KR20190120764A - 항 her3 항체-약물 콘주게이트 투여에 의한 egfr-tki 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법 - Google Patents

항 her3 항체-약물 콘주게이트 투여에 의한 egfr-tki 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법 Download PDF

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기미오 요네사카
가즈히코 나카가와
겐지 히로타니
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갓코 호진 긴키 다이가쿠
다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
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Abstract

(과제) EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법을 제공하는 것.
(해결 수단) 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 유효 성분으로서 함유하는 치료제, 또는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법을 제공하는 것.

Description

항 HER3 항체-약물 콘주게이트 투여에 의한 EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법
본 발명은, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법에 관한 것이다.
상피 성장 인자 수용체 (Epidermal Growth Factor Receptor ; EGFR) 유전자 변이 양성의 비소세포 폐암에 유효한 EGFR 티로신 키나아제 저해약 (EGFR-TKI) 을 사용하는 치료에서는, 많은 경우, 치료를 계속하는 중에 치료 대상 암에 있어서의 당해 저해약에 대한 약제 저항성이 증강되고, 결과적으로 병세가 진행한다. 제 1 세대의 EGFR-TKI 인 게피티닙 (Gefitinib) 및 에를로티닙 (Erlotinib), 그리고 제 2 세대의 EGFR-TKI 인 아파티닙 (Afatinib) 에 저항성의 암 중, 약 반수가 EGFR 유전자 상에 T790M 변이를 갖는 것이 알려져 있다. EGFR T790M 변이가 양성인 것이 확인된 비소세포 폐암에 유효한 약제로서 제 3 세대의 EGFR-TKI 인 오시머티닙 (Osimertinib) 이 알려져 있다 (비특허문헌 1). 그러나, 오시머티닙에 저항성의 비소세포 폐암에 대하여 지적 (至適) 인 약제는 여전히 승인되어 있지 않다. 또, EGFR-TKI 에 저항성을 나타내고 EGFR T790M 변이가 음성인 것이 확인된 비소세포 폐암에 대하여 지적인 약제도 여전히 승인되어 있지 않다.
인간 상피 증식 인자 수용체 3 (HER3, ErbB3 으로서도 알려짐) 은, 수용체 단백질 티로신 키나아제의 상피 증식 인자 수용체 서브패밀리에 속하는, 막 관통 수용체이다. 암세포에 있어서의 H3 의 발현량의 증가는 EGFR-TKI 에 대한 저항성의 획득과 관련성이 있는 것이 알려져 있다 (비특허문헌 2). 또한 비소세포 폐암에 대한 항 HER3 항체의 효과를 검증하는 연구가 실시되어 있다 (비특허문헌 3).
암세포 표면에 발현하며, 또한 세포에 내재화할 수 있는 항원에 결합하는 항체에, 세포 독성을 갖는 약물을 결합시킨 항체-약물 콘주게이트 (Antibody-Drug Conjugate ; ADC) 는, 암세포에 선택적으로 약물을 송달할 수 있음으로써, 암세포 내에 약물을 축적시키고, 암세포를 사멸시키는 것을 기대할 수 있다 (비특허문헌 4 ∼ 8).
항체-약물 콘주게이트의 하나로서, 항 HER3 항체와 토포이소머라아제 I 저해제인 엑사테칸을 구성 요소로 하는 항체-약물 콘주게이트가 알려져 있다 (특허문헌 1).
국제 공개 제2015/155998호
I. Sullivan et al. Ther Adv Respir Dis 2016, Vol. 10(6) 549-565. N.V. Sergina et al. Nature 2007 January 25 ; 445(7126) : 437-441. K Yonesaka et al., Oncogene (2016) 35, 878-886. Ducry, L., et al., Bioconjugate Chem. (2010) 21, 5-13. Alley, S. C., et al., Current Opinion in Chemical Biology (2010) 14, 529-537. Damle N. K. Expert Opin. Biol. Ther. (2004) 4, 1445-1452. Senter P. D., et al., Nature Biotechnology (2012) 30, 631-637. Howard A. et al., J Clin Oncol 29 : 398-405.
본 발명은, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법을 제공하는 것이 과제이다.
본 발명자들은, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암에 대하여, 우수한 항종양 효과를 나타내는 것을 알아냈다.
즉, 본 발명은,
[1]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 유효 성분으로서 함유하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
[2]
비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, [1] 에 기재된 치료제.
[3]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [1] 또는 [2] 에 기재된 치료제.
[4]
EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, [1] 또는 [2] 에 기재된 치료제.
[5]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, [2] 에 기재된 치료제.
[6]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, [2] 에 기재된 치료제.
[7]
비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, [1] ∼ [6] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[8]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
[화학식 1]
Figure pct00001
(식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, [1] ∼ [7] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[9]
항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [1] ∼ [8] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[10]
항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [1] ∼ [8] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[11]
항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, [1] ∼ [8] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[12]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [11] 에 기재된 치료제.
[13]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [1] ∼ [12] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[14]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [1] ∼ [12] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[15]
제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, [1] ∼ [14] 중 어느 한 항에 기재된 치료제.
[16]
제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [15] 에 기재된 치료제.
[17]
제 2 약제가 에를로티닙인, [16] 에 기재된 치료제.
[18]
제 2 약제가 오시머티닙인, [16] 에 기재된 치료제.
[19]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
[20]
비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, [19] 에 기재된 치료 방법.
[21]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [19] 또는 [20] 에 기재된 치료 방법.
[22]
EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, [19] 또는 [20] 에 기재된 치료 방법.
[23]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, [20] 에 기재된 치료 방법.
[24]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, [20] 에 기재된 치료 방법.
[25]
비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, [19] ∼ [24] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[26]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
[화학식 2]
Figure pct00002
(식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, [19] ∼ [25] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[27]
항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [19] ∼ [26] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[28]
항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [19] ∼ [26] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[29]
항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, [19] ∼ [26] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[30]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [29] 에 기재된 치료 방법.
[31]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [19] ∼ [30] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[32]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [19] ∼ [30] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[33]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, [19] ∼ [32] 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.
[34]
제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [33] 에 기재된 치료 방법.
[35]
제 2 약제가 에를로티닙인, [34] 에 기재된 치료 방법.
[36]
제 2 약제가 오시머티닙인, [34] 에 기재된 치료 방법.
[37]
EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료를 위한, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[38]
비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, [37] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[39]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [37] 또는 [38] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[40]
EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, [37] 또는 [38] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[41]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, [38] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[42]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, [38] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[43]
비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, [37] ∼ [42] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[44]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
[화학식 3]
Figure pct00003
(식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, [37] ∼ [43] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[45]
항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [37] ∼ [44] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[46]
항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [37] ∼ [44] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[47]
항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, [37] ∼ [44] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[48]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [47] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[49]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [37] ∼ [48] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[50]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [37] ∼ [48] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[51]
제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, [37] ∼ [50] 중 어느 한 항에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[52]
제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [51] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[53]
제 2 약제가 에를로티닙인, [52] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[54]
제 2 약제가 오시머티닙인, [52] 에 기재된 항 HER3 항체-약물 콘주게이트.
[55]
EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료용의 의약을 제조하기 위한, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 사용.
[56]
비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, [55] 에 기재된 사용.
[57]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [55] 또는 [56] 에 기재된 사용.
[58]
EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, [55] 또는 [56] 에 기재된 사용.
[59]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, [56] 에 기재된 사용.
[60]
EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, [56] 에 기재된 사용.
[61]
비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, [55] ∼ [60] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[62]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
[화학식 4]
Figure pct00004
(식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, [55] ∼ [61] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[63]
항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [55] ∼ [62] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[64]
항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, [55] ∼ [62] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[65]
항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, [55] ∼ [62] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[66]
항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, [65] 에 기재된 사용.
[67]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, [55] ∼ [66] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[68]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, [55] ∼ [66] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[69]
항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, [55] ∼ [68] 중 어느 한 항에 기재된 사용.
[70]
제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, [69] 에 기재된 사용.
[71]
제 2 약제가 에를로티닙인, [70] 에 기재된 사용.
[72]
제 2 약제가 오시머티닙인, [70] 에 기재된 사용.
에 관한 것이다.
본 발명에 의해, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법을 제공할 수 있다.
도 1 은, 항 HER3 항체 (1) 의 중사슬 아미노산 서열을 나타내는 도면이다.
도 2 는, 항 HER3 항체 (1) 의 경사슬 아미노산 서열을 나타내는 도면이다.
도 3 은, HER3-ADC(1) 의, HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성을 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (n ＝ 6) 를 나타낸다.
도 4 는, HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주에 있어서의 HER3 의 mRNA 량을 나타내는 도면이다.
도 5 는, HER3-ADC(1) 단제 (單劑), 에를로티닙 단제, 또는 HER3-ADC(1) 과 에를로티닙의 병용에 의한, HCC827GR5 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성을 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (n ＝ 6) 를 나타낸다.
도 6 은, HER3-ADC(1) 단제, 에를로티닙 단제, 또는 HER3-ADC(1) 과 에를로티닙의 병용 치료에 의한, 누드 마우스 이식 HCC827GR5 세포주에 대한 항종양 효과를 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 편차 (n ＝ 10) 를 나타낸다.
도 7 은, PC9 세포주 및 PC9AZDR7 세포주에 대한 오시머티닙의 세포 증식 억제 활성을 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (n ＝ 6) 를 나타낸다.
도 8 은, PC9 세포주 및 PC9AZDR7 세포주에 있어서의 HER3 의 단백질량을 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 편차 (n ＝ 3) 를 나타낸다.
