CN102884085B - 抗erbb3抗体 - Google Patents

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Abstract

披露了结合并抑制表皮生长因子相关成员ErbB3/HER3的激活的单克隆抗体。这些抗体可以用以治疗细胞增殖性疾病和紊乱，包括某些形式的与ErbB3/HER3的激活相关的癌症。

Description

抗ERBB3抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求于2010年4月9日提交的美国临时专利申请序列号61/322,712的权益和优先权，其全部内容通过引用结合在此。
发明领域
本发明的领域涉及分子生物学、免疫学以及肿瘤学。更具体地，该领域是结合人类ErbB3/HER3的人源化抗体。
背景
HER3/c-ErbB3（在此称作ErbB3）是表皮生长因子（EGFR）家族的一个成员。ErbB3结合神经调节蛋白/heregulin（NRG/HRG）。EGFR家族中的受体是具有细胞内酪氨酸激酶结构域的单跨膜受体。虽然其他EGFR家族成员（即，EGFR/HER1/ErbB1、HER2/ErbB2以及HER4/ErbB4）每个都具有酪氨酸激酶活性，但是ErbB3具有极少或者没有酪氨酸激酶活性，并且因此是“无活性激酶（kinase-dead）”。
EGFR家族的胞外域（ECD）包含四个结构域。结构域1和3（也称作结构域L1和L2）负责配体结合。半胱氨酸富集结构域2和4（也称作结构域L1和L2）涉及与受体配偶体（receptorpartners）的二聚体化。在配体结合时，该ECD就经历构象变化。结构域2和4的相互作用（该作用维持该受体的拘束构象（tetheredconformation）（无活性））解除，并且延展构象（extendedconformation）（活性的）得以采取。该延展构象有利于与其他受体配偶体的二聚体化。HER2/ErbB2是这一普遍规则的唯一例外，即，Her2-ECD是结构性地处于这一延展构象。迄今为止还没有鉴定出用于HER2的配体。
因为ErbB3缺乏内在激酶活性，所以它必须与要被酪氨酸磷酸化激活的另一活性酪氨酸激酶受体二聚体化。二聚体化可以发生在两种不同的受体之间（异二聚体化），例如ErbB3和EGFR/HER1/ErbB1、HER2/ErbB2或HER4/ErbB4。最近，还显示出ErbB3与MET二聚体化。在与另一酪氨酸激酶受体相结合时，则ErbB3就通过ErbB3胞内结构域中的至少九个酪氨酸残基的磷酸化而被激活，并且然后迅速地与受体或下游信号分子相关联。ErbB3磷酸化的酪氨酸残基中的六个直接与磷脂酰肌醇3-激酶（PIK3）的p85亚基相关联，这导致受PI3K/Akt轴线控制的细胞存活途径的激活。由ErbB3的不受调节的二聚体化和/或不受调节的磷酸化而引起的ErbB3的组成型活化可以导致某些癌症。
ErbB3的过表达与多种癌（例如，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、以及头颈部癌）的预后不良相关联。ErbB3的过表达还与肺癌、胃癌、以及结直肠癌的局部到远端转移以及前列腺癌的骨侵袭相关联（Sithanandam（斯坦南达姆）等人,2008,《癌症基因治疗》（CANCERGENETHERAPY）15:413））。已经将ErbB3的过表达与若干癌症治疗的抗性联系起来，包括非小细胞性肺癌（NSCLC）与头颈部癌中利用EGFR酪氨酸激酶抑制剂的治疗、乳腺癌中利用Her2抑制剂的治疗以及胰腺癌中利用放射疗法的治疗。而且，NRG（ErbB3的一种配体）的过表达也与对EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗的抗性有关。Chen（陈）等人描述了抑制NRG功能的抗ErbB3单克隆抗体的用途并且显示了针对乳腺癌与卵巢癌的抑制活性中的生长（Chen等人,1996,《生物化学杂志》（J.BIOL.CHEM.）271:7620）。
对于改进可以用作治疗剂的抗ErbB3抗体存在需要。
概述
本发明基于一个特异性结合人类ErbB3的抗体家族的发现。这些抗体包含基于特异性结合人类ErbB3的多个CDR的ErbB3结合位点。当用作治疗剂时，这些抗体是经工程化的（例如，人源化的）以降低或消除施药于人类患者时的免疫反应。
在此披露的这些抗体阻止或抑制人类ErbB3的激活。在一些实施方案中，这些抗体阻止ErbB3结合至一种配体（例如，NRG/HRG），从而中和ErbB3的生物活性。在其他实施方案中，这些抗ErbB3抗体抑制ErbB3二聚体化，从而中和ErbB3的生物活性。在此披露的这些抗体可以用以体外地或体内地抑制肿瘤细胞的增殖。当施药于人类癌症患者（或动物模型，比如小鼠模型）时，这些抗体抑制或降低人类患者（或动物模型）中的肿瘤生长。
本发明的这些以及其他方面以及优势通过以下的图、详细描述以及权利要求来进行说明。如在此使用的，“包括”不表示限制，并且引用的实例是非限制性的。
附图说明
参考以下附图可以更完全地理解本发明。
图1（现有技术）是一种典型抗体的图示。
图2是一个示意图，显示显示了表示为04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、以及24C05的抗体的完整免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列。每一抗体的氨基酸序列彼此对齐，并且互补决定序列（ComplementaryDeterminingSequences，CDR）（卡巴特定义（Kabatdefinition））CDR1、CDR2以及CDR3在方框中得以鉴别。未加以方框的序列表示骨架（FR）序列。
图3是一个示意图，显示显示了图2中每一免疫球蛋白重链可变区的CDR1、CDR2以及CDR3序列（卡巴特定义）。
图4是一个示意图，显示显示了抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02、以及24C05的完整免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列。每一抗体的氨基酸序列彼此对齐，并且CDR1、CDR2以及CDR3序列（卡巴特定义）在方框中得以鉴别。未加以方框的序列表示骨架（FR）序列。
图5是一个示意图，显示了图4中每一免疫球蛋白轻链可变区的CDR1、CDR2以及CDR3序列（卡巴特定义）。
图6A与6B是一个图表，总结了测量阴性对照（鼠IgG(Δ)）以及抗ErbB3单克隆抗体（04D01(■)、12A07(○)、18H02(◇)、22A02(●)以及24C05(□)）对于抑制NRG1-β1结合至hErbB3上的中和活性的实验结果（图6A）以及测量通过抗ErbB3mAb09D03(▲)与11G01(*)，NRG1-β1增强地结合至rhErbB3的实验结果（图6B）。
图7是一个图表，总结了测量阴性对照（鼠IgG）以及抗ErbB3单克隆抗体（04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）对于抑制NRG1-β1结合至hErbB3上的中和活性的实验结果。
图8是一个图表，总结了测量在CHO细胞表面表达的嵌合蛋白Her2/3d2的抗ErbB3单克隆抗体的细胞表面识别的实验结果。
图9是一个图表，总结了在NRG1-β1存在下，在表达Her2与ErbB3的BaF/3细胞中，测量阴性对照IgG（鼠IgG(Δ)）以及抗ErbB3单克隆抗体（04D01(■)、09D0311G01(◆)、12A07(○)、18H02(◇)、22A02(●)以及24C05(□)）的抗增殖活性的实验结果。
图10是一个图表，总结了在NRG1-β1存在下。在MCF7细胞中测量抗ErbB3单克隆抗体04D01(■)、09D0311G01(◆)、12A07(○)、18H02(◇)、22A02(●)以及24C05(□)的抗增殖活性的实验结果。
图11是一个图表，总结了在血清存在下、在用5g/ml的抗体进行处理的SKBR-3细胞中，测量阴性对照（鼠IgG）以及抗ErbB3单克隆抗体（04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）的抗增殖活性的实验结果。
图12是一个图表，总结了在SKBR-3细胞中，测量阴性对照IgG以及抗ErbB3单克隆抗体（04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）对于由NRG引起的ErbB3磷酸化的抑制活性的实验结果。还显示了无抗体/无配体对照以及无抗体对照。
图13A与13B是图表，表示了如通过ELISA确定的那样，在MCF7细胞中（图13A）以及DU145细胞中（图13B）测量抗ErbB3单克隆抗体（04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）在响应NRG1-β1时，对Akt磷酸化的抑制活性的实验结果。还显示了无抗体/无配体对照以及无抗体对照。
图14是一个图表，总结了以20mg/kg的剂量、在CB17SCID小鼠（空白对照，PBS（◆））BxPC3胰腺肿瘤异种移植模型中，测量抗ErbB3单克隆抗体（04D01（Δ）、09D03（*）、11G01（□）、12A07（▲）、18H02（●）、22A02（■）、24C05（○））以及人类IgG对照（--■--）的肿瘤抑制活性的实验结果。
图15是一个示意图，显示了24C05的完整重链可变区以及表示为Sh24C05Hv3-7、Sh24C05Hv3-11、Sh24C05Hv3-11N62S、Sh24C05Hv3-21、Sh24C05Hv3-23、Sh24C05Hv3-30以及Hu24C05HvA的完整人源化重链可变区的氨基酸序列。每一重链可变区的氨基酸序列彼此对齐，并且互补决定序列（CDR）（卡巴特定义）CDR1、CDR2以及CDR3在方框中得以鉴别。未加以方框的序列表示骨架（FR）序列。
图16是一个示意图，显示了24C05的完整氢链可变区以及表示为Sh24C05Kv1-9、Sh24C05Kv1-16、Sh24C05Kv1-17、Sh24C05Kv1-33、Sh24C05Kv1-39以及Hu24C05KvA的完整人源化轻链可变区的氨基酸序列。每一氢链可变区的氨基酸序列彼此对齐，并且CDR1、CDR2以及CDR3序列（卡巴特定义）在方框中得以鉴别。未加以方框的序列表示骨架（FR）序列。
图17是Biacore传感图（Biacoresensorgrams），表示了测量抗ErbB3单克隆抗体Sh24C05-31N62S-IgG1、Ab#6、U1-53以及U1-59的动力学值的实验结果。
图18A是一个图表，总结了测量阴性对照（人类IgG（□））以及抗ErbB3单克隆抗体（Sh24C05-25N62S-IgG1（▲）、Sh24C05-25N62S-IgG2（Δ）、Sh24C05-31N62S-IgG1(●)以及Sh24C05-31N62S-IgG2（○））的中和活性的实验结果。图18B是一个图表，总结了测量人类IgG（□）以及抗ErbB3单克隆抗体Ab#6IgG2U1-53（◇）与U1-59（■）的中和活性的实验结果。
图19A是一个图表，总结了在NRG1-β1存在下、在表达Her2和ErbB3的BaF/3细胞中，测量阴性对照（人类IgG（□））以及抗ErbB3单克隆抗体（Sh24C05-25N62S-IgG1（▲）、Sh24C05-25N62S-IgG2（Δ）、Sh24C05-31N62S-IgG1(●)以及Sh24C05-31N62S-IgG2（○））的抑制活性的实验结果。图19B是一个图表，总结了在NRG1-β1存在下，在表达Her2和ErbB3的BaF/3细胞中，测量人类IgG（□）以及抗ErbB3单克隆抗体（Sh24C05-31N62S-IgG1(●)、Ab#6IgG2U1-53（◇）以及U1-59（■））的抑制活性的实验结果。
图20是一个图表，总结了在正生长的SKBR-3细胞中，测量阴性对照（人类IgG）以及抗ErbB3单克隆抗体（Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1、以及Sh24C05-31N62S-IgG2）对于ErbB3的稳定状态磷酸化的抑制活性的实验结果。
图21是一个图表，总结了在正生长的SKBR-3细胞中，测量通过阴性对照（人类IgG）以及抗ErbB3单克隆抗体（Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2）的ErbB3受体降解的实验结果。
图22是一个图表，总结了以2mg/kg的剂量，在CB17SCID小鼠BxPC3胰腺肿瘤异种移植模型中，测量人类IgG、鼠IgG或抗ErbB3单克隆抗体的肿瘤抑制活性的实验结果（鼠24C05（Δ）、Sh24C05-31N62SIgG1（●）、Sh24C05-31N62SIgG2（◆）、Sh24C05-25N62SIgG1（▲）、Sh24C05-25N62SIgG2（■）、空白对照（□）、鼠IgG（x）、以及人类IgG（◇））。
图23A是一个图表，总结了以5mg/kg的剂量，在NCR裸鼠Calu-3非小细胞性肺癌异种移植模型中，测量鼠IgG或抗ErbB3单克隆抗体的肿瘤抑制活性的实验结果（空白对照（□）、鼠IgG（x）、Sh24C05-31N62SIgG1（▲）、Ab#6IgG2（●）以及U1-59（■））。
图23B是一个图表，总结了以10mg/kg的剂量，在NCR裸鼠Calu-3非小细胞性肺癌异种移植模型中，测量鼠IgG或抗ErbB3单克隆抗体的肿瘤抑制活性的实验结果（空白对照（□）、鼠IgG（x）、Sh24C05-31N62SIgG1（▲）、Ab#6IgG2（●）以及U1-59（■））。
图23C是一个图表，总结了以20mg/kg的剂量，在NCR裸鼠Calu-3非小细胞性肺癌异种移植模型中测量鼠IgG或抗ErbB3单克隆抗体的肿瘤抑制活性的实验结果（空白对照（□）、鼠IgG（x）、Sh24C05-31N62SIgG1（▲）、Ab#6IgG2（●）以及U1-59（■））。
图24是一个图表，总结了在NODSCID小鼠MDA-MB-453乳腺癌异种移植模型中，测量人类IgG、鼠或抗ErbB3单克隆抗体的肿瘤抑制活性的实验结果（空白对照（□）、人类IgG（x）、5mg/kg剂量的Sh24C05-31N62SIgG1（◇）、10mg/kg剂量的Sh24C05-31N62SIgG1（Δ）、20mg/kg剂量的Sh24C05-31N62SIgG1（▲）、10mg/kg剂量的Ab#6IgG2（●）以及10mg/kg剂量的U1-59（■））。
详细描述
在此披露的这些ErbB3抗体是基于某些单克隆抗体的抗原结合位点，这些单克隆抗体由于它们中和人类ErbB3多肽的生物活性的活性而被选择。这些抗体包含免疫球蛋白可变区CDR序列，这些序列限定一种针对ErbB3的结合位点。在一些实施方案中，这些抗体阻止ErbB3结合至一种配体（例如，NRG/HRG），从而中和ErbB3的生物活性。在其他实施方案中，这些抗ErbB3抗体抑制ErbB3二聚体化，从而中和ErbB3的生物活性。仍在其他实施方案中，这些抗ErbB3抗体抑制ErbB3的磷酸化和下游信号。
由于这些抗体的中和活性，它们对于抑制某些癌症细胞以及肿瘤的生长和/或增殖是有用的。这些抗体可以工程化以最小化或消除当施药于人类患者时的免疫反应。在一些实施方案中，这些抗体被融合或接合至其他部分，比如可检测的标记或效应分子（比如小分子毒素）。
I.接合ErbB3的抗体
在一些实施方案中，该抗体包括：(a)一种包括CDRH1-CDRH2-CDRH3结构的免疫球蛋白重链可变区以及(b)免疫球蛋白轻链可变区，其中该重链可变区和该轻链可变区一起限定一种用于结合人类ErbB3的单结合位点。CDRH1包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:5(04D01)、SEQID号:15(09D03)、SEQID号:25(11G01)、SEQID号:34(12A07)、SEQID号:41(18H02)、SEQID号:51(22A02)、SEQID号:57(24C05)、以及SEQID号:75(24C05)；CDRH2包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:6(04D01)、SEQID号:16(09D03)、SEQID号:26(11G01)、SEQID号:35(12A07)、SEQID号:42(18H02)、SEQID号:52(22A02)、SEQID号:58(24C05)、以及SEQID号:148(Sh24C05Hv3-11N62S)；并且CDRH3包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:7(04D01)、SEQID号:17(09D03)、SEQID号:27(11G01)、SEQID号:36(12A07、22A02)、SEQID号:43(18H02)、以及SEQID号:59(24C05)。贯穿该说明书，一个具体的SEQID号后跟的括号里是为那一序列起源的抗体。例如，“SEQID号:5(04D01)”意为SEQID号:5来自抗体04D01。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:5(04D01)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:6(04D01)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:7(04D01)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:15(09D03)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:16(09D03)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:17(09D03)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包含SEQID号:25(11G01)的氨基酸序列的CDRH1，一种包含SEQID号:26(11G01)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包含SEQID号:27(11G01)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:34(12A07)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:35(12A07)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:36(12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:41(18H02)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:42(18H02)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:43(18H02)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:51(22A02)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:52(22A02)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:36(12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRH3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括EQID号:57(24C05)或SEQID号:75(24C05)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:58(24C05)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59(24C05)的氨基酸序列的CDRH3。
在某些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:57(24C05)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:58(24C05)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59(24C05)的氨基酸序列的CDRH3。
在其他实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:75(24C05)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:58(24C05)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59(24C05)的氨基酸序列的CDRH3。
在某些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括SEQID号:57(24C05)或SEQID号:75(24C05)的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:148(Sh24C05Hv3-11N62S)的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59(24C05)的氨基酸序列的CDRH3。
优选地，这些CDRH1、CDRH2以及CDRH3序列插入在多个人类或人源化免疫球蛋白FR之间。该抗体可以是一种完整的抗体或一种抗原结合抗体片段。
在一些实施方案中，该抗体包括(a)一种包括CDRL1-CDRL2-CDRL3结构的免疫球蛋白轻链可变区以及(b)一种免疫球蛋白重链可变区，其中该IgG轻链可变区和该IgG重链可变区一起限定一种用于结合人类ErbB3的单结合位点。CDRL1包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:8(04D01,12A07,22A02)、SEQID号:18(09D03)、SEQID号:28(11G01)、SEQID号:44(18H02)、以及SEQID号:60(24C05)；CDRL2包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:9(04D01,11G01，12A07,22A02)、SEQID号:19(09D03)、SEQID号:45(18H02)、以及SEQID号:61(24C05)；并且CDRL3包括一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:10(04D01,12A07,22A02)、SEQID号:20(09D03)、SEQID号:29(11G01)、SEQID号:46(18H02)、以及SEQID号:62(24C05)。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包括：一种包括SEQID号:8(04D01,12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:9(04D01,11G01,12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRL2，一种包含SEQID号:10(04D01,12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRL3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包括：一种包括SEQID号:18(09D03)的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:19(09D03)的氨基酸序列的CDRL2，以及一种包括SEQID括:20(09D03)的氨基酸序列的CDRL3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包括：一种包含SEQID号:28(11G01)的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:9(04D01,11G01,12A07,22A02)的氨基酸序列的CDRL2，以及一种包括SEQID号:29(11G01)的氨基酸序列的CDRL3。
在一些实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包括：一种包括SEQID号:44(18H02)的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:45(18H02)的氨基酸序列的CDRL2，以及一种包含SEQID号:46(18H02)的氨基酸序列的CDRL3。
在一个实施方案中，该抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白轻链可变区包括：一种包括SEQID号:60(24C05)的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:61(24C05)的氨基酸序列的CDRL2，以及一种包含SEQID号:62(24C05)的氨基酸序列的CDRL3。
优选地，这些CDRL1、CDRL2以及CDRL3序列是插入在多个人类或人源化免疫球蛋白FR之间。该抗体可以是一种完整的抗体或一种抗原结合抗体片段。
在一些实施方案中，该抗体包括：(a)一种包括CDRH1-CDRH2-CDRH3结构的IgG重链可变区以及(b)一种包括CDRL1-CDRL2-CDRL3结构的IgG轻链可变区，其中该重链可变区和该轻链可变区一起限定一种结合人类ErbB3的单结合位点。该CDRH1是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:5(04D01)、SEQID号:15(09D03)、SEQID号:25(11G01)、SEQID号:34(12A07)、SEQID号:41(18H02)、SEQID号:51(22A02)、SEQID号:57(24C05)、以及SEQID号:75(24C05)；该CDRH2是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:6(04D01)、SEQID号:16(09D03)、SEQID号:26(11G01)、SEQID号:35(12A07)、SEQID号:42(18H02)、SEQID号:52(22A02)、SEQID号:58(24C05)、以及SEQID号:148(Sh24C05Hv3-11N62S)；并且该CDRH3是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:7(04D01)、SEQID号:17(09D03)、SEQID号:27(11G01)、SEQID号:36(12A07、22A02)、SEQID号:43(18H02)、以及SEQID号:59(24C05)。该CDRL1是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:8(04D01,12A07,22A02)、SEQID号:18(09D03)、SEQID号:28(11G01)、SEQID号:44(18H02)、以及SEQID号:60(24C05)；该CDRL2是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:9(04D01,11G01,12A07,22A02)、SEQID号:19(09D03)、SEQID号:45(18H02)、以及SEQID号:61(24C05)；并且该CDRL3是一种选自下组的氨基酸序列，该组由以下项组成：SEQID号:10(04D01,12A07,22A02)、SEQID号:20(09D03)、SEQID号:29(11G01)、SEQID号:46(18H02)、以及SEQID号:62(24C05)。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种选自下组的免疫球蛋白重链可变区，该组由以下项组成：SEQID号:2(04D01)、SEQID号:12(09D03)、SEQID号:22(11G01)、SEQID号:31(12A07)、SEQID号:38(18H02)、SEQID号:48(22A02)、SEQID号:54(24C05)、以及SEQID号:154(Sh24C05Hv3-11N62S)；以及一种选自下组的免疫球蛋白轻链可变区，该组由以下项组成：SEQID号:4(04D01)、SEQID号:14(09D03)、SEQID号:24(11G01)、SEQID号:33(12A07)、SEQID号:40(18H02)、SEQID号:50(22A02)、SEQID号:56(24C05)、SEQID号:166(Sh24C05Kv1-16)、以及SEQID号:168(Sh24C05Kv1-17)。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:2(04D01)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:4(04D01)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:12(09D03)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:14(09D03)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:22(11G01)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:24(11G01)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:31(12A07)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:33(12A07)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:38(18H02)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:40(18H02)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:48(22A02)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:50(22A02)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:54(24C05)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:56(24C05)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:154(Sh24C05Hv3-11N62S)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:166(Sh24C05Kv1-16)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:154(Sh24C05Hv3-11N62S)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区，以及一种包括SEQID号:168(Sh24C05Kv1-17)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
