CN102993321B - 一种黄芪多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药提取工艺，尤其涉及一种黄芪多糖的制备方法。其步骤为：将黄芪用水浸泡，对混合物热回流提取，过滤取滤液，将滤液离心后取其上清液，向上清液中加入壳聚糖絮凝，静置，对溶液除杂后加入乙醇至含醇体积比达70-80%，3-5℃下静置1.5-2.5h，离心取上清液，静置22-24h，抽滤得沉淀，洗涤烘干即得黄芪多糖。本发明的工艺结合了4种提纯和除杂工艺，对设备和环境的要求较低，操作简便，极大降低了生产成本的同时，对黄芪多糖做到了高纯度提取，采用本发明方案提取的黄芪多糖的纯度达90%以上。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取工艺，尤其涉及一种黄芪多糖的制备方法。
背景技术
中药材黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。其性甘、微温，入肺、脾经，具有补气升阳、固表止汗、托毒排脓、利水消肿、敛疮生肌等功效。中药黄芪中含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮类、微量元素等多种生物活性物质，其中黄芪多糖是其主要生物活性成分，它主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成。大量体内外实验及临床研究表明，黄芪多糖具有增强机体免疫功能、强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效。
实验研究证明黄芪多糖具有促进机体对抗病毒诱导产生干扰的能力，一定程度地干扰病毒复制，抑制病毒繁殖。通过增强机体单核巨噬细胞系统中各种巨噬细胞功能，消灭机体内一些病原菌。同时黄芪多糖具有促进动物生长，提高机体对营养物质的利用率，可作为饲料添加剂显著提高动物的生长速度，提升动物抗病力，从而提高动物肉类产品的质量。综上所述，黄芪多糖营养价值高、对治疗病症疗效好且副作用小、对畜牧饲养业也有很好的使用价值。
传统的黄芪多糖分离方法为水提醇沉法，但用这种方法所得黄芪多糖提取率和纯度都不高。此外，醇沉前采用的减压蒸发浓缩温度高、易起泡，给蒸发浓缩造成困难，容易造成多糖分解并给实际造作带来不便。而中国专利200610024178.5公开了一种黄芪多糖的提取分离方法：采用微波提取、微滤、超滤和醇沉技术精制黄芪多糖，其中微滤和超滤虽省时，但需要一定的微滤设备，使得生产成本大大增加。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺简单、成本低廉、高纯度提取黄芪多糖的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下方案：
一种黄芪多糖的制备方法：将黄芪用水浸泡，对混合物热回流提取，过滤取滤液，将滤液离心后取其上清液，向上清液中加入壳聚糖絮凝，静置，对溶液除杂后加入乙醇至含醇体积比达70-80%，3-5℃下静置1.5-2.5h，离心取上清液，静置22-24h，抽滤得沉淀，洗涤烘干即得黄芪多糖。
所述的一种黄芪多糖的制备方法，按重量份：1份黄芪用4-6份蒸馏水浸泡1.5-2.5h，对混合物热回流1-1.5h，过滤取滤液；向滤渣中加入4-5份水，并对混合物热回流1-1.5h，过滤取滤液，相同方法再次对滤渣进行1次以上的热回流提取，将所有的滤液合并。
所述的一种黄芪多糖的制备方法，其特征在于，按重量份：每1份滤液离心后的上清液中加1%重量体积比浓度的壳聚糖絮凝剂0.1-0.2份，絮凝24h。
所述的一种黄芪多糖的制备方法，其特征在于，每次离心皆在3000-5000r/min条件下离心10-20min。
本发明的优点如下：结合了4种提纯和除杂工艺，对设备和环境的要求较低，操作简便，极大降低了生产成本的同时，对黄芪多糖做到了高纯度提取，采用本发明方案提取的黄芪多糖的纯度达90%以上。
附图说明：
图1为本发明提取物中的蛋白质检测的颜色对比；
图2为本发明提取物中鞣质的检测；
图3为本发明提取物溶液经苯酚-硫酸法处理后的紫外分光光度法测出的结果。
注：图1中从左到右依次是提取的淡黄色粉末状物质、试验后的提取物的溶液、试验后的牛血清白蛋白溶液。图2中从左到右依次是提取的淡黄色粉末状物质、试验后的提取物的溶液、试验后的常规中药水提液。
具体实施方式
实施例1
