本发明涉及一种益生菌微胶囊，以及所述益生菌微胶囊的制备方法。
背景技术
益生菌作为一类对宿主健康有一定促进作用的微生物活体，在治疗保健等方面具有多重生理功能。然而，在实际生产、贮藏、运输等过程中，益生菌受到食品组分(酸、添加剂等)、环境温度及宿主消化系统(胃酸、酶、胆盐等)的影响，导致活菌数大幅下降，最终定植于肠道中的活菌数低于理论上能发挥益生作用的最小值。另外，由于普通益生菌抗逆性差，导致最终进入肠道内的益生菌数量少而不能有效发挥其益生作用。普通益生菌如乳酸菌等自身比较脆弱且易受周围环境因素的影响，因此普通的益生菌产品均需要低温冷藏保存，这样才能最大限度的保证其中活性益生菌的数量。
目前关于益生菌的产品一般都是压片、胶囊、粉剂等应用到医药领域中，一般均需要低温冷藏保存，保存环境受到局限，因此，应用的领域非常有限。
另外，在乳制品领域添加益生菌的产品，通常采用的包埋技术，一般均采用胶体包埋益生菌，呈胶滴状，直接添加到产品中，但受生产工艺的影响，最终产品中益生菌数量保留较少，且应用的条件比较苛刻。
因此，如何有效提高益生菌活菌数量已成为当前亟待解决的课题。基于以上的问题，本发明采用微胶囊技术对益生菌进行包埋，通过在益生菌活菌体周围形成一层或多层类似胶囊的保护膜，能显著提高益生菌在不利环境中的存活率，其中，壁材的选择、包埋方式、造粒方式及干燥方式对微胶囊保护作用的发挥至关重要。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种可常温条件下长期保存的固态干粒微胶囊，采用坚硬外壳将益生菌包埋制成约50-500μm的固体颗粒，应用及保存条件受环境的影响较小，可应用到药品、保健品及食品领域。
本发明的另一目的是提供一种益生菌微胶囊的制备方法，该方法以流化床和喷雾流化作为微胶囊的主要造粒和微胶囊多次包埋的方法：其以粉末状或者颗粒状可以食用的固相组分如益生菌，以粘合剂溶液作为液相组分，通过流化造粒的方式制成芯材，然后再通过流化床喷雾包衣的方式将一层或多层壁材均匀包裹芯材得到具有一层或多层包埋结构的益生菌微胶囊。
本发明使用流化床工艺进行益生菌微胶囊的制备，可以极大地降低微胶囊生产过程中水分和水分活度，特别适合对水分敏感的组分进行微胶囊制备。尤其是其使用独特的多层包埋结构，微胶囊的中间层壁材可以有效地保护和隔离芯材与水分和空气的接触，即使微胶囊投放在水基液体中时也可以有效防止水分浸入微胶囊核心；外层壁材可以有效包裹和稳定微胶囊的整体结构，在微胶囊投放在水基液体中，可以帮助微胶囊悬浮在液体中。
定义
除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解相同的含义，但如有冲突，则以本说明书中的定义为准。
如说明书和权利要求书中所用，单数形式“一”、“一个”和“该(所述)”包括复数形式，除非上下文另有明确说明。
如无特殊说明，本说明书中的百分比(％)均为重量百分比(重量％)。
在说明书和权利要求书中使用的涉及组分量、工艺条件等的所有数值或表述在所有情形中均应理解被“约”修饰。术语“约”当指数量或数值范围时，意思是所指数量或者数值范围是试验变异性内(或统计学实验误差内)的近似值，因此该数量或者数值范围可以在所述数量或数值范围的例如+5之间变化。
涉及相同组分或性质的所有范围均包括端点，该端点可独立地组合。由于这些范围是连续的，因此它们包括在最小值与最大值之间的每一数值。还应理解的是，本申请引用的任何数值范围预期包括该范围内的所有子范围。
当本发明针对物理性质例如分子量或者针对化学性质范围时，应包括范围的所有组合和亚组合以及其内的具体实施方式。术语“包含”(以及相关术语例如“含有”或“含”或“具有”或“包括”)包括这样一些实施方式，该实施方式为例如，物质、组合物、方法或过程等的任何组合，其“由所描述的特征组成”或者“基本上由所描述的特征组成”。
本发明使用的缩写具有在食品、生物学和化学领域的通常含义。
益生菌：本发明的益生菌微胶囊内的益生菌类型，使用国家批准的任何益生菌作为微胶囊包埋芯材的保护对象。包括：青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、凝结芽孢杆菌等益生菌中一种或多种。具体如附表A-D所示。
A.可用于食品的菌种名单
B.可用于保健食品的益生菌菌种名单
| 序号 | 名称 | 拉丁学名 | 备注 |
| 一 | 双歧杆菌属 | Bifidobacterium | |
| 1 | 两歧双歧杆菌 | Bifidobacterium bifidum | |
| 2 | 婴儿双歧杆菌 | Bifidobacterium infantis | |
| 3 | 长双歧杆菌 | Bifidobacterium longum | |
| 4 | 短双歧杆菌 | Bifidobacterium breve | |
| 5 | 青春双歧杆菌 | Bifidobacterium adolescentis | |
| 二 | 乳杆菌属 | Lactobacillus | |
| 1 | 保加利亚乳杆菌 | Lactobacillus bulgaricus | |
| 2 | 嗜酸乳杆菌 | Lactobacillus acidophilus | |
| 3 | 干酪乳杆菌干酪亚种 | Lactobacillus casei subsp.Casei | |
| 4 | 罗伊氏乳杆菌 | Lactobacillus reuteri | |
| 5 | 鼠李糖乳杆菌 | Lactobacillus rhamnosus | |
| 三 | 链球菌属 | Streptococcus | |
| 1 | 嗜热链球菌 | Streptococcus thermophilus |
C.可用于婴幼儿食品的菌种名单
D.可用于保健食品的真菌菌种名单
| 序号 | 中文名 | 英文名 |
| 1 | 酿酒酵母 | Saccharomyces cerevisiae |
| 2 | 产朊假丝酵母 | Cadida atilis |
| 3 | 乳酸克鲁维酵母 | Kluyveromyces lactis |
| 4 | 卡氏酵母 | Saccharomyces carlsbergensis |
| 5 | 蝠蛾拟青霉 | Paecilomyces hepiali Chen et Dai,sp.Nov |
| 6 | 蝙蝠蛾被毛孢 | Hirsutella hepiali Chen et Shen |
| 7 | 灵芝 | Ganoderma lucidum |
| 8 | 紫芝 | Ganoderma sinensis |
| 9 | 松杉灵芝 | Ganoderma tsugae |
| 10 | 红曲霉 | Monacus anka |
| 11 | 紫红曲霉 | Monacus purpureus |
壁材：用来包覆、保护或控制释放芯材的成囊物质称为微胶囊的壁材、囊壁或囊壳。壁材是构成微胶囊外壳的材料，也可以称为包衣或包材。
在选择壁材时要考虑壁材本身的性能，如渗透性、稳定性、机械强度、溶解性、可聚合性、电性能、吸湿性及成膜性等，对于生物活性物质的芯材，还要着重考虑壁材的毒性，与芯材的相容性。在本发明中选择具有无毒、成膜性或成球性较好、免疫原性低、生物相容性好、可降解且产物无毒副作用的壁材。
在本发明中，优选与活菌具有很好的生物相容性的成膜材料、食品中可选用的肠溶材料、具有阻湿性的成膜材料、具有阻氧性的成膜材料。
优选的，具体的实例包括下列的一种或多种的组合：
(1)可食用蛋白类：包括动物蛋白如乳蛋白、卵蛋白、酪蛋白，植物蛋白如谷类蛋白等；
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自乳清蛋白：
包括浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；其中，WPI是在浓缩乳清蛋白(WPC)的基础上经过进一步工艺处理得到的高纯度乳清蛋白，纯度可达90％以上，且更易消化吸收，安全无毒无副作用；
乳蛋白：包括酪蛋白或乳清蛋白。乳清蛋白质是指溶解分散在乳清中的蛋白，约占乳蛋白质的18％～20％，可分为热稳定和热不稳定乳清蛋白两部分。
浓缩乳清蛋白(WPC)
将乳清直接烘干后，可得到乳清粉末，其中的乳清蛋白极低，一般为百分之十几，不超过百分之三十。乳清经过澄清、超滤、干燥等过程后得到的产物就是浓缩乳清蛋白。过滤程度的不同可以得到蛋白浓度从34-80％不等的产品。
分离乳清蛋白(WPI)