도 9 는, 누드 마우스 이식 PC9 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 단제에서의 항종양 효과를 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (컨트롤군 n ＝ 8, HER3-ADC(1) 군 n ＝ 9) 를 나타내고, 화살표는 약제의 투여를 나타낸다.
도 10 은, 누드 마우스 이식 PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 단제에서의 항종양 효과를 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (컨트롤군 n ＝ 8, HER3-ADC(1) 군 n ＝ 9) 를 나타내고, 화살표는 약제의 투여를 나타낸다.
도 11 은, 누드 마우스 이식 PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 과 오시머티닙 병용에서의 항종양 효과를 나타내는 도면이다. 도면 중의 에러 바는 표준 오차 (컨트롤군 n ＝ 11, HER3-ADC(1) 단제군 n ＝ 12, 오시머티닙 단제군 n ＝ 12, HER3-ADC(1) 과 오시머티닙의 병용군 n ＝ 10) 를 나타내고, 화살표는 약제의 투여를 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 형태에 대하여 설명한다. 또한, 이하에 설명하는 실시형태는, 본 발명의 대표적인 실시형태의 례를 나타낸 것이고, 이것에 의해 본 발명의 범위가 좁게 해석되는 경우는 없다.
본 발명에 있어서, 「EGFR-TKI」란, EGFR 티로신 키나아제 저해약을 나타내고, 예를 들어, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 및 오시머티닙을 들 수 있다.
본 발명에 있어서, 게피티닙 및 에를로티닙을 제 1 세대의 EGFR-TKI, 아파티닙을 제 2 세대의 EGFR-TKI, 또한, 오시머티닙을 제 3 세대의 EGFR-TKI 라고 부르는 경우도 있다.
본 발명에 있어서, 「EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암」이란, EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 것이 확인된 비소세포 폐암, 그리고 EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 것을 합리적으로 인식 또는 예측할 수 있는 비소세포 폐암을 나타낸다.
본 발명에 있어서, 「EGFR T790M 변이」란, EGFR 티로신 키나아제 도메인의 ATP 결합 부위의 게이트키퍼 영역에 위치하는 790 번째의 아미노산 트레오닌이 메티오닌으로 변환된 변이를 나타낸다 (Pao W, et al., PLoS Med. 2(3) : e73, 2005, Kobayashi S, et al., N Engl J Med. 352(8) : 786-792, 2005). EGFR T790M 변이의 유무는, 비소세포 폐암의 환자로부터 조직 검체 또는 혈장 검체를 채취하고, 리얼 타임 PCR 법 등의 방법에 의해 확인할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「EGFR T790M 변이 양성의 비소세포 폐암」이란, EGFR T790M 변이가 양성인 것이 확인된 비소세포 폐암, 그리고 EGFR T790M 변이가 양성인 것을 합리적으로 인식 또는 예측할 수 있는 비소세포 폐암을 나타낸다.
EGFR T790M 변이 양성의 비소세포 폐암은, EGFR 의 ATP 결합 부위의 입체 구조에 변화가 생기고, 입체 장해 등의 기전으로, 제 1 세대의 EGFR-TKI 및 제 2 세대의 EGFR-TKI 에 대하여 저항성을 나타낸다고 생각되고 있으며, 제 1 세대의 EGFR-TKI 및 제 2 세대의 EGFR-TKI 의 저항성 예의 약 반수의 증례에서 확인되고 있다. EGFR T790M 변이 양성의 비소세포 폐암에 유효한 약제로서, 제 3 세대의 EGFR-TKI 인 오시머티닙이 알려져 있다.
오시머티닙 저항성의 비소세포 폐암에 대하여 지적인 약제는 여전히 승인되어 있지 않고, 언메트·메디컬 니즈가 존재한다.
오시머티닙 저항성의 비소세포 폐암에 상당하는 세포주로서, 예를 들어, PC9AZDR7 세포주를 들 수 있다. PC9AZDR7 세포주는, 인간 비소세포 폐암의 세포주인 PC9 를 친주로 하고, 오시머티닙에 대한 저항성을 획득한 세포주이고, 본원 명세서의 실시예 3-1 에 기재된 방법에 의해 수립할 수 있다.
오시머티닙 저항성의 비소세포 폐암에 대한 약제의 항종양 효과는, 상기 세포주에 대한 in vitro 에서의 세포 증식 억제 활성이나, 누드 마우스에 상기 세포주를 이식한 모델에서의 in vivo 에서의 종양 증식 억제율 등을 시험함으로써, 확인할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암」이란, EGFR T790M 변이가 음성인 것이 확인된 비소세포 폐암, 그리고 EGFR T790M 변이가 음성인 것을 합리적으로 인식 또는 예측할 수 있는 비소세포 폐암을 나타낸다.
EGFR-TKI 저항성의 증례에 있어서는, EGFR T790M 변이 양성의 비소세포 폐암 이외의 증례가 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 상당한다. 이와 같은 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암은, EGFR T790M 변이 이외의 변이 (예를 들어 MET 유전자의 증폭) 등에 의해 저항성을 획득했다고 생각되고 있지만, 미지의 저항성 메커니즘의 존재도 시사되고 있다.
EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 대하여 지적인 약제는 여전히 승인되어 있지 않고, 언메트·메디컬 니즈가 존재한다.
EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 상당하는 세포주로서, 예를 들어, HCC827GR5 세포주 (Engelman JA et al., Science 2007, 316(5827), 1039-1043) 를 들 수 있다. HCC827GR5 세포주는, 인간 비소세포 폐암의 세포주인 HCC827 을 친주로 하고, EGFR-TKI 인 게피티닙에 대한 저항성을 획득한 세포주이다. 또, 11-18 세포주 (Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 31 ; 109(31) : E2127-33) 나, Ma70GR 세포주 (K Yonesaka et al., Oncogene (2016) 35, 878-886) 도, EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 상당하는 세포주로서 사용할 수 있다.
EGFR-TKI 에 저항성을 나타내는 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 대한 약제의 항종양 효과는, 상기 세포주에 대한 in vitro 에서의 세포 증식 억제 활성이나, 누드 마우스에 상기 세포주를 이식한 모델에서의 in vivo 에서의 종양 증식 억제율 등을 시험함으로써, 확인할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「HER3」이란, 인간 상피 증식 인자 수용체 3 (ErbB3 이라고 불리는 경우도 있다) 과 동일한 의미이고, HER1, HER2 및 HER4 와 함께 수용체 단백질 티로신 키나아제의 상피 증식 인자 수용체 서브패밀리에 속하는, 막 관통 수용체이다. HER3 은 유방암, 위장암 및 췌장암 등, 몇 가지 종류의 암에 있어서 발현하고 있고, EGFR 이나 HER2 등의 티로신 키나아제 수용체 등과 헤테로 2 량체를 형성함으로써, 자신이 인산화를 받고, 암세포의 증식이나 아포토시스 억제 시그널을 유도하는 것이 알려져 있다.
본 발명에서 사용하는 HER3 단백질은, 인간의 HER3 발현 세포로부터 직접 정제하여 사용하거나, 혹은, 항원으로서 사용할 때에는, 당해 세포의 세포막 획분을 HER3 단백질로서 사용할 수 있고, 또, HER3 을 in vitro 에서 합성하거나, 또는 유전자 조작에 의해 숙주 세포에 산생시킴으로써 얻을 수 있다. 유전자 조작에서는, 구체적으로는, HER3 cDNA 를 발현 가능한 벡터에 도입한 후, 당해 벡터를 전사와 번역에 필요한 효소, 기질 및 에너지 물질을 포함하는 용액 중에서 인큐베이트함으로써, HER3 을 합성할 수 있다. 혹은 다른 원핵 생물, 또는 진핵 생물의 숙주 세포를 당해 벡터에서 형질 전환시키고, HER3 을 발현시킴으로써, 그 단백질을 얻을 수 있다. 또, 상기의 유전자 조작에 의한 HER3 발현 세포, 또는 HER3 을 발현하고 있는 세포주를 HER3 단백질 항원으로서 사용하는 것도 가능하다.
HER3 의 RNA 서열, cDNA 서열 및 아미노산 서열은 공적 데이터베이스 상에 공개되어 있고, 예를 들어 AAA35979 (아미노 말단 19 아미노산 잔기로 이루어지는 시그널 서열을 포함하는 전구체), M34309 (NCBI) 등의 액세션 번호에 의해 참조 가능하다.
또, 상기 HER3 의 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 10 개의 아미노산이 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입된 아미노산 서열로 이루어지고, 당해 단백질과 동등한 생물 활성을 갖는 단백질도 HER3 에 포함된다.
본 발명에 있어서, 「항 HER3 항체」란, HER3 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는, HER3 과 결합함으로써 HER3 발현 세포에 내재화하는 활성을 갖는 항체, 바꿔 말하면, HER3 과 결합한 후, HER3 발현 세포 내로 이동하는 활성을 갖는 항체를 나타낸다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체는, 공지된 수단에 의해 취득할 수 있다. 예를 들어, 이 분야에서 통상 실시되는 방법을 사용하여, 항원이 되는 HER3 또는 HER3 의 아미노산 서열로부터 선택되는 임의의 폴리펩티드를 동물에 면역하고, 생체 내에 산생되는 항체를 채취, 정제함으로써 얻을 수 있다. 항원의 유래는 인간에 한정되지 않고, 마우스, 래트 등의 인간 이외의 동물에서 유래하는 항원을 동물에 면역할 수도 있다. 이 경우에는, 취득된 이종 항원에 결합하는 항체와 인간 항원과의 교차성을 시험함으로써, 인간의 질환에 적용 가능한 항 HER3 항체를 선별할 수 있다.
