CN103073605B - 一种蒙花苷单体的分离纯化方法 - Google Patents

一种蒙花苷单体的分离纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种蒙花苷单体的分离纯化方法，该方法包括如下工艺步骤：（1）提取：将野菊花药材以乙醇溶液回流提取，收集滤液；（2）浓缩：将滤液浓缩后静置析晶并烘干沉淀；（3）溶剂洗涤：将沉淀以甲醇进行超声波洗涤，过滤，收集过滤固体，烘干；（4）溶解、过滤：经烘干后的固体中，加入有机溶剂溶解，过滤，收集滤液；（5）高效制备液相色谱分离：针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；（6）产品回收：回收乙腈，蒙花苷单体析出后经干燥得到蒙花苷单体产品。本发明操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量蒙花苷单体的高纯度分离制备，蒙花苷单体纯度高，可作为含量测定的对照品使用。

Description

一种蒙花苷单体的分离纯化方法
技术领域
本发明涉及一种从植物中分离化合物单体的方法，具体来说，涉及一种从野菊花中提取蒙花苷单体的分离纯化方法，属于化合物单体的分离纯化技术领域。
背景技术
野菊花（Flower of Indian Dendranthema,Wild chrysanthemum）为菊科多年生草本植物野菊的头状花序，外形与菊花相似。产品以色黄无梗、完整、气香、花未全开者为佳。野菊花可广泛用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病证。同时又有很好的降压作用，可用于高血压病的辅助治疗。
蒙花苷是野菊花的特征性化学成分，也是野菊花中活性最高的黄酮类成分，其英文名为Buddleoside，化学名为: 7-[[6-O-(6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy]-5-hydroxy-4'-methoxyflavone，分子式为C28H32O14，分子量为592.54，属于Flavonoids黄酮类，其结构式如下:
基于蒙花苷是野菊花的特征性化学成分，因此，如果能以蒙花苷作为该药材及其相关制剂的质量评价指标，既能较真实地反映其质量又具有专属性，可对野菊花药材及其制剂的质量控制起到重要作用。
但是，发明人通过检索大量文献发现，目前只有关于野菊花中蒙花苷结晶纯化的报道，且蒙花苷未达到标准品所需要的纯度，而对于蒙花苷单体液相色谱分离工艺却未见有相关报道。
中国专利CN200910057065.9提供一种从野菊花中制备蒙花苷提取物的方法，获得的提取物中蒙花苷含量在50%以上。具体的技术方案为：将野菊花加入乙醇水溶剂，采用热回流或者渗漉提取，将提取溶液浓缩至无醇味，后将浓缩液pH值调节至10，放置，取上清液用酸调节pH至7-8左右，过滤沉淀后，取上清液上大孔树脂，先用水洗脱，然后用10%-30%的乙醇水和50%-80%的乙醇水洗脱，收集50%-80%的馏分。将50%-80%的馏分浓缩，干燥，得蒙花苷提取物，蒙花苷含量在50%以上。由该方法提取得到的蒙花苷的含量只能达到50%以上，无法得到高纯度的蒙花苷单体，对药材的研究与质量控制意义不大。
另外，中国专利CN201110195580.0 公开了一种从野菊花中提取蒙花苷的方法，包括如下步骤：(1)原料预处理：将干燥的野菊花除杂、切碎，使用去离子水常温浸泡5~10h，甩干水液后，备用；(2)碱水提取：加入重量为野菊花原料干重6~10倍的质量浓度为2‰~8‰的碱水溶液，在70℃~80℃的条件下，浸泡提取≥2次，每次浸泡2~3h，过滤，得提取液；(3)醇沉：将步骤(2)所得提取液蒸发浓缩至原提取液重的1/20~1/15，然后加入重量为所得浓缩液2~3倍的95%(体积)乙醇，在20℃~30℃下静置6~10h，过滤，得醇液；(4)萃取：将步骤(3)所得醇液蒸发浓缩至原所得醇液量重的1/6~1/5，然后加入重量为所得浓缩液2~3倍的石油醚萃取≥2次，收集下层重液，上层轻液石油醚层回收；(5)调酸：将步骤(4)所得重液蒸发浓缩至其重量的1/3~1/2后，向其中加入0.2~0.4 mol/L的酸溶液，调节pH至3~5后，冷却至10℃~20℃，静置10~20h，收集沉淀物；(6)大孔树脂吸附分离：将步骤(5)所得沉淀物用相当于沉淀物重量8~12倍体积浓度为60%~80%的乙醇溶解，上大孔吸附树脂柱，流速为1.5~2.0倍柱体积/h，静置2~3h，使用2~3倍柱体积去离子水进行洗脱后，再使用8~12倍柱体积的组合有机溶剂进行洗脱，收集有机溶剂洗脱液；(7)结晶与重结晶：将步骤(6)所得有机溶剂洗脱液蒸发浓缩、干燥后，使用重量为所得干物质10~15倍的组合有机溶剂溶解，并加温至40℃~60℃，保持此温度20~30min后，降温至5℃~10℃，静置10~15h，收集晶体，重结晶3~4次，干燥得成品。所得的野菊花提取物产品，经高效液相色谱法检测，其蒙花苷含量可达95%以上。该方法的工艺较繁琐，且结晶的产品收率较低，含量仍达不到所需药材控制的纯度检测标准。
发明内容
本发明旨在解决蒙花苷单体无法从结晶中获得高纯度蒙花苷的技术难题，提供一种蒙花苷单体的分离纯化方法。该方法操作简便，生产周期短，分离效率高，工艺稳定，成本易控制，可实现大量蒙花苷单体的高纯度分离制备，得到的蒙花苷单体纯度高，可作为含量测定的对照品使用。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种蒙花苷单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
（1）提取
将野菊花药材粉碎成直径3mm的粗粉，按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:10L计算，加入体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
经乙醇回流提取得到的提取液即滤液中主要含有蒙花苷、色素和极性类杂质成分。
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的10%，常温下静置析晶10～12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将沉淀60℃烘干后进行下一步洗涤处理；
经浓缩后的滤液中主要含有色素和大分子极性类杂质成分。
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）经烘干后的沉淀中加入10倍量体积的甲醇进行超声波洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后待下一步处理；
经洗涤后的滤液层主要含有色素和小极性类杂质。
（4）溶解、过滤
将步骤（3）经烘干后的固体中，按照固体物质量:溶剂体积=1g:10mL，加入有机溶剂溶解，溶解后的溶液用有机膜过滤，滤除颗粒杂质，收集滤液；
所述有机溶剂为吡啶、四氢呋喃或DMF。
（5）高效制备液相色谱分离
