CN103327996B

CN103327996B - 血栓溶解用组合物及包含其的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物

Info

Publication number: CN103327996B
Application number: CN201180052931.0A
Authority: CN
Inventors: 许智会; 权一; 金永大; 洪性洧
Original assignee: IND ACADEMIC COOP
Current assignee: IND ACADEMIC COOP
Priority date: 2010-11-01
Filing date: 2011-11-01
Publication date: 2016-06-15
Anticipated expiration: 2031-11-01
Also published as: KR20120061036A; CN103327996A; WO2012060607A2; US20130316951A1; JP2013542952A; US9982021B2; EP2636412A4; EP2845601B1; JP5894176B2; EP2636412A2; EP2845601A1; ES2679400T3; WO2012060607A3; KR101463181B1

Abstract

本发明涉及一种包含具有Arg-Gly-Asp模体的肽的血栓溶解用组合物、包含该血栓溶解用组合物的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物、包括给药该血栓溶解用组合物的步骤的血栓溶解方法及血管狭窄或闭塞性疾病的治疗方法。本发明的组合物及方法采用如血小板表面GPIIb-IIIa的血栓内整合素靶原理，而不是采用现有的纤溶酶原激活原理，从而具有有效分解已生成的血栓的优点。并且，本发明的组合物及方法在贯通后不再引起再狭窄，还有效开放微血管，且具有神经保护功效。

Description

血栓溶解用组合物及包含其的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物

技术领域

本发明涉及一种血栓溶解用组合物及包含该血栓溶解用组合物的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物。

背景技术

大部分的脑卒中是由主脑或更小的脑内动脉的血栓栓塞性闭塞（thromboembolicocclusion）引起（Wardlaw,Murrayetal.,2009）。就缺血性脑卒中而言，只有快速的血栓溶解为唯一被确立的用于抑制不可避免的完全梗塞的发病的治疗方法（1995；及Choi，Batemanetal.,2006）。基于重组组织型纤溶酶原活性因子（recombinanttissueplasminogenactivator，rt-PA）的静脉内给药的治疗法是现今唯一被承认的能够在缺血性脑卒中的发病（onset）后3小时内进行的对于缺血性脑卒中的治疗法（Caplan，Mohretal.，1997；及Lopez-Yunez，Brunoetal.，2001）。但是，有一半以上的患者在血栓溶解治疗后都失败实现成功的再通（recanalization）（RhaandSaver，2007；及Leeetal.,Stroke，2007；38：192-193）。虽然，即使闭塞的动脉由血栓溶解治疗法而成功地再通，这样的恢复（benefits）还是因再灌注损伤（HallenbeckandDutka，1990）、脑出血（Adamsetal.,2005）以及再闭塞（Heo，Leeetal.,2003）的危险而重新劣化。并且，有报告指出rt-PA具有神经毒性（ChenandStrickl，1997；Wang，Tsirkaetal.,1998；Nicole，Docagneetal.,2001；Yepes，Sandkvistetal.,2002；及MatysandStrickl，2003）。

虽然再通战略的功效得以证明，但是由于可适用性的限制及潜在的副作用，而多次试图（efforts）开发功效相比rt-PA更好的新颖的血栓溶解制剂（agents）。这些试图包含rt-PA的变异体、来源于动物源的纤溶酶原活性因子及微纤溶酶。上述药物（drugs）具有如下的目的：（a）血纤蛋白特异性的增大；（b）血浆内半衰期的延长；（c）基于纤溶酶原活性因子抑制剂-1的抑制能力减少；以及（d）神经毒性的回避。多种药物都完成的临床实验，几种药物处于现今正研究功效的状态。这样的药物将血栓内的血纤蛋白作为靶。但是，血栓由血小板-纤维蛋白原相互作用形成。并且，凝血酶、白血球及红血球细胞也是血栓的组成成分。对于将血纤蛋白作为靶的血栓溶解制剂的血栓的抵抗性是在脑卒中患者中表现的低再通率（recanalizationrates）的主要理由之一，这样的现象可以在基于血小板-丰富血栓的闭塞中更长出现。在这种方面，将血小板作为靶的治疗法可以是对于为了被改善的血栓溶解功效而对血纤蛋白进行靶向的治疗法的选择性或追加性的方法。

作为整合素家族的成员的血小板糖蛋白（Plateletglycoprotein，GP）IIb/IIIa以高密度存在于血小板膜表面（ShattilandGinsberg，1997）。GPIIb/IIIa受体特异地与纤维蛋白原相结合，对血小板凝集路径的最终阶段进行媒介作用（Phillips，Charoetal.，1988）。因此，对血小板GPIIb/IIIa受体进行靶向在开发作用于血小板的药物上非常重要。开发有许多血小板GPIIb/IIIa拮抗剂，这些包含圆形七肽解整联蛋白（依替巴肽（eptifibatide）），该圆形七肽解整联蛋白包含对于GPIIb/IIIa的人类-小鼠嵌合抗体的抗原结合（Fab）片段（阿昔单抗（abciximab））、非-肽类似物（替罗非班及拉米非班）及KGD模体（Seitz，Meiseletal.，2004；Abou-Chebl，Bajzeretal.，2005；及Eckert，Kochetal.，2005）。上述GPIIb/IIIa拮抗剂对不稳定性心绞痛、急性心肌梗塞以及接受经皮冠状动脉腔内血管成形术（percutaneoustransfemoralcoronaryangioplasty，PTCA）及支架植入术的患者有效。就脑卒中而言，阿昔单抗在出现症状后经过5小时至6小时后进行处理的患者中未起效（Adams，Effronetal.,2008）。但是，GPIIb/IIIa拮抗剂溶解了再闭塞的脑卒中患者的血栓且对选择性的患者有效（Heo，Leeetal.,2003；Seitz；Hamzavietal.,2003；Seitz，Meiseletal.,2004；Eckert，Kochetal.,2005；及Chen，Moetal.,2007）。并且，GPIIb/IIIa抑制剂对在动物脑卒中开放微血管有益，且具有神经保护功效（Choudhri，Hohetal.,1998；及Abumiya，Fitridgeetal.,2000）。

作为从韩国蛇毒提炼并纯系化的新颖的解整联蛋白的萨克萨提林素（Saxatilin）具有作为三肽序列的Arg-Gly-Asp（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，RGD），该序列是对于血小板GPIIb/IIIa受体的解整联蛋白的识别位点（recognitionsite）（Hong，Kohetal.，2002；及Hong，Sohnetal.，2002）。萨克萨提林素熟知为，在血小板凝集（Hong，Kohetal.,2002）及血小板活化（Jang，Jeonetal.,2007）上具有强有力的抑制功效，来妨碍血栓生成。