分离乳清蛋白是在浓缩乳清蛋白的基础上经过进一步的工艺处理得到的高纯度乳清蛋白，纯度可达90％以上。其价格昂贵，是浓缩乳清蛋白的2-3倍，但是它也更容易消化吸收。分离乳清蛋白的真正妙处在于它的营养价值，它拥有高含量的优质蛋白，能为某些特定需要的人群比如婴儿和住院病人提供所需优质蛋白。此外，分离乳清蛋白所含有的生物活性化合物如α-乳白蛋白和β-乳球蛋白、乳铁蛋白以及免疫球蛋白，都为市场注入了新鲜的活力。
乳清蛋白肽
乳清蛋白肽是乳清蛋白的水解产物，是乳清蛋白的精华，它在机体中能更快地参与肌肉合成的过程。
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自下列中的一种或者多种的组合：
植物蛋白：包括油料种子蛋白、豆类蛋白质、谷类蛋白等，
其中，油料种子蛋白包括：花生蛋白、芝麻蛋白、油菜子蛋白、向日葵蛋白、棉子蛋白、红花蛋白、椰子蛋白等；
其中，豆类蛋白包括：大豆蛋白、蚕豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白、红小豆蛋白、芸豆蛋白等；
其中，谷类蛋白包括：稻类(籼稻、粳稻、糯稻)蛋白、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦)蛋白、玉米蛋白、高粱蛋白、粟蛋白、黍蛋白、黄米蛋白、荞麦蛋白等，以及薯类蛋白：包括甘薯蛋白、马铃薯蛋白、山药蛋白、芋蛋白、木薯蛋白等；
其中，玉米蛋白包括玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白等；
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自玉米蛋白，包括玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白，尤其优选玉米醇溶蛋白。
(2)油脂类：
本发明中，油脂是油和脂肪的统称，是脂肪族羧酸与甘油所形成的酯，在室温下呈液态的称为油，呈固态或半固态的的称为脂肪。天然油脂大都是混合甘油酯。从植物种子中得到的大多为油，来自动物的大多为脂肪。
本发明中，根据脂肪酸的种类，各种天然脂肪酸分子是由不同碳链(4～24C)所组成的直链脂肪酸。除个别例外，碳原子均为双数。此类脂肪酸有两种分类法：一种是根据碳原子数将脂肪酸分为短链(4-6C)、中链(8-12C)及长链(12C以上)脂肪酸。另一种是将脂肪酸分为饱和及不饱和脂肪酸。饱和脂肪酸的一般分子式为CnH2nO2，而不饱和脂肪酸带有1、2、3个以至更多的双键，其一般分子式为CnH2n-2O2、CnH2n-4O2、CnH2n-6O2。其中有两个以上双键的亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸称为多不饱和脂肪酸。除直接脂肪酸外，还有环状脂肪酸，大枫子油中的大枫子油酸与亚大枫子油酸。
本发明中的油脂中的脂肪酸大多是含偶数碳原子的饱和的或不饱和的脂肪酸，常见的有肉豆蔻酸(C14)、软脂酸(C16)、硬脂酸(C18)等饱和酸和棕榈油酸(C16，单烯)、油酸(C18，单烯)、亚油酸(C18，二烯)、亚麻酸(C18，三烯)等不饱和酸。某些油脂中含有若干特殊的脂肪酸，如桐油中的桐油酸，菜油中的油菜酸，蓖麻油中的蓖麻酸，椰子油中的橘酸等。
根据来源将脂肪分成动物性脂肪和植物性脂肪。动物性脂肪又有两大类，一类为水产动物脂肪，如鱼类、虾、海豹等另一类是陆生动物脂肪，其中大部分含饱和脂肪酸和较少量的不饱和脂肪酸。植物性脂肪如棉子油、花生油、菜子油、豆油等，其脂肪中主要含不饱和脂肪酸，而且多不饱和脂肪酸(亚油酸)含量很高，占脂肪总量的40～50％。但椰子油中的脂肪酸主要是饱和的脂肪酸。
中链甘油三酯(MCT)：其为己酸(C6)到月桂酸(C12)组成的甘油三酯,尤其是指其组成中的脂肪酸为辛酸、癸酸等六碳链到十二碳链的脂肪酸的一种结构脂质，天然的MCT主要来源于椰子油、棕榈油等植物油中。低于己酸构成的甘油三酯为短链脂肪酸甘油三酯(SCT),高于月桂酸组成的甘油三酯称为长链脂肪酸甘油三酯(LCT)。
棕榈油：又称棕油、棕皮油，包括：毛棕榈油(CPO)、棕榈粕(PE)、毛棕榈仁油(CPKO)、棕榈仁粕(PKE)、-精炼棕榈油(RBD PO)、棕榈油色拉油(RBD PKO)、棕榈油酸(PFAD)、棕榈液油(简称OLEAN)、棕榈硬脂(简称STEARINE或ST)等。棕榈油在常温下呈半固态，其稠度和熔点在很大程度上取决于游离脂肪酸的含量。常把低酸值的棕榈油叫做软油，高酸值的油则叫做硬油。
本发明的益生菌微胶囊的壁材优选选自棕榈油，尤其优选33℃棕榈油、40℃棕榈油、44℃棕榈油、52℃棕榈油、58℃棕榈油，更优选熔点为40℃以上的棕榈油，尤其是熔点为40-50℃的棕榈油，例如熔点为40℃的棕榈油。
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自下列中的一种或者多种的组合：
植物油：包括代可可脂、可可脂、菜籽油、大豆油、玉米油、花生油、棉籽油、葵花籽油、棕榈油(固体棕榈油或者液体棕榈油)、棕仁油、椰子油等；或者
动物油：猪油、牛油、鱼油、乳脂、羊脂等。
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自优选熔点为40℃以上的油脂，尤其是熔点为40-50℃的油脂，例如熔点为40℃的棕榈油或MCT。
尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等，它们的熔点优选40℃以上，尤其优选熔点为40-50℃。
(3)其他材料：
包括：海藻酸钠、虫胶、CMC-Na、胶凝糖、黄原胶、k-角叉菜胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、麦芽糊精、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、葡聚糖、玉米糖浆、果胶、阿拉伯胶、壳聚糖、乙酰化单双甘油脂肪酸酯、魔芋胶、卡拉胶、蜡质或明胶等的一种或者多种的组合。
肠溶性壁材：肠溶性指微胶囊顺利通过胃环境，而不被破坏或降解，最终进入肠道，壁材发生崩解、溶解或降解，导致胶囊内部的芯材被释放出来的过程。肠溶性壁材可以是某一种单独的壁材，也可是复合壁材。包括：虫胶、果胶、海藻酸钠、甘油单酯、甘油三脂、氢化油脂(如：棕榈油、氢化棕榈油，硬化油，氢化大豆油等)等。
优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材具备肠溶性。
固化剂
本发明中的固化剂包括至少一种下列化合物：乙酸钠、冰乙酸、柠檬酸、柠檬酸钠、钙盐、表面活性剂。
固化剂优选乙酸钠、冰乙酸和表面活性剂混合液，这样可以使蛋白在非共价键和共价键(如二硫键)的可共同作用下形成不可逆的化学凝胶，并结合表面活性剂的作用，提高蛋白颗粒凝胶强度和在分散相中的稳定性。
粘合剂
包括淀粉、变性淀粉、可压性淀粉、糊精、乳糖、动物胶如明胶、阿拉伯胶、蔗糖、西黄芪胶、液状葡萄糖、虫胶、皮胶、松香、羟甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚维酮、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、微晶纤维素、无机盐类等。用于本发明的益生菌微胶囊的优选粘合剂为：淀粉，优选的粘合剂浓度为5％-20％。
具体实施方式
本发明涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括：菌芯颗粒和任选的至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳，其中，所述菌芯颗粒包括芯材和第一层壁材，所述芯材包括一种或多种益生菌粉或菌泥，所述芯材被所述第一层壁材所包覆，以及所述至少一层包覆所述菌芯颗粒的外壳包括一层、两层或更多层壁材，分别为第二层壁材、第三层壁材或者更多层壁材，其中，包括以下步骤：
(1)单层微胶囊制备：任选的将菌粉或菌泥与粘合剂混合造粒，而后通过流化床喷雾造粒法与第一壁材均匀混合并任选经固化、过滤收集湿粒进行干燥得到单层微胶囊干粒；和任选的(2)多层微胶囊制备：将上述单层微胶囊干粒作为菌芯颗粒，通过流化床喷雾造粒法在菌芯颗粒外均匀涂布一层壁材，并任选喷涂固化液使胶囊壁固化而不溶于水，将所制微胶囊干燥(优选于流化床中干燥)，收集双层微胶囊干粒或者将其继续再次或多次包衣。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：