取步骤（4）所得的滤液进样，用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）制备分离蒙花苷单体，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；
所述反相高效液相色谱法的色谱条件如下：
采用填料为C18的色谱柱；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；常温下制备；流速60-600mL/min；检测波长为334 nm。
所述蒙花苷单体进行高效制备液相色谱分离前，可采用液-质联用（HPLC-MS）方法或其它本技术领域常用的方法，如气-质联用、核磁共振碳谱、氢谱等确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形。
以液-质联用（HPLC-MS）方法为例，可采用填料为C18的色谱柱，流动相组成及流速与上述反相高效制备液相色谱法相同，柱温为室温，检测波长为334nm，取步骤（4）所得的滤液进样，进行蒙花苷单体的HPLC-MS检测，紫外检测器在线监测，根据色谱峰峰形和质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形与位置。由于反相高效液相色谱法（RP-HPLC）制备分离蒙花苷单体也采用C18色谱柱，且流动相组成相同，因而可用于推断在反相高效液相色谱法（RP-HPLC）制备分离蒙花苷单体中的出峰位置及峰形等。
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，蒙花苷单体在剩余醋酸水溶液中析出，放置室温后用漏斗过滤析出固体，固体65℃干燥至干，即得到蒙花苷单体产品。
与现有技术相比，本发明具有以下突出的技术效果：
1、本发明方法采用制备型高效液相色谱系统对蒙花苷单体进行分离纯化，通过最适宜的前处理方法和色谱条件等，达到良好的分离效果，并且紫外检测器在线监测，过程直观，针对性收集蒙花苷单体，目标明确，且易于控制产品质量。
2、本发明方法操作简便，生产周期短，产品收率高、纯度高，产量大，工艺稳定可靠，重现性好，成本易控制，易于扩大生产。
3. 本发明方法各工艺步骤中的有机试剂均可回收再利用，溶剂消耗量少。
4. 具有较高的学术价值。由于目前尚未有能规模生产蒙花苷单体及对照品的方法报道，本发明所得产品不但能有效改善蒙花苷对照品缺乏的现状，也能为产业化开发蒙花苷制剂提供高纯度优质原料。
5、由于高效液相色谱对样品溶液的纯度、色泽等要求均较高，因此若在进行高效液相色谱分离前，不按照本发明的前期方法步骤处理原料中的杂质与色素，使其进样溶液中尽可能有较少的杂质与色素，则有可能达不到良好的分离效果，还可能对高效液相色谱系统的色谱柱等配件产生难以逆转的影响，缩短其使用周期。
6、由于在高效液相色谱分离过程中，色谱条件的选择非常重要，它对样品溶液中各物质的出峰顺序、峰形、分离效果等起着决定性的作用；色谱条件主要包括色谱柱（包括填料、柱长及内径等）、流动相（包括组成及流速等）、柱温、检测波长、检测器等，各色谱条件的选择及其组合至关重要。本发明通过大量的试验研究及对比分析，确定了如上所述的各色谱条件，使样品溶液中各物质的出峰时间、峰形、分离效果等最佳化，有利于蒙花苷单体得到充分有效的分离。
7、从本发明野菊花药材的HPLC分析图谱可以看到，蒙花苷峰占主要的色谱峰，且杂质相对较少，利用液相色谱分离，可以很快得到较高纯度的蒙花苷。
附图说明
图1为本发明实施例1的野菊花提取原料图谱。
图2为本发明实施例1的高效制备液相色谱图，图中记录为3针样品连续进样色谱图。
图3为本发明实施例1的蒙花苷单体产品复检的HPLC分析图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明仅限于下述实施例。
下述各实施例中，终产品蒙花苷单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：
以C18(十八烷基硅烷键合硅胶)为填充剂；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；柱温30℃；流速1.0mL/min；检测波长为334 nm。
实施例1
一种蒙花苷单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
（1）、提取
取野菊花药材1kg，粉碎成直径3mm的粗粉，加入10L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）、浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至3L时，常温下静置析晶12小时，过滤收集沉淀，除去滤液（滤液中主要含一些色素和大极性杂质成分），将沉淀60℃烘干后（重18克）进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）、溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入180mL甲醇进行超声洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后固体为11克，待下一步处理；
（4）、溶解、过滤
将步骤（3）过滤后所得的固体加110mL DMF溶解，溶解后的溶液用0.45μm纳米有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）、高效制备液相色谱分离
采用填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×5cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为60mL/min；
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量3克（以滤液样品中所含的干品重量计），紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成。
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的滤液进样，进行蒙花苷单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形。
（6）、产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液1.4L，放置室温后用漏斗过滤蒙花苷晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品6.2克。
整个生产流程用时约3天。
计算得产品收率为（6.2/1000）×100%=0.62%。
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.32%。
实施例2
一种蒙花苷单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
（1）提取
