CN102988828A - 一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，该方法首先按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁的重量配比为：15～28：30～42：7～18：3～13：15～28：15～28取材；将铁皮石斛置多功能提取罐中，加水浸泡、煎煮、过滤得第一滤渣和第一滤液；将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加水煎煮，过滤得第二滤渣和第二滤液；将第二滤渣置多功能提取罐中，加水煎煮，过滤得第三滤渣和第三滤液；合并滤液，过滤后，滤液减压浓缩，再加入β-环糊精，喷雾干燥成浸膏粉，最后干法制粒，过筛整粒；本发明整个工艺过程仅使用水为提取溶剂，生产过程没有废水、废气产生，适合工业化生产。

Description

一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种高效提取铁皮石斛等多味中药材的有效成分，并进一步制备成颗粒剂的方法。

背景技术

中药颗粒剂是指中药材的提取物与适宜辅料或部分药材细粉混匀，制成的干颗粒状剂型。中药颗粒剂是结合汤剂、酒剂和糖浆剂的特点而发展起来的一种中药剂型，既保持了汤剂吸收快、显效迅速的特点，又克服了汤剂服用前临时煎煮、久置易霉败变质的特点，还可掩盖某些中药的苦味。也可以说“中药颗粒剂是中药饮片加工炮制工艺及剂型改革研究的进展，是依据中医药理论临床应用需要，而对中药材及中药材饮片进行特殊加工的一种便于携带和服用的疗效显著增高的新剂型”。开始出现于上世纪70年代，由于其携带服用方便，在上世纪80年代的中药生产工业中曾以年递增41.9%的速度发展。

中药颗粒的提取、浓缩、干燥、辅料选择、制粒方法和粒度选择等都应该进行优选和详细的研究。由于中药成分复杂、既要体现中医药理论指导的自身特色，还要保留中药传统制剂合理的本质、注意成分和疗效的密切相关性等，所以中药颗粒剂的制备关键的问题是对原药材的提取技术研究和干燥技术研究。

提取是从药材原料中分离有效成分的单元操作，直接关系到产品有效成分的含量，影响内在质量、临床疗效、经济效益及GMP的实施。中药制剂的研究和生产从传统制剂原粉成型的丸、散到浸提型制剂如颗粒剂、浸膏片、胶囊、口服液、注射液等的兴起和发展，是半个世纪来中药制剂进步的特征，属于从传统制剂进入改进制剂的时期。由于中药成分复杂，要体现中医药理论指导的自身特色，要尽可能保留中药传统制剂合理的本职，注重成分和疗效的密切相关性等诸方面，中药提取工艺的研究和选择是十分重要，也是相当复杂的课题。

铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，味甘，性微寒，归胃、肾经。具有益胃生津，滋阴清热的功能。现代医药学研究表明，铁皮石斛主要含有多糖类、氨基酸和微量元素、菲类和少量生物碱等化学成分，具有增强免疫、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖等药理作用。

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核，味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿，健脾宁心的功能。现代医药学研究表明，茯苓主要成分为β-茯苓聚糖和三菇类化合物乙酞茯苓酸、茯苓酸和3β-羟基羊毛甾三烯酸。具有提高免疫力、抗肿瘤、抗肝硬化等功能。

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根茎，味甘、微苦，性平，归脾、肺、心经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功能。现代医药学研究表明，人参主要含多种人参皂苷、糖类、挥发油、肽、氨基酸、微量元素及有机酸、多种维生素、胆碱和酶等成分。具有抗疲劳、增强免疫力、抗肿瘤，降血糖和抗衰老等作用。

枸杞子为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实，味甘，性平，归肝、肾经。具有滋补肝肾，益精明目的功能。现代医药学研究表明，枸杞子主要含有糖类、氨基酸和微量元素等化学成分，具有增强免疫力、抗肿瘤、降血脂等功能。

山药为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposite Thumb.的干燥根茎，味甘，性平，归脾、肺、肾经。具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的功能。现代医药学研究表明，山药含有多糖、蛋白质、多巴胺、盐酸山药碱、山药素、维生素、钙、镁、铜及丰富的碘和其它微量元素,以及尿囊素、皂昔、胆碱等化学成分。具有降血糖、增强免疫力、抗衰老及降血脂的功能。