在其他实施方案中，该抗体包括(i)一种选自下组的免疫球蛋白重链，该组由以下项组成：SEQID号:109(04D01)、SEQID号:113(09D03)、SEQID号:117(11G01)、SEQID号:121(12A07)、SEQID号:125(18H02)、SEQID号:129(22A07)、SEQID号:133(24C05)、SEQID号:190(Sh24C05Hv3-11N62SIgG1)、以及SEQID号:192(Sh24C05Hv3-11N62SIgG2)，以及(ii)一种选自下组的免疫球蛋白轻链，该组由以下项组成：SEQID号:111(04D01)、SEQID号:115(09D03)、SEQID号:119(11G01)、SEQID号:123(12A07)、SEQID号:127(18H02)、SEQID号:131(22A07)、SEQID号:135(24C05)、SEQID号:204(Sh24C05Kv1-16kappa)、以及SEQID号:206(Sh24C05Kv1-17kappa)。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:109(04D01)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:111(04D01)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:113(09D03)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:115(09D03)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:117(11G01)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:119(11G01)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:121(12A07)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:123(12A07)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:125(18H02)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:127(18H02)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:129(22A02)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:131(22A02)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:133(24C05)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:135(24C05)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:190(Sh24C05Hv3-11N62SIgG1)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:204(Sh24C05Kv1-16kappa)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包含SEQID号:192(Sh24C05Hv3-11N62SIgG2)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包含SEQID号:204(Sh24C05Kv1-16kappa)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:190(Sh24C05Hv3-11N62SIgG1)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:206(Sh24C05Kv1-17kappa)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
在另一个实施方案中，该抗体包括一种包括SEQID号:192(Sh24C05Hv3-11N62SIgG2)的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，以及一种包括SEQID号:206(Sh24C05Kv1-17kappa)的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
如在此使用的，除非另有指明，术语“抗体”意为一种完整的抗体（例如：一种完整的单克隆抗体）或一种抗体的抗原结合片段（例如，一种单克隆抗体的抗原结合片段），包括已经过修饰、工程化或化学接合的完整抗体或抗原结合片段。已经过修饰或工程化的抗体的实例包括嵌合抗体、人源化抗体以及多特异性抗体（例如双特异性抗体）。抗原结合片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、单链抗体（例如，scFv）、微型抗体以及双体抗体（diabodies）。化学接合抗体的实例是一种结合至毒素部分的抗体。
图1显示了一种包含四条多肽链的完整单克隆抗体的图示。多肽链的其中两条称作免疫球蛋白重链（H链），并且多肽链的其中两条称作免疫球蛋白轻链（L链）。这些免疫球蛋白重或轻链是通过一种链间二硫键而被连接的。这些免疫球蛋白重链是通过链间二硫键而被连接的。轻链由一个可变区（图1中的VL）以及一个恒定区（图1中的CL）构成。重链由一个可变区（图1中的VH）以及至少三个恒定区（图1中的CH1、CH2以及CH3）构成。这些可变区决定该抗体的特异性。
每一可变区包含三个高可变区，这些高可变区已知为决定区（CDR），两侧有四个已知为骨架区（FR）的相对保守区域。这三个CDR（称作CDR1、CDR2以及CDR3）构成抗体结合特异性。
在某些实施方案中，一种结合人类ErbB3的分离的抗体包括一种免疫球蛋白重链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种与SEQID号:2(04D01)、SEQID号:12(09D03)、SEQID号:22(11G01)、SEQID号:31(12A07)、SEQID号:38(18H02)、SEQID号:48(22A02)、SEQID号:54(24C05)、以及SEQID号:154(Sh24C05Hv3-11N62S)的整个可变区或骨架区具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、或99%一致性的氨基酸序列。
在某些实施方案中，一种结合人类ErbB3的分离的抗体包括一种免疫球蛋白轻链可变区，该免疫球蛋白重链可变区包括一种与SEQID号:4(04D01)、SEQID号:14(09D03)、SEQID号:24(11G01)、SEQID号:33(12A07)、SEQID号:40(18H02)、SEQID号:50(22A02)、SEQID号:166(Sh24C05Kv1-16)、以及SEQID号:168(Sh24C05Kv1-17)的整个可变区或骨架区具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、或99%一致性的氨基酸序列。
在每一前述实施方案中，在此考虑到，一起结合人类ErbB3的免疫球蛋白重链可变区序列和/或轻链可变区序列在该重和/或轻链可变区的骨架区中可以包含氨基酸改变（例如，至少1、2、3、4、5、或10个氨基酸置换、缺失或添加）。
在一些实施方案中，一种分离的抗体以350pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、75pM、50pM、20pM、10pM或更低的KD结合hErbB3。除非另外说明，否则KD值由表面等离子体共振方法来确定。这些表面等离子体共振方法可以使用描述在例如实例3与12（其中这些测量分别是在25°C与37°C下进行）中的条件来执行。
在一些实施方案中，这些抗体抑制hErbB3结合至NRG1-β1。例如，当使用描述于实例4与13中的方案来测定时，这些抗体可以具有大约5nM、2nM或更低的IC50（最大抑制的50%时的浓度）。
II.抗体的产生
在此披露的生产抗体的方法是本领域内已知的。例如，编码轻链可变区与重链可变区的DNA分子可以使用在此提供的序列信息进行化学合成。合成的DNA分子可以连接至其他适当的核苷酸序列（包括，例如恒定区编码序列以及表达控制序列），以产生编码所希望的抗体的常规的基因表达构建体。所定义的基因构建体的产生是在本领域内的惯常技术之内。可替代地，在此提供的序列可以使用合成核酸探针，通过常规杂交技术或聚合酶链式反应（PCR）技术来从杂种瘤中进行克隆，这些合成核酸探针的序列是基于在此提供的序列信息，或有关编码杂交瘤细胞中的鼠抗体的重和轻链的基因的现有技术序列信息。
编码在此披露的抗体的核酸可以合并（连接）进入表达载体，这些表达载体可以通过常规转染或转化技术引入宿主细胞。示例性宿主细胞是大肠杆菌（E.coli）细胞、中国仓鼠卵巢（CHO）细胞、海拉（HeLa）细胞、幼仑鼠肾（BHK）细胞、猴肾（COS）细胞、人肝癌细胞细胞（例如，HepG2）以及不另外地产生IgG蛋白的骨髓瘤细胞。经转化的宿主细胞可以在准许这些宿主细胞表达编码这些免疫球蛋白轻和/或重链可变区的基因的条件下进行生长。
具体的表达与纯化条件将取决于所采用的表达系统而变化。例如，如果一种基因有待于在大肠杆菌中表达，则首先通过将该工程化的基因定位于一种合适的细菌启动子（例如，Trp或Tac）以及一种原核生物信号序列的下游而将它克隆进入一种表达载体。该表达的分泌蛋白以折射体或包涵体而积累，并且可以在利用弗氏细胞压碎器或声处理的破裂之后进行收集。然后将这些折射体溶解，蛋白并且通过本领域内已知的方法将这些蛋白重折叠并且切割。
如果一种编码在此披露的抗体的DNA构建体有待于在真核生物宿主细胞（例如，CHO细胞）中表达，则首先将它插入一种包含合适的真核生物启动子、分泌信号、IgG增强子以及不同内含子的表达载体之中。这该表达载体可任选地包含编码一种恒定区的所有或部分的序列，使一种重和/或轻链的全部或一部分能够得以表达。在一些实施方案中，一种单表达载体包含有待表达的重和轻链可变区这二者。
该基因构建体可以使用常规技术引入真核生物宿主细胞。这些宿主细胞表达VL或VH片段、VL-VH异二聚体、VH-VL或VL-VH单链多肽、完整的重或轻免疫球蛋白链、或其部分，它们中的每一个都可以被附接至一种具有另外的功能（例如，细胞毒性）的部分。在一些实施方案中，用表达一种多肽的单载体（singlevector）转染宿主细胞，该多肽表达一种重链（例如一种重链可变区）或一种轻链（例如一种轻链可变区）的全部或部分。在其他实施方案中，用编码(a)包括一个重链可变区的多肽和包括一个轻链可变区的多肽，或(b)一个整个的免疫球蛋白重链和一个整个免疫球蛋白轻链的单载体转染宿主细胞。仍在其他实施方案中，用多于一种的表达载体（例如，一种表达包括一种重链或重链可变区的全部或部分的一种多肽的表达载体，以及另一表达包括一种轻链或轻链可变区的全部或部分的一种多肽的表达载体）共转染宿主细胞。
产生包括一种免疫球蛋白重链可变区的一种多肽或包含一种免疫球蛋白轻链可变区的一种多肽的方法可以包括在准许包含该免疫球蛋白重链可变区的该多肽或包含该免疫球蛋白轻链可变区的该多肽表达的条件下，生长用表达载体转染的宿主细胞。然后可以使用本领域内熟知技术（例如，亲和标签，比如谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签与组氨酸标签）纯化包括一种重链可变区的多肽或包括轻链可变区的多肽。
生产结合人类ErbB3的一种单克隆抗体或该抗体的一种抗原结合片段的方法，可以包括生长经以下项转染的宿主细胞：(a)一种编码完整或部分免疫球蛋白重链的表达载体，以及一种编码完整或部分免疫球蛋白轻链的分开的表达载体；或(b)一种编码两种链（例如，完整或部分的链）的单一的表达载体，在允许两种链表达的条件下。可以收集该完整抗体（或抗原结合片段），并且使用本领域内已熟知技术（例如，蛋白A（ProteinA）、蛋白G（ProteinG）、亲和标签比如谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签与组氨酸标签）进行纯化。从一种单一的表达载体或从两种分开的表达载体表达该重链与该轻链是在本领域内的普通技术之内。
III.对抗体的修饰
用于降低或消除抗体与抗体片段的抗原性的方法在本领域内是已知的。当这些抗体是有待施药于人类时，这些抗体优选地是“人源化的”以降低或消除在人类中的抗原性。优选地，一种人源化抗体具有与其衍生自的非人源化小鼠抗体相同的或实质上相同的抗原亲和力。
在一个人源化方法中，产生嵌合蛋白，其中用人类免疫球蛋白恒定区替代小鼠免疫球蛋白恒定区。参见例如Morrison（莫里森）等人，1984，《美国科学院院刊》（PROC.NAT.ACAD.SCI.）81:6851-6855；Neuberger（纽伯格）等人，1984，《自然》（NATURE）312:604-608；美国专利号6,893,625（Robinson（罗宾逊）），5,500,362（Robinson（罗宾逊））以及4,816,567（Cabilly（凯比利））。
在一种已知为CDR移植的方法中，这些轻或重链可变区的CDR是移植进入来自另外物种的骨架序列之中。例如，可以移植鼠CDR进入人FR。在一些实施方案中，抗ErbB3抗体的轻和重链可变区的CDR可以被移植到人类FR或共有人类FR（consensushumanFRs）上。为了产生共有人类FR，将从若干人类重链或轻链氨基酸序列而来的FR进行对齐以鉴定共有氨基酸序列。CDR移植描述于美国专利号7,022,500（Queen（昆））；6,982,321（Winter（温特））；6,180,370（Queen（昆））；6,054,297（Carter（卡特））；5,693,762（Queen（昆））；5,859,205（Adair（亚代尔））；5,693,761（Queen（昆））；5,565,332（Hoogenboom（胡根伯姆））；5,585,089（Queen（昆））；5,530,101（Queen（昆））；Jones（琼斯）等人（1986）《自然》321:522-525；Riechmann（利赫曼）等人（1988）《自然》332:323-327；Verhoeyen（沃霍恩）等人（1988）《科学》（SCIENCE）239:1534-1536；以及Winter（温特）（1998）《欧洲生物化学学会联盟快讯》（FEBSLETT）430:92-94。
在一种称作“SUPERHUMANIZATIONTM”的方法中，人CDR序列是基于这些人CDR与那些有待于人源化的小鼠抗体的结构相似性，从人生殖细胞基因中选择。参见例如美国专利申请号6,881,557（Foote（富特））；以及Tan（谭）等人，2002，《免疫学杂志》（J.IMMUNOL）169:1119-1125。
降低免疫原性的其他方法包括“重塑（reshaping）”、“超嵌合（hyperchimerization）”以及“镶面/表面重修（veneering/resurfacing）”。参见例如Vaswami（瓦斯瓦米）等人，1998，《过敏、哮喘及免疫学年鉴》（ANNALSOFALLERGY,ASTHMA,&IMMUNOL.）81:105；Roguska（罗固斯卡）等人，1996，《蛋白工程》（PROT.ENGINEER）9:895-904；以及美国专利号6,072,035（Hardman（哈德曼））。在该镶面/表面重修方法中，该鼠抗体中的易接近表面的氨基酸残基被在人类抗体中的相同位置更常发现的氨基酸残基替代。这种类型的抗体表面重修描述于例如美国专利号5,639,641（Pedersen（佩德森））中。
用于将小鼠抗体转化成一种适合人类医学用途的形式的另一方法已知为ACTIVMABTM技术（Vaccinex公司，纽约州罗彻斯特（Vaccinex,Inc.,Rochester,NY）），该技术涉及一种牛痘病毒基载体，用来在哺乳动物细胞中表达抗体。据说要产生IgG重和轻链的高水平的组合多样性。参见例如美国专利号6,706,477（Zauderer（藻德尔））；6,800,442（Zauderer（藻德尔））；以及6,872,518（Zauderer（藻德尔））。
用于将小鼠抗体转化成一种适合在人类中使用的形式的另一方法是由KaloBios制药公司（KaloBiosPharmaceuticals,Inc.）（加利福尼亚帕洛阿尔托）（PaloAlto,CA）商业化运作的技术。这种技术涉及使用一种专利性的人类“受体”文库来产生一种用于抗体选择的“表位聚焦的表位表位”文库。
用于将小鼠抗体修饰成一种适合人类医学用途的形式的另一方法是由HUMANENGINEERINGTM技术，该技术由XOMA(US)公司（XOMA(US)LLC）商业化运作。参见，例如，PCT公开号WO93/11794以及美国专利号5,766,886；5,770,196；5,821,123；以及5,869,619。
任何适合的方法（包括任何以上的方法）可以用以降低或消除在此披露的抗体的人免疫原性。
制造多特异性抗体的方法在本领域内是已知的。多特异性抗体包括双特异性抗体。双特异性抗体是具有针对至少两种不同表位表位的结合特异性的抗体。示例性双特异性抗体结合至感兴趣的抗原的两种不同表位表位。双特异性抗体是具有针对至少两个不同表位的结合特异性的抗体。示例性双特异性抗体结合至感兴趣的抗原的两个不同表位。双特异性抗体可以制备为全长抗体或抗体片段（例如F(ab')2双特异性抗体与双体），如描述于例如Milstein（米尔斯坦）等人，《自然》305:537-539(1983)；WO93/08829；Traunecker(巢奈克尔)等人，《欧洲分子生物学组织杂志》（EMBOJ.），10:3655-3659(1991)；WO94/04690；Suresh（苏雷什）等人，《酶学方法》（METHODSINENZYMOLOGY），121:210(1986)；WO96/27011；Brennan(布伦南)等人，《科学》，229:81(1985)；Shalaby等人，《实验医学杂志》（J.EXP.MED.），175:217-225(1992)；Kostelny(克斯特尔尼)等人，《免疫学杂志》，148(5):1547-1553(1992)；Hollinger（霍林格）等人，PNAS，90:6444-6448；Gruber（格鲁伯）等人，《免疫学杂志》，152:5368(1994)；Wu（吴）等人，《自然生物技术》（NAT.BIOTECHNOL.），25(11):1290-1297；美国专利申请号2007/0071675；以及Bostrom（博斯特罗姆）等人，《科学》323:1640-1644(2009)中的。
在一些实施方案中，使用标准的体外共轭化学剂（conjugationchemistries）将该抗体共轭至一种效应物剂（比如一种小分子毒素或一种放射性核素）。如果该效应物剂是一种多肽，则该抗体可以化学共轭至该效应物或连接至该效应物作为一种融合蛋白。融合蛋白的构建在本领域普通技术内
IV.抗体的用途
在此披露的抗体可以用以治疗不同形式的癌症，例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、结直肠癌、肺癌（非小细胞性肺癌）、胰腺癌、胃癌、皮肤癌、肾癌、以及头颈部癌以及神经鞘瘤癌。这些癌细胞被暴露于一个治疗有效量的该抗体，以抑制或降低该癌细胞的增殖。在一些实施方案中，这些抗体抑制癌细胞增殖至少40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、或100%。
在一些实施方案中，该抗体通过抑制人ErbB3结合至ErbB3配体（例如，神经调节蛋白/heregulin，尤其是NRGβ1/NRG1-β1/NRGβ1/HRGβ1以及NRGα1/NRG1-α1/NRGα1/HRGα1）来抑制或降低肿瘤细胞的增殖。该抗体可以在一种抑制人类患者中的肿瘤生长的方法中使用。该方法包括将一个治疗有效量的该抗体给药于该患者。
与ErbB3过表达和/或激活相关的癌症包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、肺癌（例如，非小细胞性肺癌）、一些形式的脑癌（例如，神经鞘瘤）、黑素瘤、皮肤癌、肾癌、以及肠胃癌（例如，结直肠癌、胰腺癌、胃癌、头颈部癌）。
如在此所使用的，“治疗”（treat、treating和treatment）意为对哺乳动物（例如人类）的疾病的治疗。这包括：(a)抑制该疾病，即，遏制其发展；以及（b）缓解该疾病，即，使该疾病状态退行；以及（c）治愈该疾病。
一般地，一个治疗有效量的活性组分是在0.1mg/kg至100mg/kg的范围内，例如，1mg/kg至100mg/kg，1mg/kg至10mg/kg。给药量将取决于各种变量，比如疾病的类型与程度或有待治疗的征候、该患者的总体健康、该抗体的体内效能、药物配方以及给药途径。可以增加初始计量超出以上的水平以快速达到所希望的血液水平或组织水平。可替代地，该初始剂量可以比该最适宜的更低，并且可以在治疗过程中渐进地增加每日剂量。在例如设计以从0.5mg/kg至20mg/kg进行的常规性阶段I剂量逐步提高研究中，人类剂量可以被最优化。取决于各种因素（比如给药途径、剂量以及在治疗的疾病），给药频率可以变化。示例性的给药频率是每天一次，每周一次或每两周一次。优选的给药途径是肠胃外给药，例如静脉输注。基于单克隆抗体的药物的配制品在本领域内普通技术内。在一些实施方案中，该单克隆抗体被低压冻干并且在给药时,在缓冲盐水中复原。
对于治疗用途，抗体优选结合一种药学上可接受的载体。如在此所用的，“药学上可接受的载体”意为适合用于和人类以及动物的组织相接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症的缓冲液、载体以及赋形剂，与合理的获益/风险比相称。在与该配制品的其他成分相容的意义上，这一种或多种载体应该是“可接受的”，并且不会对它的接受者有害。药学上可接受的载体包括与药学给药相容的缓冲液、溶剂、分散介质、涂层、等渗剂和吸收延迟剂、以及类似物。针对药学活性物质的此类介质与试剂的用途在本领域是已知的。
包含在此披露的抗体的药物组合物可以按剂量单位形式存在，并且可以通过任何合适的方法来制备。药物组合物应该配制以与其预期的给药途径相容。给药途径的实例是静脉（IV）、皮内、吸入、经皮、局部、经粘膜以及直肠给药。单克隆抗体的优选给药途径是IV输注。有用的配制品可以通过制药领域内熟知的方法来制备。例如，参见《雷明顿的药物科学第18版》（Remington′sPharmaceuticalSciences,18thed.）（Mack出版公司，1990）(MackPublishingCompany,1990)。适合用于肠胃外给药的配制品组分包括无菌稀释液，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如EDTA；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于张力调整的用剂，比如氯化钠或右旋糖。
对于静脉给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、CremophorELTM（BASF，新泽西州派西派尼市（Parsippany，NJ））或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。该载体应该在制造和储存的条件下是稳定的，并且应该抗微生物保存。该载体可以是一种溶剂或分散介质，它包含例如：水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇、以及液体聚乙二醇），以及它们的适合的混合物。
药物配制品优选是无菌的。灭菌可以例如通过经由无菌滤膜的过滤来完成。在该组合物被低压冻干的情况下，过滤灭菌可以在低压冻干与复原之前或之后进行。
实例
以下实例仅是说明性的，并且不意在以任何方式限制本发明的范围或内容。
实例1-抗hErbB3单克隆抗体的产生
在缅因州生物技术服务公司（MaineBiotechnologyServicesInc.）进行免疫、融合以及初筛选，接着是多位点重复免疫（RIMMS）方案。用重组人类ErbB3/Fc（R&DSystems公司，Cat.号348-RB）免疫三只AJ小鼠以及三只Balb/c小鼠。用切割的rhErbB3（免疫A）亦或用与其配体重组人类NRG1-1/HRG1-1-EGF结构域（R&DSystems公司，Cat.号396-RB）交联的切割的rhErbB3（免疫B）进行两组免疫。通过酶联免疫吸附测定（ELISA），每一免疫中，选择具有显示高抗ErbB3活性的血清的两只AJ小鼠用于随后的融合。收集来自适当小鼠的脾脏与淋巴结。然后收集B细胞，并将其与一种骨髓瘤细胞系融合。将融合产物连续地稀释到40个96孔平板上，以接近克隆性。使用ELISA，筛选了来自生成的融合的总共5280份上清液，用于结合至重组rhErbB3/Fc。还筛选了相同的上清液，用于使它们结合至在CHO细胞中过表达的人类ErbB3（利用中尺度电化学发光测定（Mesoscaleelectrochemiluminescenceassay））。如以下讨论的，通过体外生物化学测定和基于细胞的测定，对鉴定为包含针对ErbB3的抗体的三百份上清液进行进一步的特征化。选择一组杂交瘤，并亚克隆并且扩增这些杂交瘤。将杂交瘤细胞系转移至BioXCell（原来的Bio-Express公司），用于抗体表达，以及通过标准条件下的蛋白G树脂上的亲和色谱进行纯化。
抗hErbB3单克隆抗体04D01产生自上述免疫A。抗hErbB3单克隆抗体09D03、11G01、12A07、18H02,22A02以及24C05产生自上述免疫B。
实例2-抗hErbB3单克隆抗体的序列分析
根据制造商的说明书（罗氏应用科学（RocheAppliedScience）），使用IsoStripTM小鼠单克隆抗体同种型试剂盒，对实例1中每一单克隆抗体的轻链同种型与重链同种型进行确定。所有的抗体都被确定为Kappa轻链以及IgG1或IgG2bIgG重链。
使用5’RACE（cDNA末端快速扩增）对这些小鼠单克隆抗体的重链与轻链可变区进行测序。根据提供商的说明书（Qiagen），使用小量制备试剂盒从每一单克隆杂交瘤细胞系提取总RNA。根据制造商的说明书，使用5’RACE随机引物，使用GeneRacerTM试剂盒（Invitrogen公司）亦或SMARTerTMRACEcDNA扩增试剂盒（Clontech），产生包含5’末端的全长第一链cDNA。
根据制造商的说明书，使用KOD热启动聚合酶（Novagen）或高级2聚合酶混合物（Clontech），通过PCR扩增该Kappa以及重（IgG1或IgG2b）IgG链的可变区。为了结合GeneRacerTM试剂盒，扩增5’cDNA末端，使用GeneRacerTM5’引物5’cgactggagcacgaggacactga3’（SEQID号:136）（Invitrogen公司）作为5’引物。为了结合SMARTerTMRACEcDNA扩增试剂盒，扩增5’cDNA末端，使用通用引物混合物A（UniversalPrimerMixA）引物（Clontech）（5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT3’（SEQID号:137）和5’CTAATACGACTCACTATAGGGC3’（SEQID号:138）的混合物）作为5’引物。使用以上5’引物和3’IgG1恒定区特异引物（5’TATGCAAGGCTTACAACCACA3’（SEQID号:139）亦或5’GCCAGTGGATAGACAGATGGGGGTGTCG3’（SEQID号:140））扩增重链可变区。用5’AGGACAGGGGTTGATTGTTGA3’（SEQID号:141）、5’GGCCAGTGGATAGACTGATGGGGGTGTTGT3’（SEQID号:142）亦或5’GGAGGAACCAGTTGTATCTCCACACCCA3’（SEQID号:143）扩增IgG2b序列。用以上5’引物和3’Kappa恒定区特异引物（5’CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT3’（SEQID号:144）亦或5’CGACTGAGGCACCTCCAGATGTT3’（SEQID号:145））扩增Kappa链可变区。
通过琼脂糖凝胶电泳来分离单个PCR产物，并且使用凝胶纯化试剂盒（GelPurificationkit）（Qiagen），根据制造商的说明书进行纯化。使用ZeroPCR克隆试剂盒（ZeroPCRCloningKit），根据制造商（Invitrogen公司）的说明书，将这些PCR产物相继地克隆进入4Blunt质粒，并且通过标准的分子生物学技术转化进入DH5-α细菌（Invitrogen公司）。由BeckmanGenomics公司，使用M13正向（5’GTAAAACGACGGCCAGT3’）（SEQID号:146）和M13反向（5’CAGGAAACAGCTATGACC3’）（SEQID号:147）引物，使用标准的双脱氧DNA测序方法对从转化细菌克隆中分离而来的质粒DNA进行测序，以鉴定这些可变区序列的序列。使用VectorNTI软件（Invitrogen公司）以及IMGT/V-Quest软件对这些序列进行分析，以鉴定并且确定可变区序列。
编码这些鼠单克隆抗体的可变区的核酸序列与定义这些鼠单克隆抗体的可变区的蛋白序列总结于下（氨基末端信号肽序列未展示）。CDR序列（Kabat定义）以这些氨基酸序列中的粗体/下划线来展示。
编码04D01抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:1）
1caggtccaactgcagcagcctggggctgaactggtgaggcctgggacttcagtgaagttg
61tcctgcaaggcttctggctacaccttcaccagccactggttgcactgggtgaagcagagg
121cctggacaaggccttgagtggatcggagtgcttgatccttctgatttttatagtaactac
181aatcaaaacttcaagggcaaggccacattgactgtagacacatcctccagcacagcctac
241atgcagctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcacgaggccta
301ctatccggggactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca
定义04D01抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:2）
1qvqlqqpgaelvrpgtsvklsckasgytftshwlhwvkqrpgqglewigvldpsdfysny
61nqnfkgkatltvdtssstaymqlssltsedsavyycargllsgdyamdywgqgtsvtvss
编码04D01抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:3）
1gatgttttgatgacccaaattccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctcc
61atctcttgcagatctagtcagagcattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatgg
121tacctgcagaaaccaggccagtctccaaagtccctgatctacaaagtttctaaccgattt
181tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
241agcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcatatgttccg
301tggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
定义04D01抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:4）
1dvlmtqiplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewylqkpgqspksliykvsnrf
61sgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpwtfgggtkleik
编码09D03抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:11）
1caggttactctaaaagagtctggccctgggatattgcggccctcccagaccctcagtctg
61acttgttctttctctgggttttcactgagcacttttggtttgagtgtaggctggattcgt
121cagccttcagggaagggtctggagtggctggcacacatttggtgggatgatgataagtac
181tataacccagcccttaagagtcggctcacaatctccaaggatacctccaaaaaccaggta
241ttcctcaagatcgccaatgtggacactgcagatactgccacatactactgtgctcgaata
301ggggcggacgcccttccttttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca
定义09D03抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:12）
1qvtlkesgpgilrpsqtlsltcsfsgfslstfglsvgwirqpsgkglewlahiwwdddky
61ynpalksrltiskdtsknqvflkianvdtadtatyycarigadalpfdywgqgttltvss
编码09D03抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:13）
1gatattgtgttgactcagactgcaccctctgtacctgtcactcctggagagtcagtatcc
61atctcctgcaggtctagtaagagtctcctgcatagtaatggcaacacttacttgtattgg
121ttcctgcagaggccaggccagtctcctcagctcctgatatatcggatgtccaaccttgcc
181tcaggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggaactgctttcacactgagaatc
241agtagagtggaggctgaggatgtgggtgtttattactgtatgcaacatctagaatatcct
301ttcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaa
定义09D03抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:14）
1divltqtapsvpvtpgesvsiscrssksllhsngntylywflqrpgqspqlliyrmsnla
61sgvpdrfsgsgsgtaftlrisrveaedvgvyycmqhleypftfgsgtkleik
编码11G01抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:21）