또, 공지된 방법 (예를 들어, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497 ; Kennet, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y.(1980)) 에 따라, 항원에 대한 항체를 산생하는 항체 산생 세포와 미엘로마 세포를 융합시킴으로써 하이브리도마를 수립하고, 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다.
또한, 항원은 항원 단백질을 코드하는 유전자를 유전자 조작에 의해 숙주 세포에 산생시킴으로써 얻을 수 있다. 구체적으로는, 항원 유전자를 발현 가능한 벡터를 제작하고, 이것을 숙주 세포에 도입하여 그 유전자를 발현시키고, 발현한 항원을 정제하면 된다. 상기의 유전자 조작에 의한 항원 발현 세포, 또는 항원을 발현하고 있는 세포주를 동물에 면역하는 방법을 사용하는 것에 의해서도 항체를 취득할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체는, 인간에 대한 이종 항원성을 저하시키는 것 등을 목적으로 하여 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체, 예를 들어, 키메라 (Chimeric) 항체, 인간화 (Humanized) 항체인 것이 바람직하고, 또는 인간 유래의 항체의 유전자 서열만을 갖는 항체, 즉 인간 항체인 것이 바람직하다. 이들 항체는, 이미 알려진 방법을 사용하여 제조할 수 있다.
키메라 항체로는, 항체의 가변 영역과 정상 영역이 서로 이종인 항체, 예를 들어 마우스 또는 래트 유래 항체의 가변 영역을 인간 유래의 정상 영역에 접합한 키메라 항체를 들 수 있다 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984)).
인간화 항체로는, 이종 항체의 상보성 결정 영역 (CDR ; complementarity determining region) 만을 인간 유래의 항체에 도입한 항체 (Nature (1986) 321, p.522-525), CDR 이식법에 의해, 이종 항체의 CDR 의 서열에 더하여, 이종 항체의 일부의 프레임 워크의 아미노산 잔기도 인간 항체에 이식한 항체 (국제 공개 제90/07861호), 유전자 변환 돌연변이 유발 (gene conversion mutagenesis) 스트래티지를 사용하여 인간화한 항체 (미국 특허 제5821337호) 를 들 수 있다.
인간 항체로는, 인간 항체의 중사슬과 경사슬의 유전자를 포함하는 인간 염색체 단편을 갖는 인간 항체 산생 마우스를 사용하여 작성한 항체 (Tomizuka, K. et al., Nature Genetics (1997) 16, p.133-143 ; Kuroiwa, Y. et. al., Nucl. Acids Res. (1998) 26, p.3447-3448 ; Yoshida, H. et. al., Animal Cell Technology : Basic and Applied Aspects vol.10, p.69-73 (Kitagawa, Y., Matsuda, T. and Iijima, S. eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999 ; Tomizuka, K. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97, p.722-727 등을 참조.) 를 들 수 있다. 혹은, 인간 항체 라이브러리로부터 선별한 파지 디스플레이에 의해 취득한 항체 (Wormstone, I. M. et. al, Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (7), p.2301-2308 ; Carmen, S. et. al., Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1(2), p.189-203 ; Siriwardena, D. et. al., Ophthalmology (2002) 109(3), p.427-431 등 참조.) 도 들 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체에는, 항체의 수식체도 포함된다. 당해 수식체란, 본 발명에 관련된 항체에 화학적 또는 생물학적인 수식이 실시되어 이루어지는 것을 의미한다. 화학적인 수식체에는, 아미노산 골격에 대한 화학 부분의 결합, N-결합 또는 O-결합 탄수화물 사슬에 대한 화학 부분의 결합을 갖는 화학 수식체 등이 포함된다. 생물학적인 수식체에는, 번역 후 수식 (예를 들어, N-결합 또는 O-결합형 당사슬의 부가, N 말단 또는 C 말단의 프로세싱, 탈아미드화, 아스파르트산의 이성화, 메티오닌의 산화 등) 된 것, 원핵 생물 숙주 세포를 사용하여 발현시킴으로써 N 말단에 메티오닌 잔기가 부가된 것 등이 포함된다. 또, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체 또는 항원의 검출 또는 단리를 가능하게 하기 위해 표지된 것, 예를 들어, 효소 표지체, 형광 표지체, 어피니티 표지체도 이러한 수식체의 의미에 포함된다. 이와 같은 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체의 수식체는, 항체의 안정성 및 혈중 체류성의 개선, 항원성의 저감, 항체 또는 항원의 검출 또는 단리 등에 유용하다.
또, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체에 결합하고 있는 당사슬 수식을 조절하는 것 (글리코실화, 탈푸코오스화 등) 에 의해, 항체 의존성 세포 상해 활성을 증강시키는 것이 가능하다. 항체의 당사슬 수식의 조절 기술로는, 국제 공개 제99/54342호, 국제 공개 제00/61739호, 국제 공개 제02/31140호 등이 알려져 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체에는 당해 당사슬 수식이 조절된 항체도 포함된다.
또한, 포유류 배양 세포에서 생산되는 항체에서는, 그 중사슬의 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실하는 것이 알려져 있고 (Journal of Chromatography A, 705 : 129-134(1995)), 또, 동일하게 중사슬 카르복실 말단의 글리신, 리신의 2 아미노산 잔기가 결실하고, 새롭게 카르복실 말단에 위치하는 프롤린 잔기가 아미드화되는 것이 알려져 있다 (Analytical Biochemistry, 360 : 75-83(2007)). 그러나, 이들 중사슬 서열의 결실 및 수식은, 항체의 항원 결합능 및 이펙터 기능 (보체의 활성화나 항체 의존성 세포 장해 작용 등) 에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체에는, 당해 수식을 받은 항체 및 당해 항체의 기능성 단편도 포함되고, 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 의 아미노산이 결실한 결실체, 및 아미드화된 당해 결실체 (예를 들어, 카르복실 말단 부위의 프롤린 잔기가 아미드화된 중사슬) 등도 포함된다. 단, 항원 결합능 및 이펙터 기능이 유지되고 있는 한, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체의 중사슬의 카르복실 말단의 결실체는 상기의 종류에 한정되지 않는다. 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체를 구성하는 2 개의 중사슬은, 완전 길이 및 상기의 결실체로 이루어지는 군에서 선택되는 중사슬 중 어느 1 종이어도 되고, 어느 2 종을 조합한 것이어도 된다. 각 결실체의 양비는 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체를 산생하는 포유류 배양 세포의 종류 및 배양 조건에 영향을 받을 수 있지만, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체는, 바람직하게는, 2 개의 중사슬의 쌍방에서 카르복실 말단의 하나의 아미노산 잔기가 결실되어 있는 것을 들 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체의 아이소타입으로는, 예를 들어 IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) 등을 들 수 있지만, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG2 를 들 수 있다. 또, 이들의 개변체도 본 발명에 관련된 항 HER3 항체로서 이용할 수 있다.
본 발명에 있어서 사용할 수 있는 항 HER3 항체로는, 파트리투맙 (Patritumab, U3-1287), U1-59 (국제 공개 제2007/077028호), AV-203 (국제 공개 제2011/136911호), LJM-716 (국제 공개 제2012/022814호), 둘리고투맙 (Duligotumab, MEHD-7945A) (국제 공개 제2010/108127호), Istiratumab (MM-141) (국제 공개 제2011/047180호), 룸레투주맙 (Lumretuzumab, RG-7116) (국제 공개 제2014/108484호), 세리반투맙 (Setibantumab, MM-121) (국제 공개 제2008/100624호), REGN-1400 (국제 공개 제2013/048883호), ZW-9 (국제 공개 제2013/063702), 및 그들의 개변체, 활성 단편, 수식체 등을 들 수 있고, 바람직하게는, 파트리투맙, 및 U1-59 를 들 수 있다. 이들 항 HER3 항체는, 상기 문헌에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항체-약물 콘주게이트」란, 항체에, 세포 독성을 갖는 약물을, 링커를 개재하여 결합시킨 복합체를 나타낸다. 항체-약물 콘주게이트로는, 예를 들어, 미국 특허 제6214345호, 국제 공개 제2002/083067호, 국제 공개 제2003/026577호, 국제 공개 제2004/054622호, 국제 공개 제2005/112919호, 국제 공개 제2006/135371호, 국제 공개 제2007/112193호, 국제 공개 제2008/033891호, 국제 공개 제2009/100194호, 국제 공개 제2009/134976호, 국제 공개 제2009/134977호, 국제 공개 제2010/093395호, 국제 공개 제2011/130613호, 국제 공개 제2011/130616호, 국제 공개 제2013/055993호, 국제 공개 제2014/057687호, 국제 공개 제2014/061277호, 국제 공개 제2014/107024호, 국제 공개 제2014/134457호, 및 국제 공개 제2014/145090호에 기재된 것을 들 수 있고, 바람직하게는, 국제 공개 제2014/057687호, 및 국제 공개 제2014/061277호에 기재된 것이고, 보다 바람직하게는, 국제 공개 제2014/057687호에 기재된 것이다. 이들 항체-약물 콘주게이트는 상기 문헌에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.