1、微胶囊芯材制粒：将菌粉或菌泥与粘合溶液混合，经由流化床喷雾造粒制成颗粒，所述颗粒占微胶囊成品重量的百分比约为5～95％；
优选的，所述粘合溶液如下配制：
将粘合剂溶解于温水中，充分溶解后在约80摄氏度下保温约1小时，并且不间断搅拌，浓度为约5～25％，优选约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％，或期间的任意范围；
优选的，粘合剂的温度为：约30～80℃。
2、过筛：选取所需目数的标准筛，优选粒径为约50～400微米之间颗粒；通过自动或者手动筛分出所粒径分布范围的颗粒作为微胶囊的核心颗粒，进行下一步的包衣处理；
优选的，筛下物可以回到流化床中继续进行制粒，筛上物可以经过研磨，制成细粉后回添到流化床中继续进行制粒；
3、单层微胶囊制备：将经筛分所得颗粒投入流化床用第一层壁材溶液进行喷涂包衣；和任选的，
4、多层微胶囊制备：优选通过流化床喷雾造粒法，在上述单层微胶囊外均匀涂布第二层壁材，并喷涂固化液使胶囊壁固化而不溶于水，所制微胶囊继续于流化床中干燥，收集双层微胶囊干粒或者继续于流化床中再次涂布第三层壁材或更涂布更多次壁材。
优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法中，以1000重量份微胶囊干粒为基准，
益生菌菌泥或菌粉为约50至约500重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份或其间的任意范围，尤其优选约250～约400重量份；
第一层壁材为约150至约950重量份，更优选：约200重量份、约250重量份、约300重量份、约350重量份、约400重量份、约450重量份、约500重量份、约550重量份、约600重量份、约650重量份、约700重量份、约750重量份、约800重量份、约850重量份、约900重量份或其间的任意范围，尤其优选约450～约750重量份；
任选的第二层壁材为约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约300重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～约300重量份；
任选的第三层约0至约350重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约260重量份、约300重量份或其间的任意范围，尤其优选约200～约300重量份；
任选的第四层约0至约250重量份，更优选：约100重量份、约150重量份、约200重量份、约250重量份、约260重量份、约250重量份或其间的任意范围，尤其优选约100～约250重量份。
优选的，上述益生菌为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意益生菌，例如本发明中定义的益生菌，尤其优选：青春双歧杆菌、动物双歧杆菌(乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌乳亚种、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、约氏乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜热链球菌、凝结芽孢杆菌等益生菌中的一种或多种。
在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的壁材选自可食用蛋白、油脂或其他材料中的一种或多种组合。
在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的壁材是选自多种材料组合的复合壁材。
优选的，上述可食用蛋白选自动物蛋白或者植物蛋白中的一种或多种组合：
其中，动物蛋白为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意动物蛋白，例如本发明中定义的任意动物蛋白中的一种或多种组合，优选乳蛋白、卵蛋白、酪蛋白等，更优选乳清蛋白，包括浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；
其中，植物蛋白为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意植物蛋白，例如本发明中定义的任意植物蛋白中的一种或多种组合，包括油料种子蛋白、豆类蛋白质、谷类蛋白等，
其中，油料种子蛋白优选：花生蛋白、芝麻蛋白、油菜子蛋白、向日葵蛋白、棉子蛋白、红花蛋白、椰子蛋白等；
其中，豆类蛋白优选：大豆蛋白、蚕豆蛋白、豌豆蛋白、绿豆蛋白、红小豆蛋白、芸豆蛋白等；
其中，谷类蛋白优选：稻类(籼稻、粳稻、糯稻)蛋白、麦类(小麦、大麦、燕麦、黑麦)蛋白、玉米蛋白、高粱蛋白、粟蛋白、黍蛋白、黄米蛋白、荞麦蛋白等，以及薯类蛋白：包括甘薯蛋白、马铃薯蛋白、山药蛋白、芋蛋白、木薯蛋白等；
其中，玉米蛋白优选玉米醇溶蛋白、玉米胚蛋白等。
优选的，上述油脂为适用于本发明的益生菌微胶囊的任意油脂，例如本发明中定义的油脂中的一种或多种组合，优选选自下列中的一种或者多种的组合：
植物油：包括代可可脂、可可脂、菜籽油、大豆油、玉米油、花生油、棉籽油、葵花籽油、棕榈油(固体棕榈油或者液体棕榈油)、棕仁油、椰子油等；或者
动物油：猪油、牛油、鱼油、乳脂、羊脂等；
更优选的，本发明的益生菌微胶囊的壁材选自优选熔点为40-50℃的油脂；
尤其优选下列中的一种或者多种的组合：棕榈油、中链甘油三酯(MCT)、可可脂、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等。
优选的，上述其他材料选自海藻酸钠、虫胶、CMC-Na、胶凝糖、黄原胶、k-角叉菜胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、麦芽糊精、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、葡聚糖、玉米糖浆、果胶、阿拉伯胶、壳聚糖、乙酰化单双甘油脂肪酸酯、魔芋胶、卡拉胶、蜡质或明胶等的一种或者多种的组合。
在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的制备方法中，上述第一层壁材为油脂，第二层壁材为蛋白质，优选WPI，任选的第三层壁材为油脂或蛋白质(优选WPI)；
优选的，上述油脂为熔点为40-50℃的油脂；
尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等；
优选的，用油脂进行包衣，油脂选自本发明中涉及的任意油脂，上述益生菌制备方法中的油脂所占微胶囊成品重量的百分比为0.25％～50％。
在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的制备方法中，上述第一层壁材为蛋白质，优选WPI，第二层壁材为油脂，任选的第三层壁材为蛋白质(优选WPI)或者油脂；
优选的，上述油脂为熔点为40-50℃的油脂；
尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等；
优选的，用油脂进行包衣，油脂选自本发明中涉及的任意油脂，上述益生菌制备方法中的油脂所占微胶囊成品重量的百分比为0.25％～50％。
在一个实施方案中，上述益生菌微胶囊的制备方法中，上述第一层壁材为蛋白质(优选WPI)，第二层壁材为蛋白质(优选WPI)，任选的第三层壁材为蛋白质(优选WPI)或者油脂；
优选的，上述油脂为熔点为40-50℃的油脂；
尤其优选下列中的一种或者多种的组合：中链甘油三酯(MCT)、代可可脂、可可脂、棕榈油、卵磷脂、棕榈油甘油单酯、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)等；
优选的，用油脂进行包衣，油脂选自本发明中涉及的任意油脂，上述益生菌制备方法中的油脂所占微胶囊成品重量的百分比为0.25％～50％。
本发明涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括下列步骤：
(1)流化床造粒：
a.配制粘合溶液：
将粘合剂(优选淀粉)溶解于温水中，充分溶解后在约30～80℃下保温约1小时，并且不间断搅拌，优选的，在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃、75℃、80℃或期间的任意范围的温度下保温；
