CN103283598A

CN103283598A - 一种杉木初代培养芽诱导方法

Info

Publication number: CN103283598A
Application number: CN2013101951404A
Authority: CN
Inventors: 黄开勇; 陈琴; 郝海坤; 戴俊; 张照远; 蓝肖; 唐庆兰
Original assignee: Guangxi Zhuang Autonomous Region Forestry Research Institute
Current assignee: Guangxi Zhuang Autonomous Region Forestry Research Institute
Priority date: 2013-05-23
Filing date: 2013-05-23
Publication date: 2013-09-11
Anticipated expiration: 2033-05-23
Also published as: CN103283598B

Abstract

本发明公开一种杉木初代培养芽诱导方法，采用杉木基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养的芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度的条件下进行培养，诱导芽的萌发。本发明改进了现有杉木的芽诱导技术，克服杉木芽诱导过程中外植体褐变以及玻璃化等问题，提高杉木芽诱导率，出芽指数以及萌芽生长状况，获取数量多、质量好的萌芽，从而满足增殖培养的需要，促进杉木组织培养快速繁殖体系的建立，具有较好的经济效益和社会效益。

Description

一种杉木初代培养芽诱导方法

技术领域

本发明涉及杉木无性繁殖技术，具体涉及一种杉木初代培养芽诱导方法。

背景技术

杉木（Cunninghamia lanceolata）为杉科植物，是我国特有的一种重要的速生用材树种。杉木适应性广、材质优良、用途广泛，是我过南方地区的主要造林树种之一。随着我国经济的发展和国家对林业的重视，杉木的造林面积将不断扩大，对苗木数量和质量的要求将不断提高，因此，采用杉木播种、扦插、压条和嫁接等方式育苗，仍难以满足市场的需求。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术，选择杉木优良家系或者无性系为材料，通过组织培养方法繁殖苗木，既可以满足生产上的数量要求，又可保持母本性状。组织培养过程中，初代培养是制约组织培养顺利进行的关键步骤，其中涉及了外植体的获取、外植体的消毒、培养基选择以及培养过程中培养体褐变、苗木玻璃化等重要问题。

专利号为201110129388.1公开了一种杉木无性系离体生根培养方法，该方法包括以下步骤：选取杉木优良无性系原株的树干的基部萌条为组织培养材料，接入继代增殖培养基进行继代增殖培养，诱导分化出不定芽，然后将不定芽转入MS培养基上进行伸长培养；然后将不定芽转入诱导生根培养基培养，得到生根试管苗后移栽，选用黄土、泥炭土3:1比例混合后用作移栽基质。该发明虽然有效解决了杉木不同优良无性系在组织培养条件下组培苗的生根困难问题，提高了生根率，但是仍不能解决培养体出现褐变、苗木玻璃化的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种杉木初代培养芽诱导方法，改进现有的芽诱导技术，克服芽诱导过程中外植体褐变以及玻璃化等问题，提高芽诱导率，出芽指数以及萌芽生长状况，获取数量多、质量好的萌芽，从而满足增殖培养的需要，促进杉木组织培养快速繁殖体系的建立。

本发明的技术方案如下：

一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：采用杉木基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其操作步骤为，

（1）外植体选择：选择杉木基部萌发的半木质化的萌条为外植体；

（2）外植体消毒及接种：将杉木萌条针叶剪去，经过洗洁精清洗，流水冲洗和化学试剂处理消毒后，剪切成茎段接入培养基中；

（3）芽诱导培养：将接种后的外植体置于适宜室内条件下培养。

以上所述的芽诱导培养基包括1/2MS~MS培养基，激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；其中改良1/2MS~MS培养基的大量元素中NH₄NO₃含量为550~1100 mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为0.5~2.0mg/L；维生素C含量为10~15 mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%。

以上所述的萌条是长为4~10cm的半木质化的粗壮萌条。

以上所述的消毒及接种是将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为1%~5%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗10~15min后置于流水下冲洗1~2 h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；再采用无菌水冲洗8~10次后剪成长为1.5~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。

在以上所述的升汞溶液每150~200 ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。

以上所述的芽诱导培养是将接种后的外植体置于温度为23±2 ℃，湿度为35~45 %的室内条件下进行暗培养8~10天后转到光照强度为2200~2400 lx的室内条件下培养。

本发明的优点及积极效果如下：

1、本发明采用改良1/2MS~MS培养基作为基本培养基，调整了培养基中大量元素中NH₄NO₃含量，并将培养体置于适宜的环境条件下培养，有效的克服了杉木组织培养芽诱导过程中易出现的玻璃化现象，促进了萌芽的生长速度和健壮度。