세포 독성을 갖는 약물로는, 항종양 효과를 갖고, 링커에 결합할 수 있는 치환기나 부분 구조를 갖는 것이면 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 캄프토테신 (Camptothecin), 칼리키아미신 (Calicheamicin), 독소루비신 (Doxorubicin), 다우노루비신 (Daunorubicin), 마이토마이신 C (Mitomycin C), 블레오마이신 (Bleomycin), 시클로시티딘 (Cyclocytidine), 빈크리스틴 (Vincristine), 빈블라스틴 (Vinblastine), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 시스플라틴 (Cisplatin), 아우리스타틴 E (Auristatin E), 메이탄신 (Maytansine), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 피롤로벤조디아제핀 (Pyrrolobenzodiazepine), 및 이들의 유도체를 들 수 있고, 바람직하게는, 캄프토테신 유도체를 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 엑사테칸 (Exatecan) 유도체를 들 수 있다. 토포이소머라아제 I 저해제인 엑사테칸 (IUPAC 명 : (1S,9S)-1-아미노-9-에틸-5-플루오로-1,2,3,9,12,15-헥사하이드로-9-하이드록시-4-메틸-10H,13H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-10,13-디온, (화학명 : ((1S,9S)-1-아미노-9-에틸-5-플루오로-2,3-디하이드로-9-하이드록시-4-메틸-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-10,13(9H,15H)-디온) 으로서 나타낼 수도 있다)) 은, 다음 식
[화학식 5]
Figure pct00005
으로 나타내는 화합물이다.
본 발명에 있어서, 「약물 링커」란, 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 약물과 링커 부분, 바꿔 말하면, 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 항체 이외의 부분 구조를 나타낸다.
본 발명에 있어서, 「항 HER3 항체-약물 콘주게이트」란, 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 항체가 항 HER3 항체인 항체-약물 콘주게이트를 나타낸다. 항 HER3 항체-약물 콘주게이트로는, 예를 들어, 국제 공개 제2012/019024호, 국제 공개 제2012/064733호, 및 국제 공개 제2015/155998호에 기재된 것을 들 수 있고, 바람직하게는, 국제 공개 제2015/155998호에 기재된 것을 들 수 있다. 이들 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 상기 문헌에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.
본 발명에 있어서 보다 바람직하게 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 식
[화학식 6]
Figure pct00006
(식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트이다. 이 약물 링커는, 항체의 사슬 사이의 디술피드 결합 부위 (2 개 지점의 중사슬-중사슬 사이, 및 2 개 지점의 중사슬-경사슬 사이) 에 있어서 생긴 티올기 (바꿔 말하면, 시스테인 잔기의 황 원자) 에 결합하고 있다.
본 발명에 있어서 보다 바람직하게 사용되는, 상기의 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 다음 식으로 나타낼 수도 있다.
[화학식 7]
Figure pct00007
여기서, 약물 링커는 항체와 티오에테르 결합에 의해 결합하고 있다. 또, n 은 이른바 평균 약물 결합수 (DAR ; Drug-to-Antibody Ratio) 와 동일한 의미이고, 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수를 나타낸다.
본 발명에 있어서 보다 바람직하게 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 종양 세포 내로 이행한 후에 링커 부분이 절단되고, 식
[화학식 8]
Figure pct00008
으로 나타내는 화합물을 방출한다.
상기 화합물은, 본 발명에 있어서 보다 바람직하게 사용되는, 상기의 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 항종양 활성의 본체라고 생각되고, 토포이소머라아제 I 저해 작용을 갖는 것이 확인되어 있다 (Ogitani Y. et al., Clinical Cancer Research, 2016, Oct 15;22(20) : 5097-5108, Epub 2016 Mar 29).
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 항 HER3 항체 부분은, 바람직하게는, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이고,
보다 바람직하게는, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체이고,
더욱더 바람직하게는, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체, 또는, 상기 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는 항체이다.
상기의 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 제조에 사용되는 약물 링커 중간체는, 다음 식으로 나타낸다.
[화학식 9]
Figure pct00009
상기의 약물 링커 중간체는, N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]글리실글리실-L-페닐알라닐-N-[(2-{[(1S,9S)-9-에틸-5-플루오로-9-하이드록시-4-메틸-10,13-디옥소-2,3,9,10,13,15-헥사하이드로-1H,12H-벤조[de]피라노[3',4':6,7]인돌리지노[1,2-b]퀴놀린-1-일]아미노}-2-옥소에톡시)메틸]글리신아미드라고 하는 화학명으로 나타낼 수 있고, 국제 공개 제2014/057687호 및 국제 공개 제2015/155998호 등의 기재를 참고로 제조할 수 있다.
본 발명에서 바람직하게 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 전술한 약물 링커 중간체와, 티올기 (또는 술프히드릴기라고도 한다) 를 갖는 항 HER3 항체를 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
술프히드릴기를 갖는 항 HER3 항체는, 당업자에게 주지된 방법으로 얻을 수 있다 (Hermanson, G. T, Bioconjugate Techniques, pp.56-136, pp.456-493, Academic Press(1996)). 예를 들어, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀염산염 (TCEP) 등의 환원제를, 항체 내 사슬 사이 디술피드 1 개당에 대하여 0.3 내지 3 몰 당량 사용하고, 에틸렌디아민사아세트산 (EDTA) 등의 킬레이트제를 포함하는 완충액 중에서, 항 HER3 항체와 반응시킴으로써, 항체 내 사슬 사이 디술피드가 부분적 혹은 완전하게 환원된 술프히드릴기를 갖는 항 HER3 항체를 얻을 수 있다.
또한, 술프히드릴기를 갖는 항 HER3 항체 1 개당, 2 내지 20 몰 당량의 약물 링커 중간체를 사용하여, 항체 1 개당 2 개 내지 8 개의 약물이 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 제조할 수 있다.
제조한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 항체 1 분자당 평균 약물 결합수는, 예를 들어, 280 ㎚ 및 370 ㎚ 의 2 파장에 있어서의 항 HER3 항체-약물 콘주게이트와 그 콘주게이션 전구체의 UV 흡광도를 측정함으로써 산출하는 방법 (UV 법) 이나, 항체-약물 콘주게이트를 환원제로 처리하여 얻어진 각 프래그먼트를 HPLC 측정에 의해 정량하고 산출하는 방법 (HPLC 법) 에 의해 실시할 수 있다.
항 HER3 항체와 약물 링커 중간체의 콘주게이션, 및 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 항체 1 분자당 평균 약물 결합수의 산출은, 국제 공개 제2015/155998호 등의 기재를 참고로 실시할 수 있다.
본 발명에 있어서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수는, 바람직하게는 2 내지 8 이고, 보다 바람직하게는 3 내지 8 이고, 더욱더 바람직하게는 7 내지 8 이고, 더욱더 바람직하게는 7.5 내지 8 이고, 더욱더 바람직하게는 약 8 이다.
본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하고, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료를 위해 사용할 수 있다. 상기 「비소세포 폐암」은 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암이어도 되고, EGFR T790M 변이 양성의 비소세포 폐암이어도 된다.
상기 「EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암」에 있어서의 「EGFR-TKI」는, 바람직하게는, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙이고, 보다 바람직하게는 오시머티닙이다. 또, 상기 「EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암」에 있어서의 「비소세포 폐암」이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인 경우에는, 상기 「EGFR-TKI」는, 바람직하게는, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙이고, 보다 바람직하게는, 게피티닙, 또는 에를로티닙이다.
상기 「EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암」은, 바람직하게는 HER3 을 발현하고 있고, 보다 바람직하게는 HER3 을 고 (高) 발현하고 있다. HER3 의 발현은, 예를 들어, 면역 조직 화학법 (IHC) 이나 플로우 사이토미터, 웨스턴 블롯 (western blot) 법 등에 의한 HER3 의 유전자 산물 (단백질) 레벨에서의 검출, 또는, in situ 하이브리다이제이션법 (ISH) 이나 정량적 PCR 법 (q-PCR) 에 의한 유전자의 전사 레벨에서의 검출에 의해 확인할 수 있다. HER3 이 고발현하고 있는지의 여부는, 당업자에게 주지된 방법을 사용하여 판정할 수 있다.
본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트 이외의 1 이상의 다른 약제 (예를 들어, 제 2 약제) 를 포함하고 있어도 된다. 즉, 본 발명의 치료제 또는 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트는, 다른 약제와 병용하여 투여할 수도 있고, 이로써 항암 효과를 증강시킬 수 있다. 이와 같은 목적으로 사용되는 다른 약제는, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트와 동시에, 따로따로, 혹은 연속해서 개체에 투여되어도 되고, 각각의 투여 간격을 바꾸어 투여되어도 된다. 다른 약제 또는 제 2 약제는, 바람직하게는 암 치료제이다. 이와 같은 암 치료제로는, 항종양 활성을 갖는 약제이면 한정되는 경우는 없지만, 예를 들어, EGFR-TKI, 시스플라틴 (Cisplatin), 카르보플라틴 (Carboplatin), 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 도세탁셀 (Docetaxel), 겜시타빈 (Gemcitabine), 카페시타빈 (Capecitabine), 이리노테칸 (Irinotecan) (CPT-11), 에토포시드 (Etoposide), 시클로포스파미드 (Cyclophosphamide), 독소루비신 (Doxorubicin), 빈블라스틴 (Vinblastin), 및 빈크리스틴 (Vincristine) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나이고, 바람직하게는 EGFR-TKI 이다.
상기의 EGFR-TKI 로는, 바람직하게는 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙이고, 보다 바람직하게는 에를로티닙, 또는 오시머티닙이고, 더욱더 바람직하게는 오시머티닙이다.