在本说明书全文中参照多篇论文及专利文献，并且表示了其引用部分。所引用的论文及专利文献的公开内容作为参照全部插入于本说明书中，因而更加明确地说明本发明所属技术领域的水准及本发明的内容。

发明内容

本发明者为了开发能够溶解已生成的血栓来治疗由于闭塞或变窄的血管引起的疾病的血栓溶解剂，结果，确认到包含Arg-Gly-Asp模体（motif）的肽具有有效溶解已生成在血管内的血栓的活性，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的在于，提供一种血栓溶解用组合物。

本发明的再一目的在于，提供一种包含上述血栓溶解用组合物的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物。

本发明的其他目的及优点由发明内容、权利要求书及附图而更加明确。

根据本发明的一实施方式，本发明提供一种血栓溶解用组合物，该血栓溶解用组合物包含：（a）包含Arg-Gly-Asp模体的肽的药剂学有效量；以及（b）包含药剂学上接受的担体。

作为三肽序列的Arg-Gly-Asp（RGD）是解整联蛋白的识别位点（Hong，Kohetal.,2002；及Hong，Sohnetal.,2002），包含具有Arg-Gly-Asp模体的肽的代表性的例子为解整联蛋白。解整联蛋白抑制血小板的凝集来妨碍血栓生成的事实已广泛熟知。但是，是否对已在生物体内凝集而生成的血栓具有溶解效果完全不被人所知。本发明者确认到包含如解整联蛋白的Arg-Gly-Asp模体的肽具有有效溶解已在血管内生成的血栓的活性，从而完成了本发明。

本说明书中的术语“包含Arg-Gly-Asp模体的肽”作为包括能够与存在于血栓内的整合素相结合来溶解血栓的基于氨基酸的分子的概念，不论肽的长度、变形（modification）与否、电特性等，只要是包含作为整合素识别位点的Arg-Gly-Asp模体的物质可以无限制使用。

作为本发明的血栓溶解用组合物的有效成分使用的包含Arg-Gly-Asp模体的肽，以竞争性结合（competitionbinding）的原理与存在于血栓内的整合素，优选为形成血栓的血小板表面的糖蛋白（GP，glycoprotein）IIb-IIIa结合，利用将血小板等从纤维蛋白原等血栓的组成成分剥离的原理有效分解血栓。

在一实例中，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽是包含由选自包含序列表第一序列至第十一序列的组中的某一序列表示的氨基酸序列的肽。

在再一实例中，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽是包含由选自包含序列表第一序列至第十一序列的组中的某一序列表示的氨基酸序列的肽。

在另一实例中，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽是解整联蛋白（disintegrin），例如，萨克萨提林素（saxatilin）、汝都丝脱敏素（rhodostomin）、白唇竹叶青素（albolabrin）、亚普罗津素（applagin）、巴希尔立新素（basilicin）、巴托鲁肃斯塔廷素（batroxostatin）、毕提斯塔廷素（bitistatin）、小响尾蛇尾素（barbourin）、些列别林素（cereberin）、歇拉斯汀素（cerastin）、克鲁塔特卢新素（crotatroxin）、杜梨新素（durissin）、锯鳞肽（echistatin）、艾丽甘廷素（elegantin）、艾丽斯提酷品素（eristicophin）、黄绿烙铁头毒素（flavoridin）、弗拉沃斯塔廷素（flavostatin）、哈尔立新素（halysin）、爪拉拉新素（jararacin）、抓啦斯塔廷素（jarastatin）、抓啦林素（jararin）、啦澈新素（lachesin）、露脱新素（lutosin）、摩罗新素（molossin）、蝮蛇属鳃离素（salmosin）、特洛戈米粘素（tergeminin）、合成竹叶青素（trigramin）、特日美斯塔廷素（trimestatin）、烙铁头蛇素（trimucrin）、特日穆塔基素（trimutase）、乌苏日斯塔廷素（ussuristatin）及绿胶霉素（viridin）等，但并非必须局限于此。

在本发明的另一实例中，包含上述Arg-Gly-Asp模体的肽是萨克萨提林素，优选为包含序列表第十二序列的氨基酸序列的萨克萨提林素。

此外，优选地，作为具有血栓溶解活性的本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽有由序列表第一序列表示的寡肽（GRGDSP，甘氨酸-Arg-Gly-Asp-丝氨酸-脯氨酸）及其环形的环状（cyclic）GRGDSP以及由选自包含形成有二硫键（disulfidebond）的序列表第二序列至第十一序列的组中的某一序列表示的寡肽等，但并非必须局限于此。

本发明的包含作为血栓溶解有效成分的Arg-Gly-Asp模体的肽可以与如纤溶酶原激活剂的现今熟知的血栓溶解剂一同使用，但即使没有现今熟知的其他血栓溶解剂，单独也非常有效地溶解已形成的血栓，并且几乎不产生再闭塞或出血等的副作用。

在一实例中，特征在于，本发明的血栓溶解用组合物不包含纤溶酶原激活剂（Plasminogenactivator）。

在再一实例中，特征在于，本发明的血栓溶解用组合物的血栓溶解有效成分仅由包含Arg-Gly-Asp模体的肽形成。

本发明的血栓溶解用组合物除了包含作为上述有效成分使用的Arg-Gly-Asp模体的肽以外，还可以包含药剂学上接受的担体。

包含于本发明的血栓溶解用组合物的药剂学上接受的担体作为制剂时通常使用的担体，包含乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯橡胶、磷酸钙、藻酸盐、凝胶、硅酸钙、微结晶性纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等，但并不局限于此。本发明的药剂学组合物除了上述成分以外，还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、保存剂等。适当的药剂学上接受的担体及制剂详细记载于Remington’sPharmaceuticalSciences（19thed.,1995）。

根据本发明的再一实施方式，本发明提供一种包含上述血栓溶解用组合物的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物。

本发明的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物为利用上述详细说明的血栓溶解用组合物来溶解血栓，来治疗可治疗的对象疾病的药剂学组合物，因此为了避免本说明书的过度的复杂性，而省略对于上述血栓溶解用组合物的关系上共同的内容。