优选的浓度为约5～25％，优选5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％，或期间的任意范围；
b.流化床喷雾造粒：
将益生菌菌粉投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将粘合溶液通过喷枪雾化喷射到流化床中，液滴与粉体结合制成颗粒；
其中：
益生菌菌粉为约50至约500重量份，更优选约250～约400重量份；
流化床进风温度优选为约30～80℃；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体取出，取50～400微米之间颗粒；
(3)第一次包衣：
d.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，取第一壁材优选为油脂通过喷枪雾化喷射到流化床中，使壁材均匀包裹颗粒；
其中：优选的，油脂为棕榈油或者MCT，为约200至约350重量份；
(4)任选的第二次包衣：
e.取第二壁材通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤中所得的颗粒；
其中：优选的，第二壁材为乳清蛋白，优选为150～950重量份；更优选300～750重量份；
将所述乳清蛋白进行预变性处理：将乳清蛋白与水混合，充分溶解后进行冷热交替处理形成稳定凝胶；
优选的，将所述乳清蛋白与水混匀，于低温约2至8℃搅拌约4至16小时，优选的转速170至240每分钟；
更优选进一步对乳清蛋白溶液进行约75至约96℃(优选约75℃、约76℃、约77℃、约78℃、约79℃、约80℃、约81℃、约82℃、约83℃、约84℃、约85℃、约86℃、约87℃、约88℃、约89℃、约90℃、约91℃、约92℃、约93℃、约94℃、约95℃、约96℃，或其间的任意范围)，约30至约180分钟的热处理(优选约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约105、约110、约115、约120、约125、约130、约135、约140、约145、约150、约155、约160、约165、约170、约175分钟，或其间的任意范围)，优选的转速85至115rpm/每分钟；
再优选立即冷却，冷却温度约-20至约4℃；约4℃存放约12～约60小时(优选约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24、约25、约26、约27、约28、约29、约30、约31、约32、约33、约34、约35、约36、约37、约38、约39、约40、约41、约约42、约43、约44、约45、约46、约47、约48、约49、约50、约51、约约52、约53、约54、约55、约56、约57、约58、约59、约60小时，或其间的任意范围)得到乳清蛋白的凝胶溶液；
然后，将所得的乳清蛋白凝胶溶液升温至约25～75℃(优选的约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃，或其间的任意范围)，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；
f.固化：取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤e中所得的颗粒；
g.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥约1-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出；
(5)任选的第三次或更多次包衣：
h.收集上述双层微胶囊干粒或者继续于流化床中再次涂布第三层壁材或更涂布更多次壁材。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有双层包埋结构，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
将菌粉或菌泥与粘合溶液混合，经由流化床喷雾造粒制成颗粒，所述颗粒占微胶囊成品重量的百分比为5～95％；
(2)颗粒筛分：
将所得的颗粒进行筛分(优选经筛分得到50～400微米的颗粒)；
其中，菌泥或菌粉与粘合剂的比例优选为95:5，
所述粘合剂优选为淀粉；
(3)第一次油脂包衣：
将经筛分所得颗粒投入流化床进行喷涂包衣，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下，油脂优选棕榈油或者MCT，为约200至约350重量份，油脂所占微胶囊成品重量的百分比为0.25％～50％；
(4)第二次WPI包衣：WPI优选为150～950重量份；更优选300～750重量份；
将上述油膜颗粒于流化床中继续用WPI喷涂包衣；
(5)固化和任选的干燥。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有双层包埋结构，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
a.任选的配制粘合溶液：按照前述方法配制粘合溶液；
b.流化床喷雾造粒：
将优选约30℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；
其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约30℃；菌泥或菌粉与粘合剂的比例优选为95:5；粘合剂的浓度优选为约10％；
所述粘合剂优选为淀粉；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到50～400微米的颗粒；
(3)第一次包衣：壁材为壁材为棕榈油或者MCT优选熔点为40℃
d.将液体棕榈油或者MCT通过喷枪雾化喷射的流化床中，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下，便于包衣增加微胶囊厚度，使油滴均匀包裹颗粒；优选的，棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；
(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％，为约300～750重量份
e.按照前述方法对WPI进行预变性处理；
f.将步骤e中所得的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；
g.固化；
h.干燥：将步骤g中制备的微胶囊在流化床中继续干燥。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有三层包埋结构，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
a.任选的配制粘合溶液：按照前述方法配制粘合溶液；
b.流化床喷雾造粒：
将优选约40℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；
其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约40℃；菌泥或菌粉与粘合剂的比例优选为95:5(请确认核实数据)；粘合剂的浓度优选为约10％；
所述粘合剂优选为淀粉；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到约50～400微米的颗粒；
(3)第一次油脂包衣：壁材为棕榈油或者MCT，优选熔点为40℃，
d.将液体棕榈油或者MCT通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下，优选的，棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；
(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％，为约300～750重量份；
e.按照前述方法对WPI进行预变性处理；
f.将步骤e中所得的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；
g.固化；