본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 암 치료의 주요한 치료법인 약물 요법을 위한 약제로서 선택하여 사용할 수 있고, 그 결과로서, 암세포의 성장을 늦추고, 증식을 억제하고, 나아가서는 암세포를 파괴할 수 있다. 이들 작용에 의해, 암환자에 있어서, 암에 의한 증상으로부터의 해방이나, QOL 의 개선을 달성할 수 있고, 암환자의 생명을 유지하고 치료 효과가 달성된다. 암세포의 파괴에는 이르지 않는 경우라도, 암세포의 증식의 억제나 컨트롤에 의해 암환자에 있어서 보다 높은 QOL 을 달성하면서 보다 장기의 생존을 달성시킬 수 있다.
이와 같은 약물 요법에 있어서의 약물 단독으로의 사용 외에, 본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 아주반트 요법에 있어서 다른 요법과 조합하는 약제로서도 사용할 수 있고, 외과 수술이나, 방사선 요법, 호르몬 요법 등과 조합할 수 있다. 나아가서는 네오아주반트 요법에 있어서의 약물 요법의 약제로서 사용할 수도 있다.
이상과 같은 치료적 사용 외에, 본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 미세한 전이 암세포의 증식을 억제하고, 나아가서는 파괴한다고 하는 예방 효과도 기대할 수 있다. 예를 들어, 전이 과정에서 체액 중에 있는 암세포를 억제하고 파괴하는 효과나, 어느 조직에 착상한 직후의 미세한 암세포에 대한 억제, 파괴 등의 효과를 기대할 수 있다. 따라서, 특히 외과적인 암의 제거 후에 있어서의 암 전이의 억제, 예방 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 환자에 대해서는 전신 요법으로서 적용하는 것 외에, 암 조직에 국소적으로 적용하여 치료 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 치료제 및 치료 방법은, 포유 동물에 대하여 바람직하게 사용할 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간에 대하여 사용할 수 있다.
본 발명의 치료제는, 1 종 이상의 약학적으로 적합성의 성분을 포함하는 의약 조성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 의약 조성물에 있어서 사용되는 물질로는, 투여량이나 투여 농도에 있어서, 이 분야에 있어서 통상 사용되는 제제 첨가물 그 외로부터 적절히 선택하여 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 의약 조성물은, 대표적으로는, 1 종 이상의 약학적 캐리어 (예를 들어, 멸균한 액체) 를 포함한다. 여기서 액체에는, 예를 들어, 물 및 기름 (석유, 동물 기원, 식물 기원, 또는 합성 기원의 기름) 이 포함된다. 기름은, 예를 들어, 낙화생유, 대두유, 광유, 참깨유 등이어도 된다. 물은, 상기 의약 조성물이 정맥 내 투여되는 경우에, 보다 대표적인 캐리어이다. 식염수 용액, 그리고 덱스트로오스 수용액 및 글리세롤 수용액도 또한, 액체 캐리어로서, 특히, 주사용 용액을 위해 사용될 수 있다. 적절한 약학적 부형제는, 이 분야에서 공지된 것으로부터 적절히 선택할 수 있다. 상기 의약 조성물은 또한, 소망한다면, 미량의 습윤제 혹은 유화제, 또는 pH 완충화제를 포함할 수 있다. 적절한 약학적 캐리어의 예는, E. W. Martin 에 의한 「Remington's Pharmaceutical Sciences」에 기재된다. 그 처방은, 투여의 양태에 대응한다.
여러 가지 송달 시스템이 공지되어 있고, 본 발명의 의약 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 도입 경로로는, 피내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 및 피하의 경로를 들 수 있지만, 이들에 한정되는 경우는 없다. 투여는, 예를 들어, 주입 또는 볼러스 주사에 의한 것일 수 있다. 특정의 바람직한 실시형태에 있어서, 상기 항체-약물 콘주게이트의 투여는, 주입에 의한 것이다. 비경구적 투여는, 바람직한 투여 경로이다.
대표적 실시형태에 있어서, 상기 의약 조성물은, 인간에 대한 정맥 내 투여에 적합한 조성물로서, 상습적 순서에 따라 처방된다. 대표적으로는, 정맥 내 투여를 위한 조성물은, 멸균의 등장성의 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 상기 의약 조성물은 또한, 가용화제 및 주사 부위에서의 동통을 완화시키기 위한 국소 마취제 (예를 들어, 리그노카인) 를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 성분은, 예를 들어, 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 사셰 등에 밀봉하여 시일된 용기 중의 건조 동결 건조 분말 또는 무수의 농축물로서, 별개로, 또는 단위 제형 중에서 함께 혼합하여, 중 어느 것으로 공급된다. 상기 의약 조성물이 주입에 의해 투여되는 형태인 경우, 그것은, 예를 들어, 멸균의 제약 그레이드의 물 또는 식염수를 포함하는 주입 보틀로 투약될 수 있다. 상기 의약이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰플은, 예를 들어, 상기 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 제공될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 1 회당 투여량은, 바람직하게는, 1.6 ㎎/㎏ 내지 12.4 ㎎/㎏ 의 범위이고, 보다 바람직하게는, 3.2 ㎎/㎏, 4.8 ㎎/㎏, 6.4 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏, 9.6 ㎎/㎏, 또는 12.4 ㎎/㎏ 이고, 더욱더 바람직하게는, 4.8 ㎎/㎏, 6.4 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏, 9.6 ㎎/㎏, 또는 12.4 ㎎/㎏ 이다.
또, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 제 2 약제 (바람직하게는 EGFR-TKI 이고, 보다 바람직하게는 에를로티닙 또는 오시머티닙이고, 더욱더 바람직하게는 오시머티닙이다) 와 병용하는 경우, 본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 1 회당 투여량은, 바람직하게는, 0.8 ㎎/㎏ 내지 12.4 ㎎/㎏ 의 범위이고, 보다 바람직하게는, 1.6 ㎎/㎏, 3.2 ㎎/㎏, 4.8 ㎎/㎏, 6.4 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏, 9.6 ㎎/㎏, 또는 12.4 ㎎/㎏ 이고, 더욱더 바람직하게는, 3.2 ㎎/㎏, 4.8 ㎎/㎏, 6.4 ㎎/㎏, 8 ㎎/㎏, 9.6 ㎎/㎏, 또는 12.4 ㎎/㎏ 이다.
본 발명에서 사용되는 항 HER3 항체-약물 콘주게이트의 투여 간격은, 바람직하게는, 1 주에 1 회 (q1w), 2 주에 1 회 (q2w), 3 주에 1 회 (q3w), 또는 4 주에 1 회 (q4w) 이고, 보다 바람직하게는 3 주에 1 회 (q3w) 이다.
실시예
이하에 나타내는 예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또, 이들은 어떠한 의미에 있어서도 한정적으로 해석되는 것은 아니다.
실시예 1 : 항체-약물 콘주게이트의 조제
국제 공개 제2015/155998호에 기재된 제조 방법에 따라, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 (도 1), 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 (도 2) 을 포함하는, 항 HER3 항체 (본 발명에 있어서, 「항 HER3 항체 (1)」이라고 한다) 를 사용하여, 식
[화학식 10]
Figure pct00010
(식 중, A 는 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트 (본 발명에 있어서 「HER3-ADC(1)」이라고 한다) 를 제조하였다. HER3-ADC(1) 에 있어서의 1 항체당 평균 약물 결합수는 7.6 이다.
실시예 2 : HCC827GR5 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 의 감수성 시험
실시예 2-1 : HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성
HCC827 세포주를 R10 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조)) 를 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. HCC827GR5 세포주는, 상기의 배지에 최종 농도 1 μM 의 게피티닙을 포함하는 배지에서 배양하였다. 한편, HCC827GR5 세포주는, 에를로티닙 단제 및 항 HER3 항체 (1) (HER3-ADC(1) 의 항체 부분) 의 단제 치료에 대하여 강한 감수성을 나타내지 않는 것이 보고되어 있다 (K Yonesaka et al., Oncogene (2016) 35, 878-886). HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주를 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리하고, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 10 ％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI1640 배지에 현탁하고, 100000 개/㎖ 의 농도로 조제하였다. 각 세포 현탁액 50 μL 를 스미론 96 웰 플레이트 (스미토모 베이크라이트 제조) 의 각 웰에 첨가하고 (5000 개/웰), 배양을 실시하였다. 배양 개시 3 일 후에, R10 배지에 용해한 HER3-ADC(1) 희석액, 또는 음성 컨트롤로서 약제를 함유하지 않는 R10 배지를 첨가하고, 배양을 실시하였다 (최종의 용액량은 각 웰 100 μl, 또한 배양액의 최종 농도는 0, 0.0033, 0.01, 0.033, 0.1, 0.33, 1, 3.3, 10 ㎍/㎖ 로 하였다). 치료 개시 7 일째에, CellTiter Glo (프로메가사 제조) 를 각 웰에 50 μL 씩 첨가 후, 플레이트 믹서로 2 분간 교반하고, 차광 조건하에서 30 분간 정치 (靜置) 하였다. 각 웰로부터 120 μL 를 분취하고, 흑색의 마이크로 플레이트로 옮겨, 루미노미터로 발광값을 측정하였다.
각 약제의 세포 증식 억제 활성 (％ 컨트롤) 은, 이하의 식을 사용하여 산출하였다.
％ 컨트롤 ＝ (검체 첨가 웰에 있어서의 발광값의 평균값 ÷ 음성 컨트롤 웰에 있어서의 발광값의 평균값) × 100
각 군 6 웰로 실험을 실시하였다.