1caggttcagctgcaacagtctgacgctgagttggtgaaacctggagcttcagtgaagata
61tcctgcaaggtttctggctacaccttcactgaccatattattcactggatgaagcagagg
121cctgaacagggcctggaatggattggatatatttatcctagagatggttatattaagtac
181aatgagaagttcaagggcaaggccacattgactgcagacaaatcctccagcacagcctac
241atgcaggtcaacagcctgacatctgaggactctgcagtctatttctgtgcaaggggttac
301tattatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctca
定义11G01抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:22）
1qvqlqqsdaelvkpgasvkisckvsgytftdhiihwmkqrpeqglewigyiyprdgyiky
61nekfkgkatltadkssstaymqvnsltsedsavyfcargyyyamdywgqgtsvtvss
编码11G01抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:23）
1gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctcc
61atctcttgcagatctagtcagagcattgtacatagtattggaaacacctatttagaatgg
121tacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt
181tctggggtcccagagaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
241agcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcacatgttcca
301ttcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaa
定义11G01抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:24）
1dvlmtqtplslpvslgdqasiscrssqsivhsigntylewylqkpgqspklliykvsnrf
61sgvperfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshvpftfgsgtkleik
编码12A07抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:30）
1caggtccaactgctgcagcctggggctgagctggtgaggcctgggacttcagtgaagttg
61tcctgcaagacttctggctacaccttctccagctactggatgcactgggtaaagcagagg
121cctggacaaggccttgagtggatcggaatgattgatccttctgatgtttatactaactac
181aatccaaagttcaagggcaaggccacattgactgttgacacatcctccagcacagcctac
241atgcagctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagaaactac
301tctggggactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca
定义12A07抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:31）
1qvqllqpgaelvrpgtsvklscktsgytfssywmhwvkqrpgqglewigmidpsdvytny
61npkfkgkatltvdtssstaymqlssltsedsavyycarnysgdywgqgttltvss
编码12A07抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:32）
1gatgttttgatgacccaaattccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctcc
61atctcttgtagatctagtcagagcattgtccatagtaatggaaacacctatttagaatgg
121tacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt
181tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
241agcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcatatgttccg
301tggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
定义12A07抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:33）
1dvlmtqiplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewylqkpgqspklliykvsnrf
61sgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpwtfgggtkleik
编码18H02抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:37）
1cagatccagttggtacagtctggacctgaactgaagaagcctggagaggcagtcaagatc
61tcctgcaagtcttctgggtataccttcacaacctatggaatgagctgggtgaaacaggct
121ccaggaagggctttaaagtggatgggctggataaacacctactctggagtgccaacatat
181gctgatgacttcaagggacggtttgccttctctttggaatcctctgccagcactgcctat
241ttgcagatcaacaacctcaaaaatgaggacacggctacatatttctgtgcaagagggagg
301gatggttaccaagtggcctggtttgcttactggggccaagggacgctggtcactgtctct
361gca
定义18H02抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:38）
1qiqlvqsgpelkkpgeavkisckssgytfttygmswvkqapgralkwmgwintysgvpty
61addfkgrfafslessastaylqinnlknedtatyfcargrdgyqvawfaywgqgtlvtvs
121a
编码18H02抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:39）
1gaaacaactgtgacccagtctccagcatccctgtccatggctataggagataaagtcacc
61atcagatgcataaccagcactgatattgatgatgatatgaactggttccagcagaagcca
121ggggaacctcctaagctccttatttcagaaggcaatactcttcgtcctggagtcccatcc
181cgattctccggcagtggctatggtacagattttatttttacaattgaaaacatgctctct
241gaagatgttgcagattactactgtttgcaaagtgataacttgccgtacacgttcggaggg
301gggaccaagctggaaataaaa
定义18H02抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:40）
1ettvtqspaslsmaigdkvtircitstdidddmnwfqqkpgeppkllisegntlrpgvps
61rfsgsgygtdfiftienmlsedvadyyclqsdnlpytfgggtkleik
编码22A02抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:47）
1caggtccaactgcagcagcctggggctgagctggtgaggcctgggacttcagtgaagttg
61tcctgcaaggcttctggctacaccttcaccaactactggatgcactgggtaaagcagagg
121cctggacaaggccttgagtggatcggaatgattgatccttctgatagttatactaactac
181aatccaaagttcaagggtaaggccacattgactgtagacacatcctccagcacagcctac
241atgcagctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagaaactac
301tctggggactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca
定义22A02抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:48）
1qvqlqqpgaelvrpgtsvklsckasgytftnywmhwvkqrpgqglewigmidpsdsytny
61npkfkgkatltvdtssstaymqlssltsedsavyycarnysgdywgqgttltvss
编码22A02抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:49）
1gatgttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctcc
61atctcttgcagatctagtcagagcattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatgg
121tacctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattt
181tctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatc
241agcagagtggaggctgaggatctgggagtttattattgctttcaaggttcatatgttccg
301tggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa
定义22A02抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:50)
1dvlmtqtplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewylqkpgqspklliykvsnrf
61sgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpwtfgggtkleik
编码24C05抗体的重链可变区的核酸序列（SEQID号:53）
1gaggtgcagctggtggaatctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactc
61tcctgtgcagcctctggattcactttcagtgactatgccatgtcttgggttcgccagact
121ccggaaaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggtacttacacctactat
181ccagacaatgtaaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaacctgtac
241ctgcaaatgagccatctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagagaatgg
301ggtgattacgacggatttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcg
定义24C05抗体的重链可变区的蛋白序列（SEQID号:54）
1evqlvesggglvkpggslklscaasgftfsdyamswvrqtpekrlewvatisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnaknnlylqmshlksedtamyycarewgdydgfdywgqgttltvss
编码24C05抗体的Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:55）
1gacatccagatgacccagtctccatcctccttatctgcctctctgggagaaagagtcagt
61ctcacttgtcgggcaagtcaggaaattagtggttacttaagctggcttcagcagaaacca
121gatggaactattaaacgcctgatctacgccgcatccactttagattctggtgtcccaaaa
181aggttcagtggcagtaggtctgggtcagattattctctcaccatcggcagccttgagtct
241gaagatcttgcagactattactgtctacaatatgatagttatccgtacacgttcggaggg
301gggaccaagctggaaataaaa
定义24C05抗体的Kappa链可变区的蛋白序列（SEQID号:56）
1diqmtqspsslsaslgervsltcrasqeisgylswlqqkpdgtikrliyaastldsgvpk
61rfsgsrsgsdysltigslesedladyyclqydsypytfgggtkleik
定义实例1中产生的这些抗体的免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列在图2中进行了比对。氨基末端信号肽序列（用于适当的表达/分泌）没有展示出。CDR1、CDR2以及CDR3（Kabat定义）通过方框来鉴别。图3展示了每一抗体的分开的CDR1、CDR2以及CDR3序列的比对。
定义实例1中的这些抗体的免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列在图4中进行了比对。氨基末端信号肽序列（用于适当的表达/分泌）没有展示出。CDR1、CDR2以及CDR3通过方框来鉴别。图5展示了每一抗体的分开的CDR1、CDR2以及CDR3序列的比对。
表1是一个索引表，展示了在这一实例中所讨论的每一序列的SEQID号.。
表1
SEQ.ID号 核酸或蛋白
1 04D01重链可变区—核酸
2 04D01重链可变区—蛋白
3 04D01轻（kappa）链可变区—核酸
4 04D01轻（kappa）链可变区—蛋白
5 04D01重链CDR1
6 04D01重链CDR2
7 04D01重链CDR3
8 04D01轻（kappa）链CDR1
9 04D01轻（kappa）链CDR2
10 04D01轻（kappa）链CDR3
11 09D03重链可变区—核酸
12 09D03重链可变区—蛋白
13 09D03轻（kappa）链可变区—核酸
14 09D03轻（kappa）链可变区—蛋白
15 09D03重链CDR1
16 09D03重链CDR2
17 09D03重链CDR3
18 09D03轻（kappa）链CDR1
19 09D03轻（kappa）链CDR2
20 09D03轻（kappa）链CDR3
21 11G01重链可变区—核酸19 -->
22 11G01重链可变区—蛋白
23 11G01轻（kappa）链可变区—核酸
24 11G01轻（kappa）链可变区—蛋白
25 11G01重链CDR1
26 11G01重链CDR2
27 11G01重链CDR3
28 11G01轻（kappa）链CDR1
SEQ.ID号 核酸或蛋白
9 11G01轻（kappa）链CDR2
表1（续）
SEQ.ID号 核酸或蛋白
29 11G01轻（kappa）链CDR3
30 12A07重链可变区—核酸
31 12A07重链可变区—蛋白
32 12A07轻（kappa）链可变区—核酸
33 12A07轻（kappa）链可变区—蛋白
34 12A07重链CDR1
35 12A07重链CDR2
36 12A07重链CDR3
8 12A07轻（kappa）链CDR1
9 12A07轻（kappa）链CDR2
10 12A07轻（kappa）链CDR3
37 18H02重链可变区—核酸
38 18H02重链可变区—蛋白
39 18H02轻（kappa）链可变区—核酸
40 18H02轻（kappa）链可变区—蛋白
41 18H02重链CDR1
42 18H02重链CDR2
43 18H02重链CDR3
44 18H02轻（kappa）链CDR1
45 18H02轻（kappa）链CDR2
46 18H02轻（kappa）链CDR3
47 22A02重链可变区—核酸
48 22A02重链可变区—蛋白
49 22A02轻（kappa）链可变区—核酸
50 22A02轻（kappa）链可变区—蛋白
51 22A02重链CDR120 -->
52 22A02重链CDR2
36 22A02重链CDR3
8 22A02轻（kappa）链CDR1
9 22A02轻（kappa）链CDR2
表1（续）
SEQ.ID号 核酸或蛋白
10 22A02轻（kappa）链CDR3
53 24C05重链可变区—核酸
54 24C05重链可变区—蛋白
55 24C05轻（kappa）链可变区—核酸
56 24C05轻（kappa）链可变区—蛋白
57 24C05重链CDR1
58 24C05重链CDR2
59 24C05重链CDR3
60 24C05轻（kappa）链CDR1
61 24C05轻（kappa）链CDR2
62 24C05轻（kappa）链CDR3
小鼠单克隆抗体重链CDR序列（Kabat、Chothia以及IMGT定义）展示在表2中。
表2
表2（续）
表2（续）
小鼠单克隆抗体Kappa轻链CDR序列（Kabat、Chothia以及IMGT定义）展示在表3中。
表3
表3（续）
在表2与3中，该免疫球蛋白重链与轻链的最长CDR序列以粗体展示。
为了产生最完整的重链或kappa链抗体序列，以上的每一可变序列都结合其对应的恒定区。例如，完整的重链包括一种随后是鼠IgG1或IgG2b重链恒定区序列的重可变序列，并且完整的kappa链包括一种随后是鼠kappa轻链恒定区序列的Kappa可变序列。
编码鼠IgG1重链恒定区的核酸序列（SEQID号:102）
1gccaaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaac
61tccatggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacc
121tggaactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgac
181ctctacactctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagccagaccgtc
241acctgcaacgttgcccacccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagg
301gattgtggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttc
361cccccaaagcccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtg
421gtagacatcagcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggag
481gtgcacacagctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtc
541agtgaacttcccatcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtc
601aacagtgcagctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccg
661aaggctccacaggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtc
721agtctgacctgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtgg
781aatgggcagccagcggagaactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctct
841tacttcgtctacagcaagctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttc
901acctgctctgtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccac
961tctcctggtaaa
定义鼠IgG1重链恒定区的蛋白序列（SEQID号:103）
1akttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgslssgvhtfpavlqsd
61lytlsssvtvpsstwpsqtvtcnvahpasstkvdkkivprdcgckpcictvpevssvfif
121ppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvevhtaqtqpreeqfnstfrsv
181selpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpkapqvytipppkeqmakdkv
241sltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgsyfvysklnvqksnweagntf
301tcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码鼠IgG2b重链恒定区的核酸序列（SEQID号:104）
1gccaaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggt
61tcctctgtgactctgggatgcctggtcaagggctacttccctgagtcagtgactgtgact
121tggaactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctgga
181ctctacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtc
241acctgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagc
301gggcccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagct
361cctaacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactc
421atgatctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgaccca
481gacgtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacc
541catagagaggattacaacagtactatccgggtggtcagcaccctccccatccagcaccag
601gactggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtcaacaacaaagacctcccatcaccc
661atcgagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacatcttg
721ccgccaccagcagagcagttgtccaggaaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggc
781ttcaaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactac
841aaggacaccgcaccagtcctagactctgacggttcttacttcatatatagcaagctcaat
901atgaaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggt
961ctgaaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaa
定义鼠IgG2b重链恒定区的蛋白序列（SEQID号:105）
1akttppsvyplapgcgdttgssvtlgclvkgyfpesvtvtwnsgslsssvhtfpallqsg
61lytmsssvtvpsstwpsqtvtcsvahpassttvdkklepsgpistinpcppckechkcpa
121pnleggpsvfifppnikdvlmisltpkvtcvvvdvseddpdvqiswfvnnvevhtaqtqt
181hredynstirvvstlpiqhqdwmsgkefkckvnnkdlpspiertiskikglvrapqvyil
241pppaeqlsrkdvsltclvvgfnpgdisvewtsnghteenykdtapvldsdgsyfiyskln
301mktskwektdsfscnvrheglknyylkktisrspgk
编码鼠Kappa轻链恒定区的核酸序列（SEQID号:106）
1cgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtgagcagttaacatct
61ggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttgaacaacttctaccccagagacatcaatgtcaag
121tggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggtgtcctgaacagttggactgatcaggac
181agcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcacattgaccaaggacgagtatgaa
241cgacataacagctatacctgtgaggccactcacaagacatcaacttcacccattgtcaag
301agcttcaacaggaatgagtgt
定义鼠Kappa轻链恒定区的蛋白序列（SEQID号:107）
1radaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfyprdinvkwkidgserqngvlnswtdqd
61skdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
以下序列表示在这一实例中描述的每一抗体的实际的或互补的全长重链或轻链序列（即，包含可变区与恒定区序列这二者）。用于这些抗体适当分泌的信号序列还被包括在这些DNA序列5’末端或这些蛋白序列的氨基末端。这些可变区序列可以连接至其他恒定区序列，以产生活性的全长IgG重链与轻链。
编码04D01的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号: 108）
1atgggatggagctgtatcattgtcctcttggtatcaacagctacaggtgtccactcccag
61gtccaactgcagcagcctggggctgaactggtgaggcctgggacttcagtgaagttgtcc
121tgcaaggcttctggctacaccttcaccagccactggttgcactgggtgaagcagaggcct
181ggacaaggccttgagtggatcggagtgcttgatccttctgatttttatagtaactacaat
241caaaacttcaagggcaaggccacattgactgtagacacatcctccagcacagcctacatg
301cagctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcacgaggcctacta
361tccggggactatgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcagcc
421aaaacgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactcc
481atggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctgg
541aactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctc
601tacactctgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggcccagccagaccgtcacc
661tgcaacgttgcccacccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagggat
721tgtggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttcccc
781ccaaagcccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtggta
841gacatcagcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggaggtg
901cacacagctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagt
961gaacttcccatcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaac
1021agtgcagctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaag
1081gctccacaggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagt
1141ctgacctgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaat
1201gggcagccagcggagaactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctcttac
1261ttcgtctacagcaagctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttcacc
1321tgctctgtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactct
1381cctggtaaa
定义04D01的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 109）
1mgwsciivllvstatgvhsqvqlqqpgaelvrpgtsvklsckasgytftshwlhwvkqrp
61gqglewigvldpsdfysnynqnfkgkatltvdtssstaymqlssltsedsavyycargll
121sgdyamdywgqgtsvtvssakttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtw
181nsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsqtvtcnvahpasstkvdkkivprd
241cgckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvev
301htaqtqpreeqfnstfrsvselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpk
361apqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgsy
421fvysklnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码04D01的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 110）