h.干燥：将步骤g中制备的微胶囊在流化床中继续干燥；
(5)第三次包衣：
i.按照前述步骤采用棕榈油或者MCT对步骤h中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT为约150～200重量份。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有四层包埋结构，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
a.任选的配制粘合溶液：
将粘合剂(优选淀粉)溶解于温水中，充分溶解后在约30～80℃下保温约1小时，并且不间断搅拌，优选的，在约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃或期间的任意范围的温度下保温；
优选的浓度为约5～25％，优选约5％、约10％、约20％、约25％，或期间的任意范围；
b.流化床喷雾造粒：
将优选约40℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；
其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约30～70℃；更优选约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃；
所述粘合剂优选为淀粉；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到约50～400微米的颗粒；
(3)第一次包衣：壁材为棕榈油或者MCT，优选熔点为40℃，
d.将液体棕榈油或者MCT通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒，将油脂喷雾到颗粒上后迅速降低到约40℃以下；优选的，棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；
(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％，优选350～750重量份，
e.WPI的预变性处理：
将WPI与水混合，于约4℃搅拌约16小时；
进一步对WPI溶液进行约75至约78℃，约30至约45分钟的热处理；
再立即冷却至约-20至约0℃；约4℃存放约12～约16小时而得到WPI的凝胶溶液；
f.将步骤e中所得的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；
g.固化：取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤f中所得的颗粒；
h.干燥：将步骤g中制备的微胶囊在流化床中继续干燥优选约10-30min,颗粒水分含量达到约＜8％时取出；
(5)第三次包衣：
i.按照前述步骤采用棕榈油或者MCT对步骤h中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT为约150～200重量份；
(6)第四次包衣：
j.按照前述步骤采用WPI对步骤i中所得到的颗粒进行第四次包衣，其中优选WPI为约100～250重量份。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或者多层包埋结构，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
a.配制粘合溶液：
将粘合剂(优选淀粉)溶解于温水中，充分溶解后在约30～80℃下保温约1小时，并且不间断搅拌，优选的，在约30℃、约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃或期间的任意范围的温度下保温；
优选的浓度为约5～25％，优选约5％、约10％、约20％、约25％，或期间的任意范围；
b.流化床喷雾造粒：
将粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；
其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份，更优选约250重量份；流化床进风温度优选为约30～70℃；更优选约30℃、约40℃、约50℃、与60℃、约70℃；
所述粘合剂优选为淀粉；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体颗粒取出，过筛，优选经筛分得到约50～400微米的颗粒；
(3)第一次包衣：壁材为WPI(浓度为9～13％)，优选为150～950重量份；更优选300～750重量份；
d.按照前述方法对WPI预变性处理；
e.将液体WPI通过喷枪雾化喷射的流化床中，使其均匀包裹颗粒，；
(4)任选的第二次包衣：壁材为WPI(浓度为9～13％)或油脂(优选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)，优选150～750重量份，
使第二壁材均匀包裹上述步骤e中所得的颗粒。
f.固化：取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹上述步骤f中所得的颗粒；
g.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥约10～30min,；
(5)任选的第三次包衣：
h.按照前述步骤采用蛋白(优选WPI)或者油脂(选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)对步骤g中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT为约150～200重量份；
(6)任选的第四次包衣：
i.按照前述步骤采用蛋白(优选WPI)或者油脂(选棕榈油或者MCT，更优选熔点为40℃)对步骤h中所得到的颗粒进行第四次包衣，其中优选WPI为约100～250重量份。
优选的，上述益生菌微胶囊的制备方法，其中，包被的步骤中的固化剂选自乙酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、钙盐、冰乙酸和表面活性剂中的一种或几种的混合物。优选的，固化剂为乙酸-乙酸钠缓冲液，添加占固化剂溶液体积约0.01％至约0.1％的吐温-20。优选的，固化剂溶液浓度为约0.5mol/L，pH约4.5至约5.3。
本发明还涉及一种益生菌微胶囊，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，其根据上述的益生菌微胶囊的制备方法制备得到。
优选的，上述的双层或多层益生菌微胶囊，其中第一层包衣后得到的菌芯颗粒外径约为≤400μm，优选约为50-300μm，更优选约为50-200μm；双层或多层微胶囊外径为约100～约500μm，更优选100-300μm。
本发明的益生菌微胶囊可运用于食品和保健品行业例如膳食补充剂中。本发明还涉及益生菌微胶囊作为食品添加剂的应用，例如用于热加工食品或冷冻食品中，优选用于发酵风味食品、饮料、巧克力、糖果如口香糖、烘焙食品例如布丁、果蔬汁食品等。
优选的，本发明的益生菌微胶囊为乳制品添加剂，更优选为添加到牛奶、酸奶、奶酪、冰激凌、奶粉、乳制品饮料中。
优选的，含有益生菌的微胶囊的添加量为0.03～0.15％。
实施例及对比例
下文中将通过益生菌微胶囊制备工艺的实施例和对比例对本发明进行详细描述，但不应将制备工艺理解为对本发明所用实施方案范围的限制。
注：以下实施例和对比例中的益生菌的菌粉量全部为250g，所述益生菌均为凝结芽孢杆菌。
实施例1
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度30℃，浓度5％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放12小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。流速10ml/min，雾化压力5bar)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为30℃，风量根据粘合剂溶液的批重量、浓度和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至35℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.3×109cfu/g；60天后微胶囊内活菌量下降为7.5×109cfu/g；120天后微胶囊内活菌量下降为4.8×109cfu/g；胶囊外表面菌残留为2.3×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.8×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重15％。