取野菊花药材10kg，粉碎成直径3mm左右的粗粉，加入100L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至约35L左右，常温下静置析晶10小时，过滤收集沉淀，除去滤液（滤液中主要含一些色素和大极性杂质成分），将沉淀烘干后（重192克）进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入1.92L甲醇进行超声洗涤，充分洗涤后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，烘干后固体约119克，待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）烘干后所得的固体加1190mL吡啶溶解，溶解后的溶液用0.45μm有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）高效制备液相色谱分离
采用填料为C18（十八烷基硅烷键合硅胶）的色谱柱，柱规格为50cm×8cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为140mL/min;
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量6克（以滤液样品中所含的干品重量计），紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成。
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的滤液进样，进行蒙花苷单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形。
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品的水溶液8L，放置室温后用漏斗过滤固体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品71克。
整个生产流程用时约4.5天；
计算得产品收率为（71/10000）×100%=0.71%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为98.90%。
实施例3
一种蒙花苷单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
（1）提取
取野菊花药材50kg，粉碎成直径3mm左右的粗粉，加入500L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至约150L左右，常温下静置析晶11小时，过滤收集沉淀，除去滤液（滤液中主要含一些色素和大极性杂质成分），将沉淀烘干后（重1012克）进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入10.12L甲醇进行超声洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后固体约621克，待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）烘干后所得的固体加6210mL四氢呋喃溶解，溶解后的溶液用0.45μm有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）高效制备液相色谱分离
采用填料为C18（十八烷基硅烷键合硅胶）的色谱柱，柱规格为50cm×20cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为600mL/min；
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量20克（以滤液样品中所含的干品重量计），紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成。
在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形，采用的色谱条件同上，取步骤（4）所得的滤液进样，进行蒙花苷单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形。
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品的醋酸水溶液40L，放置室温后用漏斗过滤固体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品363克。
整个生产流程用时约6天；
计算得产品收率为（363/50000）×100%=0.726%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为98.86%。

Claims (5)

1.一种蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
（1）提取
将野菊花药材粉碎成直径3mm的粗粉，按照药材重量:乙醇溶液体积=1Kg:10L计算，加入体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至原滤液体积的10%，常温下静置析晶10～12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将沉淀60℃烘干后进行下一步洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）经烘干后的沉淀中加入10倍量体积的甲醇进行超声波洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）经烘干后的固体中，按照固体物质量：溶剂体积=1g:10mL，加入有机溶剂溶解，溶解后的溶液用有机膜过滤，滤除颗粒杂质，收集滤液；
（5）高效制备液相色谱分离
取步骤（4）所得的滤液进样，用反相高效液相色谱法制备分离蒙花苷单体，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液；
所述反相高效液相色谱法的色谱条件如下：
采用填料为C18的色谱柱；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70为流动相；检测波长为334 nm；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，蒙花苷单体在剩余醋酸水溶液中析出，放置室温后用漏斗过滤析出固体，固体65℃干燥至干，即得到蒙花苷单体产品；
步骤（4）所述有机溶剂为吡啶、四氢呋喃或二甲基甲酰胺；
所述蒙花苷单体进行高效制备液相色谱分离前，采用液-质联用方法或气-质联用、核磁共振碳谱、氢谱确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形；