薏苡仁为禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.mayuen（Roman.）Stapf的干燥成熟种仁，味甘、淡，性凉，归脾、胃、肺经。具有健脾渗湿，除痹止泻，清热排脓的功能。现代医药学研究表明，薏苡仁含有糖类、薏苡仁酯（coixenolide），肉豆蔻酸（myristic acid）、芸苔甾醇等，尚含氨基酸、蛋白质等。具有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖等功能。

但是，到目前为止，尚未见到以铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁为主要成分的中药制剂的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种铁皮石斛颗粒的组成配方及制备成颗粒剂的方法。本发明的铁皮石斛颗粒能够增强免疫力、缓解体力疲劳。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，它包括如下步骤：

（1）按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁的重量配比为：15～28：30～42：7～18：3～13：15～28：15～28取材；

（2）将铁皮石斛置多功能提取罐中，加20倍量水浸泡4h，煎煮1.5h，过滤得第一滤渣和第一滤液；

（3）将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加约12倍量水煎煮1h，过滤得第二滤渣和第二滤液；

（4）将第二滤渣置多功能提取罐中，加10倍量水煎煮1h，过滤得第三滤渣和第三滤液；

（5）合并第一滤液、第二滤液和第三滤液，用板框过滤机过滤后，滤液置于减压浓缩罐中；55-65℃、真空度0.07-0.09MPa下减压浓缩至相对密度为1.15-1.20（60℃测），得浓缩浸膏；

（6）在浓缩浸膏中加入质量为浓缩浸膏1.5-2.5倍的β-环糊精，喷雾干燥成浸膏粉。

（7）干法制粒，过筛整粒即得铁皮石斛颗粒。

本发明得有益效果是：

本发明具有以下技术效果：调节免疫功能，抗疲劳，补气养阴，适用于体质虚弱及易疲劳者，特别对病后康复、劳累过度、肺胃阴虚表现者具有良好的作用，消除人们由繁忙的工作和学习所致的神疲乏力，能有效地提高工作和学习效率。

传统煎煮法铁皮石斛有效成分提取率较低，因为铁皮石斛中的粗多糖含量较多，而且药材中含有大量的粘液质，各成分较难煎出，本发明的方法在提取前进行一定时间的浸泡、单独多提取一次均有利于其有效成份的提取；利用喷雾干燥、干法制粒等先进工艺制成颗粒剂，整个工艺过程仅使用水为提取溶剂，生产过程没有废水、废气产生，适合工业化生产。

本发明采用颗粒剂型，以β-环糊精为赋形剂，具有溶解性好、口感好生物利用度高、携带方便、计量准确等特点，最终产物有健脾养胃、滋补肝肾、补气养阴、扶正固本的作用，经科学实验证明具增强免疫力、缓解体力疲劳的保健食品，具有良好广阔的市场前景。

用本发明的铁皮石斛颗粒进行毒理学安全性实验：

1、急性毒性实验结论：采用最大耐受剂量法、将本发明铁皮石斛颗粒以20000mg/kg剂量对雌雄小鼠（19-22g）各10只经口灌胃染毒。灌胃容量按0.4ml/20g体重计，在24小时内对小鼠灌胃2次。本发明铁皮石斛颗粒对雌雄小白鼠的急性经口的最大耐受剂量MTD均大于20000mg/kg。

2、微核实验结论：采用30小时两次灌胃法，将本发明铁皮石斛颗粒分别以10000mg/kg、5000mg/kg、2500mg/kg三个剂量组，对小鼠（25-30g,雌雄各半），按0.4ml/20g体重，分别对各组动物灌胃。本发明铁皮石斛颗粒骨髓嗜多染红细胞微核实验结果为阴性。