对比例1
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度50℃，浓度10％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放8小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为30℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至35℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达4.8×109cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾、光泽度欠佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为8.2×108cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为6.1×107cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为3.8×106cfu/g，胶囊外表面菌残留为3.6×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为4.1×107cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重50％。
实施例2
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
棕榈油(第一层壁材)200g(浓度100％)；
WPI(第二层壁材)350g(浓度11％)；
棕榈油(第三层壁材)200g(浓度100％)；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
淀粉：温度40℃，浓度10％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为40℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至30℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
k.按照前述步骤采用棕榈油对步骤j中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中棕榈油为200g。
本实施例所得微胶囊为三层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.9×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为8.9×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为7.2×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为0cfu/g。该单层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为9.0×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重5％。
对比例2
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
棕榈油(第一层壁材)200g(浓度100％)；
WPI(第二层壁材)359g(浓度11％)；
棕榈油(第三层壁材)200g(浓度100％)；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
淀粉：温度70℃，浓度10％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为20℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至20℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得微胶囊为三层微胶囊，微胶囊内活菌量达5.8×109cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为5.6×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为4.6×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为2.2×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为1.2×104cfu/g。该三层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为3.9×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重15％。
实施例3
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
棕榈油(第一层壁材)200g(浓度100％)；
WPI(第二层壁材)300g(浓度11％)；
棕榈油(第三层壁材)150g(浓度100％)；
WPI(第四层壁材)100g(浓度11％)；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
淀粉：温度40℃，浓度10％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为40℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至35℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
k.按照前述步骤采用棕榈油对步骤j中所得到的颗粒进行第三次包衣；
l.按照前述步骤采用WPI对步骤k中所得到的颗粒进行第四次包衣。
本实施例所得的微胶囊为四层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.3×1010cfu/g，粒径150-400μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量保持为1.3×1010cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为9.8×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为9.0×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为0cfu/g。该四层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为1.0×1010cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重1％。
对比例3
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
棕榈油(第一层壁材)200g(浓度100％)；
WPI(第二层壁材)300g(浓度11％)；
棕榈油(第三层壁材)150g(浓度100％)；
WPI(第四层壁材)100g(浓度11％)；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