本发明的药剂学组合物的特征在于，有效溶解已生成的结块的血栓来治疗上述多种血管狭窄或闭塞性疾病。即，本发明的药剂学组合物并不是单纯预防血栓生成来治疗血管狭窄或闭塞性疾病，而是以溶解已生成的血栓来有效贯通血管的原理来治疗血管狭窄或闭塞性疾病。

本说明书的术语“闭塞（occlusion）”是包括血管完全堵塞或者部分堵塞而血管变窄的状态的术语。在本发明中提及的闭塞的程度可以基于已测定的血流量来判断。即，闭塞的程度分为部分闭塞（partialocclusion）或完全闭塞（completeocclusion），部分闭塞意味着正常血流量（baselinebloodflow）减少为50%-60%水准的情况，完全闭塞意味着减少为90%-100%水准的情况（参考：图2）。

本发明的药剂学组合物除了作为有效成分包含的上述血栓溶解用组合物以外，还可以包含药剂学上接受的担体，此时可以使用的担体以上已详细说明。

本发明的药剂学组合物可以通过静脉内注入、动脉内注入、局部注入、脑室内注入、脊髓腔注入、皮下注入、腹腔注入、经皮给药等方式给药，优选地，能够以直接向血管内注入的方式给药。直接向血管内注入的方式意味着向包含动脉、静脉、毛细血管的血管，例如，包含大动脉、颈动脉、锁骨下动脉、腹腔动脉、肠系膜动脉（mesentericarteries）、肾动脉、髂动脉、小动脉、毛细血管、小静脉的血管内给药，可以根据生成血栓的血管部位来适当选择其给药方法。

本发明的药剂学组合物的适当给药量根据如制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药路径、排泄速度及反应灵敏性的因素而多样，通常熟练的医生可以容易决定及处方所要的对治疗有效的给药剂量。根据本发明的一实例，本发明的药剂学组合物的一日给药量为0.001mg/kg-1000mg/kg。

本发明的药剂学组合物根据本发明所属技术领域的普通技术人员可以容易实施的方法，利用药剂学上接受的担体和/或赋形剂来进行制剂化，从而能够以单位容量形态制备或者装入多容量容器内而制备。此时，剂型是油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态，或者也可以是浸膏剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可以包含分散剂或稳定剂。

将包含Arg-Gly-Asp模体的肽作为血栓溶解有效成分包含的本发明的药剂学组合物可以与如纤溶酶原激活剂一样的现今熟知的血栓溶解剂一同使用，但是即使没有现今熟知的其他血栓溶解剂，单独非常有效地溶解已形成的血栓，并且也几乎不产生再闭塞或出血等的副作用。

在一实例中，特征在于，本发明的药剂学组合物不包含纤溶酶原激活剂。

在再一实例中，特征在于，本发明的药剂学组合物的血栓溶解有效成分仅包含具有Arg-Gly-Asp模体的肽。

可以由本发明的药剂学组合物治疗的疾病包含多种血管狭窄或闭塞性疾病，例如，脑血管疾病（cerebrovasculardisease，CVD）、心血管疾病（cardiovasculardisease）、动脉硬化性血管疾病（arteriovasculardisease）、冠状动脉疾病（coronaryarterydisease，CAD）、末梢血管疾病（peripheralarterydisease，PAD）等，优选为脑卒中、脑梗塞、脑血栓症、脑栓塞症、腔隙性脑梗塞、急性冠脉综合征、心绞痛、主动脉狭窄症、心肌梗塞症、束支传导阻滞、脑缺血、急性缺血性心血管疾病（acuteischemicarteriovascularevent）、血栓性静脉炎、静脉血栓栓塞症、深度静脉血栓（deepveinthrombosis）、肺栓塞症（pulmonaryembolism）、末梢血管疾病、动脉粥样硬化症、血管痉挛、再狭窄、气囊血管成形术之后再狭窄及基于血管炎的血管闭塞症，最优选为脑卒中、脑梗塞、脑血栓症、脑栓塞症、心肌梗塞症。

本说明书中的术语“脑血管疾病”作为在向脸部及大脑供给含氧丰富的血液的血管内产生的动脉硬化性血管疾病，不仅包含一般与冠状动脉疾病和/或末梢血管疾病一同产生的并发症（comorbiddisease），还包含缺血性疾病或引起血流量的不足的疾病。例如，脑血管疾病包含缺血性脑血管疾病、急性脑梗塞、脑卒中、缺血性脑卒中、出血性脑卒中、静脉瘤、轻度认知障碍（mildcognitiveimpairment，MCI）或短暂性脑缺血发作（transientischemicattacks，TIA），但并不局限于此。

本说明书的术语“心血管疾病”或“动脉硬化性血管疾病（arterioscleroticvasculardisease）”作为用于分类对心脏、心脏瓣膜、血液及身体的血管结构（vasculature）产生影响的许多形态的一般的术语，包含对心脏或血管产生影响的疾病。优选地，包含代谢综合征、X综合症、动脉粥样硬化症、粥状血栓症、冠状动脉疾病、稳定及不稳定心绞痛、脑卒中、主动脉狭窄或如大动脉类的大动脉疾病、脑血管疾病、末梢血管疾病或急性缺血性动脉硬化性疾病，但并不局限于此。一般，本说明书的术语“动脉硬化性血管疾病”相比非-缺血性疾病，更意味着缺血性疾病或缺血引发性（proischemic）疾病。

本说明书的术语“冠状动脉疾病”意味着用于向心肌供给血液的动脉（冠状动脉）粥样硬化（atherosclerotic）、基于钙沉淀的硬化和/或变窄而产生的动脉硬化性血管疾病。冠状动脉疾病导致向心肌的血流量的减少，由此心肌不能得到充分量的氧，最终引起坏死（necrosis）。冠状动脉疾病包含急性冠状动脉综合症、心肌梗塞（心脏麻痹）、心绞痛（稳定及不稳定）或在向心脏供给血液的血管产生的动脉粥样硬化症及粥状血栓症，但并不局限于此。