그 결과를 도 3 에 나타낸다. HCC827GR5 세포주에 대하여, HER3-ADC(1) 의 10, 3.3, 1 ㎍/㎖ 첨가군에 있어서 각각 41.3, 40.0 및 50.0 ％ 의 세포 증식 억제 활성이 확인되었다. 한편, HCC827 세포주에 대해서는 3.3 ㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포 증식 억제 활성은 확인되지 않았다.
이상의 결과로부터, HER3-ADC(1) 은, HCC827GR5 세포주에 대하여 세포 증식 억제 활성을 나타내는 것이 분명해졌다.
실시예 2-2 : HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주에 있어서의 HER3 mRNA 의 발현
1. 총 RNA 의 조제
총 RNA 의 조제는, Rneasy Mini Kit (Qiagen 제조) 를 사용하여 실시하였다. HCC827 세포주를 R10 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조)) 를 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. HCC827GR5 세포주는, 상기의 배지에 최종 농도 1 μM 의 게피티닙을 포함하는 배지에서 배양하였다. HCC827 세포주 및 HCC827GR5 세포주를 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리하고, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 10 ％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI1640 배지에 현탁하였다. 각 세포 5000000 개를 회수하고, 원심 분리 후, 완충액 RLT (100 : 1 로 β 메르카프토에탄올 함유) 600 μL 를 첨가하고, 30 초간 교반 후, -80 ℃ 에서 보존하였다. 조제한 용액을 용해 후, QIAShredder 에 첨가하고, 15000 rpm 으로 2 분간의 원심 분리를 실시하고, 추출액에 70 ％ 에탄올 600 μL 를 첨가하고, 교반하였다. 이 용액을 스핀 컬럼 (Spin column) 에 첨가 후, 12000 rpm 으로 15 초간 원심 분리하였다. 스핀 컬럼에 80 μL 의 DNase(+) (70 μL 완충액 RDD, 10 μL DNaseI 저장액 (stock solution)) 를 첨가하고, 실온에서 15 분간 정치 후, 700 μL 의 완충액 RW 를 첨가하고, 10000 rpm 이상으로 15 초간 원심 분리를 실시하였다. 콜렉션 튜브 (Collection tube) 를 교체하고, 500 μL 의 완충액 RPE 첨가 후, 10000 rpm 이상으로 15 초간 원심 분리하고, 추출액을 폐기하였다. 재차 500 μL 의 완충액 RPE 를 첨가하고 2 분간의 원심 분리 후, 회수용 튜브로 교체하고 스핀 컬럼 (Spin column) 에 Rnase 무첨가 물 100 μL 를 첨가하고 5 분간 정치하였다. 12000 rpm 이상으로 15 초간의 원심 분리를 실시한 후에, 회수용 튜브 내의 총 RNA 량을 측정하였다.
2. cDNA 의 조제
cDNA 의 조제는, High Capacity RNA-to-cDNA Kit (Applied Biosystems 제조) 를 사용하여 실시하였다. 2x RT 완충액, 20x RT Enzyme Mix, Nuclease 무첨가 H20 으로 조제한 용액에, 상기 조작으로 조제한 RNA 2 ㎍ 을 첨가하고, 총 볼륨 20 μL 의 용액을 조제하였다. 원심 분리를 실시하고 기포를 제거한 후에 서멀 사이클러에 장착하고, 37 ℃ 에서 60 분간, 95 ℃ 에서 5 분간 반응 후, 4 ℃ 로 냉각함으로써 역전사 반응을 실시하고, cDNA 를 조제하였다.
3. 정량적 PCR 반응
정량적 폴리머라아제 체인 리액션 (qPCR) 반응은, MicroAmp Optical96-웰 반응 플레이트를 사용하여 실시하였다. 상기 조작으로 조제한 cDNA 50 ng 을 플레이트에 첨가하고, 12.5 μL 의 Soraris qPCR Master Mix (2x), (Thermo Fisher Scientific 제조) 및 HER3 의 mRNA 증폭용의 Soraris Primer/Probe set (20x) (Thermo Fisher Scientific 제조) 12.5 μL, 및 증류수를 첨가하였다. mRNA 량을 산출하는 검량선 작성을 위해, 인간 대장암 세포 HCT116 으로부터 동일한 수법에 의해 조제한 cDNA 200, 100, 20 ng 에 대해서도 동일한 조작을 실시하였다. 각종 검체를 첨가한 플레이트를 ABI 7900HT (Applied Biosystems 제조) 에 장착하고, 95 ℃ 에서 15 분간 반응 후, 95 ℃ 에서 15 초, 60 ℃ 에서 60 초의 반응을 60 사이클 실시하고, 그 후 4 ℃ 에서 10 분간 냉각한 후에, 각 웰의 형광 강도를 측정하고, PCR 산물량을 정량함으로써, 각 검체의 mRNA 량을 측정하였다.
그 결과를 도 4 에 나타낸다. HCC827GR5 세포주 중의 HER3 의 mRNA 량은, HCC827 세포주 유래의 HER3 의 mRNA 량과 비교하여 유의하게 높은 값이었다 (student t-test, p ＜ 0.05).
실시예 2-3 : HCC827GR5 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성
HCC827GR5 세포주는, R10 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조)) 를 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에 최종 농도 1 μM 의 게피티닙을 포함하는 배지에서 배양하였다. HCC827GR5 세포주를 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리 후, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 10 ％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI1640 배지에 현탁하고, 100000 개/㎖ 의 농도로 조정하였다. 세포 현탁액 50 μL 를 스미론 96 웰 플레이트 (스미토모 베이크라이트 제조) 의 각 웰에 첨가하고 (5000 개/웰), 배양을 실시하였다. 배양 3 일 후에, R10 배지에 용해한 HER3-ADC(1) 희석액 (배양액의 최종 농도 : 0, 0.0033, 0.01, 0.033, 0.1, 0.33, 1, 3.3, 10 ㎍/㎖), 에를로티닙 희석액 (배양액의 최종 농도 : 0, 0.0033, 0.01, 0.033, 0.1, 0.33, 1, 3.3, 10 μM), 에를로티닙 (배양액의 최종 농도 1 μM) 을 함유하는 R10 배지에 용해한 HER3-ADC(1) 희석액 (배양액의 최종 농도 : 0, 0.0033, 0.01, 0.033, 0.1, 0.33, 1, 3.3, 10 ㎍/㎖), 그리고 음성 컨트롤로서의 약제를 함유하지 않는 R10 배지를 첨가하고, 각 웰의 최종 배양액량 100 μL 로 하고, 배양을 실시하였다. 치료 개시 7 일째에, CellTiter Glo (프로메가사 제조) 를 각 웰에 50 μL 씩 첨가 후, 플레이트 믹서로 2 분간 교반하고, 차광 조건하에서 30 분간 정치하였다. 각 웰로부터 120 μL 를 분취하고, 흑색의 마이크로 플레이트로 옮겨, 루미노미터로 발광값을 측정하였다.
각 약제의 HCC827GR5 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성 (％ 컨트롤) 은, 이하의 식을 사용하여 산출하였다.
％ 컨트롤 ＝ (검체 첨가 웰에 있어서의 발광값의 평균값 ÷ 음성 컨트롤 웰에 있어서의 발광값의 평균값) × 100
각 군 6 웰로 실험을 실시하였다.
그 결과를 도 5 에 나타낸다. HCC827GR5 세포주에 대하여, HER3-ADC(1) 의 10, 3.3, 1 ㎍/㎖ 첨가군에 있어서 각각 41.3, 40.0 및 50.0 ％ 의 세포 증식 억제 활성이, 에를로티닙의 10, 3.3, 1 ㎍/㎖ 첨가군에 있어서 각각 31.7, 52.6 및 69.2 ％ 의 세포 증식 억제 활성이 확인되었다. 한편, 에를로티닙 1 μM 과 HER3-ADC(1) 의 10, 3.3, 1 ㎍/㎖ 의 병용군에 있어서는 각각 3.1, 3.2 및 3.0 ％ 의 세포 증식 억제 활성이 확인되었다.
이상의 결과로부터, HER3-ADC(1) 은, HCC827GR5 세포주에 대하여, 에를로티닙과의 병용에 의해, HER3-ADC(1) 또는 에를로티닙 단제에 의한 처리시와 비교하여 높은 세포 증식 억제 활성을 나타냈다.
실시예 2-4 : 누드 마우스 이식 HCC827GR5 세포주에 대한 항종양 효과
HCC827GR5 세포주를 R10 배지 (10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조)) 및 최종 농도 1 μM 의 에를로티닙을 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리 후, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, R10 배지에 현탁하고, 75000000 개/㎖ 의 농도로 조제하였다. 6 주령의 자성 누드 마우스 (BALB/cAJcl-nu/nu) 의 복측부 피하에 조제한 세포 현탁액 100 μL (7500000 개) 를 이식 후, 이식한 종양의 추정 종양 체적의 평균값이 110 ㎣ 가 된, 종양 이식 7 일 후에 군 나눔을 실시하고, 약제의 투여를 개시하였다 (0 일째). HER3-ADC(1) 은 인산 완충 생리 식염수 (PBS) 로 용해하고, 1 ㎎/㎖ 의 농도로 조제하였다. 에를로티닙은 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 (HPMC) 용액에 용해하고, 2.75 ㎎/㎖ 로 조제하였다. 각 약제의 단제 치료군은 0 일째부터 최대 49 일째까지, 조제한 HER3-ADC(1) 을 200 μL/마우스 (10 ㎎/㎏) 로 주에 1 회 (합계 7 회) 복강 내에, 조제한 에를로티닙을 0.18 ㎖/마우스 (25 ㎎/㎏) 로 주에 6 회 (합계 19) 경구로 투여를 실시하였다. 또, 병용 치료군에 있어서는 0 일째부터 HER3-ADC(1) 및 에를로티닙을 단제 치료군과 동일한 투여량 및 스케줄로의 투여를 실시하였다. 컨트롤 군으로서 투여를 실시하지 않는 군을 설정하였다. 어느 군도 1 군 10 마리의 마우스를 사용하였다. 투여 개시 후, 주 2 회 (0, 3, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28, 31, 35, 38, 41, 45, 49 일째), 종양 직경 (장경, 단경) 을 측정하고, 하기에 나타내는 식에 따라 각 군의 추정 종양 체적을 산출하고, 그 후, 각 군의 추정 종양 체적의 평균값을 산출하였다.