1atgaagttgcctgttaggctgttggtgctgatgttctggattcctgcttccagcagtgat
61gttttgatgacccaaattccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatc
121tcttgcagatctagtcagagcattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatggtac
181ctgcagaaaccaggccagtctccaaagtccctgatctacaaagtttctaaccgattttct
241ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagc
301agagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcaaggttcatatgttccgtgg
361acgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc
421atcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttg
481aacaacttctaccccagagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaa
541aatggtgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagc
601agcaccctcacattgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggcc
661actcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义04D01的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 111）
1mklpvrllvlmfwipasssdvlmtqiplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewy
61lqkpgqspksliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpw
121tfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfyprdinvkwkidgserq
181ngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码09D03的全长重链序列（重链可变区和IgG2b恒定区）的核酸序列（SEQID号: 112）
1atgggcaggcttacttcttcattcctgttactgattgtccctgcatatgtcctgtcccag
61gttactctaaaagagtctggccctgggatattgcggccctcccagaccctcagtctgact
121tgttctttctctgggttttcactgagcacttttggtttgagtgtaggctggattcgtcag
181ccttcagggaagggtctggagtggctggcacacatttggtgggatgatgataagtactat
241aacccagcccttaagagtcggctcacaatctccaaggatacctccaaaaaccaggtattc
301ctcaagatcgccaatgtggacactgcagatactgccacatactactgtgctcgaataggg
361gcggacgcccttccttttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagcc
421aaaacaacacccccatcagtctatccactggcccctgggtgtggagatacaactggttcc
481tccgtgacctctgggtgcctggtcaaggggtacttccctgagccagtgactgtgacttgg
541aactctggatccctgtccagcagtgtgcacaccttcccagctctcctgcagtctggactc
601tacactatgagcagctcagtgactgtcccctccagcacctggccaagtcagaccgtcacc
661tgcagcgttgctcacccagccagcagcaccacggtggacaaaaaacttgagcccagcggg
721cccatttcaacaatcaacccctgtcctccatgcaaggagtgtcacaaatgcccagctcct
781aacctcgagggtggaccatccgtcttcatcttccctccaaatatcaaggatgtactcatg
841atctccctgacacccaaggtcacgtgtgtggtggtggatgtgagcgaggatgacccagac
901gtccagatcagctggtttgtgaacaacgtggaagtacacacagctcagacacaaacccat
961agagaggattacaacagtactatccgggtggtcagcaccctccccatccagcaccaggac
1021tggatgagtggcaaggagttcaaatgcaaggtgaacaacaaagacctcccatcacccatc
1081gagagaaccatctcaaaaattaaagggctagtcagagctccacaagtatacactttgccg
1141ccaccagcagagcagttgtccaggaaagatgtcagtctcacttgcctggtcgtgggcttc
1201aaccctggagacatcagtgtggagtggaccagcaatgggcatacagaggagaactacaag
1261gacaccgcaccagttcttgactctgacggttcttacttcatatatagcaagctcaatatg
1321aaaacaagcaagtgggagaaaacagattccttctcatgcaacgtgagacacgagggtctg
1381aaaaattactacctgaagaagaccatctcccggtctccgggtaaa
定义09D03的全长重链序列（重链可变区和IgG2b恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 113）
1mgrltssflllivpayvlsqvtlkesgpgilrpsqtlsltcsfsgfslstfglsvgwirq
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421dtapvldsdgsyfiysklnmktskwektdsfscnvrheglknyylkktisrspgk
编码09D03的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 114）
1atgaggtgcctagctgagttcctggggctgcttgtgctctggatccctggagccattggg
61gatattgtgttgactcagactgcaccctctgtacctgtcactcctggagagtcagtatcc
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301agtagagtggaggctgaggatgtgggtgtttattactgtatgcaacatctagaatatcct
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541caaaatggtgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatg
601agcagcaccctcacattgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgag
661gccactcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义09D03的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号:115）
1mrclaeflgllvlwipgaigdivltqtapsvpvtpgesvsiscrssksllhsngntylyw
61flqrpgqspqlliyrmsnlasgvpdrfsgsgsgtaftlrisrveaedvgvyycmqhleyp
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181qngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码11G01的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号: 116）
1atggaatggagctgggtctctctcttcttcctgtcagtaactacaggtgtccactcccag
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901cagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaacttccc
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1321ttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcctggtaaa
定义11G01的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 117）
1mewswvslfflsvttgvhsqvqlqqsdaelvkpgasvkisckvsgytftdhiihwmkqrp
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编码11G01的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 118）
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661actcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义11G01的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 119）
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181ngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码12A07的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号: 120）
1atgggatggagctgtatcattgtcctcttggtatcaacagctacatgtgtccactcccag
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541tccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacactctgagcagc
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901caaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaacttcccatcatg
961caccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaacagtgcagctttccct
1021gcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaaggctccacaggtgtac
1081accattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctgacctgcatgata
1141acagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcagccagcggag
1201aactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctcttacttcgtctacagcaag
1261ctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttcacctgctctgtgttacat
1321gagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcctggtaaa
定义12A07的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 121）
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421lnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码12A07的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 122）
1atgaagttgcctgttaggctgttggtgctgatgttctggattcctgcttccagcagtgat
61gttttgatgacccaaattccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatc
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541aatggtgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagc
601agcaccctcacattgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggcc
661actcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义12A07的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号:123）
1mklpvrllvlmfwipasssdvlmtqiplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewy
61lqkpgqspklliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpw
121tfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfyprdinvkwkidgserq
181ngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码18H02的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号: 124）
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481tccatggtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacc
541tggaactctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgac
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661acctgcaacgttgcccacccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagg
721gattgtggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttc
781cccccaaagcccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtg
841gtagacatcagcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggag
901gtgcacacagctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtc
961agtgaacttcccatcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtc
1021aacagtgcagctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccg
1081aaggctccacaggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtc
1141agtctgacctgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtgg
1201aatgggcagccagcggagaactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctct
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1321acctgctctgtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccac
1381tctcctggtaaatga
定义18H02的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 125）
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61gralkwmgwintysgvptyaddfgrfafslessastaylqinnlknedtatyfcargrd
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361kapqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgs
421yfvysklnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码18H02的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 126）
1atgttctcactagctcttctcctcagtcttcttctcctctgtgtctctgattctagggca
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421tccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttgaacaacttctac
481cccagagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggtgtcctg
541aacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagcagcaccctcaca
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661tcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgttag
定义18H02的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 127）
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61geppkllisegntlrpgvpsrfsgsgygtdfiftienmlsedvadyyclqsdnlpytfgg
121gtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfyprdinvkwkidgserqngvl
181nswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码22A02的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号:128）
1atgggatggagctgtatcattgtcctcttggtatcaacagctacaggtgtccactcccag
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181ggacaaggccttgagtggatcggaatgattgatccttctgatagttatactaactacaat
241ccaaagttcaagggtaaggccacattgactgtagacacatcctccagcacagcctacatg
301cagctcagcagcctgacatctgaggactctgcggtctattactgtgcaagaaactactct
361ggggactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagccaaaacgacaccccca
421tctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatggtgaccctggga
481tgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaactctggatccctg
541tccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctacactctgagcagc
601tcagtgactgtcccctccagcacctggcccagccagaccgtcacctgcaacgttgcccac
661ccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagggattgtggttgtaagcct
721tgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttccccccaaagcccaaggat
781gtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtggtagacatcagcaaggat
841gatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggaggtgcacacagctcagacg
901caaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaacttcccatcatg
961caccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaacagtgcagctttccct
1021gcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaaggctccacaggtgtac
1081accattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctgacctgcatgata
1141acagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcagccagcggag
1201aactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctcttacttcgtctacagcaag
1261ctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttcacctgctctgtgttacat
1321gagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcctggtaaa
定义22A02的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 129）
1mgwsciivllvstatgvhsqvqlqqpgaelvrpgtsvklsckasgytftnywmhwvkqrp
61gqglewigmidpsdsytnynpkfkgkatltvdtssstaymqlssltsedsavyycarnys
121gdywgqgttltvssakttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgsl
181ssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsqtvtcnvahpasstkvdkkivprdcgckp
241cictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvevhtaqt
301qpreeqfnstfrsvselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpkapqvy
361tipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgsyfvysk
421lnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码22A02的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 130）
1atgaagttgcctgttaggctgttggtgctgatgttctggattcctgcttccagcagtgat
61gttttgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttggagatcaagcctccatc
121tcttgcagatctagtcagagcattgtacatagtaatggaaacacctatttagaatggtac
181ctgcagaaaccaggccagtctccaaagctcctgatctacaaagtttccaaccgattttct
241ggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagc
301agagtggaggctgaggatctgggagtttattattgctttcaaggttcatatgttccgtgg
361acgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcaccaactgtatcc
421atcttcccaccatccagtgagcagttaacatctggaggtgcctcagtcgtgtgcttcttg
481aacaacttctaccccagagacatcaatgtcaagtggaagattgatggcagtgaacgacaa
541aatggtgtcctgaacagttggactgatcaggacagcaaagacagcacctacagcatgagc
601agcaccctcacattgaccaaggacgagtatgaacgacataacagctatacctgtgaggcc
661actcacaagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义22A02的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 131）
1mklpvrllvlmfwipasssdvlmtqtplslpvslgdqasiscrssqsivhsngntylewy
61lqkpgqspklliykvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgsyvpw
121tfgggtkleikradaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfyprdinvkwkidgserq
181ngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
编码24C05的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号: 132）
1atgaacttcgggctcagcttgatgttccttgtccttgtcttaaaaggtgtccagtgtgag
61gtgcagctggtggaatctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcc
121tgtgcagcctctggattcactttcagtgactatgccatgtcttgggttcgccagactccg
181gaaaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggtacttacacctactatcca
241gacaatgtaaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaacctgtacctg
301caaatgagccatctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagagaatggggt
361gattacgacggatttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcggccaaa
421acgacacccccatctgtctatccactggcccctggatctgctgcccaaactaactccatg
481gtgaccctgggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgacctggaac
541tctggatccctgtccagcggtgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtctgacctctac
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661aacgttgcccacccggccagcagcaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagggattgt
721ggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttcccccca
781aagcccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtggtagac
841atcagcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggaggtgcac
901acagctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaa
961cttcccatcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtcaacagt
1021gcagctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaaggct
1081ccacaggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctg
1141acctgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatggg
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1261gtctacagcaagctcaatgtgcagaagagcaactgggaggcaggaaatactttcacctgc
1321tctgtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcct
1381ggtaaa
定义24C05的全长重链序列（重链可变区和IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 133）
1mnfglslmflvlvlkgvqcevqlvesggglvkpggslklscaasgftfsdyamswvrqtp
61ekrlewvatisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknnlylqmshlksedtamyycarewg
121dydgfdywgqgttltvssakttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwn
181sgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsqtvtcnvahpasstkvdkkivprdc
241gckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvevh
301taqtqpreeqfnstfrsvselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpka
361pqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgsyf
421vysklnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgk
编码24C05的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的核酸序列（SEQID号: 134）
1atggacatgagggttcctgctcacgtttttggcttcttgttgctctggtttccaggtacc
61agatgtgacatccagatgacccagtctccatcctccttatctgcctctctgggagaaaga
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661aagacatcaacttcacccattgtcaagagcttcaacaggaatgagtgt
定义24C05的全长轻链序列（Kappa链可变区和恒定区）的蛋白序列（SEQID号: 135）
1mdmrvpahvfgflllwfpgtrcdiqmtqspsslsaslgervsltcrasqeisgylswlqq
61kpdgtikrliyaastldsgvpkrfsgsrsgsdysltigslesedladyyclqydsypytf
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181vlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec
为了方便，表4提供了一个索引表，展示了在具有序列表中呈现的那些的实例中，所讨论的抗体的全长序列之间的对应性。
表4
SEQ ID号 核酸或蛋白
108 04D01重可变+IgG1恒定—核酸
109 04D01重可变+IgG1恒定—蛋白
110 04D01Kappa可变+恒定—核酸
111 04D01Kappa可变+恒定—蛋白
112 09D03重可变+IgG2b恒定—核酸
113 09D03重可变+IgG2b恒定—蛋白
114 09D03Kappa可变+恒定—核酸
表4（续）
SEQ ID号 核酸或蛋白
115 09D03Kappa可变+恒定—蛋白
116 11G01重可变+IgG1恒定—核酸
117 11G01重可变+IgG1恒定—蛋白
118 11G01Kappa可变+恒定—核酸
119 11G01Kappa可变+恒定—蛋白
120 12A07重可变+IgG1恒定—核酸
121 12A07重可变+IgG1恒定蛋白
SEQ ID号 核酸或蛋白
122 12A07Kappa可变+恒定—核酸
123 12A07Kappa可变+恒定—蛋白
124 18H02重可变+IgG1恒定—核酸
125 18H02重可变+IgG1恒定—蛋白
126 18H02Kappa可变+恒定—核酸
127 18H02Kappa可变+恒定—蛋白
128 22A02重可变+IgG1恒定—核酸36 -->
129 22A02重可变+IgG1恒定—蛋白
130 22A02Kappa可变+恒定—核酸
131 22A02Kappa可变+恒定—蛋白
132 24C05重可变+IgG1恒定—核酸
133 24C05重可变+IgG1恒定—蛋白
134 24C05Kappa可变+恒定—核酸
135 24C05Kappa可变+恒定—蛋白
实例3–结合亲和性
使用T100（Biacore）仪器，通过表面等离子体共振对单克隆抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05结合至重组人类ErbB3/Fc融合蛋白（rhErbB3-Fc）的结合亲和性与动力学进行测量。
根据提供商的说明，使用一种标准的偶联方案，通过胺偶合法（BIAcore，Cat.号BR-1000-50），将兔抗小鼠IgG（Biacore，Cat.号BR-1008-38）固定在羧甲基化葡聚糖CM4传感芯片（Biacore，Cat.号BR-1005-34）上。使用包含0.05%表面活性剂P20（Biacore，Cat.号BR-1000-54）的PBS（Invitrogen公司，Cat.号14040-133）作为运行缓冲液，在25°C下进行这些分析。
在10μl/分钟的流速下，在单个流动细胞中捕获这些抗体。每一抗体的注射时间不一，以产生一种30与60RU之间的Rmax。以60μl/分钟持续300秒，将缓冲液或稀释在运行缓冲液中的rhErbB3-Fc连续地注射经过参考表面（referencesurface）（无捕获的抗体）以及活性表面（activesurface）（有待测试的抗体）。持续监测该解离相达3600秒。然后在60μl/分钟的流速下，用pH1.7（从甘氨酸pH1.5制作（Biacore，Cat.号BR-1003-54））和pH2.0（Biacore，Cat.号BR-1003-55）的10mM甘氨酸-HCl的两个60秒的注射来再生该表面。该rhErbB3-Fc的测试浓度范围是0.125nM至20nM。
使用减去两倍参考的BIAevaluation软件（Biacore）的动力学函数确定多个动力学参数。确定每一抗体的动力学参数（ka（结合速率常数），kd（解离速率常数以及KD（平衡解离常数）））。这些单克隆抗体在25°C下对rhErbB3-Fc的动力学值总结于表5中。
表5
表5中的数据证明，这些抗体以大约350pM或更低、250pM或更低、200pM或更低、150pM或更低、100pM或更低、50pM或更低、或10pM或更低的KD结合rhErbB3。
实例4–中和活性
在该实例中，对实例1中产生的抗体抑制rhErbB3结合至NRG1-β1与NRG1-α1的能力进行测试。通过电化学发光（ECL）测定测试这些抗体对hErbB3结合至NRG1-β1的抑制。将MA240096孔标准结合平板（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号L15XA-6）涂上50μl在PBS（Invitrogen公司，Cat.号14040-133）中的0.5μg/mLrhErbB3/Fc（R&DSystems公司，Cat.号348-RB），无搅动地在4°C下过夜。然后用PBS+0.1%Tween20（Sigma公司P5927）洗涤这些平板3次，并且用200μl含有5%BSA（SeraCareLifeSciences公司，Cat.号AP-4510-80）的PBS在室温下封闭1.5小时。用PBS洗涤这些平板3次后，将25μl的抗体稀释物添加至这些平板，在室温下再搅动1小时。将配体NRG1-β1（R&DSystems公司，Cat.号377-HB,26kDa）添加至这些孔，终浓度为0.25μg/ml。用PBS洗涤这些平板三次，并且用25μl1μg/mL的抗人类NRG1-1（R&Dsystems公司，Cat.号BAF377）的与SULTO-TAG链亲和素（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号R32AD-5）预孵育一小时的生物素化抗体进行孵育，在室温下搅动一小时。然后用PBS洗涤这些平板3次，并且在Imager2400仪器（MesoScaleDiscovery公司）上对这些平板进行分析之前，将150μl的1X读取缓冲液（readbuffer）（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号R92TC-1）添加至每一孔。
NRG1-β1与ErbB3的相互作用受到抗体04D01、12A07、18H02、22A02以及24C05的抑制（图6A）。NRG1-β1与rhErbB3的相互作用被抗体09D03增强，但是不同于抗体11G01（图6B）。
对于这些抗体而言（即，04D01、12A07、18H02、22A02以及24C05），针对NRG1-β1结合至rhErbB3的中和的鼠抗人ErbB3抗体IC50值被计算并总结于表6中。
表6
这些结果展示抗体04D01、12A07、18H02、22A02以及24C05有效地对NRG1-β1结合至rhErbB3进行了中和。抗体09D03以及11G01增强了hNRG1-β1结合至hErbB3。
就抑制hErbB3结合至ErbB3第二配体NRG1-α1而言，通过ECL测定对这些抗体进行了测试。为了测定对NRG1-α1结合至rhErbB3的抑制，使用了对于NRG1-β1而言的相同方法，除了以下变化：平板化的rhErbB3/Fc（(R&D4518-RB）以及配体NRG1-α1（ThermoScientific，RP-317-P1AX）的浓度分别是1μg/ml以及1.5μg/ml。
NRG1-α1与rhErbB3的相互作用受到抗体11G01、12A07、18H02、22A02、以及24C05IgG1的抑制，并且受到抗体09D03的增强（图7）。
实例5-结合至ErbB3结构域II
在该实例中，就结合至hErbB3-ECD的二聚体化结构域（结构域2）而言，对实例1中产生的抗体进行了测试。将hErbB3的结构域2（位点210-327，118个氨基酸）代替Her2的结构域2（位点AA220-338，119个氨基酸），克隆进入全长Her2受体。将杂交构建体Her2/3d2克隆进入pLenti6.3，并且通过使用ViraPowerTMLentiviralSupport试剂盒（Invitrogen公司，Cat.号K497000）瞬时转染293T细胞而被包装到一种慢病毒中。用该表达Her2/3d2杂交蛋白的慢病毒感染CHO细胞。通过ECL，使用硫标签抗小鼠抗体，在这些工程化的CHO细胞上测试抗ErbB3杂交瘤上清液结合至Her2/3d2。有关这些杂交瘤上清液结合至表达在CHO细胞表面的嵌合蛋白Her2/3d2的数据总结于图8中。这些结果显示，抗体09D03以及11G01结合至ErbB3结构域II，AA210-327。
实例6–抗增殖活性
该实例针对其抑制NRG1-β1依赖的细胞增殖的能力，对在实例1中产生的抗体的特征化进行了描述。在经工程化以表达人类Her2和ErbB3的BaF/3细胞系统中，以及在人类MCF7乳腺癌细胞（自然地表达Her2和ErbB3这二者并且响应NRG1-β1刺激而生长）中对抗体进行了测试。
用经工程化以表达人类Her2或人类ErbB3的两种慢病毒感染BaF/3细胞。用杀稻瘟菌素（15μg/ml；Invitrogen公司，Cat.号R21001）对受感染的细胞进行选择，并且分离单个克隆，并且针对两种受体的表达进行了测试。在杀稻瘟菌素选择下，用[80%RPMI1640培养基（RPMIMedium1640）（GIBCO公司，Cat.号11875-093），10%胎牛血清（GIBCO公司，Cat.号10438-026）以及10%WEHI细胞条件培养基{90%IMEM细胞培养基（ISCOVE’sModifiedDulbecco’sMedium）（GIBCO公司，Cat.号12440053），10%胎牛血清（GIBCO公司，Cat.号10438-026）+2mML-谷氨酰胺（GIBCO公司，Cat.号25030-081）+0.0025mM巯基乙醇（Invitrogen公司，Cat.号21985-023）}]，将表达Her2/ErbB3的克隆保持培养。为了筛选拮抗的ErbB3抗体，用PBS清洗细胞，并且将其在不存在杀稻瘟菌素以及WEHI条件培养基下进行生长。在96孔平板（5,000细胞/孔）中，在NRG1-β1（100ng/ml）以及不同抗体浓度（0.018-5000ng/ml，终体积100μl）的存在下进行测定。在NRG1-β1刺激3-4天之后，进行MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物）测定。
鼠抗人ErbB3抗体对Her2/ErbB3-BaF/3的依赖NRG1-β1的细胞增殖的剂量依赖性抑制的实例展示在图9中。单克隆抗体（即，04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）对依赖NRG1-β1的Her2/ErbB3-BaF/3细胞系增殖的抑制数据总结于表7中。
表7
表7中的结果显示，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05强烈抑制NRG1-β1诱导的、表达Her2/ErbB3的BaF/3细胞的增殖。
MCF7细胞（ATCC，Cat.号HTB-22）按ATCC推荐的进行保藏。在96孔平板中，将细胞按5,000细胞/孔进行接种。在无血清下将细胞饥饿过夜。次日，将NRG1-β1（40ng/ml）以及不同浓度的抗体（12.8pg/ml-20μg/ml，终体积100μl）添加至这些细胞。在NRG1-β1刺激三天之后，进行MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物）测定。
鼠抗人ErbB3抗体对依赖NRG1-β1的MCF7细胞增殖的剂量依赖性抑制的实例展示在图10中。单克隆抗体（04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05）对依赖NRG1-β1的MCF7细胞增殖的抑制数据总结于表8中。
表8
表8中的结果证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05强烈抑制NRG1-β1诱导的MCF7细胞的增殖。
还对实例1中产生的抗体进行了测试，针对它们抑制表达ErbB3的人类癌细胞增殖的能力。乳腺癌细胞过表达Her2并且对Her2特异性抑制抗体敏感。
SKBR-3细胞（ATCC，Cat.号HTB-30）按ATCC推荐的进行保藏。在5μg/ml抗体存在但无外源性NRG1-β1下，在96孔平板中，将细胞按5,000细胞/孔进行接种。在培养三天之后，进行MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物）测定。
鼠抗人ErbB3抗体对SKBR-3细胞增殖的抑制的实例展示在图11中。表11中的结果显示，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05抑制SKBR-3细胞的增殖。
实例7–下游信号的抑制
这一实例描述了在实例1中产生的抗体的特征化，针对它们抑制ErbB3以及下游激酶Akt的NRG1-β1依赖性磷酸化的能力（按PI3K激活读数）。还在指数生长的细胞中，测试了这些抗体，针对它们抑制ErbB3与Akt的稳态磷酸化的能力。
乳腺癌细胞SKBR-3以及MCF7细胞以及前列腺癌细胞DU145按ATCC推荐的进行保藏。在0%FBS中将细胞饥饿过夜，用5μg/ml抗体处理一小时，接着用NRG1-β1刺激。用Phospho-ErbB3试剂盒（来自R&DSystems公司，Cat.号DYC1769）亦或用Phospho-AktELISA试剂盒（来CellSignaling公司，Cat.号7143）通过ELISA对溶解产物进行分析。
鼠抗人ErbB3抗体对SKBR-3细胞中NRG1-β1诱导的ErbB3磷酸化的抑制的实例展示在图12中。图12中的结果证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05抑制了SKBR-3细胞中受NRG1-β1诱导的ErbB3磷酸化的至少50%。
鼠抗人ErbB3抗体对MCF7细胞和DU145细胞中NRG1-β1诱导的Akt磷酸化的抑制的实例分别展示在图13A与图13B中。图13A与图13B中的结果证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05抑制了MCF7细胞和DU145这两种细胞中响应NRG1-β1的Akt磷酸化的至少80%。
通过在5μg/ml抗体存在下，通过处理这些指数生长的细胞一小时，而对这些抗ErbB3抗体在乳腺癌细胞系SKBR-3和胰腺癌细胞系BxPC3中抑制ErbB3与Akt的稳态磷酸化状态的能力进行了测试。
这些实验的蛋白印迹分析证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05抑制了SKBR-3细胞与BxPC3细胞这二者中的Akt与ErbB3的稳态磷酸化水平。
实例8–NRG1-β1诱导的EGFR磷酸化的抑制
在该实例中，在卵巢癌细胞系NCI/ADR-RES中，测试了实例1中产生的抗体，针对它们抑制NRG1-β1依赖的EGFR磷酸化的能力。在0%FBS中将NCI/ADR-RES细胞（DTP/DCTDNCI肿瘤库）饥饿过夜，用抗体（5μg/ml）预处理一小时，接着用NRG1-β1（20ng/ml）刺激15分钟。用蛋白蛋白印迹来分析EGFR的酪氨酸1068上的磷酸化。这些实验的结果证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05在NCI/ADR-RES细胞中，抑制了响应该NRG1-β1的EGFR磷酸化。
实例9–EGF诱导的ErbB3磷酸化的抑制
在该实例中，在过表达EGFR的表皮样癌细胞系A431中，测试了实例1中产生的抗体，针对它们抑制EGF依赖的ErbB3磷酸化的能力。在0%FBS中将A431细胞（ATCC，Cat.号CRL-1555）饥饿过夜，用抗体（5μg/ml）预处理一小时，接着用EGF（R&DSystems公司，Cat.号236-EG）（50ng/ml）刺激15分钟。用蛋白蛋白印迹来分析ErbB3的磷酸化。这些实验的结果证明，抗体04D01、09D03、12A07、18H02、22A02以及24C05在不同程度上抑制了A431细胞中响应该EGF的ErbB3磷酸化。
实例10–NRG1-β1诱导的Her2/ErbB3异源二聚体形成的抑制
该实例描述了对实例1中产生的抗体的特征化，针对它们在SKBR-3中抑制响应NRG1-1的Her2/ErbB3二聚体的形成的能力。在0%FBS中将乳腺癌细胞SKBR-3饥饿过夜，用5μg/ml抗体处理一小时，接着用NRG1-β1刺激（30ng/ml，30min）。将溶解产物用抗Her2抗体（R&DSystems公司，Cat.号BAF1129）进行免疫沉淀，并且用多克隆抗ErbB3抗体（SantaCruz公司，Cat.号SC285）通过蛋白蛋白印迹进行分析。
这些实验的结果证明，抗体04D01、09D03、11G01、12A07、18H02、22A02以及24C05在SKBR-3细胞中抑制了NRG1-β1诱导的Her2/ErbB3二聚体的形成。
实例11–BxPC3肿瘤异种移植生长的抑制
在胰脏BxPC3异种移植模型中，对实例1中产生的鼠单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力进行了测试。使用含有10%胎牛血清的RMPI培养基，在含有5%CO2的气氛下，在37°C下于培养物中生长人类胰脏BxPC3细胞。将BxPC3细胞皮下接种进入8周龄的雌性CB.17SCID小鼠（Taconic实验室）肋部的肋部，每只小鼠接种10×106细胞（在50%基质胶中（BDBiosciences公司，Cat号356237））。每周两次使用游标卡尺进行对肿瘤测量。使用下式对肿瘤体积进行计算：宽×宽×长/2当肿瘤达到大约200mm3时，将这些小鼠随机分为9组，每组10只小鼠。一组接受PBS并且另一组接受人类IgG对照（huIgG）。该其他八组的每一组接受以下抗体之一：04D01、09D03、18H02、11G01、24C05、22A02、或12A07。所有抗体以20mg/kg体重为剂量，每周两次，通过腹膜内注射6周。记录肿瘤体积以及小鼠体重，每周两次。将肿瘤生长抑制使用ANOVA进行分析，并且表示为与该PBS对照相比的抑制百分比。
图14中的结果显示，在该模型中，抗体24C05抑制肿瘤生长76%（p<0.001）。在该模型中，抗体04D01、18H02以及11G01还分别抑制肿瘤生长64%、71%以及72%（p<0.001）。在该模型中，抗体12A07与22A02显示出最低的活性，即，接近40%的肿瘤生长抑制，而抗体09D03给出60%的肿瘤生长抑制。
实例12–抗ErbB3抗体的人源化
A.人源化的和嵌合的抗ErbB3抗体的构建
该实例描述了指定为24C05的鼠抗体的人源化，以及生成的人源化抗体的特征化。这些人源化抗ErbB3抗体是使用SUPERHUMANIZATIONTM方法（AranaTherapeuticsLtd.公司以及Hwang（黄）,W.Y.等人(2005)《方法》（METHODS）36:35-42），或使用具有回复突变的CDR移植方法（一些人类骨架残基被改变为鼠残基）（参见例如，美国专利号5,530,101；5,693,761；5,693,762；5,585,089；6,180,370；7,022,500）来进行设计的。除重链CDR1之外，这些KabatCDR定义被用于移植到人类骨架序列上的CDR。Kabat与Chothia定义的组合被用于移植重CDR1。将设计的氨基酸序列转换成密码子最佳化的DNA序列，并且由DNA2.0,Inc.公司进行合成以包括（以如下次序）：5’HindIII限制性酶切位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、人源化可变区、人类IgG1或Kappa恒定区、终止密码子以及3’EcoRI限制性酶切位点。额外地，使用重叠延伸PCR对一条人源化重链Sh24C05Hv3-11重IgG1进行突变以增强人源化，生成Sh24C05Hv3-11N62S重链IgG1。还构建了Sh24C05Hv3-11N62S重链的人类IgG2版本。
如在此描述的，这些根据SUPERHUMANIZATIONTM方法而人源化的抗ErbB3抗体链在该抗体链名称前用字首“Sh”来指定。如在此描述的，这些通过具有回复突变的CDR移植方法而人源化的抗ErbB3抗体链在该抗体链名称前用字首“Hu”来指定。
还构建了嵌合的（鼠可变区和人恒定区）24C05重链（人类IgG1）与轻链（人类Kappa）。使用重叠延伸PCR将这些鼠可变区融合至人恒定区，包括（以如下次序）：5’HindIII限制性酶切位点、Kozak共有序列、氨基末端信号序列、鼠可变区、人类IgG1或Kappa恒定区、终止密码子以及3’EcoRI限制性酶切位点。
使用In-FusionTMPCR克隆（Clontech公司），经由HindIII以及EcoRI限制性酶切位点将这些人源化的和嵌合的重链亚克隆进入pEE6.4（LonzaBiologics公司）。使用In-FusionTMPCR克隆，经由HindIII以及EcoRI限制性酶切位点，将这些人源化的和嵌合的Kappa轻链亚克隆进入pEE14.4（LonzaBiologics公司）。
将人源化抗体链或嵌合抗体链瞬时转染进入293T细胞以产生抗体。将抗体进行纯化亦或用在细胞培养基上清液中用于随后的体外分析。嵌合的和人源化的抗体对人类ErbB3的结合如以下描述的进行测量。这些结果总结于表15中。
额外地，使用GSSystemTM（LonzaBiologics公司）将一些人源化抗体重链和轻链组合稳定地表达在CHOK1SV细胞中，以产生大量纯化的人源化抗体。通过将基于pEE6.4与pEE14.4的载体组合来构建一种单一表达载体。首先，用NotI和SalI对包含全长人源化重链cDNA的pEE6.4进行消化，以分离hCMV-MIE启动子+全长人源化重链cDNA+SV40polyA片段。经由NotI/SalI限制性酶切位点将这一片段插入已经包含全长人源化轻链cDNA的pEE14.4载体中，由此产生一种同时表达重链和轻链的表达载体。将结合的重链和轻链载体线性化并且转染进入CHOK1SV细胞中。在蛋氨酸亚砜亚胺的存在下选择稳定的克隆。
这些人源化免疫球蛋白重链与免疫球蛋白轻链可变区的每一可能组合列于以下表9中。
表9
表9（续）
编码这些人源化24C05抗体的可变区的核酸序列与定义这些人源化24C05抗体的可变区的蛋白序列总结于下（氨基末端信号肽序列未展示）。这些氨基酸序列中的CDR序列（Kabat定义）以粗体显示并且下划线。
编码Sh24C05Hv3-7重链可变区的核酸序列（SEQID号:149）
1gaggttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtacaaccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgccaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttgccactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagtctctac
241ctgcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-7重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:150）
1evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdyamswvrqapgkglewvatisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Hv3-11重链可变区的核酸序列（SEQID号:151）
1caagttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatggatcaggcaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagtctctac
241cttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-11重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:152）
1qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswirqapgkglewvstisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区的核酸序列（SEQID号:153）
1caagttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatggatcaggcaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgactccgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagtctctac
241cttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:154）
1qvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswirqapgkglewvstisdggtytyy
61pdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Hv3-21重链可变区的核酸序列（SEQID号:155）
1gaggttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgccaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagtctctat
241ttgcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-21重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:156）
1evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswvrqapgkglewvstisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Hv3-23重链可变区的核酸序列（SEQID号:157）
1gaggttcagcttctggaatctggcggtgggcttgtacagccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgccaagca
121cccgggaaaggactggagtgggtttcaactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacagcaagaacacactctat
241ctccagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-23重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:158）
1evqllesggglvqpggslrlscaasgftfsdyamswvrqapgkglewvstisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Hv3-30重链可变区的核酸序列（SEQID号:159）
1caggttcagctggtggaatctggcggtggggtagtacaaccaggacggtccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgccaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttgccactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataactcaaagaacaccctctat
241ctccaaatgagtagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Sh24C05Hv3-30重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:160）
1qvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfsdyamswvrqapgkglewvatisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnskntlylqmsslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Hu24C05HvA重链可变区的核酸序列（SEQID号:161）
1gaggttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctcagactg
61agttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgccaagca
121cccgggaaaggactggagtgggttgccactatcagcgatggcggaacgtatacctattac
181cctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagtctctac
241cttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccgagaatgg
301ggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagttct
定义Hu24C05HvA重链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:162）
1evqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswvrqapgkglewvatisdggtytyy
61pdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarewgdydgfdywgqgtlvtvss
编码Sh24C05Kv1-9Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:163）
1gatattcagttgacccaatcacctagcttcctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtaccaacagaagccc
121ggaaaagcccctaagctgttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaacagagttcactctgacaatttctagccttcagcca
241gaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Sh24C05Kv1-9Kappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:164）
1diqltqspsflsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqqkpgkapklliyaastldsgvps
61rfsgsgsgteftltisslqpedfatyyclqydsypytfgqgtkleik
编码Sh24C05Kv1-16Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:165）
1gatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtttcaacagaagccc
121ggaaaggccccgaagagcttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaaccgactttactctgacaatttctagccttcagcca
241gaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Sh24C05Kv1-16Kappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:166）
1diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswfqqkpgkapksliyaastldsgvps
61rfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyclqydsypytfgqgtkleik
编码Sh24C05Kv1-17Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:167）
1gatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtatcaacagaagccc
121ggaaaagccccaaagaggttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaaccgagttcactctgacaatttctagccttcagcca
241gaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Sh24C05Kv1-17Kappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:168）
1diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqqkpgkapkrliyaastldsgvps
61rfsgsgsgteftltisslqpedfatyyclqydsypytfgqgtkleik
编码Sh24C05Kv1-33Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:169）
1gatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtaccaacagaagccc
121ggaaaggcccccaagctgttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaacagactttacttttacaatttctagccttcagcca
241gaggacatcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Sh24C05Kv1-33Kappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:170）
1diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqqkpgkapklliyaastldsgvps
61rfsgsgsgtdftftisslqpediatyyclqydsypytfgqgtkleik
编码Sh24C05Kv1-39Kappa链可变区的核酸序列（SEQID号:171）
1gatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtatcaacagaagccc
121ggaaaagcccctaagctgttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaactgacttcactctgacaatttctagccttcagcca
241gaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Sh24C05Kv1-39Kappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:172）
1diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqqkpgkapklliyaastldsgvps
61rfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyclqydsypytfgqgtkleik
编码Hu24C05KvAKappa链可变区的核酸序列（SEQID号:173）
1gatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacagagttacc
61ataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggctgcaacagaagccc
121ggaggcgccatcaagaggttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtcccgagt
181cgattctccggttctggctccggaagtgactacactctgacaatttctagccttcagcca
241gaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacatttgggcag
301ggcactaaactggagatcaaa
定义Hu24C05KvAKappa链可变区的蛋白蛋白序列（SEQID号:174）
1diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswlqqkpggaikrliyaastldsgvps
61rfsgsgsgsdytltisslqpedfatyyclqydsypytfgqgtkleik
定义实例12中产生的这些抗体的免疫球蛋白重链可变区的氨基酸序列在图15中进行了比对。氨基末端信号肽序列（用于适当的表达/分泌）没有展示出。CDR1、CDR2以及CDR3（Kabat定义）通过方框来鉴别。
定义实例12中的这些抗体的免疫球蛋白轻链可变区的氨基酸序列在图16中进行了比对。氨基末端信号肽序列（用于适当的表达/分泌）没有展示出。CDR1、CDR2以及CDR3通过方框来鉴别。
表10是一个索引表，展示了在该实例中所讨论的每一序列的SEQID号。
表10
SEQ.ID号 核酸或蛋白
149 Sh24C05Hv3-7重链可变区—核酸
150 Sh24C05Hv3-7重链可变区—蛋白
57 Sh24C05Hv3-7重链CDR1
58 Sh24C05Hv3-7重链CDR2
59 Sh24C05Hv3-7重链CDR3
151 Sh24C05Hv3-11重链可变区—核酸
152 Sh24C05Hv3-11重链可变区—蛋白
57 Sh24C05Hv3-11重链CDR1
58 Sh24C05Hv3-11重链CDR2
59 Sh24C05Hv3-11重链CDR3
153 Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区—核酸
154 Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区—蛋白
57 Sh24C05Hv3-11N62S重链CDR1
148 Sh24C05Hv3-11N62S重链CDR2
59 Sh24C05Hv3-11N62S重链CDR3
155 Sh24C05Hv3-21重链可变区—核酸
156 Sh24C05Hv3-21重链可变区—蛋白
表10（续）
SEQ.ID号 核酸或蛋白
57 Sh24C05Hv3-21重链CDR1
58 Sh24C05Hv3-21重链CDR2
59 Sh24C05Hv3-21重链CDR3
157 Sh24C05Hv3-23重链可变区—核酸
158 Sh24C05Hv3-23重链可变区—蛋白
57 Sh24C05Hv3-23重链CDR1
58 Sh24C05Hv3-23重链CDR248 -->
59 Sh24C05Hv3-23重链CDR3
159 Sh24C05Hv3-30重链可变区—核酸
160 Sh24C05Hv3-30重链可变区—蛋白
57 Sh24C05Hv3-30重链CDR1
58 Sh24C05Hv3-30重链CDR2
59 Sh24C05Hv3-30重链CDR3
161 Hu24C05HvA重链可变区核酸
162 Hu24C05HvA重链可变区—蛋白
SEQ.ID号 核酸或蛋白
57 Hu24C05HvA重链CDR1
58 Hu24C05HvA重链CDR2
59 Hu24C05HvA重链CDR3
163 Sh24C05Kv1-9轻（kappa）链可变区—核酸
164 Sh24C05Kv1-9轻（kappa）链可变区—蛋白
60 Sh24C05Kv1-9轻（kappa）链CDR1
61 Sh24C05Kv1-9轻（kappa）链CDR2
62 Sh24C05Kv1-9轻（kappa）链CDR3
165 Sh24C05Kv1-16轻（kappa）链可变区—核酸
166 Sh24C05Kv1-16轻（kappa）链可变区—蛋白
表10（续）
SEQ.ID号 核酸或蛋白
60 Sh24C05Kv1-16轻（kappa）链CDR1
61 Sh24C05Kv1-16轻（kappa）链CDR2
62 Sh24C05Kv1-16轻（kappa）链CDR3
167 Sh24C05Kv1-17轻（kappa）链可变区—核酸
168 Sh24C05Kv1-17轻（kappa）链可变区—蛋白
60 Sh24C05Kv1-17轻（kappa）链CDR1
61 Sh24C05Kv1-17轻（kappa）链CDR2
62 Sh24C05Kv1-17轻（kappa）链CDR3
169 Sh24C05Kv1-33轻（kappa）链可变区—核酸
170 Sh24C05Kv1-33轻（kappa）链可变区—蛋白
60 Sh24C05Kv1-33轻（kappa）链CDR1
61 Sh24C05Kv1-33轻（kappa）链CDR2
62 Sh24C05Kv1-33轻（kappa）链CDR3
171 Sh24C05Kv1-39轻（kappa）链可变区—核酸
172 Sh24C05Kv1-39轻（kappa）链可变区—蛋白
60 Sh24C05Kv1-39轻（kappa）链CDR149 -->
61 Sh24C05Kv1-39轻（kappa）链CDR2
62 Sh24C05Kv1-39轻（kappa）链CDR3
173 Hu24C05KvA轻（kappa）链可变区核酸
174 Hu24C05KvA轻（kappa）链可变区蛋白
60 Hu24C05KvA轻（kappa）链CDR1
61 Hu24C05KvA轻（kappa）链CDR2
62 Hu24C05KvA轻（kappa）链CDR3
人源化单克隆抗体重链CDR序列（Kabat、Chothia以及IMGT定义）展示在表11中。
表11
表11（续）
人源化单克隆抗体Kappa轻链CDR序列（Kabat、Chothia以及IMGT定义）展示在表12中。
表12
表12（续）
在表11与12中，该免疫球蛋白重链与轻链的最长CDR序列以粗体展示。
为了产生完整的嵌合和人源化的重链或kappa链抗体序列，以上每一可变序列都与其对应的人类恒定区相结合。例如，完整的重链包括一种后随人IgG1重链恒定序列或人IgG2重链恒定序列的重可变序列。完整的kappa链包括一种随后是人kappa轻链恒定序列的kappa可变序列。
编码人IgG1重链恒定区的核酸序列（SEQID号:175）
1gcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatccggg
61ggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtgagc
121tggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagctct
181ggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcagacc
241tacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaaccc
301aagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggcggt
361cccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaacaccc
421gaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaactgg
481tacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtataat
541agtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggcaaa
601gaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactattagt
661aaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagaggaa
721atgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgacatc
781gccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaacccccccagtg
841ctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgctgg
901cagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactacacc
961cagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义人IgG1重链恒定区的蛋白序列（SEQID号:176）
1astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqss
61glyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellgg
121psvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyn
181styrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsree
241mtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrw
301qqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码人IgG2重链恒定区的核酸序列（SEQID号:177）
1gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgag
61agcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcg
121tggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctca
181ggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacc
241tacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgc
301aaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttc
361ctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgc
421gtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggc
481gtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgt
541gtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgc
601aaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggg
661cagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaac
721caggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgg
781gagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgac
841ggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac
901gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctc
961tccctgtctccgggtaaa
定义人IgG2重链恒定区的蛋白序列（SEQID号:178）
1astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqss
61glyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvf
121lfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfr
181vvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtkn
241qvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgn
301vfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码人Kappa轻链恒定区的核酸序列（SEQID号:179）
1cgcacagttgctgcccccagcgtgttcattttcccacctagcgatgagcagctgaaaagc
61ggtactgcctctgtcgtatgcttgctcaacaacttttacccacgtgaggctaaggtgcag
121tggaaagtggataatgcacttcaatctggaaacagtcaagagtccgtgacagaacaggac
181agcaaagactcaacttattcactctcttccaccctgactctgtccaaggcagactatgaa
241aaacacaaggtatacgcctgcgaggttacacaccagggtttgtctagtcctgtcaccaag
301tccttcaataggggcgaatgt
定义人Kappa轻链恒定区的蛋白序列（SEQID号:180）
1rtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqd
61skdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
以下序列表示在该实例中描述的每一抗体的实际的或互补的全长重链或轻链序列（即，包含可变区与恒定区序列这二者）。用于这些抗体适当分泌的信号序列还被包括在这些DNA序列5’末端或这些蛋白序列的氨基末端。在此还考虑到，这些可变区序列可以连接至其他恒定区序列，以产生活性的全长IgG重链与轻链。
编码全长嵌合24C05重链（小鼠重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸序列（SEQID号:181）
1atgaacttcgggctcagcttgatgttccttgtccttgtcttaaaaggtgtccagtgtgag
61gtgcagctggtggaatctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctgaaactctcc
121tgtgcagcctctggattcactttcagtgactatgccatgtcttgggttcgccagactccg
181gaaaagaggctggagtgggtcgcaaccattagtgatggtggtacttacacctactatcca
241gacaatgtaaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaacaacctgtacctg
301caaatgagccatctgaagtctgaggacacagccatgtattactgtgcaagagaatggggt
361gattacgacggatttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcggcctca
421acaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatccgggggcact
481gcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtgagctggaac
541agtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagctctggcctg
601tactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcagacctacatc
661tgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaacccaagagc
721tgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggcggtcccagc
781gtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaacacccgaggtg
841acatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaactggtacgtt
901gatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtataatagtaca
961taccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggcaaagaatac
1021aaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactattagtaaggca
1081aaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagaggaaatgaca
1141aagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtt
1201gagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaacccccccagtgctggat
1261agtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgctggcagcag
1321ggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactacacccagaag
1381tcactgagcctgagcccagggaag
定义全长嵌合24C05重链（小鼠重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白序列（SEQID号:182）
1mnfglslmflvlvlkgvqcevqlvesggglvkpggslklscaasgftfsdyamswvrqtp
61ekrlewvatisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknnlylqmshlksedtamyycarewg
121dydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswn
181sgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepks
241cdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyv
301dgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiska
361kgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvld
421sdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长嵌合24C05轻链（小鼠Kappa链可变区和人Kappa恒定区）的核酸序列（SEQID号:183）
1atggacatgagggttcctgctcacgtttttggcttcttgttgctctggtttccaggtacc
61agatgtgacatccagatgacccagtctccatcctccttatctgcctctctgggagaaaga
121gtcagtctcacttgtcgggcaagtcaggaaattagtggttacttaagctggcttcagcag
181aaaccagatggaactattaaacgcctgatctacgccgcatccactttagattctggtgtc
241ccaaaaaggttcagtggcagtaggtctgggtcagattattctctcaccatcggcagcctt
301gagtctgaagatcttgcagactattactgtctacaatatgatagttatccgtacacgttc
361ggaggggggaccaagctggaaataaaacgcacagtcgccgctccctccgtgttcatcttt
421ccaccaagtgatgagcaactgaagtctggtactgcttcagtcgtgtgtctgctgaacaat
481ttctaccctcgagaagccaaagtccaatggaaggtagacaacgcactgcagtccggcaat
541agccaagaatcagttaccgaacaggattcaaaggacagtacatattccctgagcagcact
601ctgaccctgtcaaaggccgattacgagaaacacaaggtctatgcttgcgaagtgacacat
661cagggactgtccagcccagtgacaaaatcttttaaccgtggggagtgt
定义全长嵌合24C05轻链（小鼠Kappa链可变区和人Kappa恒定区）的蛋白序列（SEQID号:184）
1mdmrvpahvfgflllwfpgtrcdiqmtqspsslsaslgervsltcrasqeisgylswlqq
61kpdgtikrliyaastldsgvpkrfsgsrsgsdysltigslesedladyyclqydsypytf
121gggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn
181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
编码全长人源化sh24C05Hv3-7重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸 序列（SEQID号:185）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgcgaggttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtacaaccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgc
181caagcacccgggaaaggactggagtgggttgccactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagt
301ctctacctgcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatcc
481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
541agctggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagc
601tctggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcag
661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
721cccaagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggc
781ggtcccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaaca
841cccgaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaac
901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
1321tggcagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactac
1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化sh24C05Hv3-7重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:186）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcevqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdyamswvr
61qapgkglewvatisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrve
241pkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfn
301wyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiekti
361skakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttpp
421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化sh24C05Hv3-11重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸 序列（SEQID号:187）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgccaagttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatggatcagg
181caagcacccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagt
301ctctaccttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatcc
481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
541agctggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagc
601tctggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcag
661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
721cccaagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggc
781ggtcccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaaca
841cccgaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaac
901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
1321tggcagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactac
1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化sh24C05Hv3-11重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:188）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcqvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswir
61qapgkglewvstisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrve
241pkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfn
301wyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiekti
361skakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttpp
421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Sh24C05Hv3-11N62SIgG1重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定 区）的核酸序列（SEQID号:189）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgccaagttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatggatcagg
181caagcacccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgactccgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagt
301ctctaccttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatcc
481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
541agctggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagc
601tctggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcag
661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
721cccaagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggc
781ggtcccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaaca
841cccgaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaac
901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
1321tggcagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactac
1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化Sh24C05Hv3-11N62SIgG1重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定 区）的蛋白序列（SEQID号:190）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcqvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswir
61qapgkglewvstisdggtytyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrve
241pkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfn
301wyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiekti
361skakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttpp
421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Sh24C05Hv3-11N62SIgG2重链（人源化重链可变区和人IgG2恒定 区）的核酸序列（SEQID号:191）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgccaagttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatggatcagg
181caagcacccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgactccgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagt
301ctctaccttcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctcc
481gagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtg
541tcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcc
601tcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccag
661acctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgag
721cgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtc
781ttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacg
841tgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggac
901ggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttc
961cgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaag
1021tgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaa
1081gggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag
1141aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggag
1201tgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactcc
1261gacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggg
1321aacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagc
1381ctctccctgtctccgggtaaa
定义全长人源化Sh24C05Hv3-11N62SIgG2重链（人源化重链可变区和人IgG2恒定 区）的蛋白序列（SEQID号:192）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcqvqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswir
61qapgkglewvstisdggtytyypdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktve
241rkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvd
301gvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktk
361gqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmlds
421dgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Sh24C05Hv3-21重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸 序列（SEQID号:193）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgcgaggttcagctggtggaatctggcggtgggcttgtaaagccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgc
181caagcacccgggaaaggactggagtgggttagcactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacgcaaagaacagt
301ctctatttgcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatcc
481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
541agctggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagc
601tctggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcag
661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
721cccaagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggc
781ggtcccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaaca
841cccgaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaac
901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
1321tggcagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactac
1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化24C05Hv3-21重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白序 列（SEQID号:194）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcevqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswvr
61qapgkglewvstisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrve
241pkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfn
301wyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiekti
361skakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttpp
421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Sh24C05Hv3-23重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸 序列（SEQID号:195）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgcgaggttcagcttctggaatctggcggtgggcttgtacagccaggaggctccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgc
181caagcacccgggaaaggactggagtgggtttcaactatcagcgatggcggaacgtatacc
241tattaccctgacaatgtgaagggtcggttcaccatttccagggataacagcaagaacaca
301ctctatctccagatgaacagcctgagggctgaggacaccgccgtctactactgcgcccga
361gaatggggagattatgatgggtttgactattggggccagggcactttggtgacagtcagt
421tctgcctcaacaaaaggaccaagtgtgttcccactcgcccctagcagcaagagtacatcc
481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
541agctggaacagtggagcactcacttctggtgtccatacttttcctgctgtcctgcaaagc
601tctggcctgtactcactcagctccgtcgtgaccgtgccatcttcatctctgggcactcag
661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
721cccaagagctgcgacaagactcacacttgtcccccatgccctgcccctgaacttctgggc
781ggtcccagcgtctttttgttcccaccaaagcctaaagatactctgatgataagtagaaca
841cccgaggtgacatgtgttgttgtagacgtttcccacgaggacccagaggttaagttcaac
901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
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1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
1321tggcagcagggtaacgtcttcagctgttccgtgatgcacgaggcattgcacaaccactac
1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化Sh24C05Hv3-23重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:196）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcevqllesggglvqpggslrlscaasgftfsdyamswvr
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编码全长人源化Sh24C05Hv3-30重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸 序列（SEQID号:197）
1atggacatgagagttcctgctcagctgctcgggttgctgttgctttggctccggggtgct
61aggtgccaggttcagctggtggaatctggcggtggggtagtacaaccaggacggtccctc
121agactgagttgtgccgcttcagggttcacattctccgactatgcgatgtcatgggtgcgc
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661acctacatctgtaatgtaaaccacaagcctagcaatactaaggtcgataagcgggtggaa
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1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
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1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
1261gtgctggatagtgacgggtctttctttctgtacagtaagctgactgtggacaagtcccgc
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1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化Sh24C05Hv3-30重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:198）
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421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Hu24C05HvA重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的核酸序 列（SEQID号:199）
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481gggggcactgcagcactcggctgcctcgtcaaggattattttccagagccagtaaccgtg
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901tggtacgttgatggagtcgaagtacataatgctaagaccaagcctagagaggagcagtat
961aatagtacataccgtgtagtcagtgttctcacagtgctgcaccaagactggctcaacggc
1021aaagaatacaaatgcaaagtgtccaacaaagcactcccagcccctatcgagaagactatt
1081agtaaggcaaaggggcagcctcgtgaaccacaggtgtacactctgccacccagtagagag
1141gaaatgacaaagaaccaagtctcattgacctgcctggtgaaaggcttctaccccagcgac
1201atcgccgttgagtgggagagtaacggtcagcctgagaacaattacaagacaaccccccca
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1381acccagaagtcactgagcctgagcccagggaag
定义全长人源化Hu24C05HvA重链（人源化重链可变区和人IgG1恒定区）的蛋白序 列（SEQID号:200）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcevqlvesggglvkpggslrlscaasgftfsdyamswvr
61qapgkglewvatisdggtytyypdnvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycar
121ewgdydgfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtv
181swnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrve
241pkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfn
301wyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiekti
361skakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttpp
421vldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
编码全长人源化Sh24C05Kv1-9轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸 序列（SEQID号:201）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagttgacccaatcacctagcttcctctcagcttccgtgggcgacaga
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181aagcccggaaaagcccctaagctgttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtc
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301cagccagaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacattt
361gggcagggcactaaactggagatcaaacgcacagttgctgcccccagcgtgttcattttc
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661cagggtttgtctagtcctgtcaccaagtccttcaataggggcgaatgt
定义全长人源化Sh24C05Kv1-9轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:202）
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61kpgkapklliyaastldsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyyclqydsypytf
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181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
编码全长人源化Sh24C05Kv1-16轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸 序列（SEQID号:203）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacaga
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定义全长人源化Sh24C05Kv1-16轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:204）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswfqq
61kpgkapksliyaastldsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyclqydsypytf
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编码全长人源化Sh24C05Kv1-17轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸 序列（SEQID号:205）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacaga
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301cagccagaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacattt
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601ctgactctgtccaaggcagactatgaaaaacacaaggtatacgcctgcgaggttacacac
661cagggtttgtctagtcctgtcaccaagtccttcaataggggcgaatgt
定义全长人源化Sh24C05Kv1-17轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:206）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqq
61kpgkapkrliyaastldsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyyclqydsypytf
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181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
编码全长人源化Sh24C05Kv1-33轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸 序列（SEQID号:207）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacaga
121gttaccataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtaccaacag
181aagcccggaaaggcccccaagctgttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtc
241ccgagtcgattctccggttctggctccggaacagactttacttttacaatttctagcctt
301cagccagaggacatcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacattt
361gggcagggcactaaactggagatcaaacgcacagttgctgcccccagcgtgttcattttc
421ccacctagcgatgagcagctgaaaagcggtactgcctctgtcgtatgcttgctcaacaac
481ttttacccacgtgaggctaaggtgcagtggaaagtggataatgcacttcaatctggaaac
541agtcaagagtccgtgacagaacaggacagcaaagactcaacttattcactctcttccacc
601ctgactctgtccaaggcagactatgaaaaacacaaggtatacgcctgcgaggttacacac
661cagggtttgtctagtcctgtcaccaagtccttcaataggggcgaatgt
定义全长人源化Sh24C05Kv1-33轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:208）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqq
61kpgkapklliyaastldsgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyyclqydsypytf
121gqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn
181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
编码全长人源化Sh24C05Kv1-39轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸 序列（SEQID号:209）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacaga
121gttaccataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggtatcaacag
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241ccgagtcgattctccggttctggctccggaactgacttcactctgacaatttctagcctt
301cagccagaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacattt
361gggcagggcactaaactggagatcaaacgcacagttgctgcccccagcgtgttcattttc
421ccacctagcgatgagcagctgaaaagcggtactgcctctgtcgtatgcttgctcaacaac
481ttttacccacgtgaggctaaggtgcagtggaaagtggataatgcacttcaatctggaaac
541agtcaagagtccgtgacagaacaggacagcaaagactcaacttattcactctcttccacc
601ctgactctgtccaaggcagactatgaaaaacacaaggtatacgcctgcgaggttacacac
661cagggtttgtctagtcctgtcaccaagtccttcaataggggcgaatgt
定义全长人源化Sh24C05Kv1-39轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白 序列（SEQID号:210）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswyqq
61kpgkapklliyaastldsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyclqydsypytf
121gqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn
181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
编码全长人源化Hu24C05KvA轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的核酸序 列（SEQID号:211）
1atggacatgagggtgcccgctcaactgctggggctgctgctgctgtggctgagaggagct
61cgttgcgatattcagatgacccaatcacctagcagtctctcagcttccgtgggcgacaga
121gttaccataacctgtcgggcaagccaggagatttctgggtacctgtcctggctgcaacag
181aagcccggaggcgccatcaagaggttgatctatgctgcgtcaaccttggatagcggtgtc
241ccgagtcgattctccggttctggctccggaagtgactacactctgacaatttctagcctt
301cagccagaagatttcgccacgtactattgcctccagtacgacagctatccctatacattt
361gggcagggcactaaactggagatcaaacgcacagttgctgcccccagcgtgttcattttc
421ccacctagcgatgagcagctgaaaagcggtactgcctctgtcgtatgcttgctcaacaac
481ttttacccacgtgaggctaaggtgcagtggaaagtggataatgcacttcaatctggaaac
541agtcaagagtccgtgacagaacaggacagcaaagactcaacttattcactctcttccacc
601ctgactctgtccaaggcagactatgaaaaacacaaggtatacgcctgcgaggttacacac
661cagggtttgtctagtcctgtcaccaagtccttcaataggggcgaatgt
定义全长人源化Hu24C05KvA轻链（人源化Kappa链可变区和人恒定区）的蛋白序 列（SEQID号:212）
1mdmrvpaqllgllllwlrgarcdiqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqeisgylswlqq
61kpggaikrliyaastldsgvpsrfsgsgsgsdytltisslqpedfatyyclqydsypytf
121gqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgn
181sqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
为了方便，表13提供了一个索引表，展示了在这一实例中所讨论的每一序列的SEQID号.。
表13
表13（续）
表13（续）
下表14展示了多种抗体，这些抗体包含嵌合免疫球蛋白重链和轻链以及全长人源化免疫球蛋白重链和轻链的每一种可能组合。
表14
表14（续）
表14（续）
表14（续）
包含这些全长嵌合重链和轻链的抗体构建体指定于下：
