CN102600368A - 一种药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:石斛3-8份、黄芪2-10份、黄精3-8份。还公开了前述药物组合物的制备方法和用途。本发明公开的药物能显著提高免疫力的各项指标,增强机体对疾病的防御能力,改善免疫低下人群的免疫力,具有较强的实际应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及药物领域,具体涉及一种增强免疫力的药物。
背景技术
免疫是机体对入侵异物的识别、排除和消灭的过程。机体免疫系统的功能即识别自己排斥异己,具有免疫防御、免疫稳定、免疫监视三大功能。如果机体的免疫防御功能过高就会出现组织的病理性损害(如变态反应),功能不足轻则容易发生感染,重则出现免疫缺陷性疾病(如艾滋病);如果免疫稳定功能失常,将会发生自身免疫病(如肝脏疾患);如果免疫监视的功能低下,则易使细胞发生突变导致癌症发生(如肺癌等)。免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别的消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等),处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫低下的身体易被感染或患癌症,导致机体体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现,且生病后很难恢复,长期如此还会诱发重大疾病。
祖国传统医学理论认为,许多中药具有提高机体免疫力的作用。盛家荣等,“铁皮石斛多糖的研究进展”,广西科院学学报2011年04期公开了铁皮石斛多糖具有提高机体免疫力的作用,王庭欣等,“黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究”,时珍国医国药2009年07期公开了黄芪多糖具有提高机体免疫力的作用,石娟等,“黄精中小分子糖对小鼠免疫功能的影响”,中国组织工程研究与临床康复2009年18期中公开了黄精可以提高机体免疫力。申请号:200910017178.6,发明名称:一种提高人体免疫力的保健品的专利申请公开了一种提高机体免疫力的药物组合物,它是采用下列重量配比的原料制成的:枸杞10-20、当归10-20、海参15-25、大枣10-20、五味子10-20、柴胡10-20、黄芪10-20、生姜5-10、山药10-20、黄精10-20、银杏10-20、灵芝10-20、甘草10-20、冬虫夏草5-10、山楂10-20、葛根10-20、金银花10-20、百合5-10。施红等,“石斛复方制剂的抗氧化和免疫功能的相关研究”,福建中医学院学报1998,7(4),13公开了由石斛、五味子、黄芪、枸杞4味中药组成的石斛复方制剂,具有增强免疫力的功效。
现未见将石斛、黄芪和黄精配合用于提高机体免疫力的报道。
发明内容
本发明提供了一种的新的提高机体免疫力的药物组合物,及其制备方法和用途。
本发明提供了一种药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:石斛3-8份、黄芪2-10份、黄精3-8份。
其中,所述原料的重量配比为:石斛5~6份、黄芪4~8份、黄精3~6份。
其中,所述原料的重量配比为:石斛5份、黄芪8份、黄精3份。
其中,所述的石斛为兰科石斛属植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum、铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo、鼓槌Dendrobium chrysotoxum Lindl、流苏Dendrobium fimbriatum Hook.等的茎。优选地,所述的石斛为兰科石斛属植物叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum。
其中,所述组合物是以石斛、黄芪和黄精的原药材、水提物或者有机溶剂提取物为有效成分,加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
其中,所述制剂为口服制剂。
其中,所述制剂为散剂、膏剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或者滴丸。
本发明还提供了一种制备前述药物食品组合物的方法,它包含如下步骤:
(1)称取原料药;
(2)原料药直接打粉,或将原料药加水煎煮或有机溶剂提取,提取液浓缩,再加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
本发明最后提供了前述药物组合物在制备增强免疫力的药物中的用途。
本发明提供的药物能显著提高免疫力的各项指标,增强机体对疾病的防御能力,改善免疫低下人群的免疫力,组方中黄芪和黄精的价格低廉,成本低,组方中各药材配伍,具有协同增效作用,显著优于单味药单独使用,具有较强的实际应用价值。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1本发明药物组合物的制备