3、精子畸形实验结论：将样品分别以10000mg/kg、5000mg/kg、2500mg/kg三个剂量组，对雄性小鼠（25-35g）按0.4ml/20g体重,分别对各组动物灌胃。每日一次，连续5天。于首次给样后第35天，取二侧副睾剪碎，取滤液制片。镜检观察，每鼠计数1000个精子的畸形数。本发明铁皮石斛颗粒精子畸形实验结果为阴性。。

4、Ames实验结论：采用平板掺入法，测试计量为0.06mg/皿、0.18mg/皿、0.55mg/皿、1.66mg/皿、5.00mg/皿。检测重复一次。本发明铁皮石斛颗粒Ames实验结果为阴性。

5、30天喂养实验：SD大鼠80只（60-80g），雌雄各半，将本发明铁皮石斛颗粒设立2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg三个剂量组（相当于本发明铁皮石斛颗粒推荐剂量6g/kg/日的25倍，50倍，100倍）单笼饲养，自由饮食，连续喂养30天。结果大鼠生长情况基本良好。血色素、红细胞、白细胞计数及其分类的检查结果均在正常范围内。肝、肾、脾、胃肠、性器官等主要脏器的组织学检查结果未发现与实验有关的病变。

用本发明铁皮石斛颗粒进行有关增强免疫力功能和抗疲劳功能实验

本发明铁皮石斛颗粒，为浅黄色颗粒，人体推荐剂量为每日6g/60kg。本次动物实验设低、中、高三个剂量组，即0.5g/kg、1.0g/kg、3.0g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。对小鼠连续灌胃给予样品30天，另设空白对照组，灌胃给予蒸馏水。实验结果表明：本发明铁皮石斛颗粒能明显增强细胞免疫活性，提高单核-巨噬细胞吞噬能力，但体液免疫活性及NK细胞活性未见明显增强。

结论：在本次试验条件下，小鼠经口给予本发明铁皮石斛颗粒具有增强免疫力功能。

1．材料

1.1、受试本发明铁皮石斛颗粒及剂量设计：本发明铁皮石斛颗粒，本品人体推荐剂量为每日6g/60kg。本次动物实验设低、中、高三个剂量组，即0.5g/kg、1.0g/kg、3.0g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。对小鼠连续灌胃给予样品30天，另设空白对照组，灌胃给予蒸馏水。称取样品0.5g、1.0g、3.0g分别加蒸馏水至20ml，按此比例配制即为低、中、高三个剂量组的供试液。1.2、实验动物：清洁级ICR种小白鼠，许可证号：SCXK（沪）2007-0005，体重21-27g，雌性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，本中心SPF动物房饲养。实验动物饲养室温度20-25℃，相对湿度40-70%，实验动物使用许可证号：SYXK（沪）2007-0008，动物饲养料由苏州双狮实验动物饲料科技服务有限公司提供，登记证号：苏E饲生字（2002）006。

2.试验方法

2.1、分组：将200只小鼠按体重随机分入五个实验大组，每组40只（免疫一组进行NK细胞活性测定和淋转实验，免疫二组进行DTH、脾指数和胸腺指数实验，免疫三组进行溶血空斑和溶血素实验，免疫四组进行碳廓清实验，免疫五组进行吞噬实验）。

2.2、喂养并称重：按剂量设计连续喂养小鼠30天，每周称重一次，计算实验初，中期（第二周）末和实验末体重。实验结果用SPSS软件进行统计。

2.3、脏器/体重比值（胸腺指数、脾指数）测定：动物连续给样30天后，颈椎脱臼处死，取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数和脾指数。

2.4、细胞免疫功能测定：

2.4.1、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验：动物连续给样30天后，颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为3×10⁶个/ml，将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μl ConA液（相当于7.5μg/ml），另一孔作为对照，置5%CO₂,37℃培养72h。培养结束前4h，每孔加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解后，以570nm波长进行比色，实验结果用SPSS15.0进行统计。

2.4.2、DTH测定及胸腺指数、脾指数的测定：致敏：动物连续给样30天后，每鼠腹部去毛，范围约3cm×3cm，将1%DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击。24h后，每鼠称重，颈椎脱臼处死小鼠，用打孔器取下直径8mm的左右耳片，称重并计算肿胀度。再取胸腺、脾脏称重，分别计算胸腺指数、脾指数。