本说明书中的术语“末梢血管疾病”作为如在心脏及大脑以外的部分产生的动脉粥样硬化症及粥状血栓症的疾病，包含一般与冠状动脉疾病一同产生的并发症。

本发明的药剂学组合物特征在于，并非单纯以预防血栓生成的原理预防或治疗上述疾病，而是以溶解已生成的血栓来有效贯通血管的原理治疗上述血管狭窄或闭塞性疾病。

例如，就脑梗塞而言，预防血栓生成的方式的药剂学组合物（例如，阿司匹林）已广泛熟知。但是，处于一旦生成血栓并且闭塞脑血管而引起脑梗塞，就几乎不存在能够有效治疗此的药剂学组合物的实情，基于纤溶酶原活性因子的静脉内给药的治疗法是现今唯一被承认的可以在脑梗塞发病后3小时内实行的脑梗塞治疗法。但是，就利用纤溶酶原活性因子的治疗法而言，不仅受到如上所述的时间限制，而且在一半以上的患者进行血栓溶解治疗后失败于成功进行再通，在这种现实下，能够有效溶解已生成的血栓的本发明的药剂学组合物是对一旦发病的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗上非常现实且划时代的方案。不仅如此，本发明的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物也有效治疗微血管的闭塞，并且在也不产生再狭窄的方面其价值则更大。

根据本发明的再一实施方式，本发明提供一种具有包含选自包含序列表第三序列至第十一序列的组中的某一氨基酸序列的血栓溶解活性的肽。

根据本发明的另一实施方式，本发明提供一种包括向血管给药包含Arg-Gly-Asp模体的肽的步骤的血栓溶解方法。

根据本发明的另一实施方式，本发明提供一种包括向血管给药包含Arg-Gly-Asp模体的肽的步骤的血管的狭窄或闭塞性疾病的治疗方法。

本发明的血栓溶解方法及血管狭窄或闭塞性疾病的治疗方法是利用上述详细说明的肽来溶解血栓的方法，因此为了避免本说明书的过度的复杂性，而省略对上述共同的内容的记载。

本发明的肽由以基于萨克萨提林素的氨基酸序列（序列表第十二序列）的萨克萨提林素衍生物（即，缺失突变体（deletionmutant））预测萨克萨提林素的活性，即预测能够更加有效呈现对于已形成的血栓的溶解能力的序列而优化的氨基酸序列制备。

在本发明中提供的萨克萨提林素衍生物相比全长（full-length）萨克萨提林素，具有药剂学上优秀的特性。

首先，在本发明中提供的萨克萨提林素衍生物虽然短于全长野生型萨克萨提林素，但是血栓溶解能力类似（参照：图7及图8）。

第二，在本发明中提供的萨克萨提林素衍生物相比全长野生型萨克萨提林素，由于免疫原性减少而更少引发免疫反应，因此稳定性（safety）优于全长野生型萨克萨提林素。

第三，在本发明中提供的萨克萨提林素衍生物与全长野生型萨克萨提林素相比，因在血栓溶解治疗中再通以后的再闭塞频率及血流量增减的程度显著减少，而呈现稳定维持正常血流量的倾向（参照：图7及图8）。如上所述的萨克萨提林素衍生物的血栓溶解模式与野生型萨克萨提林素相比，在治疗学上导致功效的增大及副作用的减少。

本说明书中的术语“肽”是指氨基酸残基借助肽结合而相互结合而形成的线性分子。

本发明的肽可以根据本领域公知的化学合成方法，尤其根据固相合成技术（solid-phasesynthesistechniques）而制备（Merrifield，J.Amer.Chem.Soc.85：2149-54（1963）；Stewart，etal.,SolidPhasePeptideSynthesis，2nd.ed.,PierceChem.Co.：Rockford，111（1984））。

本发明的肽，其本身的稳定性比天然的萨克萨提林素优秀，但是稳定性可以由氨基酸的变形而更加提高。根据本发明的优选实例，上述肽的C-末端可以由羟基（-OH）或氨基（-NH2）变形，上述肽的N-末端可以与选自包含乙酰基、芴基甲氧羰基、甲酰基、棕榈酰基、豆蔻基、硬脂酰基及聚乙二醇（PEG）的组中的保护基相结合。

上述的氨基酸的变形起到大大改善本发明的肽的稳定性的作用。本说明书中的术语“稳定性”不仅意味着体内稳定性，而且还意味着储存稳定性（例如，常温储存稳定性）。上述保护基起到从生物体内的蛋白质裂解酶的攻击保护本发明的肽的作用。

根据本发明的优选实例，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽包含SX1（序列表第三序列）、SX2（序列表第四序列）、SX3（序列表第五序列）、XL1（序列表第六序列）、XL2（序列表第七序列）、XL3（序列表第十一序列）、LS1（序列表第八序列）、LS2（序列表第九序列）及LS3（序列表第十序列），更加优选地包含SX1、SX2、SX3及XL2，进而优选地包含SX1及SX3，最优选地包含SX1。

根据本发明，本发明的方法可以有效适用于基于所形成的血栓的血管的治疗。即，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽不仅可以抑制血栓的形成，而且还可以有效溶解已形成的血栓。因此，本发明的方法适用于产生血管闭塞（部分闭塞或完全闭塞）的患者（例如，脑梗塞患者）而溶解已形成的血栓，从而可以非常有效地适用于治疗。

根据本发明的优选实例，本发明的包含Arg-Gly-Asp模体的肽的处理浓度为1mg/kg-100mg/kg，更优选为5mg/kg-70mg/kg，最优选为10mg/kg-40mg/kg。

根据本发明的优选实例，可以适用本发明的方法的动物没有特别限制，优选为哺乳动物，更优选地包含人类、小鼠、大鼠、兔子、猴子、猪、马、牛、羊、羚羊、狗或猫，进而优选地包含人类或小鼠。

根据本发明的优选实例，上述动物血管包含动脉、静脉、毛细血管，更优选地包含大动脉、颈动脉、锁骨下动脉、腹腔动脉、肠系膜动脉（mesentericarteries）、肾动脉、髂动脉、小动脉、毛细血管、小静脉，最优选地包含大动脉或颈动脉。

简要本发明的特征及优点如下：

（i）本发明涉及包含具有Arg-Gly-Asp模体的肽的血栓溶解用组合物、包含该血栓溶解用组合物的血管狭窄或闭塞性疾病的治疗用药剂学组合物、包括给药该药剂学组合物的步骤的血栓溶解方法及血管狭窄或闭塞性疾病的治疗方法。

（ii）本发明的组合物及方法具有采用如血小板表面GPIIb-IIIa的血栓内整合素靶原理而不是现有的纤溶酶原激活原理，有效分解已生成的血栓的优点。

（iii）并且，本发明的组合物及方法已贯通后也不引起再狭窄，而且有效开放微血管且具有神经保护功效。

附图说明

图1a是表示根据FeCl₃-处理的闭塞图案的结果，在FeCl₃-处理后，血流量减少，抑制血管完全闭塞而维持。

图1b是用于检测生成在实际血管的血栓的H&E染色结果，测定在五只小鼠中生成的血栓的大小的结果，判断为因生成均匀的大小的血栓而适合作为鉴定基于血栓溶解剂的效果的模型。