淀粉：温度90℃，浓度10％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放16小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为90℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至35℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得的胶囊为四层微胶囊，微胶囊内活菌量达6.5×109cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为6.5×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌下降为6.0×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为5.1×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为3.2×103cfu/g。该四层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为5.0×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重1％。
实施例4
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：750g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：0g
淀粉：温度50℃，浓度15％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放30小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为50℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至25℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.0×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为8.9×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.0×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.5×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为2.0×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.2×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重10％。
对比例4
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：750g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：0g
淀粉：温度60℃，浓度5％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放65小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为40℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至25℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例双层微胶囊颗粒不成形，固化液中多为絮状。
实施例5
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度60℃，浓度15％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放40小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为60℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至40℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.1×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小均匀、有光泽。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.1×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.4×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.6×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为5.6×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.9×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重15％。
对比例5
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度60℃，浓度25％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放40小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为50℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至80℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例所得的微胶囊为单层微胶囊，微胶囊内活菌量达5.4×109cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为5.2×108cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为3.0×107cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为2.2×106cfu/g，胶囊外表面菌残留为1.6×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为3.1×107cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重50％。
实施例6：
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度70℃，浓度20％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放50小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为70℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至50℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本实施例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.2×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.0×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.4×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.6×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为4.2×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.0×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重13％。