2.5、体液免疫功能测定：

2.5.1、抗体生产检测试验：动物连续给样30天后，将脱纤维绵羊红细胞免疫5天后，动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，调整细胞浓度为5×10⁶个/ml。将表层培养基（1g琼脂糖加双蒸水至100ml）加热溶解后，放入45℃水浴保温，与等量pH7.2-7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl 110%SRBC，20μl中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体（1:10）加入到平皿中，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。

2.5.2、血清溶血素实验：动物连续给样30天后，用2%（v/v）SRBC免疫动物5天后，眼眶采血，分离血清。在96孔微量血凝板上加100μl生理盐水，再分别在第一排加100μl血清，以后各排作倍比稀释，每孔加1%SRBC100μl，振荡后37℃放置3h，当血球对照出现沉落后观察结果。

2.6、单核-巨噬细胞功能测定实验：

2.6.1、小鼠碳廓清实验：动物连续给样30天后，尾静脉注射1:3稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min后，分别从眼静脉取血20μl，并将其加到2ml 0.1%Na₂CO₃溶液中，用分光光度计在600nm处测OD值，以Na₂CO₃溶液作空白对照。根据动物体重、肝重和脾重计算吞噬指数。

2.6.2、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验：动物连续给样30天后，每鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml，间隔30min，颈椎脱臼处死，固定于鼠板上，剪开腹壁皮肤，注射生理盐水2ml，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱湿孵30min，用生理盐水漂洗，晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，4%Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干，用油镜镜检，计算吞噬百分率（%）和吞噬指数。

2.7、NK细胞活性测定：动物连续给样30天后，动物颈椎脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液（效应细胞），取传代后24h YAC-1细胞加入RPMI1640完全培养液，调整细胞浓度为4×10⁵个/ml（靶细胞），取靶细胞和效应细胞各100μl（效靶比50:1），加入U型96孔板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μl，上述各项均设三个复孔，于37℃、5%CO₂培养箱中培养4h，每孔吸取上清液100μl置平底96孔板中，同时加入LDH基质液100μl，反应3min，每孔加入1mol/l的HCl 30μl终止，用酶标仪在490nm处测定OD值。

2.8、统计：实验结果用SPSS15.0软件进行统计分析，各剂量分别于对照组比较。

3．结果

在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定本发明铁皮石斛颗粒具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能检测项目中的两个实验（即小鼠脾淋巴细胞转化实验和迟发型变态反应实验）结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验（即抗体生成细胞检测和血清溶血素测定）结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验（即小鼠碳廓清实验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验）结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量结果为阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果为阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。

表1：免疫一组（NK细胞活性、脾淋巴细胞转化实验）结果（n=10）

注：*经方差分析，与对照组相比，p<0.01

由表1可见，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的小鼠初始、实验中、实验末的体重及增重与对照组相比，均无显著性差异；NK细胞活性数据转换后进行方差分析，各剂量组的NK细胞活性与对照组相比，均无显著性差异；ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验中，样品3.0g/kg剂量组的OD差值与对照组相比，有显著性差异（p<0.01）。

表2：免疫二组（DTH、脾指数和胸腺指数实验）结果

（n=10）

注：*经方差分析，与对照组相比，p<0.01

由表2可见，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的小鼠初始、实验中、实验末的体重及增重与对照组相比，均无显著性差异；样品各剂量组的小鼠脾指数和胸腺指数分别与对照组相比，均无显著性差异；DTH实验中，样品3.0g/kg剂量组的OD差值与对照组相比，有显著性差异（p<0.01）。

表3免疫三组（溶血空斑和溶血素实验）结果

（n=10）

由表3可见，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的小鼠初始、实验中、实验末的体重及增重与对照组相比，均无显著性差异；抗体生成细胞检测中，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的空斑数与对照组相比，均无显著性差异；血清溶血素实验中，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的空斑数与对照组相比，均无显著性差异。