2、本发明采用激动素KT诱导芽的发生，使得玻璃化发生率低，萌芽生长良好。

3、本发明在芽诱导培养基中添加适量维生素C，能有效防止芽诱导过程中外植体褐变的发生。

4、本发明以基部长4~10 cm长的半木质化粗壮萌条作为外植体，保证了外植体较强的分生能力，促进芽的诱导。

5、本发明将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%，光照强度为2200~2400 lx的室内条件下培养，温度和湿度偏低，光照强度偏高的室内条件，有利于减少芽诱导过程中玻璃化的发生。

附图说明

图1为外植体萌芽效果图；

图2为杉木萌芽初期生长效果图；

图3为杉木萌芽高生长效果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良1/2 MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以1/2 MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为550 mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为1.0 mg/L；维生素C含量为10mg/L；琼脂含量为0.8 %和蔗糖含量为3 %，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为4~6 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为1~2 %的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200 r/min的摇床上清洗10 min后置于流水下冲洗1 h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每150 ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗8次后剪成长为1.5~2.0 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养8天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体的存活率为90.0%，诱导芽的萌发率为100%，诱导率为5.47，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例2：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良1/2MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以1/2MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为550 mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为1.5mg/L；维生素C含量为15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为4~6cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为2~3%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗1.5h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每160ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗10次后剪成长为2.0~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养8天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为100%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为5.58，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例3：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良2/3MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以2/3MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为825 mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为2.0mg/L；维生素C含量为15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为6~8 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为2~3%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗2h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每180 ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗9次后剪成长为2.0~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养9天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体的存活率为96.7%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为5.31，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例4：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良3/4MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以3/4MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为550mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为0.5mg/L；维生素C含量为: 10mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为6~8 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为3~4%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗1.5h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每180ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗8次后剪成长为2.0~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养10天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为100%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为4.98，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例5：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良3/4MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以3/4MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为825mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为1.0mg/L；维生素C含量为: 15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为8~10 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为4~5%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗12min后置于流水下冲洗2h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每180ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗9次后剪成长为1.5~2.0 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养10天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为96.7%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为5.33，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例6：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良3/4MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以3/4MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为1100mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为1.5mg/L；维生素C含量为: 15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为8~10 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为4~5%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗2h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每200ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗10次后剪成长为1.5~2.0 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养9天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为100%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为5.15，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例7：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良3/4MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以3/4MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为825mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为2.0mg/L；维生素C含量为: 15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为8~10 cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为4~5%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗2h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每200ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗8次后剪成长为2.0~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养10天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为90%，诱导芽的萌发率为100%，诱导指数为5.71，极少数外植体发生褐变，萌芽无玻璃化，幼苗生长正常。

实施例8：

一种杉木初代培养芽诱导方法，所用的芽诱导培养基是改良MS培养基，添加激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；以MS培养基为基本培养基，大量元素中NH₄NO₃含量为550mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为1.0mg/L；维生素C含量为: 15mg/L；琼脂含量为0.8%和蔗糖含量为3%，制成芽诱导培养基备用。选择杉木基部萌发的长为5~8cm长的半木质化的粗壮萌条作为外植体，将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为2~4%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200r/min的摇床上清洗15min后置于流水下冲洗2h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9min；其中升汞溶液每200ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。再采用无菌水冲洗10次后剪成长为1.5~2.0 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。将接种后的外植体置于温度为23±2℃，湿度为35~45%的室内条件下暗培养10天，然后转到光照强度为2200~2400lx的室内条件下培养，外植体存活率为100%，诱导芽的萌发率为92.3%，诱导指数为5.15，少数外植体发生褐变，萌芽萌发初期有少量玻璃化，后期幼苗生长正常。

Claims

1.一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：采用杉木基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其操作步骤为，

2.根据权利要求1所述的一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：所述的芽诱导培养基包括改良1/2MS~MS培养基，激动素6-糠氨基嘌呤（KT），维生素C，琼脂和蔗糖；其中改良1/2MS~MS培养基的大量元素中NH₄NO₃含量为550~1100 mg/L；激动素6-糠氨基嘌呤（KT）含量为0.5~2.0 mg/L；维生素C含量为10~15mg/L；琼脂含量为0.8 %和蔗糖含量为3%。

3.根据权利要求1所述的一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：所述的萌条是长为4~10cm的半木质化的粗壮萌条。

4.根据权利要求1所述的一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：所述的消毒及接种是将杉木萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入浓度为1~5 %的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200 r/min的摇床上清洗10~15 min后置于流水下冲洗1~2 h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用0.15 %升汞溶液灭菌9 min；再采用无菌水冲洗8~10次后剪成长为1.5~2.5 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。

5.根据权利要求4所述的一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：在所述的升汞溶液每150~200 ml中滴1滴吐温20，搅拌均匀。

6.根据权利要求1所述的一种杉木初代培养芽诱导方法，其特征在于：所述的芽诱导培养是将接种后的外植体置于温度为23±2 ℃，湿度为35~45 %的室内条件下进行暗培养8~10天后转到光照强度为2200~2400 lx 的室内条件下培养。