图2是检测在正常血管及闭塞的程度相异的血管中测定的血流量，以及在这些血管中形成的血栓的结果。

图3是测定随着在实施例中使用的重组萨克萨提林素的给药量而发生的血流量的变化的曲线图。随着萨克萨提林素的给药量增加，血流量（血流时间曲线下的面积）几乎恢复到基线（baseline）（5mg/kg和10mg/kg的萨克萨提林素的注入组）。

图4是比较根据在实施例中使用的萨克萨提林素的给药方法的血栓溶解的功效的结果。A面的蓝色箭头表示产生再闭塞的时点。A面的B意味着快速推注（bolusinjection），I表示连续性的静脉内（intravenous）注入。

图5是测定根据在实施例中使用的萨克萨提林素的给药量的血栓溶解的功效的结果。在FeCl₃-衍生的动物中注入指定浓度的萨克萨提林素来连续监测2小时的血流量。

图6是测定萨克萨提林素和萨克萨提林素衍生物（SX1及SX3）的血小板凝集的抑制程度的结果。

图7是测定通过40mg/kg的萨克萨提林素和萨克萨提林素衍生物（SX1及SX3）的处理的血流量的变化的结果。

图8是测定通过20mg/kg的萨克萨提林素和萨克萨提林素衍生物（SX1及SX3）的处理的血流量的变化的结果。

具体实施方式

【实施例】

下面，通过实施例，对本发明进行更详细的说明。这些实施例仅仅是为了对本发明进行更加具体的说明，根据本发明的要旨本发明的范围并不局限于这些实施例，这对本发明所属技术领域的普通技术人员来说是显而易见的。

实施例

实验方法

实验动物及基于FeCl₃的血栓生成模型

利用了8周龄的雄性癌症研究所（ICR，InstituteofCancerResearch）小鼠（株东方生物）。实验室动物的管理及利用根据在适于对此的美国国立卫生研究院（NIH）的指南的制度上承认的实验方案而实施。观察手术过程，通过在70%的N₂O及30%的O₂的混合物内吸入5%的异氟醚来麻醉动物。由2%的异氟醚维持了麻醉。在手术过程中，利用直肠用探针持续监测了动物的体温，利用恒温毯控制器（Homeothermicblanketcontrolunit）及加热垫（HarvardApparatus，霍利斯顿（Holliston），马萨诸塞州（MA））来维持在37.0±0.2℃。为了测验萨克萨提林素的体内血栓溶解活性而利用了由FeCl₃（西格玛奥德里奇（SigmaAldrich），美国（USA））衍生的颈动脉血栓模型。实施颈部正中切口（midlinecervicalincision）来在手术显微镜下小心地对左侧总颈动脉进行了解剖。将超声波多普勒流速探针（ultrasonicDopplerflowprobe；超声波马赫数（TransonicMA）0.7PSB）位于总颈动脉（CCA，commoncaroticartery）的中央部位。利用超声波TS420血流量仪（TransonicInstruments，伊撒卡（Ithaca），纽约（NY））及iWorxIX-304T数据获取系统（iWorxSystems，Inc.,Dover，新罕布什尔（NH））来测定了颈动脉血流量。作为对照组，测定了5分钟的总颈动脉的基本血流量。决定对照组基本血流量后，除去了探针。在露出的总颈动脉中央部位的外侧表面（adventitialsurface）接触5分钟由50%的FeCl₃饱和的过滤纸（700×500μm），从而引发了基于化学性压力的氧化性血管损伤。在除去过滤纸之后，利用生理盐水来清洗总颈动脉并测定了其血流量。通过血流量的减少来决定血栓形成及动脉闭塞，完全闭塞被定义为10分钟不存在血流的情况。

血栓的组织学分析及血栓大小的测定

针对血栓的形成及大小，评价了模型的一致性（consistency）。在完全闭塞10分钟后，摘除损伤的总颈动脉切片并浸泡在4%的多聚甲醛来进行固定，并为了实现组织学分析而嵌入于石蜡。以3μm-的厚度向垂直方向连续切断石蜡块。将被切断的切片置于载玻片上，并利用苏木精（丹科（Dako），丹麦（Denmark））及伊红（西格玛奥德里奇（SigmaAldrich），USA）来进行了染色。利用赛恩图像分析软件（ScionCo.,Frederick，马萨诸塞州，美国）来在呈现最大的血栓大小的切片中测定了各动物中的血栓的大小（垂直长度及区域）。

作为血栓溶解制剂而使用的重组萨克萨提林素

在本实施例中作为血栓溶解制剂使用的萨克萨提林素（recombinantsaxatilin）使用了根据记载于韩国公开专利第2002-0064787号的方法进行分离提炼的重组萨克萨提林素蛋白质，其氨基酸序列表示在序列表第十二序列。

基于重组萨克萨提林素的静脉内血栓溶解

总颈动脉闭塞10分钟后，利用与PE-10管相连接的注入泵（美国德可纳利有限公司：KDScinetificInc.,USA）并通过左侧股静脉将萨克萨提林素给药到静脉内。从开始注入时间开始检测了连续2小时的颈动脉血流量。

萨克萨提林素的剂量-反应（doseresponse）

为了调查萨克萨提林素的剂量-反应，而将动物任意分为7个组（各个组分别包含5只小鼠）：给药生理盐水（对照组）、1mg/kg、1.75mg/kg、2.5mg/kg、3.75mg/kg、5.0mg/kg及10.0mg/kg的萨克萨提林素的组。将给药剂量（dose）的10%程度以快速推注（bolus）方式进行静脉内给药，将剩余的量连续注入60分钟。

萨克萨提林素的给药方法

就血栓溶解而言，根据给药方法来评价了萨克萨提林素的效果。为了本实验，在各动物中，利用了5mg/kg的萨克萨提林素的总给药剂量，并将动物任意分为4各组（各个组分别包含5只小鼠）：（a）总给药剂量（5mg/kg）的快速推注；（b）在闭塞10分钟后注入萨克萨提林素给药剂量的一半（2.5mg/kg），在第一次快速推注60分钟后注入萨克萨提林素给药剂量的一半的双重快速推注；（c）在闭塞10分钟后注入萨克萨提林素给药剂量的一半（2.5mg/kg），60分钟连续注入剩余给药剂量；以及（d）在闭塞10分钟后注入萨克萨提林素给药剂量的10%（0.5mg/kg），60分钟连续注入剩余量（4.5mg/kg）。