表4：免疫四组（碳廓清实验）结果（n=10）

注：#经方差分析，与对照组相比，p<0.05；*经方差分析，与对照组相比，p<0.01

由表4可见，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的小鼠初始、实验中、实验末的体重及增重与对照组相比，均无显著性差异；碳廓清实验中，样品1.0g/kg及3.0g/kg剂量组的吞噬指数与对照组相比，有差异（p<0.05），3.0g/kg剂量组的吞噬指数与对照组相比，有显著性差异（p<0.01）。

表5：免疫五组（吞噬实验）结果（n=10）

由表5可见，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的小鼠初始、实验中、实验末的体重及增重与对照组相比，均无显著性差异；小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验中，吞噬分率数据转换后经方差分析得，本发明铁皮石斛颗粒各剂量组的吞噬百分率与对照组相比，均无显著性差异；样品各剂量组的吞噬指数与对照组相比，均无显著性差异。

4.结论：在本次试验条件下，细胞免疫功能阳性，单核-巨噬细胞功能阳性，但体液免疫功能和NK细胞活性结果为阴性，根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中“增加免疫力功能”的结果判定，认为小鼠经口给予本发明铁皮石斛颗粒30天后，对小鼠具有增强免疫力功能。

具体实施方式

申请人在研究中发现：正气即免疫力是维持机体的生理功能并有抵御外邪的能力。《内经》说“正气存内，邪不可干”。百病皆因正气虚，故古人说“虚则补之”。本方将补虚大法用于正气不足之虚证。此证主要因五脏正气虚弱所致。元气不足，阴津亏损，肺脾失和，则有神疲乏力，身疲体倦、头昏失眠，气短懒言，咽干舌燥，烦渴欲饮，午后颧红等诸多不适。方用铁皮石斛、人参为主，辅以山药、茯苓、薏苡仁、枸杞子。铁皮石斛滋阴养胃，清热生津，明目强身；人参大补元气，补脾益肺，生津安神；山药健脾胃，生津益气，增强补肾气之力；茯苓、薏苡仁益脾宁心，利水渗湿，力助人参补肺脾之气，实气血生之化源。枸杞子补肝肾，益精血，明目润燥。全方相辅为用，诸药合用共奏扶正固本、滋补肝肾、补脾养肺之功效。

申请人在上述发明原理的基础上，经过大量地实验，得到了本发明的铁皮石斛颗粒的配方和制备工艺。

本发明铁皮石斛颗粒，主要由铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药、薏苡仁组成，其中，所述铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药、薏苡仁的重量配比为：15～28：30～42：7～18：3～13：15～28：15～28。

本发明的制备工艺，包括如下步骤：

1、按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药、薏苡仁的重量配比为：15～28：30～42：7～18：3～13：15～28：15～28取材。

2、将铁皮石斛置多功能提取罐中，加20倍量水浸泡4h，煎煮1.5h，过滤得第一滤渣和第一滤液；

3、将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加12倍量水煎煮1h，过滤得第二滤渣和第二滤液；

4、将第二滤渣置多功能提取罐中，加10倍量水煎煮1h，过滤得第三滤渣和第三滤液；

5、合并第一滤液、第二滤液和第三滤液，用板框过滤机过滤后，滤液置于减压浓缩罐中；55-65℃、真空度0.07-0.09MPa下减压浓缩至相对密度为1.15-1.20（60℃测），得浓缩浸膏；

6、在浓缩浸膏中加入质量为浓缩浸膏1.5-2.5倍的β-环糊精，喷雾干燥成浸膏粉。

7、干法制粒，过筛整粒即得铁皮石斛颗粒。

本发明中六味中药配伍合理得当、功效明确、无毒副作用，具增强免疫力、缓解体力疲劳的作用，采用颗粒剂型，以β-环糊精为赋形剂，颗粒剂具有生物利用度高、溶解性好口感佳、携带方便等特点，且整个工艺涉及技术没有产生对环境污染的废料，没有产生工艺废水，是一种经济环保型工艺，适合企业生产并推广应用，产品质量好，经济价值高。