取石斛5g、黄芪8g和黄精3g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
实施例2本发明药物组合物的制备
取石斛5g、黄芪5g和黄精6g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
实施例3本发明药物组合物的制备
取石斛6g、黄芪4g和黄精6g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
实施例4本发明药物组合物的制备
取石斛5g、黄芪4g和黄精3g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.的茎。
实施例5本发明药物组合物的制备
取石斛6g、黄芪8g和黄精6g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的茎。
实施例6本发明药物组合物的制备
取石斛3g、黄芪2g和黄精3g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属鼓槌Dendrobium chrysotoxum Lindl的茎。
实施例7本发明药物组合物的制备
取石斛8g、黄芪10g和黄精8g,经常规提取和纯化方法处理后,再制成所需剂型的药物,如:颗粒剂、片剂、硬胶囊、口服液、软胶囊、滴丸或糖浆。其中,所述的石斛为兰科石斛属流苏Dendrobium fimbriatum Hook.的茎。
以下通过具体药效学实验证明本发明的有益效果:
试验例1本发明药物组合物提高免疫力作用的验证
1实验材料
1.1实验药物本发明药物组合物,由石斛5g,黄芪8g,黄精3g为主要原料组成,浓缩为16g原生药/100g浸膏备用。所述石斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurant iacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
石斛,由四川省中药饮片公司提供。加水煎煮浓缩至1.00g/ml。所述石 斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
黄芪,由四川省中药饮片公司提供。加水煎煮浓缩至1.00g/ml。
黄精,由四川省中药饮片公司提供。加水煎煮浓缩至1.00g/ml。
1.2实验动物BALB/c小鼠,成都达硕生物科技有限公司提供,体重18-22g,雌性,动物合格证号:动物许可证号:SCXK(川)2008-24
1.3实验试剂与仪器96孔培养板、CO2培养箱、752紫外分光光度计、酶标仪、恒温水浴箱、离心机、微量血凝实验板、显微镜、RPMI1640细胞培养液、小牛血清、刀豆蛋白A(ConA)、MTT、Hanks液、PBS缓冲液(PH值7.2-7.4)、)、2,4-二硝基氟苯(DNFB)、绵羊红细胞(SRBC)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、印度墨汁、Giemsa染液、YAC-1细胞等。
2实验方法
2.1免疫器官重量及脏器指数
取80只小鼠随机分为7组,分别为石斛组(2.67g·kg-1)、黄芪组(2.67g·kg-1)、黄精组(2.67g·kg-1)、本发明药物组合物的高剂量组(5.34g·kg-1)、中剂量组(2.67g·kg-1)、低剂量组(1.34g·kg-1)。每组均按照0.2ml/10g灌胃,空白组给予同体积的生理盐水,连续灌胃15d,第15d灌胃后,股动脉放血处死,取出动物的脾脏、胸腺称重,并计算脏器指数。各剂量组结果与空白对照组比较进行方差分析。
脏器指数(%)=脏器重量(g)/动物体重(g)*100%
2.2小鼠迟发型变态反应(DTH)测定
给药及分组同2.1,于灌胃第11d,给小鼠腹腔注射2%绵羊红细胞(SRBC)0.2ml/只进行致敏,于免疫后第4d每鼠左后足跖部皮下注射20%SRBC(20μl/只)进行攻击。并于攻击前和攻击后24h测量每鼠左后足跖同一部位厚度,计算攻击前、后的差值,各剂量组结果与溶剂对照组比较进行方差分析。
2.3ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
给药及分组同2.1,对各组小鼠无菌取脾,制脾细胞悬液,用RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度为3*109个/L,按照程序中MTT法进行淋巴细胞增殖反应,最后在752紫外可见分光光度计570nm波长处测其吸光度值(A),计算ConA+与ConA-各孔的吸光度。各剂量组结果与空白对照组比较进行方差分析。
2.4血清溶血素测定