所述液-质联用方法采用填料为C18的色谱柱，流动相组成及流速与步骤（4）所述反相高效制备液相色谱法相同，柱温为室温，检测波长为334nm，紫外检测器在线监测，根据色谱峰峰形和质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形与位置。
2.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
（1）提取
取野菊花药材1kg，粉碎成直径3mm的粗粉，加入10L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至3L时，常温下静置析晶12小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将60℃烘干后的18克沉淀进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入180mL甲醇进行超声洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后固体为11克，待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）过滤后所得的固体加110mL二甲基甲酰胺溶解，溶解后的溶液用0.45μm纳米有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）高效制备液相色谱分离
采用填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×5cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为60mL/min；
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量3克，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品水溶液1.4L，放置室温后用漏斗过滤蒙花苷晶体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品6.2克；
整个生产流程用时3天；
计算得产品收率为（6.2/1000）×100%=0.62%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱复检产品纯度，测得结果为99.32%。
3.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
（1）提取
取野菊花药材10kg，粉碎成直径3mm的粗粉，加入100L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取4次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至35L，常温下静置析晶10小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将60℃烘干后的192克进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入1.92L甲醇进行超声洗涤，充分洗涤后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，烘干后固体为119克，待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）烘干后所得的固体加1190mL吡啶溶解，溶解后的溶液用0.45μm有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）高效制备液相色谱分离
采用填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×8cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为140mL/min；
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量6克，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品的水溶液8L，放置室温后用漏斗过滤固体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品71克；
整个生产流程用时4.5天；
计算得产品收率为（71/10000）×100%=0.71%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱复检产品纯度，测得结果为98.90%。
4.根据权利要求1所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
（1）提取
取野菊花药材50kg，粉碎成直径3mm的粗粉，加入500L 体积百分比为95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小时，过滤，收集、合并滤液；
（2）浓缩
将步骤（1）收集、合并的滤液回收乙醇，浓缩至150L，常温下静置析晶11小时，过滤收集沉淀，除去滤液，将60℃烘干后的1012克进行下一步溶剂洗涤处理；
（3）溶剂洗涤
向步骤（2）所得的沉淀中加入10.12L甲醇进行超声洗涤，待产品与甲醇成混悬液后用中速滤纸过滤，收集过滤固体，60℃烘干后固体为621克，待下一步处理；
（4）溶解、过滤
将步骤（3）烘干后所得的固体加6210mL四氢呋喃溶解，溶解后的溶液用0.45μm有机膜过滤，滤液作为下一步制备蒙花苷单体的原料；
（5）高效制备液相色谱分离
采用填料为C18的色谱柱，柱规格为50cm×20cm；
流动相组成为：乙腈-0.3%醋酸水溶液，体积比为30:70；
流速为600mL/min；
检测波长为334nm，室温操作；
取步骤（4）所得的滤液进样，每一针进样量以滤液样品中所含的干品重量计为20克，紫外检测器在线监测，针对性收集蒙花苷单体的制备馏分溶液，得蒙花苷单体溶液，重复此操作，直至制备完成；
（6）产品回收
将步骤（5）高效制备液相色谱分离得到的蒙花苷单体溶液加热回收乙腈，得到析出产品的醋酸水溶液40L，放置室温后用漏斗过滤固体，过滤固体于65℃干燥12小时，得到蒙花苷单体产品363克；
整个生产流程用时6天；
计算得产品收率为（363/50000）×100%=0.726%；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱RP-HPLC复检产品纯度，测得结果为98.86%。
5.根据权利要求2-4所述的蒙花苷单体的分离纯化方法，其特征在于在进行高效制备液相色谱分离前，通过液-质联用方法确定高效液相色谱中蒙花苷单体的峰形，采用的色谱条件与高效制备液相色谱分离相同，取步骤（4）所得的滤液进样，进行蒙花苷单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，确定蒙花苷单体在液相色谱中所对应的峰形。
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