再通的确认

通过测定血流量来测定再通与否及其程度。利用iWorxLabscribe2数据获取软件（version2.045000）来获得对于基本血流量的数据及对于总颈动脉闭塞后持续检测2小时的血流量的数据。监测2小时血流量后，在所有小鼠中获得总颈动脉并利用4%的多聚甲醛溶液进行固定，并为了组织学调查而嵌入在石蜡。以3μm-厚度朝横向连续切断石蜡块，置于载玻片并利用苏木精及伊红进行染色。

萨克萨提林素的剂量-反应（doseresponse）

借助血流时间（flow-time）曲线下面的面积分析了颈动脉血流量。为了避免由动物间的生理学条件的变异而引起的误差（differences），借助各动物的最少血流来对所有测定的数值进行标准化。如下计算血栓溶解效果，并表示为对于正常血流量的平均值的百分率：（萨克萨提林素给药后2小时间的平均血流量/正常血流量的平均值）×100（%）。在剂量-反应研究中计算各组的平均值，并将此呈现为剂量反应曲线（平均值±标准偏差）。

血栓溶解效果的时间-模式（Time-pattern）

每1分钟计算各动物的血流量的平均值，对萨克萨提林素的给药剂量量及给药方法，以时间-依赖性呈现各个代表性的模式。在各组中计算所有动物的平均值，以条形图呈现根据时间的变化（平均值±标准偏差）。

再通时间

调查了用于有效的再通（effectiverecanalization）的萨克萨提林素的给药时期。有效的再通定义为正常等级的50%的血流量得到恢复并持续至少30分钟以上。

蛇毒-来源萨克萨提林素衍生物的表达系统确立

序列优化的萨克萨提林素衍生物的纯系化及pPIC9载体的制备

作为萨克萨提林素衍生物的表达系统利用了毕赤酵母属（Pichia）表达系统，并制备了用于此的载体。

首先，为了制备肽序列优化蛋白质，萨克萨提林素基因在毕赤酵母属（Pichia）宿主细胞内表达时，执行密码子优化（codonoptimization），以适于毕赤酵母属（Pichia）密码子使用频率（codonusagefrequency），来变换为优化的基因核苷酸序列（序列表第十三序列至序列表第二十一序列）。在适于在毕赤酵母属（Pichia）宿主细胞（GS115，His；（株）艾津）表达的pPIC9载体（Invitrogen）纯系化上述优化的基因核苷酸序列。更详细地，在萨克萨提林素衍生物基因的5’-部位包含XhoI限制酶位点，在3’-部位包含EcoRI限制酶位点。在位于作为毕赤酵母属（Pichia）宿主细胞（GS115）表达用载体的pPIC9载体的多克隆位点（MCS，multicloningsite）的XhoI与EcoRI限制酶之间插入基因。纯系化于上述pPIC9载体的萨克萨提林素基因制备为在N-末端部位与酵母α-因子（α-factor）结合的融合蛋白质形态表达。此时，上述酵母α-因子（α-factor）起到用于将蛋白质向细胞外部分泌的信号序列，同时向细胞外部分泌时切断并除去。因上述合成的萨克萨提林素分泌到培养液，因此提炼回收的培养液来利用为有效活性分析用萨克萨提林素试样。

萨克萨提林素衍生物表达载体保存用菌株的制备

为了表达载体的分离/提炼及保存而转化（transformation）到大肠杆菌（DH5α），来制备了保存用菌株（甘油菌（Glycerolstock），保管于-70℃）。为了实现毕赤酵母属（Pichiapastoris）的转化，在毕赤酵母属宿主细胞（GS115）的转化过程中，相比大肠杆菌转化利用了多量的表达载体。为了诱导作为上述萨克萨提林素基因的染色体插入过程的位点-特异性重组（sitespecificrecombination），通过表达载体的特定基因部位（HIS4locus）的切断，来对质粒进行了线性化（即，使用SalI或StuI来切断了pPIC9载体）。在GS115感受态细胞混合10μg-50μg的线性化的表达载体质粒和40μg的担体（carrier）DNA（鲑鱼精DNA（salmonspermDNA））来进行了转化。此后，筛选成长良好的单一集群。提取基因组DNA并以聚合酶链式反应（PCR，PolymeraseChainReaction）方法确认了通过转化进入到细胞内的萨克萨提林素基因是否插入到毕赤酵母属（GS115）染色体上的his4基因之间。

萨克萨提林素衍生物的表达验证

筛选确认基因的插入的毕赤酵母属菌株中的一部分来确认了重组蛋白质的表达。以烧瓶规模培养候选（candidate）菌株，并以聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE，sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis）方法进行分析。

萨克萨提林素衍生物的表达及提炼

活性分析用萨克萨提林素衍生物试样的制备

为了制备萨克萨提林素衍生物蛋白质试样，对大量的上述筛选的菌株进行了烧瓶培养。培养条件除了增加甲醇给药剂量和要使用于代谢的氧的供给以外，与上述菌株培养条件相同。简要地，利用上述菌株的发酵是利用发酵器Fed-batch（KF7；（株）KBT）在30℃下实施。上述发酵器系统为7升（实际，以5升实施）控制系统为温度/rpm/Air/O2/pH/DO，运行模式为Batch&Fed-batch、半连续（Semi-continuous）模式。首先，将上述菌株在11.5g的无氨基酸酵母氮源（YNB，YeastNitrogenBase）培养基（每一升的无氨基酸酵母氮源（YeastNitrogenBase）为1.7g、硫酸铵为5.0g、磷酸钾（一元（monobasic））、磷酸钾（二元（dibasic））为2.85g、甘油为10g）中培养一天，将获得的上述培养液用分批（batch）培养液（pH5.0；启动介质（Start-upMedium），每2升磷酸为54ml、硫酸钙（无水）为1.8g、硫酸钾为36g、硫酸镁（7H₂O）为30g、氢氧化钾为8.26g、甘油为80g、微量金属溶液（TMS，Tracemetalsolution）为8.8ml）培养一天。上述微量金属溶液（常温保管）在适量的蒸馏水依次添加6.0g的CuSO4-5H₂O、4.28g的MnSO4-5H₂O、20.0g的ZnCl₂、65.0g的FeSO₄-7H₂O、5ml的H₂SO₄、0.08g的NaI、0.2g的Na₂MoO₄-2H₂O、0.02g的硼酸（Boricacid）、0.92g的CoCl₂-6H₂O、0.2g的生物素（Biotin）并充分溶解后，将体积定为1升并利用0.2μm的过滤器进行灭菌而制备。对上述分批（batch）培养液实施8小时-10小时的甘油补料分批（GlycerolFed-batch）培养（GFBM，pH5.0；将0.5升的甘油与0.5升的蒸馏水进行混合来进行蒸汽灭菌并以常温进行冷却之后，按每1升的GFBM添加12ml的微量金属溶液来制备）。在上述培养液处理3小时的甲醇（MeOH）来引导蛋白质之后，实施了3天的甲醇补料分批（MeOHFed-batch）培养（MFBM，pH5.0；按每1升的99.9%的工业用甲醇混合12ml的微量金属溶液来制备，并不进行单独的灭菌处理即刻使用，对容器及配管进行蒸汽灭菌并使用）。根据需要由甲醇半连续培养进行了上述培养。此时，甲醇处理率（feedrate），利用DO-STAT（DOsetpt.,min.6ppm），在第一天为6ml/liter/hr-15ml/liter/hr，第二天-第三天为15ml/liter/hr-20ml/liter/hr。另一方面，从GFBM培养供给氧，纯氧的供给量为0.2vvm-0.4vvm。