给药及分组同2.1,于灌胃第10d给小鼠腹腔注射2%SRBC(0.2ml/只),于免疫后第5d摘眼球采血,分离血清并在微量血凝板上进行血清溶血素测 定,37℃孵育3h,统计血球凝集度,计算相应抗体积数。各剂量组结果与空白对照组比较进行方差分析。
2.5抗体生成细胞(PFC)检测
给药及分组同2.1,于灌胃第10d给小鼠腹腔注射2%SRBC0.2mL/只,于免疫后第5d处死,解剖取脾制备脾细胞悬液,用RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度为5*109个/L。按程序方法制备琼脂糖玻片,在CO2培养箱(37℃、5%CO2)中温育1.5h后加补体,再温育1.5h,计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血空斑数。各剂量组结果与溶剂对照组比较进行方差分析。
2.6小鼠碳廓清实验
给药及分组同2.1,按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(4倍稀释)0.1ml/10g。每鼠均于注射墨汁后2min及10min分别准时内毗采血20μl,并迅速测吸光度值(A)。同时取小鼠肝、脾称重,按公式计算吞噬指数(α)。各剂量组结果与溶剂对照组比较进行方差分析。
2.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
给药及分组同2.1,于末次给予受试物后各组小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液1ml/只,间隔30min处死小鼠,腹腔注入生理盐水2ml/只,振摇1min后取腹腔洗液制片,37℃温育30min,漂洗、固定后染色镜检。计数吞噬鸡红的巨噬细胞数和巨噬细胞吞噬鸡红细胞数,以各剂量组吞噬率转换值和吞噬指数与溶剂对照组比较进行方差分析。
2.8NK细胞活性测定(LDH测定法)
将小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾,制成脾细胞悬液2*107个/ml,取传代后24h生长良好的YAC-1细胞,此为靶细胞,取靶细胞4*105个/ml和效应细胞各100μl(效靶比50∶1),加入U型96孔培养板中,靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μl。上述各项各设3个平行孔,置CO2培养箱孵箱(5%CO2、37℃)中培养4h。然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μl,反应8分钟,每孔加入1mol/L的HCL30μl,在酶标仪490nm处测定光密度(OD)值,计算NK细胞活性。
3实验结果
3.1免疫器官重量及脏器指数
实验结果如表1所示:
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表1可知,与空白组相比,石斛、黄芪、黄精组与本发明药物组合物各剂量组对小鼠的胸腺指数无明显差异(P>0.05),黄芪组和本发明药物高剂量组小鼠的脾脏指数显著增加(P<0.01),石斛组、本发明药物中、低剂量组小鼠脾脏指数增加(P<0.05)。
3.2小鼠迟发型变态反应(DTH)测定
实验结果如表2所示:
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | 足跖厚度差值(mm) |
空白对照组 | 10 | - | 0.615±0.372 |
石斛组 | 10 | 2.67 | 0.742±0.601* |
黄芪组 | 10 | 2.67 | 0.802±0.524* |
黄精组 | 10 | 2.67 | 0.649±0.469 |
高剂量组 | 10 | 5。34 | 0.941±0.465** |
中剂量组 | 10 | 2.67 | 0.952±0.676** |
低剂量组 | 10 | 1.34 | 0.940±0.691** |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表2可知,各剂量组用SRBS攻击后,与空白组相比,石斛组、黄芪组具有增加小鼠足跖厚度的作用(P<0.05),本发明药物高、中、低剂量组具有增加小鼠足跖厚度的作用,且具有显著性差异(P<0.01)。
3.3ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
实验结果如表3所示:
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | ConA+与ConA-A差值 |
空白对照组 | 10 | - | 0.115±0.007 |
石斛组 | 10 | 2.67 | 0.124±0.006 |
黄芪组 | 10 | 2.67 | 0.124±0.003 |
黄精组 | 10 | 2.67 | 0.116±0.005 |
高剂量组 | 10 | 5.34 | 0.140±0.006 |
中剂量组 | 10 | 2.67 | 0.147±0.009* |