工艺条件摸索如下：

实施例1：提取时间对铁皮石斛提取率的考察

取相同量的铁皮石斛进行提取时间的考察实验，固定料液比为1：40（g/ml），提取时间2小时、3小时、3.5小时、4小时，进行粗多糖含量的测定。结果如下：

表6：不同提取时间对铁皮石斛粗多糖提取率的影响

以上实验结果表明，在相同的提取水量下，粗多糖的提取率随着提取时间的增加也有相应地提高，提取3.5小时比3小时、2小时粗多糖的提取率有显著地增加；比较4小时和3.5小时粗多糖的提取率，提取率无显著差异。因此，从能耗和工时等因素考虑，选定提取时间为3.5小时。

实施例2：提取水量对铁皮石斛提取率的的考察

取相同量的铁皮石斛进行提取水量的考察实验，固定料液比为1：20；1：30，1：40，1：50，提取时间为3.5小时，进行粗多糖含量的测定，实验结果如下：

表:7：不同提取水量对铁皮石斛粗多糖提取率的影响

实验号	提取水量(g/ml)	粗多糖提取率(%）(按药材计算)
			1	20	46.5
2	30	58.1
			3	40	67.4
4	50	69.5

由于多糖的提取是固体溶质逐渐溶解的过程，故随着固液比的增大，铁皮石斛多糖提取得率呈增长的趋势。尤其在料液比l：40之前，多糖的提取得率增长迅速，但在1：40之后，多糖得率随料液比增大呈缓慢增长趋势，考虑到溶剂量增多给后续的浓缩带来时间和能量的消耗，从省时、节能等方面考虑，1：4O的料液比进行铁皮石斛的提取，能得到比较好的提取效果。

综合考虑各方面因素，铁皮石斛的提取条件定为：铁皮石斛加20倍水加热提取1次，1.5小时，滤出药液，其药渣再与处方中的另外几味药材一起再提取2次，每次1小时。按此生产工艺，铁皮石斛有取得很好的提取效果，粗多糖提取率高。

实施例3：人参、茯苓、枸杞子等药材的提取工艺研究

铁皮石斛单煎1次，滤出药液后的药渣和处方中人参等药材共煎。为了找出最佳的提取条件，以功效成分总皂苷（g）为指标，选用四因素三水平表即L9（34）表，对加水量（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）三个因素进行正交试验，各因素均确定为三个水平，见表3。实验安排、实验结果及数据处理见表4。

表8：试验因素水平表

实验方法与结果：

按配方比例称取相同重量的9份药材,照表5的实验安排分别进行煎煮，所得的药液合并，滤过，浓缩至一定体积，采用功效成分的检验方法[总皂苷的测定]项下的方法，分别对各试验号样品中的总皂苷进行含量测定。结果见表4。

表9：L9（34）实验安排、实验结果及数据处理表

方差分析如下：

将表9的正交试验结果进行方差分析，结果见表10

表10：方差分析表

注：F_1-0.01（2，2）=99.0  F_1-0.05（2，2）=19.0 F_1-0.10（2，2）=9.0结果分析如下：

对表4中的Ⅰj、Ⅱj、IIIj值进行直观分析，比较R值可知，影响程度C＞B＞A；但各因素的水平变化究竟对实验结果的影响如何，利用方差分析进一步考察。表5的方差分析结果表明：F_A＜F_1-0.10（2，2），因素A的水平变化对实验结果影响不大；F_B＞F_1-0.10（2，2），因素B的水平变化对实验结果有比较大的影响；F_1-0.01（2，2）＞F_C＞F_1-0.05（2，2），因素C的水平变化对实验结果有显著性影响。从省时节能、降低成本等角度综合考虑，将提取工艺方案定为：药材第一次加12倍量水（考虑到第一次提取时有2倍左右的水量被药材吸润），提取1小时；第二次加10倍量水，提取1小时，按此工艺有效成份总皂苷已获得比较理想的提取效果。