萨克萨提林素衍生物的分离提炼实验方案

如下实施了萨克萨提林素衍生物（SX1、SX2、SX3、XL1、XL2、XL3、LS1、LS2及LS3）的分离提炼。

首先，萨克萨提林素衍生物转化的酵母菌株进行高密度细胞培养后，回收了发酵上层液（supernatant）。为了树脂吸附，在上述上层液，将硫酸铵（A/S）预处理到浓度为2M，并实施了捕获色谱法（Capturingchromatography）。将苯基琼脂糖凝胶6FF树脂添加在75ml的苯基琼脂糖凝胶（PhenylSepharose）FF（通用电气医疗集团（GEHealthcare））柱之后，装入了上述上层液。根据更大规模的（scale-up）改善实验方案来吸附发酵上层液，并利用5倍的柱容量（5CV）的平衡化缓冲液（2.0MA/Sin磷酸盐缓冲溶液）及4倍的柱容量（4CV）的清洗缓冲液（1.5MA/Sinх0.5PBS）清洗后，以1.0M、0.8M、0.7M、0.5MA/S浓度洗脱活性池（activepool），结果，利用‘х0.5PBS缓冲液+0.8MA/S’的洗脱缓冲液洗脱的结果在质量和收益率方面最优秀。利用3倍的柱容量（3CV）的1NNaOH及5倍的柱容量（5CV）的蒸馏水实施了柱的再活性化（Regeneration）。

第二，利用获得的上述洗脱缓冲液来实施了研磨性色谱法。进行与上述相同的条件的预处理后，将树脂添在215ml的SOURCE30RPC/FINELINEPilot35（通用电气医疗集团（GEHealthcare））柱之后，装入上述洗脱缓冲液来进行了吸附。利用5倍的柱容量（5CV）的平衡化缓冲液（0.1%的三氟乙酸在超轻水（0.1%TFAinDDW））及5倍的柱容量（5CV）的清洗缓冲液（0.1%的三氟乙酸在10%的乙腈（0.1%TFAin10%Acetonitrile，CAN））进行清洗之后，以3倍的柱容量（3CV）的洗脱缓冲液（0.1%的三氟乙酸在30%的硝酸钙铵（0.1%TFAin30%CAN））洗脱活性池。此后，以3倍的柱容量（3CV）的0.1NNaOH（在40%的丙烯腈（in40%CAN））实施柱的再活性化。

第三，实施了羟丙基葡聚糖凝胶柱（SephadexLH20）色谱（通用电气医疗集团（GEHealthcare））。首先，为了将从活性粉末混凝土（RPC，ReactivePowderConcrete）获得的活性池适用为提炼物，而由最终保管用缓冲液进行了交换。为此，使用了截留分子量（MWCO）为5KDa的超滤（UF），但是由于萨克萨提林素分子量为7.7kDa，而预想收益率多少减少，在最终结果中也呈现出10%以上的减少。尤其，由于在RPC活性池中包含约30%程度的作为有机溶剂的乙腈，因此使用了可以使用有机溶剂的超滤膜。另一方面，作为超滤法备用方案可以使用凝胶过滤（GelFiltration），但是羟丙基葡聚糖凝胶柱作为可以使用有机溶剂的树脂非常适于萨克萨提林素脱盐，并实施此来获得最终萨克萨提林素衍生物。

利用0.2μm的过滤器来对所获得的萨克萨提林素衍生物进行灭菌后，测定了纯度。此后，将高纯度的萨克萨提林素衍生物进行冻结干燥并进行灭菌添加，并在-80℃下保管到注入前。

此后，以与上述的重组萨克萨提林素的方法相同的方法实施了基于萨克萨提林素衍生物的静脉内血栓溶解及用量-反应（图7及图8）。

实验结果

动物模型的一致性

将FeCl₃处理5分钟之后，总颈动脉的血流量在被调查的所有动物中快速且持续减少到几乎为零（图1a）。以组织学性分析确认了总颈动脉的血栓性闭塞（图1b）。血栓的大小在动物间都相似（长，1.139mm±0.091mm；面积，0.799mm²±0.139mm²）。组织学上分析萨克萨提林素处理组的血管的结果，观察到在血流量完全恢复的小鼠的颈动脉内部，血栓几乎都小时，但是血流量部分恢复的小鼠中留有一些血栓，在血流量完全未恢复的情况下，确认到血管仍然由血栓闭塞（图2）。

萨克萨提林素的给药剂量-依赖性血栓溶解效果

利用对于血流时间曲线下面的面积的数据来评价了r-萨克萨提林素的给药剂量-依赖性效果（图3）。与生理盐水处理组（2.47%±1.07%）相比，萨克萨提林素处理组在1mg/kg（2.36%±0.78%）或1.75mg/kg（4.97%±3.94%）的给药剂量中未引起显眼的变化。血流量的恢复从2.5mg/kg（32.50%±33.70%）的给药剂量开始观察到，并以给药剂量-依赖性进行增加。血流因5mg/kg的萨克萨提林素的注入而恢复到几乎正常水准（94.50%±20.47%）。5mg/kg的萨克萨提林素注入组与10mg/kg的萨克萨提林素注入组之间不存在明显的差异。