取黄芪100g置于回流装置中，加入蒸馏水400mL浸泡1.5h，对混合物加热回流1h，趁热纱网过滤取滤液。向滤渣中加入蒸馏水500mL，对混合物加热回流1h，过滤取滤液，按照此法，对滤渣加水后热回流2次，并过滤取滤液。将所有的滤液合并，对其3000r/min离心10min，取上清液，浓缩，用蒸馏水调整至600mL的溶液备用。取600ml上述溶液，加入1%重量体积比浓度的壳聚糖絮凝剂60ml，絮凝24h，将絮凝除杂后的溶液，浓缩至100 mL，加入95%乙醇使含醇体积比达到70%，3 ℃温度下，在冰箱静置1.5 h后有大量粘性沉淀产生，对其3000r/min离心10min后弃沉淀，取上清液继续静置22h，有沉淀产生，抽滤，用无水乙醇和丙酮反复洗涤所得沉淀，烘干得淡黄色粉末状物质，经公认的检测方法检测后，其纯度达92％。
实施例2
取黄芪100g置于回流装置中，加入蒸馏水500mL浸泡2h，对混合物加热回流1.5h，趁热纱网过滤取滤液。向滤渣中加入蒸馏水400mL，对混合物加热回流1.5h，过滤取滤液，按照此法，对滤渣加水后热回流2次，并过滤取滤液。将所有的滤液合并，对其4000r/min离心15min，取上清液，浓缩，用蒸馏水调整至600mL的溶液备用。取600ml上述溶液，加入1%重量体积比浓度的壳聚糖絮凝剂90ml，絮凝24h，将絮凝除杂后的溶液，浓缩至100 mL，加入95%乙醇使含醇体积比达到75%，5 ℃温度下，在冰箱静置2 h后有大量粘性沉淀产生，对其3000r/min离心15min后弃沉淀，取上清液继续静置23h，有沉淀产生，抽滤，用无水乙醇和丙酮反复洗涤所得沉淀，烘干得淡黄色粉末状物质，经公认的检测方法检测后，其纯度达95％。
实施例3
取黄芪100g置于回流装置中，加入蒸馏水600mL浸泡2.5h，对混合物加热回流1h，趁热纱网过滤取滤液。向滤渣中加入蒸馏水500mL，对混合物加热回流1.5h，过滤取滤液，按照此法，对滤渣加水后热回流2次，并过滤取滤液。将所有的滤液合并，对其5000r/min离心20min，去上清液，浓缩，用蒸馏水调整至600mL的溶液备用。取600ml上述溶液，加入1%重量体积比浓度的壳聚糖絮凝剂120ml，絮凝24h，将絮凝除杂后的水提液，浓缩至100 mL，加入95%乙醇使含醇量体积比达到80%，4 ℃温度下，在冰箱静置2.5 h后有大量粘性沉淀产生，对其5000r/min离心20min后弃沉淀，取上清液继续静置24h，有沉淀产生，抽滤，用无水乙醇和丙酮反复洗涤所得沉淀，烘干得淡黄色粉末状物质，经公认的检测方法检测后，其纯度达96％。
中药提取后，提取物中含量最多的杂质有两种，分别为蛋白质和鞣质，为了确定本发明方案制取出的淡黄色粉末状物质为黄芪多糖，确定定性实验如下：
1.取实施例3中淡黄色粉末状物质100 mg，定容于10 mL容量瓶中，即浓度为10 mg/mL待测溶液。
2.取待测溶液1 mL，加稀醋酸1滴，后加氯化钠明胶试液4滴，振摇，以相同处理后常规中药水提液为对照，观察处理后的提取物溶液是否浑浊，判断提取物中有无鞣质的存在。
3.取待测溶液1 mL，先加入双缩脲A试液1 mL，充分振荡后，加入双缩脲B试液2滴，振荡，以相同处理后的1mg/mL的牛血清白蛋白为对照，观察颜色的变化，判断有提取物中有无蛋白质的存在。
4. 对待测溶液经苯酚-硫酸法处理后生成的橙黄色溶液进行紫外分光光度法测量。
实验结果：
1.如图1所示：将提取的淡黄色粉末状物质配制的待测溶液，经双缩脲反应后，溶液不显紫色，对照溶液1mg/mL牛血清白蛋白溶液显紫色，说明提取的淡黄色粉末状物质中不含杂质蛋白质。
2.如图2所示：经氯化钠明胶试液检查后，待测溶液为阴性，常规中药水提液出现浑浊为阳性，说明提取的淡黄色粉末状物质中不含鞣质，初步判断提取的物质为多糖物质。
3.如图3所示：对待测溶液经苯酚-硫酸法处理后生成的橙黄色溶液在波长486 nm处有最大的吸收峰，进一步证实提取的淡黄色粉末状物质为黄芪多糖。
取实施例1-2任一所得的提取物，对其进行以上的定性实验，结果相同。证明了本发明采用的制备方法所得的提取物确为黄芪多糖。
Claims (2)
1.一种黄芪多糖的制备方法，其特征在于，按重量份：1份黄芪用4-6份蒸馏水浸泡1.5-2.5h，对混合物热回流1-1.5h，过滤取滤液；向滤渣中加入4-5份水，并对混合物热回流1-1.5h，过滤取滤液，相同方法再次对滤渣进行1次以上的热回流提取，将所有的滤液合并，将滤液离心后取其上清液，向上清液中加入壳聚糖絮凝，按重量份：每1份滤液离心后的上清液中加1%重量体积比浓度的壳聚糖絮凝剂0.1-0.2份，絮凝24h，静置，对溶液除杂后加入乙醇至含醇体积比达70-80%，3-5℃下静置1.5-2.5h，离心取上清液，静置22-24h，抽滤得沉淀，洗涤烘干即得黄芪多糖。
2.如权利要求1所述的一种黄芪多糖的制备方法，其特征在于，每次离心皆在3000-5000r/min条件下离心10-20min。
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