实施例4：正交工艺验证实验

按配方比例称取相同重量的药材3份药材，进行提取工艺验证实验。提取条件：药材第一次加12倍量水，提取1小时；第二次加10倍量水，提取1小时，过滤合并两次提取液浓缩至一定体积；按以上条件平行进行三份实验。按产品质量标准中规定的功效成分测定方法，测定其功效成分总皂苷的含量，并考察提取工艺的可行性，结果见下表。

表6：三份验证样品的检测结果

样品	总皂苷（以人参皂苷Re计）mg
		1	412
2	427
		3	418

由上表可知，三批小试样品中功效成份的总皂苷的含量基本一致，提取率接近，说本产品的提取工艺是稳定、可行的。

实施例5

取37.5kg铁皮石斛，置提取罐中，加20倍量温水浸泡4h，煎煮1.5h，过滤得滤渣1滤液1；

（2）取滤渣1，加入茯苓62.5kg、人参17.5kg、枸杞子2.5kg、山药18.75kg、薏苡仁18.75kg，置提取罐中，加12倍量水煎煮1h，过滤得滤渣2和滤液2，取滤渣2加10倍量水煎煮1h，过滤得滤渣3和滤液3；

（3）合并滤液1、滤液2和滤液3，用板框过滤机过滤后，滤液置于真空浓缩罐中，真空浓缩（温度50-70℃，真空度0.07-0.09MPa）至相对密度为1.15-1.20（60℃），得稠浸膏33.75kg；

（4）称取75kg β-环糊精，混入稠浸膏中，边加边搅拌制成软材；

（5）将软材过12目筛制粒，制成的湿颗粒置烘箱中（温度65-75℃），烘干至颗粒水分≤5.0%,，得到颗粒剂148kg。

本工艺对处方组成进行了研究，针对处方组成各药的特点，进行工艺设计，并选择了最佳提取工艺。

干燥工艺：本工艺选择了喷雾干燥法，即浸膏加入配方量辅料，直接进行喷雾干燥。喷雾干燥的特点：1.干燥速度快，水分瞬间蒸发，适用于热敏性药物；2.干燥后所得产品色泽好，粉末质地疏松，溶解性能好，提高溶出速率；3.改变干燥条件容易；4.产品不受污染，干燥过程在密闭状态下进行；5.自动化程度高，可连续生产，提高生产效率。

制粒工艺：本工艺选择干法制粒，直接将浸膏粉制备成干颗粒。干法制粒具有以下特点：1.不需要加其他黏合剂，成品颗粒粒度均匀，外观及流动性好，崩解度易控制；2.对于遇热遇湿易分解失效或者结块的物料尤为适合；3.相对于其他制粒法，可以直接将喷雾粉等中药粉末制成颗粒，消除了用水和溶液进行湿法制粒引起的药物降解，节约了湿颗粒再次干燥的能源成本，无需或少用中间体和添加剂，大大减少辅料用量，缩短制造周期，可对热敏性物料特别适用于遇热遇湿易分解失效或结块的物料进行造粒。制粒后可增加产品流动性和密度。

上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种铁皮石斛颗粒剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：

（1）按照铁皮石斛、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁等的重量配比为：15～28：30～42：7～18：3～13：15～28：15～28取材；

（2）将铁皮石斛置多功能提取罐中，加约20倍量水浸泡4h，煎煮1.5h，过滤得第一滤渣和第一滤液；

（3）将第一滤渣、茯苓、人参、枸杞子、山药和薏苡仁置多功能提取罐中，加约12倍量水煎煮1h，过滤得第二滤渣和第二滤液；

（4）将第二滤渣置多功能提取罐中，加约10倍量水煎煮1h，过滤得第三滤渣和第三滤液；

（5）合并第一滤液、第二滤液和第三滤液，用板框过滤机过滤后，滤液置于减压浓缩罐中；55-65℃、真空度0.07-0.09MPa下减压浓缩至相对密度为1.15-1.20（60℃测），得浓缩浸膏；

（6）在浓缩浸膏中加入质量为浓缩浸膏1.5-2.5倍的β-环糊精，喷雾干燥成浸膏粉；

（7）干法制粒，过筛整粒即得铁皮石斛颗粒。