根据给药方法的萨克萨提林素的效果

利用在剂量-反应研究中呈现充分的效果的5mg/k的总给药剂量来决定了优化的萨克萨提林素的静脉内给药方法。与正常血流量相比，注入组的血流量的平均百分率如下：（a）总给药剂量（5mg/kg）的快速推注组，77.01%±46.11%；（b）分别利用给药剂量的一半的双重快速推注组，85.23%±29.95%；（c）注入给药剂量的一半，并连续注入剩余给药剂量的组，80.72%±30.13%；以及（d）注入总给药剂量的10%，并连续注入剩余给药剂量的组，94.50%±20.47%。

根据给药方法在不同时点（timepoints）观察到了血栓溶解效果的减少。在如下的时点观察到了突如其来的再闭塞：（a）在双重快速推注的小鼠中，在第一次注入后约50分钟后；（b）总给药剂量的快速推注约100分钟后；以及（c）快速推注给药剂量的一半，并连续注入剩余给药剂量后，约110分钟后（图4）。在注入总给药剂量的10%并连续注入剩余给药剂量的小鼠中未观察到任何再闭塞。

基于萨克萨提林素的再通时间

在给药生理盐水的小鼠及给药1mg/kg或1.75mg/kg的萨克萨提林素的小鼠中未观察到有效的再通。仅在给药2.5mg/kg的萨克萨提林素的五只小鼠中的两只及给药3.75mg/kg的r-萨克萨提林素的五只小鼠中的三只中产生有效的再通。

有效的再通定义为正常血流量的50%以上得到恢复并持续至少30分钟以上（图5）。在注入5mg/kg或10mg/kg的r-萨克萨提林素的所有小鼠中观察到有效的再通（图5）。根据给药剂量，有效的再通时间如下：（a）给药2.5mg/kg的r-萨克萨提林素的小鼠，32.92分钟±23.52分钟；（b）给药3.75mg/kg的萨克萨提林素的小鼠，21.75分钟±21.62分钟；（c）给药5mg/kg的萨克萨提林素的小鼠，13.92分钟±6.02分钟；以及（d）给药10mg/kg的萨克萨提林素的小鼠，19.46分钟±19.75分钟。并且，根据萨克萨提林素的给药方法来评价了有效的再通。除了以总给药剂量的快速推注进行处理的两只小鼠以外的处理5mg/kg的萨克萨提林素的所有小鼠都呈现出有效的再通。有效的再通时间如下：（a）总给药剂量的快速推注组，2.86分钟±0.22分钟；（b）双重快速推注组，13.44分钟±26.31分钟；（c）注入给药剂量的一半，并连续注入剩余给药剂量的组，19.48分钟±25.94分钟；以及（d）注入总给药剂量的10%，并连续注入剩余给药剂量的组，13.92分钟±6.02分钟。与注入总给药剂量10%并连续注入剩余给药剂量的组相比，有效的再通时间在总给药剂量的快速推注组中更短（p=0.004）。

处理萨克萨提林素后的死亡率及出血

将总共51只动物利用于萨克萨提林素的血栓溶解效果的验证。其中，快速推注5mg/kg的萨克萨提林素后，约90分钟后，因在颈部切口位置的出血而有一只动物死亡，虽然另一只未死亡，但是呈现出在相同的部位的出血。

萨克萨提林素衍生物的活性测定

体外血小板凝集的分析

在小鼠富血小板血浆（PRP，plateletrichplasma）给药萨克萨提林素衍生物及二磷酸腺苷（ADP），利用凝集测定仪（Aggregometer；CHRONO-LOG，USA）测定凝集程度来评价了本发明的萨克萨提林素衍生物的活性（表1）。

表1．重组萨克萨提林素及萨克萨提林素衍生物的体外活性

如可以从表1及图6中确认，作为本发明的萨克萨提林素衍生物的SX1（349）及SX3（918）的活性最高，并可以确认到与萨克萨提林素类似的血小板抑制模式。

综上所述，即使在上述所有萨克萨提林素及萨克萨提林素衍生物的效果间存在一些差异，在比较根据处理浓度的范围的凝集抑制的程度的情况下，可以了解到本发明的萨克萨提林素衍生物的处理（例如，SX1，1μM；SX3，4μM）与上述萨克萨提林素（约0.7μM）的效果类似（图6）。

萨克萨提林素衍生物的血栓溶解效果

与上述实验相同，利用对于血流时间曲线下面的面积的数据来评价了萨克萨提林素和萨克萨提林素衍生物（SX1、SX3）的血栓溶解效果（图7及图8）。相同处理了萨克萨提林素及萨克萨提林素衍生物的给药剂量。在处理20mg/kg的情况下，萨克萨提林素给药组恢复了60.92%±39.52%的血流量，SX1给药组恢复了78.56%±16.24%的血流量，SX3给药组恢复了69.15%±14.89%的血流量。在给药40mg/kg的剂量时，萨克萨提林素给药组和萨克萨提林素衍生物（SX1、SX3）给药组都恢复到正常血流量而不产生再闭塞地维持。虽然不存在再闭塞，与给药20mg/kg的剂量时相同，确认到，与给药现有萨克萨提林素时相比，给药萨克萨提林素衍生物（SX1、SX3）时，由于血流量增减的程度少而稳定维持血流量（图7）。在20mg/kg的给药剂量中，确认到，在血流量得到恢复的程度上表现出大差异，但与现有萨克萨提林素相比，基于萨克萨提林素衍生物（SX1）的血栓溶解治疗中，由于再通之后的再闭塞频率及血流量增减的程度显著降低而稳定维持正常血流量的倾向（图8）。

以上，对本发明的特定部分进行详细的记述，但是这样的具体记述仅仅是优选实例，本发明的范围并不局限于此，这对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。本发明的实质性范围应由所附的权利要求书及其等同替代定义。

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Claims

1.包含选自SEQIDNO:3～12的氨基酸序列的肽作为血栓溶解用的活性成分用于制备血栓溶解剂的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述肽具有解整联蛋白活性。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述肽是包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的肽，且为萨克萨提林素。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述肽与存在于血栓内的整合素相结合来溶解血栓。

5.根据权利要求1所述的用途，其中所述肽与存在于形成血栓的血小板表面的糖蛋白IIb-IIIa相结合来溶解血栓。