추정 종양 체적 (Volume, ㎣) ＝ 장경 (㎜) × 단경 (㎜)2 ÷ 2
또, 각 군의 컨트롤군과 비교한 종양 증식 억제율을 하기에 나타내는 식에 따라 산출하였다.
종양 증식 억제율 (％) ＝ 100 － (치료군의 추정 종양 체적의 평균값 ÷ 컨트롤군의 추정 종양 체적의 평균값 × 100)
또한, 컨트롤군 및 에를로티닙 단제 치료군에 있어서는 21 일째의 시점에서 추정 종양 체적이 1200 내지 1500 ㎣ 에 도달했기 때문에, 동물 윤리의 관점에서 측정을 종료하였다. 이것에 수반하여, 종양 증식 억제율 (％) 의 산출은 21 일째까지로 하였다.
그 결과를 표 1, 표 2, 및 도 6 에 나타낸다. HCC827GR5 세포주에 대하여 에를로티닙은 유효성을 나타내지 않았다. 이에 대하여, HER3-ADC(1) 치료군 및 HER3-ADC(1) 과 에를로티닙의 병용에 의한 치료군에 있어서는 유의한 항종양 효과가 확인되었다 (21 일째에 있어서 Dunnet's Multiple Comparison test p ＜ 0.001).
이상의 결과로부터, HER3-ADC(1) 은, 누드 마우스 이식 HCC827GR5 세포주에 대하여, 단제 또는 에를로티닙과의 병용에 의해, 무처치 또는 에를로티닙 단제에 의한 치료시와 비교하여 유의하게 높은 항종양 효과를 나타냈다 (21 일째에 있어서 Dunnet's Multiple Comparison test p ＜ 0.001).
[표 1]
Figure pct00011
Figure pct00012
[표 2]
Figure pct00013
실시예 2 의 결과로부터, HER3-ADC(1) 의 HCC827GR5 세포주에 대한 항종양 효과가 확인되었다. HCC827GR5 세포주는, 인간 비소세포 폐암의 세포주인 HCC827 을 친주로 하고, EGFR-TKI 에 대한 저항성을 획득한 세포주이고, EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암에 상당하는 세포주이다.
이상에 의해, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여함으로써, EGFR-TKI 저항성이며, 또한 EGFR T790M 변이 음성인 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법을 제공할 수 있는 것이 밝혀졌다.
실시예 3 : PC9 세포주 및 PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 의 감수성 시험
실시예 3-1 : 오시머티닙 저항성 PC9 세포주의 작성
비소세포 폐암주인 PC9 를, 10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조) 를 함유하는 RPMI-1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. 배양액 중에 1 nM 의 오시머티닙을 첨가 후에 배양하고, 오시머티닙의 첨가 농도를 단계적으로 상승시켜 계대 배양을 실시하고, 최종적으로 100 nM 의 오시머티닙을 함유하는 배지에서 배양함으로써, 오시머티닙 저항성 PC9 세포주 (PC9AZDR7) 를 수립하였다.
실시예 3-2 : PC9 및 PC9AZDR7 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성
PC9 및 PC9AZDR7 세포주를 10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조) 를 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. PC9AZDR7 은 100 nM 의 오시머티닙을 첨가하여 배양하였다. PC9 및 PC9AZDR7 세포주를 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리하고, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 2 ％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI1640 배지에 현탁 후, 각 세포 현탁액 50 μL 를 스미론 96 웰 플레이트 (스미토모 베이크라이트 제조) 의 각 웰에 첨가하고 (10000 개/웰), 배양을 실시하였다. 배양 개시 1 일 후에 각종 농도로 조제한 오시머티닙 희석액, 또는 음성 컨트롤로서 약제를 함유하지 않는 RPMI-1640 배지를 첨가하고, 배양을 실시하였다. 오시머티닙의 최종 농도는 0, 0.001, 0.0033, 0.01, 0.033, 0.1, 0.33, 1, 3.3 μM 로 하였다. 치료 개시 3 일째에, CellTiter Glo (프로메가사 제조) 를 각 웰에 50 μL 씩 첨가 후, 플레이트 믹서로 2 분간 교반하고, 차광 조건하에서 30 분간 정치하였다. 각 웰로부터 120 μL 를 분취하고, 흑색의 마이크로 플레이트로 옮겨, 루미노미터로 발광값을 측정하였다.
각 약제의 세포 증식 억제 활성 (컨트롤의 ％) 은, 이하의 식을 사용하여 산출하였다.
컨트롤의 ％ ＝ (검체 첨가 웰에 있어서의 발광값의 평균값 ÷ 음성 컨트롤 웰에 있어서의 발광값의 평균값) × 100
각 군 6 웰로 실험을 실시하였다.
그 결과를 도 7 에 나타낸다. PC9 세포주에 대하여, 오시머티닙의 0.01 μM 이상의 첨가군에 있어서 강한 세포 증식 억제 활성이 확인되었다. 한편, PC9AZDR7 세포주에 대해서는 1 μM 이하의 농도에서는 세포 증식 억제 활성은 확인되지 않았다.
이상의 결과로부터 PC9AZDR7 은 오시머티닙에 대하여 약제 저항성을 나타내는 것이 분명해졌다.
실시예 3-3 : PC9 세포주 및 PC9AZDR7 세포주에 있어서의 HER3 단백질의 발현
PC9 및 PC9AZDR7 각 세포주에 있어서의 HER3 단백질의 발현은 QIFIKIT (Dako 제조) 를 사용하여 측정하였다. PC9 및 PC9AZDR7 을 배양 후, 마우스 항인간 HER3 항체 (Clone 1B4C3, Dako 제조) 혹은 마우스 IgG2a 아이소타입 컨트롤 항체를 첨가 후에 배양하고, FITC 복합 항마우스 IgG 항체 (Dako 제조) 로 배양하였다. 각 검체를 LSRFortessaX-20 (BD Biosciences 제조) 을 사용하여 형광 강도를 측정함으로써, 각 세포주에서의 HER3 단백질의 발현량을 측정하였다.
그 결과를 도 8 에 나타낸다. PC9 에 있어서의 HER3 단백질의 발현량은 5,088 개/세포인 것에 대하여, PC9AZDR7 에 있어서의 발현량은 15,469 개/세포로, PC9 와 비교하여 3 배 이상 높은 HER3 단백질의 발현이 확인되었다 (unpaired T test, p ＜ 0.001).
이상의 결과로부터, 비소세포 폐암주인 PC9 로부터 수립한 오시머티닙에 대하여 저항성을 나타내는 PC9AZDR7 에 있어서의 HER3 단백질의 발현량은 친주인 PC9 와 비교하여 현저하게 높은 것인 것이 분명해졌다.
실시예 3-4 : 누드 마우스 이식 PC9 및 PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 의 항종양 효과
PC9 및 PC9AZDR7 세포주를 10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조) 함유 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. PC9AZDR7 세포주는 최종 농도 100 nM 의 오시머티닙을 함유하는 배지에서 배양하였다. 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리 후, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 각 세포 현탁액을 조제하였다. 6 주령의 자성 누드 마우스 (BALB/cAJcl-nu/nu) 의 복측부 피하에 조제한 각 세포 현탁액 100 μL (5000000 개) 를 이식 후, 이식한 종양의 추정 종양 체적의 평균값이 약 200 ㎣ 가 된 시점에서 군 나눔을 실시하고, 약제의 투여를 개시하였다 (0 일째). HER3-ADC(1) 은 인산 완충 생리 식염수 (PBS) 로 용해하고, 0.6 ㎎/㎖ 의 농도로 조제하였다. 조제한 HER3-ADC(1) 을 100 μL/마우스 (3 ㎎/㎏) 로 0 일째에 단회의 복강 내에서 투여를 실시하였다. 컨트롤군으로서 PBS 만의 투여군을 설정하였다. 컨트롤군은 8 마리, HER3-ADC(1) 군은 9 마리의 마우스를 사용하였다. 투여 개시 후, 주 2 회, 종양 직경 (장경, 단경) 을 측정하고, 하기에 나타내는 식에 따라 각 군의 추정 종양 체적을 산출하고, 그 후, 각 군의 추정 종양 체적의 평균값을 산출하였다.
추정 종양 체적 (Volume, ㎣) ＝ 장경 (㎜) × 단경 (㎜)2 ÷ 2
또, 각 군의 컨트롤군과 비교한 종양 증식 억제율을 하기에 나타내는 식에 따라 산출하였다.