低剂量组 | 10 | 1.34 | 0.139±0.008 |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表3可知,与空白组相比,本发明药物中剂量组具有统计学差异(P<0.05),而其他各组均无明显差异(P>0.05)。说明本发明药物中剂量能促进ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化。
3.4血清溶血素测定
实验结果如表4所示:
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表4可知,与空白组相比,石斛组、黄芪组具有增加抗体积数的作用(P<0.05),而本发明药物各剂量组均具有显著性差异(P<0.01)。
3.5抗体生成细胞(PFC)检测
实验结果如表5所示:
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表5可见,与空白组相比,本发明药物高、中、低剂量组均具有增加脾细胞溶血空斑数的作用(P<0.05),而其余各组仅具有增加的趋势(P>0.05)。
3.6小鼠碳廓清实验
实验结果见表6所示:
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | 吞噬指数 |
空白对照组 | 10 | - | 3.643±0.645 |
石斛组 | 10 | 2.67 | 3.651±0.631 |
黄芪组 | 10 | 2.67 | 3.685±0.712 |
黄精组 | 10 | 2.67 | 3.645±0.524 |
高剂量组 | 10 | 5.34 | 3.845±0.841 |
中剂量组 | 10 | 2.67 | 3.923±0.615* |
低剂量组 | 10 | 1.34 | 3.799±0.900 |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表6可见,与空白组相比,本发明药物中剂量组小鼠碳廓清吞噬指数增加(P<0.05),而其他各组仅具有增加的趋势,并无统计学差异(P>0.05)。
3.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
实验结果见表7所示:
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | 计巨噬细胞数 | 吞噬率(%)转换值 | 吞噬指数 |
空白对照组 | 10 | - | 100*10 | 51.45±9.05 | 1.87±0.46 |
石斛组 | 10 | 2.67 | 100*10 | 61.36±8.56 | 2.86±0.56* |
黄芪组 | 10 | 2.67 | 100*10 | 61.99±8.97 | 2.88±0.65* |
黄精组 | 10 | 2.67 | 100*10 | 55.31±6.32 | 2.09±0.35 |
高剂量组 | 10 | 5.34 | 100*10 | 62.35±7.07 | 2.93±0.71** |
中剂量组 | 10 | 2.67 | 100*10 | 65.43±6.45 | 3.01±1.02** |
低剂量组 | 10 | 1.34 | 100*10 | 64.24±5.75 | 2.91±0.91* |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表7可知,与空白组相比,石斛组、黄芪组和受试药物低剂量组小鼠能增加对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用(P<0.05),而本发明药物高、中剂量组能显著增加对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用(P<0.01)。
3.8NK细胞活性测定
实验结果见表8所示:
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | NK细胞活性(%) |
空白对照组 | 10 | - | 45.12±9.02 |
石斛组 | 10 | 2.67 | 51.34±8.56 |
黄芪组 | 10 | 2.67 | 50.20±10.12 |
黄精组 | 10 | 2.67 | 48.39±9.54 |
高剂量组 | 10 | 5.34 | 57.43±9.48 |
中剂量组 | 10 | 2.67 | 61.20±8.62* |
低剂量组 | 10 | 1.34 | 60.58±7.61* |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表8可知,与空白组相比,本发明药物中、低剂量组具有增加NK细胞活性的作用(P<0.05),黄芪组和高剂量组仅具有增加NK细胞活性的趋势(P>0.05)。
从上述结果可知,本发明药物各剂量组均可明显提高免疫力的各项指标,特别是中剂量组显著优于同等剂量的石斛、黄芪和黄精单独使用的效果,说明本发明药物中各组分具有协同增效的作用。