对比例6：
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：750g
淀粉：温度80℃，浓度20％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放50小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为60℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至50℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例双层微胶囊颗粒不成形，固化液中多为絮状。
实施例7：
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：550g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
棕榈油：200g
淀粉：温度80℃，浓度25％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放60小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为80℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至75℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例所得的微胶囊为双层微胶囊，微胶囊内活菌量达1.1×1010cfu/g，粒径150-250μm，颗粒大小不均匀、有拖尾佳。常温条件下存放30天后，微胶囊内活菌量下降为9.0×109cfu/g，60天后微胶囊内活菌量下降为7.4×109cfu/g，120天后微胶囊内活菌量下降为4.6×109cfu/g，胶囊外表面菌残留为5.0×106cfu/g。该双层微胶囊在模拟胃液中孵育2h后所含活菌量降低为8.3×109cfu/g，微胶囊干粒吸水48h后增重20％。
对比例7：
1、原料(以1000g微胶囊干粒为基准)
WPI：750g，浓度11％；
菌粉250g；
固化剂溶液：0.5mol/L，pH-4.6
淀粉：温度80℃，浓度25％
2、制备方法
a.将乳清蛋白与水混匀，于4℃下180rpm/分钟搅拌16小时；
b.对乳清蛋白溶液进行78℃、95rpm/分钟、45分钟的热处理；
c.0℃下立即冷却；4℃存放60小时；
d.将乙酸钠137g、冰乙酸100ml和6718g水混匀配成固化剂溶液，调整pH至4.6，加入吐温-20 2.9g，充分混匀后待用。
e.流化床造粒法：将益生菌菌粉投入到流化床中，启动进风使粉体循环流动，将粘合剂溶液通过喷枪雾化(用量和喷液速度根据所需制粒粒径大小和批重量进行设定。)喷射到流化床中，使液滴与粉体结合形成制粒，流化床进风温度为70℃，风量根据WPI溶液的批重量和流化状态设定；
f.将流化床内粉体取出，过筛，取50-400μm之间的颗粒；
g.将所取颗粒投入到流化床中，并启动进风使粉体循环流动，将液体棕榈油通过喷枪雾化喷射的流化床中，使油滴均匀包裹颗粒；
h.将蛋白溶液升温至75℃，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒；
i.取固化液，通过喷枪雾化喷射到流化床中，使液滴均匀包裹颗粒。
j.所制微胶囊在流化床中继续干燥10-30min,颗粒水分含量达到＜8％时取出。
本对比例双层微胶囊颗粒不成形，固化液中多为絮状。
2、本实施例1-7、对比例1-7微胶囊颗粒检测结果如下：
Claims (9)
1.一种益生菌微胶囊的制备方法，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，包括以下步骤：
(1)第一层微胶囊的包被：将菌粉或菌泥与粘合剂混合造粒，而后通过流化床喷雾造粒法与第一壁材均匀混合并任选经固化、过滤收集湿粒进行干燥得到单层微胶囊干粒；和任选的
(2)第二层微胶囊的包被：将步骤(1)得到的微胶囊与第二壁材混匀，通过流化床喷雾法制备微胶囊，将所制微胶囊干燥并收集双层微胶囊干粒；
(3)任选将步骤(2)得到的微胶囊继续于流化床中进行第三次或更多次包衣。
2.根据权利要求1的益生菌微胶囊的制备方法，所述壁材选自下列中的一种或者多种的组合：
植物蛋白，例如大豆蛋白、大米蛋白、小麦蛋白、玉米蛋白等；优选为玉米蛋白，或
动物蛋白，例如乳清蛋白、酪蛋白等；优选浓缩乳清蛋白(WPC)、分离乳清蛋白(WPI)或乳清蛋白肽，尤其优选分离乳清蛋白(WPI)；或者
油脂，例如熔点为40℃以上的油脂，优选熔点为40-50℃的油脂，尤其优选棕榈油、中链甘油酯(MCT)、氢化油脂(如：氢化棕榈油、硬化油、氢化大豆油)、卵磷脂、代可可脂、可可脂、棕榈油甘油单酯、椰子油、豆油、花生油、葵花籽油，或者
其他材料，例如海藻酸钠、虫胶、CMC-Na、胶凝糖、黄原胶、k-角叉菜胶、醋酸邻苯二甲酸纤维素、麦芽糊精、淀粉、糊精、蔗糖、乳糖、葡聚糖、玉米糖浆、果胶、阿拉伯胶、壳聚糖、乙酰化单双甘油脂肪酸酯、魔芋胶、卡拉胶、蜡质或明胶等。
3.根据权利要求1～2的益生菌微胶囊的制备方法，其中，以1000重量份微胶囊干粒为基准，益生菌菌泥或菌粉为50至500重量份，优选为250-400重量份；第一层壁材为0至350重量份，优选为200至350重量份，第二层壁材为150至950重量份，优选为300至750重量份，第三层壁材为约0至350重量份；第四层壁材为约0至250重量份。
4.根据权利要求1～3的任一项的益生菌微胶囊的制备方法，其中，所述第一壁材为乳清蛋白，将所述乳清蛋白进行预变性处理：将乳清蛋白与水混合，充分溶解后进行冷热交替处理形成稳定凝胶；
优选的，将所述乳清蛋白与水混匀，于低温约2至8℃搅拌4至16小时，更优选进一步对乳清蛋白溶液进行约75至96℃，约30至180分钟的热处理；再优选立即冷却，冷却温度-20至4℃；4℃存放10-60小时以上得到乳清蛋白的凝胶溶液。
5.根据权利要求1～4中任一项的益生菌微胶囊的制备方法，其中，在微胶囊的包被的步骤中，采用升温至约25至75℃的第二壁材水溶液、乳浊液或凝胶液，优选使用乳清蛋白进行包衣。
6.根据权利要求1～5任一项的益生菌微胶囊的制备方法，其中，优选流化床进风温度为约30至80℃。
7.根据权利要求1～6任一项的益生菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
(1)流化床造粒：
a.流化床喷雾造粒：
将优选约40℃粘合剂溶液通过喷枪雾化并使液滴与粉体结合形成颗粒；
其中：益生菌菌粉为约250至约400重量份；流化床进风温度优选为约30～80℃；
(2)颗粒筛分：
c.过筛：将流化床内内粉体取出，取50～400微米之间颗粒；
(3)第一次包衣：壁材优选为棕榈油或者MCT
d.将液体棕榈油或者MCT通过流化床均匀包裹颗粒，优选的，棕榈油或者MCT为约200至约350重量份；
(4)第二次包衣：壁材为WPI，浓度为约9～13％
e.将经过预变性处理的WPI溶液升温至约25～35℃，并使液滴均匀包裹上述步骤d中所得的颗粒；
f.固化：取固化液包裹上述步骤e中所得的颗粒；
g.干燥：将步骤f中制备的微胶囊在流化床中继续干燥；
(5)任选的第三次包衣：
h.按照前述步骤对步骤g中所得到的颗粒进行第三次包衣，其中优选棕榈油或者MCT，其为约150～200重量份；
(6)任选的第四次包衣：
i.按照前述步骤采对步骤j中所得到的颗粒进行第四次包衣，其中优选WPI，其为约100～250重量份。
8.一种益生菌微胶囊，所述益生菌微胶囊具有一层或多层包埋结构，其根据权利要求1～7任一项的益生菌微胶囊的制备方法制备得到，其中第一层包衣后得到的菌芯颗粒外径为50-300μm，双层或多层微胶囊外径为100-500μm。
9.权利要求1-8中任一项所述的益生菌微胶囊作为食品和保健品行业例如膳食补充剂的应用，例如用于热加工食品或冷冻食品中，优选用于发酵风味食品、饮料、巧克力、糖果如口香糖、烘焙食品例如布丁、果蔬汁食品更优选的，本发明的益生菌微胶囊为乳制品添加剂，如添加到牛奶、酸奶、奶酪、冰激凌、奶粉、乳制品饮料中。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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