종양 증식 억제율 (％) ＝ 100 － (치료군의 추정 종양 체적의 평균값 ÷ 컨트롤군의 추정 종양 체적의 평균값 × 100)
PC9 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 의 항종양 효과를 표 3 및 도 9 에, PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 의 항종양 효과를 표 4 및 도 10 에 나타낸다. PC9 세포주에 대하여 HER3-ADC(1) 은 유효성을 나타내지 않았다 (21 일째에 있어서의 종양 증식 억제율 17 ％). 이에 대하여, PC9AZDR7 의 HER3-ADC(1) 치료군에 있어서는 유의한 항종양 효과 (18 일째에 있어서의 종양 증식 억제율 72 ％) 가 확인되었다 (18 일째에 있어서 unpaired t test p ＜ 0.05).
[표 3]
Figure pct00014
[표 4]
Figure pct00015
이상의 결과로부터, HER3-ADC(1) 은, 누드 마우스 이식 PC9AZDR7 세포주에 대하여 컨트롤군과 비교하여 유의하게 높은 항종양 효과를 나타내는 것이 분명해졌다.
이상에 의해, 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여함으로써, 오시머티닙 저항성의 비소세포 폐암의 치료제 및 치료 방법을 제공할 수 있는 것이 밝혀졌다.
실시예 3-5 : 누드 마우스 이식 PC9AZDR7 세포주에 대한 HER3-ADC(1) 과 오시머티닙 병용에서의 항종양 효과
PC9AZDR7 세포주를 10 ％ 소 태아 혈청 및 1 ％ 페니실린-스트렙토마이신 B (와코 순약 제조) 및 100 nM 의 오시머티닙을 함유하는 RPMI1640 배지 (시그마 제조) 에서 배양하였다. PC9AZDR7 세포주를 배양 후, 트립신 처리에 의해 박리하고, 세포를 회수하고, 세포 현탁액 중의 세포수를 측정하고, 각 세포 현탁액을 조제하였다. 6 주령의 자성 누드 마우스 (BALB/cAJcl-nu/nu) 의 복측부 피하에 조제한 각 세포 현탁액 100 μL (34000000 개) 를 이식 후, 이식한 종양의 추정 종양 체적의 평균값이 약 60 ㎣ 가 된 시점에서 군 나눔을 실시하고 (0 일째), 군 나눔 다음날 (1 일째) 부터 약제의 투여를 개시하였다. HER3-ADC(1) 은 인산 완충 생리 식염수 (PBS) 로 용해하고, 0.1 ㎎/㎖ 의 농도로 조제하였다. 오시머티닙은 0.1 ％ 디메틸술폭시드 및 30 ％ 폴리에틸렌글리콜 300 을 함유하는 주사용 증류수에 용해하고, 0.2 ㎎/㎖ 의 농도로 조제하였다. 각 약제의 단제군에서는, HER3-ADC(1) 을 200 μL/마우스 (1 ㎎/㎏) 로 1 일째에 복강 내에서 투여를 실시하고, 오시머티닙을 100 μL/마우스 (1 ㎎/㎏) 로 1, 2, 3, 4, 5, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 16, 17, 18 일 및 19 일째에 경구로 투여를 실시하였다. HER3-ADC(1) 과 오시머티닙의 병용군은, 각 약제를 각 단제군과 동일한 투여량 및 투여 스케줄로 투여를 실시하였다. 컨트롤군으로서 투여를 실시하지 않는 군을 설정하였다. 컨트롤군은 11 마리, HER3-ADC(1) 단제군은 12 마리, 오시머티닙 단제군은 12 마리, HER3-ADC(1) 과 오시머티닙 병용군은 10 마리의 마우스를 사용하였다. 투여 개시 후, 주 2 회, 종양 직경 (장경, 단경) 을 측정하고, 하기에 나타내는 식에 따라 각 군의 추정 종양 체적을 산출하고, 그 후, 각 군의 추정 종양 체적의 평균값을 산출하였다.
추정 종양 체적 (Volume, ㎣) ＝ 장경 (㎜) × 단경 (㎜)2 ÷ 2
또, 각 군의 컨트롤군과 비교한 종양 증식 억제율을 하기에 나타내는 식에 따라 산출하였다.
종양 증식 억제율 (％) ＝ 100 － (치료군의 추정 종양 체적의 평균값 ÷ 컨트롤군의 추정 종양 체적의 평균값 × 100)
그 결과를 표 5 및 도 11 에 나타낸다. PC9AZDR7 세포주에 대하여 HER3-ADC(1) 1 ㎎/㎏ 및 오시머티닙 1 ㎎/㎏ 각 단제 치료군에서는 높은 유효성을 나타내지 않았다 (21 일째에 있어서의 종양 증식 억제율 : HER3-ADC(1), 25.3 ％, 오시머티닙, 27.7 ％). 이에 대하여, HER3-ADC(1) 1 ㎎/㎏ 과 오시머티닙 1 ㎎/㎏ 의 병용 치료군에 있어서는 유의한 항종양 효과 (21 일째에 있어서의 종양 증식 억제율 66.6 ％, 21 일째에 있어서 HER3-ADC(1) 단제 치료군에 대하여 p ＝ 0.0057, 오시머티닙 단제 치료군에 대하여 p ＝ 0.0092, Dunnett's test) 가 확인되었다.
[표 5]
Figure pct00016
[표 6]
Figure pct00017
이상의 결과로부터, HER3-ADC(1) 과 오시머티닙의 병용에 의한 치료는, 누드 마우스 이식 PC9AZDR7 세포주에 대하여, HER3-ADC(1) 단제 또는 오시머티닙 단제에 의한 치료와 비교하여 유의하게 높은 항종양 효과를 나타내는 것이 분명해졌다.
서열표 프리텍스트
서열 번호 1 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRH1 의 아미노산 서열
서열 번호 2 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRH2 의 아미노산 서열
서열 번호 3 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRH3 의 아미노산 서열
서열 번호 4 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRL1 의 아미노산 서열
서열 번호 5 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRL2 의 아미노산 서열
서열 번호 6 : 항 HER3 항체 (1) 의 CDRL3 의 아미노산 서열
서열 번호 7 : 항 HER3 항체 (1) 의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 8 : 항 HER3 항체 (1) 의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열
서열 번호 9 : 항 HER3 항체 (1) 의 중사슬의 아미노산 서열
서열 번호 10 : 항 HER3 항체 (1) 의 경사슬의 아미노산 서열
SEQUENCE LISTING <110>?KINKI UNIVERSITY DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED <120>?A method for treating EGFR-TKI resistant non-small cell lung cancer comprising administering an anti-HER3 antibody-drug conjugate <130>?SAP-849-PCT <141> 2018-02-27 <150> JP 2017035919 <151> 2017-02-28 <150> JP 2017199883 <151> 2017-10-13 <160>?10? ??? <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRH1 <400> 1 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRH2 <400> 2 Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRH3 <400> 3 Asp Lys Trp Thr Trp Tyr Phe Asp Leu 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRL1 <400> 4 Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRL2 <400> 5 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) CDRL3 <400> 6 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5 <210> 7 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) VH <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Glu Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Trp Thr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> anti-HER3 antibody (1) VL <400> 8 Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 9 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-HER3 antibody (1) H <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Glu Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Lys Trp Thr Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 10 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-HER3 antibody (1) L <400> 10 Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220

Claims (36)

  1. 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 유효 성분으로서 함유하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  5. 제 2 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  6. 제 2 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
    Figure pct00018

    (식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
    으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  11. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  12. 제 11 항에 있어서,
    항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  14. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  16. 제 15 항에 있어서,
    제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  17. 제 16 항에 있어서,
    제 2 약제가 에를로티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  18. 제 16 항에 있어서,
    제 2 약제가 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료제.
  19. 항 HER3 항체-약물 콘주게이트를 투여하는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  20. 제 19 항에 있어서,
    비소세포 폐암이 EGFR T790M 변이 음성의 비소세포 폐암인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  21. 제 19 항 또는 제 20 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  22. 제 19 항 또는 제 20 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  23. 제 20 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 에를로티닙, 또는 아파티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  24. 제 20 항에 있어서,
    EGFR-TKI 가, 게피티닙, 또는 에를로티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  25. 제 19 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    비소세포 폐암이 HER3 을 발현하고 있는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  26. 제 19 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 식
    Figure pct00019

    (식 중, A 는 항 HER3 항체와의 결합 위치를 나타낸다)
    으로 나타내는 약물 링커와, 항 HER3 항체가 티오에테르 결합에 의해 결합한 항 HER3 항체-약물 콘주게이트인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  27. 제 19 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 및 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH3 을 포함하는 중사슬, 그리고, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 및 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  28. 제 19 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역을 포함하는 중사슬, 및 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  29. 제 19 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체가, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬, 및 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬을 포함하는 항체인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  30. 제 29 항에 있어서,
    항 HER3 항체의 중사슬 카르복실 말단의 리신 잔기가 결실되어 있는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  31. 제 19 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7 내지 8 개의 범위인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  32. 제 19 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트에 있어서의 1 항체당 약물 링커의 평균 결합수가 7.5 내지 8 개의 범위인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  33. 제 19 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항 HER3 항체-약물 콘주게이트가, 제 2 약제와 병용하여 투여되는 것을 특징으로 하는, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  34. 제 33 항에 있어서,
    제 2 약제가 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 또는 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  35. 제 34 항에 있어서,
    제 2 약제가 에를로티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법.
  36. 제 34 항에 있어서,
    제 2 약제가 오시머티닙인, EGFR-TKI 저항성의 비소세포 폐암의 치료 방법
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