实验例2本发明药物组合物提高免疫力效果最佳配比筛选
1实验材料
1.1实验药物为确定最佳配比剂量,设定不同剂量配比组进行初步的筛 选,分别为配比组1(石斛∶黄芪∶黄精=5∶8∶3,即石斛5g,黄芪8g,黄精3g,实施例1制备);配比组2(石斛∶黄芪∶黄精=5∶5∶6,即石斛5g,黄芪5g,黄精6g,实施例2制备);配比组3(石斛∶黄芪∶黄精=6∶4∶6,即石斛6g,黄芪4g,黄精6g,实施例3制备)分别浓缩为16g原生药/100g浸膏备用。其中,配比组1、2、3所用石斛为兰科石斛属叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum的茎。
1.2实验动物BALB/c小鼠,成都达硕生物科技有限公司提供,体重18-22g,雌性,动物合格证号:动物许可证号:SCXK(川)2008-24
1.3实验试剂印度墨汁
1.4实验仪器752紫外分光光度计
2实验方法选择小鼠碳廓清实验进行筛选
取40只小鼠随机分为4组,按照成人日剂量的10倍灌胃给药,分别为配比组1(2.67g·kg-1)、配比组2(2.67g·kg-1)、配比组3(2.67g·kg-1)。每组均按照0.2ml/10g灌胃,空白组给予同体积的生理盐水,连续灌胃15d,第15d按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(4倍稀释)0.1ml/10g。每鼠均于注射墨汁后2min及10min分别准时内毗采血20μl,并迅速测吸光度值(A)。同时取小鼠肝、脾称重,按公式计算吞噬指数(α)。各剂量组结果与溶剂对照组比较进行方差分析。
3实验结果见表9
表9不同剂量配比的小鼠碳廓清实验
组别 | 动物(只) | 剂量(g·kg-1) | 吞噬指数 |
空白对照组 | 10 | - | 3.650±0.672 |
配比组1 | 10 | 2.67 | 3.922±0.587* |
配比组2 | 10 | 2.67 | 3.834±0.622 |
配比组3 | 10 | 2.67 | 3.817±0.713 |
注:与空白组比较,*P<0.05,**P<0.01
由表9可见,与空白组相比,本发明药物组合物的配比组1能够增加小鼠碳廓清吞噬指数(P<0.05),配比组2、3具有增加吞噬指数的趋势(P>0.05)。
本发明提供的药物组合物的配比组1增强机体对疾病的防御能力的作用较配比组2、3为好,故配比组1为本发明药物的最佳剂量配比。
综上,本发明提供的药物能显著提高免疫力的各项指标,增强机体对疾病的防御能力的作用,具有良好的市场应用前景。
Claims (10)
1.一种药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:石斛3~8份、黄芪2~10份、黄精3~8份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:所述原料的重量配比为:石斛5~6份、黄芪4~8份、黄精3~6份。
3.根据权利要求2所述的药物组合物,其特征在于:所述原料的重量配比为:石斛5份、黄芪8份、黄精3份。
4.根据权利要求1~3任意一项所述的药物组合物,其特征在于:所述的石斛为兰科石斛属植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum、铁皮石斛Dendrobium officinaleKimura et Migo、鼓槌Dendrobium chrysotoxum Lindl、流苏Dendrobiumfimbriatum Hook.的茎。
5.根据权利要求4所述的药物组合物,其特征在于:所述的石斛为兰科石斛属植物叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum。
6.根据权利要求1~5任意一项所述的药物组合物,其特征在于:所述组合物是以石斛、黄芪和黄精的原药材、水提物或者有机溶剂提取物为有效成分,加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物,其特征在于:所述制剂为口服制剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物,其特征在于:所述制剂为散剂、膏剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或者滴丸。
9.一种制备权利要求1~8任意一项药物组合物的方法,其特征在于:它包含如下步骤:
(1)称取原料药;
(2)原料药直接打粉,或将原料药加水煎煮或有机溶剂提取,提取液浓缩,再加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
10.权利要求1~8任意一项药物组合物在制备增强免疫力的药物中的用途。
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