嵌合24C05=全长嵌合24C05重链（小鼠可变区和人IgG1恒定区）(SEQID号:182)加上全长嵌合24C05轻链（小鼠可变区和人Kappa恒定区）（SEQID号:184）
包含这些包含人源化可变区的全长免疫球蛋白重链和轻链的四种可能的抗体构建体指定于下：
Sh24C05-25N62SIgG1=人源化Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区和人IgG1恒定区（SEQID号:190）加上Sh24C05Kv1-16轻链可变区和人Kappa恒定区（SEQID号:204）
Sh24C05-25N62SIgG2=人源化Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区和人IgG2恒定区（SEQID号:192）加上Sh24C05Kv1-16轻链可变区和人Kappa恒定区（SEQID号:204）
Sh24C05-31N62SIgG1=人源化Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区和人IgG1恒定区（SEQID号:190）加上Sh24C05Kv1-17轻链可变区和人Kappa恒定区（SEQID号:206）
Sh24C05-31N62SIgG2=人源化Sh24C05Hv3-11N62S重链可变区和人IgG2恒定区（SEQID号:192）加上Sh24C05Kv1-17轻链可变区和人Kappa恒定区（SEQID号:206）
B.人源化的和嵌合的抗ErbB3单克隆抗体的结合亲和性
使用T100（Biacore）仪器，通过表面等离子体共振对实例12中产生的单克隆抗体与重组人类ErbB3单体蛋白（经切割的rhErbB3）的相互作用的结合亲和性与动力学进行测量。通过蛋白酶切割rhErbB3-Fc（R&DSystems公司，Cat.号348-RB）而获得单体蛋白ErbB。
根据提供商的说明，使用一种标准的偶联方案，通过胺偶合法（Biacore公司，目录编号BR-1000-50），将山羊抗人鼠IgGFc（JacksonImmunoResearch公司，目录编号109-005-098）固定在羧甲基化葡聚糖CM4传感芯片（Biacore公司，目录编号BR-1005-34）上。使用包含0.05%表面活性剂P20（Biacore公司，目录编号BR-1000-54）的PBS（Invitrogen公司，目录编号14040-133）作为运行缓冲液，在37°C下进行这些分析。
在60μl/分钟的流速下，在单个流动细胞中捕获这些抗体每一抗体的注射时间不一，以产生一种30与60RU之间的Rmax。以60μl/分钟持续300秒，将缓冲液或稀释在运行缓冲液中的经切割的rhErbB3连续地注射经过参考表面（referencesurface）（无捕获的抗体）以及活性表面（activesurface）（有待检测试的抗体）。持续监测该解离相达1200秒。然后在60μl/分钟下，用pH2.25（从甘氨酸pH2.0制作（Biacore，Cat.号BR-1003-55））和pH2.5（Biacore，Cat.号BR-1003-56）的甘氨酸的两个60秒的注射来再生该表面。为了初步筛选，仅测试了一种或两种浓度的经切割的rhErbB3，典型的是5.0以及1.25nM（结果总结与表15中）。
使用减去两倍参考的BIAevaluation软件（Biacore）的动力学函数确定多个动力学参数。。确定每一抗体的动力学参数（ka（结合速率常数），kd（解离速率常数以及KD（平衡解离常数）））。使用包含分泌抗体的细胞培养基上清液。对这些初始单克隆抗体进行筛选，并且这些单克隆抗体在37°C下对经切割的rhErbB3的动力学值总结于表15中。
表15
抗体 ka（1/Ms） kd（1/s） KD（M） n
Sh24C05-1 2.52E+06 4.48E-04 1.78E-10 3
Sh24C05-14 2.88E+06 4.98E-04 1.73E-10 2
Sh24C05-15 2.67E+06 4.99E-04 1.87E-10 2
Sh24C05-16 2.75E+06 4.04E-04 1.47E-10 2
Sh24C05-17 2.79E+06 4.17E-04 1.50E-10 2
Sh24C05-18 2.88E+06 4.63E-04 1.61E-10 272 -->
Sh24C05-19 3.00E+06 2.55E-04 8.55E-11 2
Sh24C05-20 2.67E+06 5.91E-04 2.21E-10 2
Sh24C05-21 3.11E+06 6.62E-04 2.20E-10 2
Sh24C05-22 2.79E+06 6.01E-04 2.16E-10 2
Sh24C05-23 2.79E+06 7.21E-04 2.63E-10 2
Sh24C05-24 2.90E+06 6.28E-04 2.18E-10 2
Sh24C05-25 2.63E+06 4.59E-04 1.75E-10 2
Sh24C05-26 3.36E+06 7.39E-04 2.20E-10 2
Sh24C05-27 3.34E+06 7.98E-04 2.40E-10 2
Sh24C05-28 3.26E+06 6.14E-04 1.89E-10 2
表15（续）
抗体 ka（1/Ms） kd（1/s） KD（M） n
Sh24C05-29 3.25E+06 5.88E-04 1.82E-10 2
Sh24C05-30 4.48E+06 7.87E-04 1.90E-10 2
Sh24C05-31 3.47E+06 2.92E-04 8.65E-11 2
Sh24C05-32 9.98E+06 6.02E-03 6.03E-10 1
Sh24C05-33 4.02E+06 4.33E-03 1.08E-09 1
Sh24C05-34 1.09E+07 6.00E-03 5.52E-10 1
Sh24C05-35 8.44E+06 5.53E-03 6.55E-10 1
Sh24C05-36 5.18E+06 4.34E-03 8.37E-10 1
Sh24C05-37 5.94E+06 2.00E-03 3.74E-10 2
Sh24C05-38 2.71E+07 1.54E-02 5.67E-10 1
Sh24C05-39 1.18E+07 9.67E-03 8.19E-10 1
Sh24C05-40 2.11E+07 1.06E-02 5.03E-10 1
Sh24C05-41 1.81E+07 1.21E-02 6.69E-10 1
Sh24C05-42 7.35E+06 6.82E-03 9.27E-10 1
Sh24C05-43 6.16E+06 3.58E-03 5.82E-10 1
Sh24C05-44 7.96E+06 5.12E-03 6.44E-10 1
Sh24C05-45 8.57E+06 6.06E-03 7.07E-10 1
Sh24C05-46 7.99E+06 4.40E-03 5.51E-10 1
Sh24C05-47 7.98E+06 4.41E-03 5.53E-10 1
Sh24C05-48 8.72E+06 4.90E-03 5.62E-10 1
Sh24C05-49 4.08E+06 1.70E-03 4.16E-10 2
表15中的结果证明，这些嵌合的以及每一人源化的24C05抗体具有快速的结合速率（ka）、非常低的解离速率（kd）以及非常高的亲和性（KD）。具体地，这些抗体具有范围从约87pM至约1nM的亲和力。
还确定了某些纯化的单克隆抗体的结合亲和性与动力学。为了进一步地特征化某些抗体，使用0.3125nM与5.0nM（2倍连续稀释）之间的浓度的经切割的rhErbB3进行了上述表面等离子体共振实验。
某些纯化的单克隆抗体（即，Sh24C05-1、Sh24C05-25、Sh24C05-25N62SIgG1、Sh24C05-25N62SIgG2、Sh24C05-31、Sh24C05-31N62SIgG1、以及Sh24C05-31N62SIgG2）对经切割的rhErbB3在37°C下的动力学值总结于表16中。
表16
表16中的结果证明，当在37°C下进行测试时，这些纯化的抗体具有范围从约63pM至约160nM的亲和力。
C.其他抗ErbB3抗体的比较
构建了三种抑制人类ErbB3功能的人类抗体并且使用已公布的信息将其进行表达。基于Schoeberl（舒波尔）等人，US2009/0291085（MerrimackPharmaceuticals,Inc.公司）的披露，将一种抗体（称作Ab#6）构建为一种人类IgG2/λ抗体。基于Rothe（罗德）等人，US2008/0124345（U3PharmaAGandAmgen,Inc.公司）的披露，将两种额外的抗体（称作U1-53和U1-59）构建为人类IgG1/Kappa抗体。
如上所述，使用经切割的rhErbB3（单体）在37°C下通过Biacore来确定Ab#6、U1-53以及U1-59抗体的动力学参数（参见部分B.，人源化的和嵌合的抗ErbB3单克隆抗体的结合亲和性）。针对每一抗体展示了Biacore传感图（图17）以及动力学值（表17）这二者。
表17
抗体 ka（1/Ms） kd（1/s） KD（M） n
Sh24C05-31N62S IgG1 3.5+06 2.7E-04 7.6E-11 6
Ab#6 9.3E+05 1.9E-04 2.3E-10 3
U1-59 1.8E+06 9.4E-04 5.3E-10 3
U1-53 - - - -
表17中的结果证明，Sh24C05-31N62SIgG1（76pM）的总体平衡解离常数（KD）比Ab#6和U1-59抗体的KD（分别是230pM（p<0.01）以及530pM（p<0.0005））更小。由于差的曲线拟合，，因此不能确定U1-53的平衡解离常数（KD）（参见图17，展示了U1-53的快速Koff速率）。还可以通过比较表16与17，来将Ab#6、U1-53以及U1-59抗体的KD与其他人源化24C05变体进行比较。
因此，如在此披露的，Sh24C05-31N62SIgG1的亲和性显著高于Ab#6和U1-59的亲和性。
实例13–人源化抗ErbB3抗体的中和活性
在该实例中，通过ECL测定，对实例12中产生的人源化抗体进行了测试，针对它们抑制rhErbB3结合至NRG1-β1的能力。将多阵列96孔标准结合平板（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号L15XA-3）涂上50μl在PBS（Invitrogen公司，Cat.号14040-133）中的0.5μg/mLrhErbB3/Fc（R&DSystems公司，Cat.号348-RB），无搅动地在室温下保持一小时。然后用PBS+0.1%Tween20（Sigma公司P5927）洗涤这些平板三次，并且用200μl的100%马血清（热灭活的，GIBCO公司，Cat.号26050-088）在室温下封闭1.5小时。用PBS+0.1%Tween洗涤这些平板三次后，搅动下，在室温下另用一小时将25μl这些抗体稀释物添加至这些平板。将配体NRG1-β1（R&DSystems公司，Cat.号377-HB，26kDa）添加至这些孔，终浓度为0.25μg/ml。用PBS+0.1%Tween洗涤这些平板三次，并且在室温下用25μl1μg/mL的、对人类NRG1-β1（R&Dsystems公司，Cat.号BAF377）的、与SULTO-TAG链亲和素（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号R32AD-5）预孵育一小时的生物素化抗体搅动下孵育一小时。然后用PBS+0.1%Tween洗涤这些平板三次，并且在用Imager2400仪器（MesoScaleDiscovery公司）对这些平板进行分析之前，将150μl的1X读取缓冲液（readbuffer）（MesoScaleDiscovery公司，Cat.号R92TC-1）添加至每一孔。
NRG1-β1与rhErbB3的相互作用受到抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2抑制（图18A）。还测试了如描述在Schoeberl（舒波尔）等人（同上）中的Ab#6IgG2抗体以及如描述在Rothe（罗德）等人（同上）中的U1-53和U1-59抗体，针对它们抑制ErbB3结合至NRG1-β1的能力。如在图18B中所展示，Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59抗体中的每一个都抑制ErbB3结合至NRG1-β1。
计算了人源化24C05抗体（即，Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2）对NRG1-β1结合至hErbB3的中和的IC50值并且总结于表18中。抗ErbB3人类抗体Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59的NRG1-β1中和活性的IC50值也展示在表18中。
表18
表18中的结果证明，抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2有效地对NRG1-β1结合至rhErbB3进行了中和（图18A）。而这些抗ErbB3人类抗体Ab#6IgG2、U1-53和U1-59也显示出中和活性，这些人源化Sh24C05抗体（即，Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2）具有比U1-59或Ab#6IgG2更优秀的中和能力。
实例14–抗增殖活性
在该实例中，在工程化而表达人类Her2和ErbB3的BaF/3细胞系统中，对实例12中产生的人源化抗体进行了测试，针对它们抑制NRG1-β1依赖的细胞增殖的能力。
在WEHI条件培养基不存在但NRG1-β1（100ng/ml）存在下，用抗ErbB3抗体处理如在实例6中描述的表达Her2和ErbB3受体的BaF/3细胞。在96孔平板（5,000细胞/孔）中，在NRG1-β1（100ng/ml）和不同抗体浓度（0.018-5000ng/ml，终体积100μl）的存在下进行测定。在NRG1-β1刺激3-4天之后，进行MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物）测定。
这些结果证明，Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2以剂量依赖方式对NRG诱导的Her2/ErbB3-BaF/3细胞增殖进行抑制。
计算了人源化24C05抗体（即，Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2）对NRG1-β1依赖的Her2/ErbB3-BaF/3细胞系增殖的抑制的IC50值并且总结于表19中。
表19
表19中的结果证明，抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2强烈抑制表达Her2/ErbB3的BaF/3细胞受NRG1-β1诱导的增殖。
在NRG1-β1依赖的Her2/ErbB3-BaF/3细胞增殖测定中，还测试了抗ErbB3的Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59抗体的抑制活性。如在图19B中所展示，这些结果证明，Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59抗体以剂量依赖方式抑制NRG诱导的Her2/ErbB3-BaF/3细胞增殖。用抗体Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59对依赖NRG1-β1的Her2/ErbB3-BaF/3细胞增殖的抑制数据总结于表19中。表19中的结果证明，抗体Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59抑制了Her2/ErbB3-BaF/3细胞的受NRG1-β1诱导的增殖。对在该NRG1-β1依赖的Her2/ErbB3-BaF/3细胞增殖测定中经测试的抗ErbB3抗体的抑制活性的比较表明，人源化Sh24C05抗体的抑制活性优于Ab#6IgG2、U1-53以及U1-59抗体的抑制活性（例如，Sh24C05-31N62S-IgG1的IC50是0.1245nM，与U1-53的0.8128nM相比）。
实例15–SKBR-3细胞中，下游信号的抑制
这一实例描述了实例12中产生的人源化抗体在指数生长的SKBR-3细胞中的特征化，针对它们降解总ErbB3并且抑制ErbB3的磷酸化的能力。
乳腺癌SKBR-3细胞按ATCC推荐的进行维持。用40μg/ml抗ErbB3抗体（即，Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2）对维持在全血清条件中的细胞进行处理1、2、4或6小时。用来自R&DSystems公司的Total-ErbB3试剂盒和Phospho-ErbB3试剂盒（分别是Cat.号DYC234与Cat.号DYC1769），通过ELISA对溶解产物进行分析。
这些结果证明，抗ErbB3抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2在指数生长的SKBR-3细胞中，抑制至少50%的ErbB3磷酸化（图20）。
这些结果还证明，抗ErbB3抗体Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1以及Sh24C05-31N62S-IgG2降解存在于指数生长的SKBR-3细胞中的至少50%的总ErbB3受体（图21）。
实例16–BxPC3肿瘤异种移植生长的抑制
在BxPC3胰脏异种移植模型中，对实例12中产生的人源化单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力进行了测试。使用含有10%胎牛血清的RMPI培养基，在含有5%CO2的气氛下，在37°C下于培养物中生长人类胰脏BxPC3细胞。将BxPC3细胞皮下接种进入8周龄的雌性CB.17SCID小鼠（Taconic实验室）肋部的肋部，每只小鼠接种10×106细胞（在50%基质胶中（BDBiosciences公司，Cat号356237））。每周两次使用游标卡尺对肿瘤进行测量。用下式对肿瘤体积进行计算：宽×宽×长/2当肿瘤达到约200mm3时，将这些小鼠随机分为8组，每组10只小鼠。一组接受PBS，另一组接受huIgG对照（huIgG），并且另一组接受muIgG对照。剩下的五组每一组接受以下抗体之一，（即鼠24C05、Sh24C05-25N62S-IgG1、Sh24C05-25N62S-IgG2、Sh24C05-31N62S-IgG1或Sh24C05-31N62S-IgG2）。所有抗体以2mg/kg体重为剂量给药，每周两次，通过腹膜内注射7周。记录肿瘤体积以及小鼠体重，每周两次。将肿瘤生长抑制使用ANOVA进行分析并且表达为与该PBS对照相比的抑制百分比。
这些经测试的人源化抗体在体内是活性的。在该研究的第28天，若以2mg/kg剂量，在该BxPC3模型中所有四种人源化抗ErbB3抗体具有类似的效能，范围是从75%-80%的肿瘤生长抑制（p<0.001）（即，Sh24C05-25N62S-IgG1，75%；Sh24C05-25N62S-IgG2，76%；Sh24C05-31N62S-IgG1，79%以及Sh24C05-31N62S-IgG2，80%）（图22）。在该研究中，该鼠抗体证明了65%的肿瘤生长抑制（p<0.05）。这些结果表明了这四种人源化抗体在该模型中的类似效价与活性。
还在BxPC3异种移植模型中，对人源化单克隆抗体U1-53、U1-59以及Ab#6IgG2抑制肿瘤生长的能力进行了测试。利用以上述方案，在CB.17SCID小鼠中产生BxPC3肿瘤。当肿瘤达到大约200mm3时，将这些小鼠随机分为11组，每组10只小鼠。一组接受PBS并且另一组接受huIgG对照。剩下的九组每一组接受以下人源化抗体之一，（即Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-53、U1-59或Ab#6IgG2）。这些抗体以0.5mg/kg、1mg/kg亦或5mg/kg体重为剂量给药，每周两次，通过腹膜内注射7周。记录肿瘤体积以及小鼠体重，每周两次。将肿瘤生长抑制使用ANOVA进行分析，并且表达为与该PBS对照相比的抑制百分比。
用以下人源化抗体之一（即，鼠Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-59或Ab#6IgG2）处理后的第29天，肿瘤生长抑制数据展示于表20中。
表20
表20（续）
这些结果证明，在该BxPC3胰脏异种移植模型中，以5mg/kg的剂量到第29天时，Sh24C05-31N62S-IgG1显示出最大的肿瘤生长抑制（76.5%，p<0.001）。在该BxPC3模型中，以5mg/kg的剂量，U1-59以及Ab#6IgG2抗体分别证明约60%和41%的肿瘤生长抑制（P<0.001）。
这些结果还证明，在该BxPC3胰脏异种移植模型中，以0.5mg/kg的剂量（63.3%，p<0.001）以及以1mg/kg的剂量（75.0%，p<0.001）到第29天时，Sh24C05-31N62S-IgG1显示出最大的肿瘤生长抑制。在该BxPC3模型中，以0.5mg/kg的剂量，U1-59以及AB#6IgG2抗体分别证明约33%（p<0.01）和31%的肿瘤生长抑制（p<0.05）。在该BxPC3模型中，以1.0mg/kg的剂量，U1-59和AB#6IgG2抗体分别证明约53%（p<0.001）和2%（不显著）的肿瘤生长抑制。
实例17–Calu-3肿瘤异种移植生长的抑制
在Calu-3非小细胞性肺癌异种移植模型中，对实例12中产生的人源化单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力进行了测试。还在相同模型中，对如在实例12中描述的人源化单克隆抗体U1-59和Ab#6IgG2抑制肿瘤生长的能力进行了测试。
使用含有10%胎牛血清的EMEM培养基，在含有5%CO2的气氛下，在37°C下于培养物中生长人类非小细胞性肺癌Calu-3细胞。将Calu-3细胞皮下接种进入8周龄的雌性NCR裸小鼠（Taconic实验室）的肋部，每只小鼠接种10x106细胞（在50%基质胶中（BDBiosciences公司，Cat号356237））。每周两次使用游标卡尺对肿瘤进行测量。用下式对肿瘤体积进行计算：宽x宽x长/2
当肿瘤达到大约200mm3时，将这些小鼠随机分为11组，每组10只小鼠。一组接受PBS并且另一组接受muIgG对照。剩下的九组每一组接受以下人源化抗体之一，即Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-59或Ab#6IgG2，以5mg/kg、10mg/kg或20mg/kg体重为剂量给药，每周两次，通过腹膜内注射4周。记录肿瘤体积以及小鼠体重，每周两次。将肿瘤生长抑制使用ANOVA进行分析，并且表达为与该PBS对照相比的抑制百分比。
用以下人源化抗体之一（即，鼠Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-59或Ab#6IgG2）处理后的第26天，肿瘤生长抑制数据展示于表21中。
表21
这些使用该Calu-3非小细胞性肺癌异种移植模型的结果证明，所有测试剂量（即，5mg/kg、10mg/kg以及20mg/kg体重）到26天时，Sh24C05-31N62S-IgG1显示出最大的肿瘤生长抑制。
例如，以10mg/kg的剂量，当与Ab#6IgG2（36%，NS）或U1-59（57%，P<0.001）比较时，到26天时Sh24C05-31N62S-IgG1显示出最大的肿瘤生长抑制（62%，p<0.001）。以20mg/kg的剂量，当与Ab#6IgG2（48%，P<0.001）或U1-59（58%，P<0.001）比较时，到26天时Sh24C05-31N62S-IgG1也显示出最大的肿瘤生长抑制（69%，p<0.001）。
实例18–MDA-MB-453肿瘤异种移植生长的抑制
在MDA-MB-453乳腺异种移植模型（它是一种HER2阳性乳腺模型）中，对实例12中产生的人源化单克隆抗体抑制肿瘤生长的能力进行了测试。还在相同模型中对如在实例12中描述的人源化单克隆抗体U1-59以及Ab#6IgG2抑制肿瘤生长的能力进行了测试。
使用含有10%胎牛血清的LeibovitzATCC培养基（CatNo.30-2008），在含有0%CO2的气氛下，在37°C下于培养物中生长人类乳腺MDA-MB-453细胞。将MDA-MB-453细胞皮下接种进入8周龄的雌性NODSCID小鼠（Taconic实验室）的肋部，每只小鼠接种20×106细胞（在50%基质胶中（BDBiosciences公司，CatNo.356237））。每周两次利用游标卡尺对肿瘤进行测量。用下式对肿瘤体积进行计算：宽×宽×长/2
当肿瘤达到大约200mm3时，将这些小鼠随机分为7组，每组10只小鼠。一组接受PBS并且另一组接受huIgG对照。剩下的九组每一组接受以下人源化抗体之一，（即Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-59或Ab#6IgG2）。Sh24C05-31N62S-IgG1以5mg/kg、10mg/kg亦或20mg/kg体重为剂量给药，每周两次，通过腹膜内注射超过10周；U1-59或Ab#6以10mg/kg为剂量以相同的频率给药。记录肿瘤体积以及小鼠体重，每周两次。将肿瘤生长抑制使用ANOVA进行分析并且表达为与该PBS对照相比的抑制百分比。
利用以下人源化抗体之一（即，鼠Sh24C05-31N62S-IgG1、U1-59或Ab#6IgG2）处理后的第71天，肿瘤生长抑制数据展示于表22中。
表22
这些使用该MDA-MB-453异种移植模型的结果证明，所有测试剂量（即，5mg/kg、10mg/kg以及20mg/kg体重）到第71天时，Sh24C05-31N62S-IgG1显示出有效的肿瘤生长抑制。
这些结果还证明，以10mg/kg的剂量，当与Ab#6IgG2（62%，P<0.001）比较时，到第71天时Sh24C05-31N62S-IgG1显示出更大的肿瘤生长抑制（84%，p<0.001）。在相同剂量下，Sh24C05-31N62S-IgG1与U1-59显示出相等的肿瘤生长抑制。
通过引用进行结合
出于所有的目的，在此所提到的专利文件和科学论文中的每一篇的完整披露内容均通过引用结合在此。
等效物
可以用其他的具体形式实施本发明而不背离本发明的精神或本质特征。因此，上述的实施方案必须被认为在所有方面是用作说明的而不是对在此所说明的本发明进行限制。因此，本发明的范围是由所附的权利要求书而不是通过上述的说明来指明的，并且在该权利要求书的等效性的含义和范围之内的所有变化均旨在涵盖于其中。
权利要求书。

Claims (21)

1.一种分离的结合人类ErbB3的抗体，包括：
(i)一种免疫球蛋白重链可变区，包括一种包括选自由SEQID号:57以及SEQID号:75组成的组的氨基酸序列的CDRH1，一种包括选自由SEQID号:58以及SEQID号:148组成的组的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59的氨基酸序列的CDRH3；
(ii)一种免疫球蛋白轻链可变区，包括一种包括SEQID号:60的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:61的氨基酸序列的CDRL2，以及一种包含SEQID号:62的氨基酸序列的CDRL3。
2.如权利要求1所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括选自由SEQID号:57与SEQID号:75组成的组的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:148的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59的氨基酸序列的CDRH3；并且
其中该免疫球蛋白轻链可变区包括一种包括SEQID号:60的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:61的氨基酸序列的CDRL2，一种包括SEQID号:62的氨基酸序列的CDRL3。
3.如权利要求1所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链可变区包括一种包括选自由SEQID号:57与SEQID号:75组成的组的氨基酸序列的CDRH1，一种包括SEQID号:58的氨基酸序列的CDRH2，以及一种包括SEQID号:59的氨基酸序列的CDRH3；并且
其中该免疫球蛋白轻链可变区包括一种包括SEQID号:60的氨基酸序列的CDRL1，一种包括SEQID号:61的氨基酸序列的CDRL2，一种包括SEQID号:62的氨基酸序列的CDRL3。
4.如权利要求1所述的抗体，其中这些CDR序列是在人类或人源化框架序列之间插入。
5.如权利要求2所述的抗体，其中这些CDR序列是在人类或人源化框架序列之间插入。
6.如权利要求3所述的抗体，其中这些CDR序列是在人类或人源化框架序列之间插入。
7.如权利要求2所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链可变区和该免疫球蛋白轻链可变区选自：
(a)一个包括SEQID号:154的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区；以及
一个包括SEQID号:168的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；
(b)一个包括SEQID号:154的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区；以及
一个包括SEQID号:166的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
8.如权利要求7所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链可变区包括SEQID号:154的氨基酸序列，并且该免疫球蛋白轻链可变区包括SEQID号:168的氨基酸序列。
9.如权利要求2所述的抗体，其中该抗体包括选自以下组的一个免疫球蛋白重链和一个免疫球蛋白轻链，该组由以下项组成：
(a)一个包括SEQID号:190的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，和一个包括SEQID号:206的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链；和
(b)一个包括SEQID号:190的氨基酸序列的免疫球蛋白重链，和一个包括SEQID号:204的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
10.如权利要求9所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链包括SEQID号:190的氨基酸序列，并且该免疫球蛋白轻链包括SEQID号:206的氨基酸序列。
11.如权利要求3所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链可变区和该免疫球蛋白轻链可变区选自：
(a)一个包括SEQID号:152的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区；以及
一个包括SEQID号:168的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区；
(b)一个包括SEQID号:152的氨基酸序列的免疫球蛋白重链可变区；以及
一个包括SEQID号:166的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链可变区。
12.如权利要求3所述的抗体，其中该免疫球蛋白重链和该免疫球蛋白轻链选自：
(a)一个包括SEQID号:188的氨基酸序列的免疫球蛋白重链；以及
一个包括SEQID号:206的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链；
(b)一个包括SEQID号:188的氨基酸序列的免疫球蛋白重链；以及
一个包括SEQID号:204的氨基酸序列的免疫球蛋白轻链。
13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其中该抗体是一个单克隆抗体。
14.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其中该抗体具有如通过表面等离子体共振测量的200pM或更低的KD。
15.权利要求1-14中任一项所述的抗体在制备用于抑制或降低肿瘤细胞增殖的药物中的用途。
16.权利要求1-14中任一项所述的抗体在制备用于抑制或降低哺乳动物中的肿瘤生长的药物中的用途。
17.权利要求1-14中任一项所述的抗体在制备用于治疗哺乳动物中的癌症的药物中的用途。
18.一种分离的核酸，包括编码权利要求1-12中任一项所述的抗体的核苷酸序列。
19.一种表达载体，包括权利要求18所述的核酸。
20.一种宿主细胞，包括权利要求19所述的表达载体。
21.生产结合人类ErbB3的一种抗体的一种方法，该方法包括：
(a)在多种条件下生长权利要求20所述的宿主细胞，以使得该宿主细胞表达包含该免疫球蛋白重链可变区的多肽和包含该免疫球蛋白轻链可变区的多肽，从而生产该抗体；并且
(b)纯化该抗体。
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Denomination of invention: Anti-ERBB3 antibodies

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